原位聚合酶链技术检测肝细胞癌组织内丙型肝炎病毒核酸及其意义

应用一步反转录。聚合酶链原位扩增法（ＯＲＴ－ＰＣＲＩＳ）检测肝细胞癌（ＨＣＣ）及癌周组织内丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶＲＮＡ），同时以一步反转录－ＰＣＲ（ＯＲＴ－ＰＣＲ）法检测血清及肝组织匀浆内ＨＣＶＲＮＡ。发现癌和癌周组织经原位扩增后ＨＣＶＲＮＡ检出率为７７．８％（２／２７）及８１．５％（２２／２７），而血清及组织匀浆内仅为２９．６％及３７．Ｏ％，两者与癌及癌周组织相比差异均有显著性（Ｐ＜０．０１）。ＯＲＴ－ＰＣＲＩＳ示在癌组织中ＨＣＶＲＮＡ以核型为主（１２／２１），阳性细胞点样分布，细胞内信号强度多为＋（５７．１％）；而癌周组织以核浆型为主（１４／２２），阳性细胞弥漫分布，信号强度多为＋＋＋（５０．０％）。无论在癌还是在癌周组织均未发现ＨＣＶｃＤＮＡ存在。结果提示ＯＲＴ－ＰＣＲＩＳ优于ＲＴ－ＰＣＲ，ＨＣＶ对本地区ＨＣＣ发生、发展起着极为重要的作用。癌周ＨＣＶ复制较癌组织内活跃，癌和癌周细胞核阳性表明ＨＣＶＲＮＡ在核内整合或复制，这种整合或复制对肝细胞基因组ＤＮＡ产生的影响可能与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）相类似。     

逆转录－套式－聚合酶链反应检测HCV RNA正链和负链及与肝细胞癌的关系

为了解ＨＣＶ与肝癌的关系，采用ＨＣＶ５－ＮＣＲ正相引物和反相引物逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测了２２例肝癌手术患者血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链和负链；用ＨＢＶＣ保守区引物ＰＣＲ法检测了ＨＢＶＤＮＡ。结果发现：５例抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者中，３例血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链扩增试验均阳性；１例三者均阴性；１例血清和癌旁组织阳性。３例正链扩增试验阳性的癌组织和癌旁组织均检出了ＨＣＶＲＮＡ负链，但血清中未检出负链。在２２例ＨＣＣ中１３例血清、８例癌组织和１５例癌旁组织中检出ＨＢＶＤＮＡ。５例有ＨＣＶＲＮＡ和／或抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者血清、和／或癌组织、和／或癌旁组织中均伴随ＨＢＶＤＮＡ和／或ＨＢ－ＶＭ阳性。提示ＨＣＶ可在癌旁肝细胞或肝癌细胞中感染并复制；ＨＢＶ感染与肝癌发生的关系比ＨＣＶ感染更密切。     

肝细胞癌组织中HCV基因型的逆转录原位PCR检测

目的 从分子病理学水平探讨HCV基因型与HCE发生的关系.方法 采用逆转录原位PCR法对95例HCC及其非癌组织中1b型和2a型HCV进行检测,同时采用Okamoto法对HcC组织RNA抽提物中HCV基因型加以验证.结果 HCC中HCV阳性率为44%(42/95),检出3种HCV基因型,包括1b(13例,31%)、2a(23例,55%)、混合型(1b+2a,2例,5%)和3a(4例,10%),1b型检出率(14%)与2a型者(24%)无显著性差异(χ2=3.427,P＞0.05),两型与HCE主要病理学参数的相关性相似.2a型阳性细胞在癌和非癌区的分布相似,而1b型在癌组织多呈局灶分布,在非癌区多呈局灶/弥漫分布.HCG中1b型HCV的核一胞质型/核型阳性信号较2a型者明显多见(χ2=4.073,P＜0.05).去除逆转录并用RNase A处理后,1b型和2a型HCV仍分别有5例和9例可见阳性信号.结论 我国两种常见的HCV基因型与HCC发生的相关性相似,HC/3中HCV相关DNA及其与宿主基因组整合的可能性不能除外.     

HCV核心抗原在肝细胞癌及癌旁肝组织中的免疫组化研究

ＨＣＶ核心抗原在肝细胞癌及癌旁肝组织中的免疫组化研究汪荣泉周子成杨建明房殿春目前有关丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）相关抗原在肝细胞癌（ＨＣＣ）中表达定位研究作者所见报道不多。因此采用ＳＰ法和ＨＣＶ核心抗原的单克隆抗体、ＨＢｓＡｇ的多克隆抗体对ＨＣＣ及癌旁组织...     

