不同缺血预处理方案对大鼠肾脏缺血再灌注损伤组织HSP70表达的研究

目的探讨单、多循环两种缺血预处理方案对大鼠肾脏急性缺血再灌注损伤的保护作用及对HSP70表达的影响。方法60只雄性SD大鼠切除右肾、分离出左肾动脉后随机均分为四组。1）缺血再灌注（I/R）组;2）单循环缺血预处理（SCP）组;3）多循环缺血预处理（MCP）组;4）假手术（Sham）组。24 h取材行生化、常规病理、免疫组化检查及肾小管损伤评分。结果假手术组未见明显改变;肌酐（Scr）水平、肾小管损伤评分单循环缺血预处理组多循环缺血预处理组低于缺血再灌注组,差异显著;多循环缺血预处理组低于单循环缺血预处理组,差异显著（P〈0.01）。HSP70表达水平多循环缺血预处理组最高。结论缺血预处理可从功能和组织学上减轻肾脏的急性缺血再灌注损伤,多循环预处理方案诱导HSP70表达及保护作用在24 h内强于单循环的方案。     

缺血预处理对大鼠缺血再灌注小肠能量代谢、Bcl-2和Bax表达的影响

目的:探讨缺血预处理对小肠细胞能量代谢和凋亡基因bcl-2,bax表达的影响及它们与肠细胞凋亡的内在联系. 方法:健康SD大鼠36只,雌雄不限,随机分为3组,空白对照组(C组)、缺血预处理组(IPC-I/R组)和缺血再灌注组(I/R组),每组12只. 按Murry法制备缺血预处理模型,I/R组用血管钳夹闭肠系膜前动脉1 h,再灌注2 h, IP-I/R组用血管钳夹闭肠系膜前动脉10 min松开10 min,反复4次,余同I/R组. 高效液相色谱法测定ATP,ADP含量;免疫组化检测Bcl-2及Bax蛋白的表达,每组选24个视野分别测量A值. TUNEL法检测凋亡的小肠细胞并计算凋亡指数. 结果:C和IPC-I/R组ATP含量高于I/R组(P<0.05);IPC-I/R组Bcl-2 A值高于C组和I/R组(P<0.01),I/R组Bcl-2 A值低于C组(P<0.05);I/R组Bax A值明显高于C组和IPC-I/R组(P<0.01),且IPC-I/R组高于C组(P<0.05);与C组比较,I/R组和IPC-I/R组凋亡指数较高(P<0.01, P<0.05);与I/R组相比,IPC-I/R组凋亡指数较低(P<0.01). 结论:缺血预处理能在一定程度上延缓ATP降解并调控Bcl-2及Bax蛋白的表达、抑制缺血再灌注介导的小肠细胞凋亡.     

急性缺血性肾损伤中IκB激酶β(IKKβ)的变化及其意义的初步研究

目的:通过建立大鼠肾脏急性缺血再灌注(I/R)及缺血预适应/再灌注(I/P+I/R)模型,初步研究不同的缺血方式后肾脏IκB激酶β(IKKβ)的变化及其与中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的相互关系.方法:雄性SD大鼠摘除右肾、分离出左肾动脉后随机均分为3组:假手术组(sham组);缺血再灌注组(I/R组);缺血预适应+缺血冉灌注组(I/P/+I/R组).分别用生化学检测血清肌酐(Scr)的变化,组织病理学评价肾小管损伤程度评分,用免疫荧光定量分析IKKβ的表达,免疫组织化学染色检测肾脏组织中NGAL的表达,免疫印迹检测肾脏组织中IKKβ、NGAL的表达.结果:Scr水平及肾小管损伤评分提示,I/R组肾脏组织病理改变明显,与sham组比较损伤程度重(P<0.01);与I/R组比较,I/P+I/R组损伤程度则明显减轻(P<0.05).免疫荧光定量分析与免疫印迹检测IKKβ的表达提示,I/P+I/R组的表达明显高于sham组(P<0.01,P<0.05);VR+I/P组较I/R组则明显减少(P<0.05).免疫组织化学染色检测与免疫印迹检测NGAL的表达提示,I/P+I/R组的表达明显高于sham组(P<0.01,P<0.05);I/R+I/P组较I/R组则明显减少(P<0.05).且IKKβ与NGAL两种蛋白的表达呈正相关(P<0.01).结论:IKKβ参与了肾脏的缺血再灌注损伤,促进了肾损伤标志物NGAL的产生,肾脏缺血预适应抑制IKKβ的激活,减少NGAL的产生.与肾脏保护作用有关.     

肾脏缺血预适应对核因子-κB活性及细胞凋亡的影响

目的通过建立大鼠肾脏急性缺血/再灌注（I/R）及缺血预适应（I/P＋I/R）模型,初步研究不同的缺血方式后肾脏核因子-κB（NF-κB）活性及二聚体亚单位的构成,探讨其减轻肾脏肾小管细胞凋亡的机制。方法 30只雄性SD大鼠摘除右肾、分离出左肾动脉后随机均分为3组（n=10）：A组为假手术组（Sham组）,只分离左肾动脉,暴露术野60 m in后直接缝合,24 h后取肾;B组为缺血/再灌注组（I/R组）,持续夹闭左肾动脉45m in,恢复血供24 h后取肾;C组为缺血预适应＋缺血/再灌注组（I/P＋I/R组）,左肾动脉夹闭2 m in,松开5 m in,重复3个循环,余同I/R组。分别用生化学方法检测血肌酐值的变化,组织病理学评价肾小管损伤程度评分,凝胶电泳迟滞分析检测肾组织NF-κB/DNA结合活性,超迟滞分析检测NF-κB亚单位的构成,Tunel法检测肾小管上皮细胞的凋亡。结果血清学检查及肾小管损伤评分提示,I/R组肾脏组织病理改变明显,损伤程度重,与Sham组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;与I/R组比较,I/P＋I/R组损伤程度则明显减轻,差异有统计学意义（P〈0.05）。凝胶电泳迟滞分析检测肾组织NF-κB/DNA结合活性I/P＋I/R组明显高于Sham组,差异有统计学意义（P〈0.05）;超迟滞分析检测NF-κB亚单位含有p65、p50;差异有统计学意义（P〈0.05）。结论肾脏缺血预适应可通过抑制NF-κB转录活性,减轻肾小管上皮细胞凋亡,从而发挥损伤保护效应。     

缺血预处理对兔颌下腺缺血再灌注后的超氧化物歧化酶活力和丙二醛含量的影响

目的:研究缺血预处理(IP)对缺血再灌注(I/R)损伤的颌下腺保护作用.方法:用血管夹夹闭兔颌下腺动脉和静脉1 h后放开血管夹恢复血运的方法建立兔颌下腺缺血再灌注损伤的动物实验模型.施加缺血预处理因素,用血管夹夹闭颌下腺动脉和静脉5 min,放开血管夹恢复血运10 min,作缺血预处理因素然后再进行缺血再灌注损伤实验.检测I/R组和IP组颌下腺组织缺血再灌注1,2,3,5 h超氧化物歧化酶活力和丙二醛含量.结果:IP组颌下腺组织内超氧化物歧化酶活力升高并显著高于I/R组,丙二醛含量升高但显著低于I/R组.结论:缺血预处理对兔颌下腺缺血再灌注损伤具有较显著的保护作用.     

肾缺血-再灌注损伤后TNF-α 、IL-6和MCP-1表达变化的意义

目的观察肾缺血-再灌注损伤后TNF-α、IL-6和MCP-1的表达,研究肾IR I的炎症机制。方法将健康雄性SD(Sprasue-Dawley)大鼠随机分为假手术组(sham组)和缺血-再灌注组(I/R组),通过摘除右肾,夹闭左肾蒂60 min的方法建立肾I/R大鼠模型。Sham组大鼠摘除右肾后未夹闭左肾蒂,组内分为I/R后24 h、48 h及72 h 3个时间点,分别在上述时间点处死大鼠;全自动生化仪检测两组大鼠肾功能BUN和Scr水平;ELISA法检测两组大鼠血清TNF-α、IL-6水平的变化,免疫荧光法和western blot法肾组织MCP-1蛋白的变化。结果肾IRI诱导血清BUN、Scr、TNF-α及IL-6水平显著增高,肾小管上皮细胞MCP-1蛋白表达显著上调,均于再灌注后24 h达高峰,之后逐渐下降,与sham组大鼠24 h、48 h及72 h同时间点相比较,差异均具有显著性(P<0.01)。结论肾IRI后存在炎症过程,且肾小管上皮细胞可转化为炎症细胞。     

瑞芬太尼预处理对大鼠脑缺血再灌注心肌氧化损伤的影响

目的 观察瑞芬太尼预处理对脑缺血再灌注后心肌细胞损伤的影响.方法 健康成年wistar雄性大鼠72只随机分为假手术组(sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、瑞芬太尼预处理组(R组).采用夹闭双侧颈总动脉的方法来建立脑缺血再灌注损伤模型.sham组暴露双侧颈总动脉不夹闭;I/R组夹闭两侧颈总动脉5min;R组夹闭前持续输注瑞芬太尼2μgkg-1·min-1.检测大鼠心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量及肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)含量变化.结果 与sham组相比.I/R组和R组SOD值降低,MDA值增高,CK-MB值增高,且在6h、12h、24h时间点差异均有统计学意义(P<0.05);与R组相比.I/R组SOD值降低,MDA值增高,CK-MB值增高,且在6h、12h、24h时间点差异均有统计学意义(P<0.05).结论 瑞芬太尼预处理可以降低大鼠脑缺血再灌注后心肌细胞的损伤作用.     

冬虫夏草对肾缺血-再灌注大鼠肾组织Caspase-12 mRNA和蛋白表达的影响

目的观察冬虫夏草对肾缺血-再灌注(I/R)大鼠肾组织Caspase-12 mRNA和蛋白表达的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、缺血-再灌注组(I/R组)和冬虫夏草(CS)组3组,采用摘除右肾夹闭左肾蒂60 min的方法复制I/R大鼠模型,sham组和I/R组大鼠再灌注后灌服生理盐水(2 mL/d);CS组再灌注后灌服冬虫夏草提取液[5 g/(kg·d)]。结果 sham组肾小球和肾小管结构基本正常,而I/R组可见肾小管坏死改变,各时间点半定量计分均高于sham组(P<0.01),而CS组肾小管病理改善,半定量计分均低于相同时间点I/R组(P<0.01);正常组和sham组肾组织可见少量的Caspase-12 mRNA和蛋白表达,I/R可诱导Caspase-12 mRNA和蛋白表达上调,各时间点I/R组Caspase-12 mRNA和蛋白表达显著高于sham组(P<0.01)。CS组Caspase-12 mRNA和蛋白水平表达显著低于相同时间点I/R组(P<0.01)。sham组有极少量的肾小管上皮细胞凋亡,I/R可诱导肾小管上皮细胞凋亡显著增多,各时间点I/R组凋亡比例均高于sham组(P<0.01),而CS组各时间点的凋亡比例均低于I/R组(P<0.01)。结论冬虫夏草通过下调肾组织中Caspase-12的表达,抑制内质网应激凋亡途径发挥肾保护作用。     

雷帕霉素靶蛋白参与缺血后处理减轻大鼠骨骼肌缺血/再灌注损伤

目的 探讨哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路在缺血后处理(I-postC)减轻大鼠骨骼肌缺血再灌注(I/R)损伤中的表达和意义.方法 48只雄性健康Wistar大鼠,无创动脉夹夹闭右侧股动脉4 h,松夹再灌注12 h或24 h建立大鼠右后肢I/R损伤模型,随机分为I/R组(n=16)、缺血预处理(IPC)组(5 min缺血/5 min再灌,3个循环,n=16)及缺血后处理(IpostC)组(1 min再灌/1 min缺血,3个循环,n=16).分别于再灌注后12 h、24 h取标本.观察骨骼肌组织形态学、湿,干重比、丙二醛(MDA)及髓过氧化物酶(MPO)的变化,Western blot和免疫组织化学方法检测mTOR的表达.结果 I-postC和IPC组的骨骼肌水肿明显减轻,MDA和MPO指标亦明显降低,与I/R组比较差异显著(P＜0.05).I-postC组和IPC组之间无显著差异(P＞0.05).I-postC和IPC组mTOR蛋白产物表达显著增加,与I/R组比较差异显著(P＜0.05).结论 I-postC减轻大鼠后肢骨骼肌I/R损伤,与缺血预处理可能存在共同的作用机制,及通过激活mTOR信号转导通路发挥作用.     

氢气对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨氢气对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法 将18只成年雄性SD大鼠随机分成假手术(Sham)组、缺血再灌注(I/R)组、氢气治疗（H2)组3组,每组6只。I/R组大鼠右肾切除术后,制备左肾缺血再灌注损伤模型;Sham组大鼠右肾切除后,仅分离而不夹闭左肾肾蒂;H2组从再灌注前10 min开始吸入浓度为2.5%的氢气130 min,其余操作与I/R组相同。比较再灌注24 h 3组之间血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN),肾组织丙二醛(MDA)水平以及肾小管损伤的组织病理学半定量评分。结果 I/R可导致大鼠肾脏严重损伤。吸入浓度为2.5%的氢气可以降低大鼠BUN、Cr和MDA水平（P<0.05）;同时,H2组肾组织病理学评分低于I/R组（P<0.05）。结论 吸入低浓度的氢气对肾脏缺血再灌注损伤有保护作用,其机制与减少肾组织中MDA的生成有关。     

缺血预处理对兔缺血再灌注心肌bcl—2，bax，p53基因表达的影响

OBJECTIVE: To investigate the effects of ischemic preconditioning on myocardial bcl-2, bax, p53 gene expression during ischemia/reperfusion period in rabbits. METHODS: Twenty four rabbits were randomly allocated to three groups (n = 8), pseudo-operation group(Group P), ischemia/reperfusion group (Group IR) and ischemic preconditioning group(Group IP). Group IR and Group IP were subjected to three hours of left anterior descending coronary artery occlusion followed for three hours of reperfusion. Ischemic preconditioning was achieved by three 5-minute cycles of ischemia, each followed by 5 minutes of reperfusion. Apoptosis index(AI) and protein expression of Bcl-2, Bax, and p53 in the border zone of myocardium of ischemic area at risk were obtained with a flow cytometry. RESULTS: Compared with Group IR, AI was significantly reduced in Group IP(P < 0.01). Bcl-2 expressions was higher in Group IP than in Group IR, while bax and p53 expressions were lower in Group IP than in Group IR. CONCLUSION: The rabbit myocardial apoptosis induced by ischemic preconditioning inhibited ischemia-reperfusion in vivo partly related to the modulating of bcl-2, bax and p53 expression.     

缺血预处理对兔缺血再灌注心肌bcl-2,bax,p53基因表达的影响

目的 :探讨缺血预处理对兔在体心脏局部缺血再灌注过程中心肌细胞bcl 2 ,bax ,p5 3基因表达的影响。方法 :2 4只新西兰白兔随机分成 3组 (n =8) :假手术对照组 (P组 )、缺血再灌注对照组 (IR组 )、缺血预处理组(IP组 )。除P组外 ,其余两组均接受左冠脉前降支 3h阻断和 3h再灌注。IP组在 3h缺血前接受连续 3次每次缺血 5min ,再灌注 5min的预处理。取心肌缺血区边缘组织用流式细胞仪测凋亡指数 (AI)和bcl 2 ,bax ,p5 3基因的蛋白表达量。结果 :凋亡指数 ,IP组 ( 5 .85± 1.5 9) %较IR组 ( 13.83± 3.98) %显著减少 (P <0 .0 1)。bcl 2基因的蛋白表达量IP组高于IR组 ;bax ,p5 3基因的蛋白表达量IP组低于IR组。结论 :缺血预处理抑制缺血再灌注所致心肌细胞凋亡与上调bcl 2基因的蛋白表达 ,下调p5 3和bax基因的蛋白表达有关。     

IL-6在大鼠肾脏缺血/再灌注损伤中的变化及山莨菪碱的影响

目的观察大鼠肾脏缺血-再灌注损伤（IRI）的不同时间内肾组织和血液中IL-6水平的动态变化以及山莨菪碱（654—2）干预的影响。方法构建大鼠肾IRI模型：切除大鼠右肾，夹闭左肾动脉1h，松开再灌注1、4、24h；654—2分别于缺血和再灌注前10min腹腔注射，12h追加一次。用双抗体夹心ELISA法分别动态检测血清和肾组织中IL-6含量，同时做肾功能指标——血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）和肾系数（RC）检测。结果缺血组IL-6含量低于对照组（P〈0．05），而再灌注1h（R1h）组显著高于缺血组（P〈0．01）。再灌注4h组（R4h）和24h组（R24h）与缺血组比无明显差异，两组肾组织中IL-6的含量均低于再灌注1h组（P〈0．05）。肾组织中IL-6含量的动态变化和血液中IL-6含量的变化呈直线正相关（r=0．86，P〈0．01）。654—2干预可使R4h和R24h组的IL-6含量较未处理组增高（P〈0．01），同时使R4h组SUN、Scr及肾系数也明显增高（P〈0．01或P〈0．05），使R24h组的Scr明显降低（P〈0．01），但SUN及肾系数无明显变化。结论在再灌注的早期，肾组织和血液中IL-6的含量升高，随之下降接近于单纯缺血水平。654—2预处置使IL-6增多的同时加重早期肾IRI，再灌注24h后才显示其治疗作用。     

缺血预处理对肺保护的临床研究

在常温下长时程阴断一侧肺动脉主干作肺叶切除病例２０例,１０例为预处理组,１０例为对照组。结果提示：预处理组轿中降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）及肺静脉氧分压（ＰｐｖＯ２）较对照组明显增加（Ｐ〈０．０５）,而血中丙二醛（ＭＤＡ）含量及肺平均动脉压（ＭＰＡＰ）较对照明显降低（Ｐ〈０．０５）。提示缺血预处理能减轻在体肺缺血再灌注损伤,其机制可能与内源性降钙素基因相关肽产生增加有关。     

缺血预处理对肺保护的临床研究

在常温下长时程阻断一侧肺动脉主干作肺叶切除病例２０ 例,１０ 例为预处理组,１０ 例为对照组。结果提示：预处理组血中降钙素基因相关肽（ Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ） 、超氧化物歧化酶（ Ｓ Ｏ Ｄ） 及肺静脉氧分压（ Ｐｐｖ Ｏ２）较对照组明显增加（ Ｐ ＜ ０ ．０５） ,而血中丙二醛（ Ｍ Ｄ Ａ） 含量及肺平均动脉压（ Ｍ Ｐ Ａ Ｐ） 较对照组明显降低（ Ｐ＜ ０ ．０５） 。提示缺血预处理能减轻在体肺缺血再灌注损伤,其机制可能与内源性降钙素基因相关肽产生增加有关。     

缺血预处理抑制缺血再灌注所致兔在体心肌细胞凋亡

目的：为探讨缺血预处理对缺血再灌注过程中心肌细胞凋亡的影响。方法：将24只新西兰白兔制成在体心肌缺血／再灌注模型,并随机分成假手术对照组（P组）,缺血／再灌注对照组（IR组）,缺血预处理组（IP组）,结果：IP组心肌梗死面积与缺血面积的比率比IR组显著减少（P＜0．05）;凋亡指数IP组亦比IR组小（P＜0．01）,IR组心肌DNA Ladder形成明显,IP组DNA Ladder模糊不清,结论：缺血预处理对缺血／再灌注损伤中心肌细胞凋亡具有抑制作用。     

缺血预处理抑制缺血再灌注所致兔在体心肌细胞凋亡

目的 :为探讨缺血预处理对缺血再灌注过程中心肌细胞凋亡的影响。方法 :将 2 4只新西兰白兔制成在体心肌缺血 /再灌注模型 ,并随机分成假手术对照组 (P组 )、缺血 /再灌注对照组 (IR组 )、缺血预处理组 (IP组 )。结果 :IP组心肌梗死面积与缺血面积的比率比IR组显著减小 (P <0 .0 5 ) ;凋亡指数IP组亦比IR组小 (P <0 .0 1 ) ;IR组心肌DNALadder形成明显 ,IP组DNALadder模糊不清。结论 :缺血预处理对缺血 /再灌注损伤中心肌细胞凋亡具有抑制作用     

缺血预处理减轻在体肺缺血再灌注损伤

３０只日本雄性大耳兔,随机等分为２组。缺血预处理先采用左肺门阻断１０ｍｉｎ,开放再灌注１５ｍｉｎ的肺血预处理,然后阻断左肺门６０ｍｉｎ,开放再灌注６０ｍｉｎ,对照组未采用预处理。结果示在再灌注后６０ｍｉｎ,预处理组血中血管紧张素Ⅱ含量、动脉氧分压及肺组织中超氧化物歧化酶含量罗对照组明显增加,而平均肺动脉压和肺组织的丙二醛含量及肺泡损伤较对照组明显减低。提示缺血预处理能减轻在体兔肺缺血再灌注损作     

肢体缺血预处理对兔肾急性缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察肢体缺血预处理对肾脏急性缺血再灌注损伤(IRI)能否产生保护作用,并通过肾功能、组织病理学等检测评估其效果。方法(1)建模:40只新西兰大白兔随机分为3个组,假手术(S)组8只,缺血再灌注(IR)组和预处理(LIP)组各16只,后2个组兔采用右肾切除、左肾动静脉阻断1h开放法建立肾脏缺血再灌注模型,S组仅切除右肾,游离左肾动静脉但不阻断。(2)肢体缺血预处理方法:LIP组在阻断前,先以止血带在双下肢根部绑扎,阻断血流5min,完全开放10min,反复4次。(3)评估指标:对比各组兔在再灌注后8、24h和3、7d时肾功能、肾组织MDA含量和SOD活性以及组织病理学差异。结果LIP组再灌注后血清Scr和BUN升高幅度要明显低于IR组(P<0.05),在再灌注后3d内血Scr和BUN明显低于IR组(P<0.05);LIP组再灌注后24h内SOD活性和MDA含量的变化幅度明显低于IR组(P<0.05),且在各时间点SOD活性均明显高于IR组(P<0.05),MDA含量均明显低于IR组(P<0.05);LIP组光镜下病理改变轻于IR组。结论肢体缺血预处理能减轻肾脏缺血再灌注引起的组织病理改变,降低肾组织MDA含量并增加SOD活性,改善肾功能,对急性肾脏IRI起到明显的保护作用。