逆转录—套式—聚合酶链反应检测HCV RNA正链和负链及与肝细胞…

为了解ＨＣＶ与肝癌的关系，采用ＨＣＶ５′－ＮＣＲ正相引物和反相引物逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测了２２例肝癌手术患者血清，癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链和负链，用ＨＢＶＣ保守区引物ＰＣＲ法检测了ＨＢＶＤＮＡ，结果发现，５例抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者中，３例血清，癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链扩增试验均阳性，１例三者均阴性，１例血清和癌旁组织阳性。３例正链扩增试验阳性     

丙型肝炎病毒在肝外组织复制状态和抗原表达

目的 探讨丙型肝炎肝外组织丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ,ＨＣＶ）感染和复制状态及其意义。方法 分别采用免疫组织化学和逆转录多聚酶链反应（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ,ＲＴＰＣＲ）方法检测９例丙型肝炎肾,心,胰腺和肠等肝外组织ＨＣＶ多种抗原和正链,负链ＨＣＶ ＲＮＡ。结果 ９例中６例（６６．７％）在肝外组织检出ＨＣ     

HCV NS5和核心抗原在肝细胞癌及癌旁肝组织的表达及意义

采用ＳＰ法检测４６例肝细胞癌及其３８例癌旁肝组织中ＨＣＶ ＮＳ５抗原，ＨＣＶ核心抗原和ＨＢｓＡｇ。结果在癌组织中的检出率分别为１５．２％，２１．７％和１９．６％，癌旁组织中的检出率分别为３１．６％、３６．８％和７８．９％；ＮＳ５抗原、核心抗原伴ＨＢｓＡｇ者分别为２１．７％和２３．９％，不伴ＨＣＶ核心抗原、ＮＳ５抗原者分别为４７．８％和５０％。两种ＨＣＶ抗原和ＨＢｓＡｇ均定位于肝细胞和肝癌细胞的胞浆     

聚合酶链反应研究丙型肝炎病毒与肝癌的关系

聚合酶链反应研究丙型肝炎病毒与肝癌的关系谢小明，苏先狮，张铮，郑宣鹤，陈一德丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是输血后肝炎和散发非甲非乙肝炎的主要致病因子。近年来国内外已报道，在肝细胞癌（ＨＣＣ）患者特别是乙型肝炎病毒标志阴性者中，抗－ＨＣＶ有高检出率。作者为进...     

肝细胞肝癌癌组织及癌旁肝组织中HCVNS5蛋白的检测

为了解肝细胞肝癌（ＨＣＣ）患者丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染状况，应用免疫组织化学方法以单克隆鼠抗－ＨＣＶＮＳ５检测了一组ＨＣＣ患者癌组织和癌旁肝组织中ＨＣＶ表达情况。结果：６４例ＨＣＣ患者癌旁肝组织中，共检出ＨＣＶＮＳ５阳性３０例（４６．９），阳性信号位于癌细胞和癌直细胞胞浆中，阳性细胞多呈弥漫或簇状分布；３０例ＨＣＶＮＳ５呈阳性的标本中，７例只于癌直细胞中检出，１２例只存在于癌组织中，另１１例癌旁     

丙型肝炎病毒感染与原发性肝癌关系的研究

本文应用ＰＣＲ调查了ＨＣＶ感染与原发性肝癌发生的相关性，发现：①约三分之一肝癌的发生可能与ＨＣＶ感染有关；②约四分之三ＨＢＶ五项免疫标志全阴性肝癌的发生可能与ＨＣＶ或（和）隐匿性ＨＢＶ感染有关；③肝癌组织中确有ＨＣＶ的复制；④蜡块组织可获得与血清大致相似的定性ＨＣＶＰＣＲ结果；③Ⅱ型ＨＣＶ在ＨＣＶ相关性肝癌的发生中可能起着主导作用。     

肝癌组织中丙型和乙型肝炎病毒基因状况研究

采用逆转录巢式ＰＣＲ技术检测了５１例ＨＣＣ患者的肝癌及癌周肝组织中ＨＣＶＲＮＡ正负链，同时以巢式ＰＣＲ技术检测了这些组织中的ＨＢＶＤＮＡ。结果，１１．８％（６／５１）检出组织中ＨＣＶＲＮＡ正链：其中５例在癌周肝组织，２例在癌组织中检测出ＨＣＶＲＮＡ负链，由于负链ＲＮＡ为ＨＣＶ的复制中间体，不释放到细胞外，其检出ＨＣＶ感染与ＨＣＣ关系的研究提供了进一步的病因证据，组织中ＨＢＶＤＮＡ检出率高达９２．２     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCV RNA检测及意义

目的 了解丙肝患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶＲＮＡ存在情况及有其临床意义，方法 应用套式ＰＣＲ检测４６例急性丙型肝炎（丙型肝炎以下简称丙肝）和４２例慢性丙型肝炎患者血清和ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ。结果 慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ检出率显著高于急性丙型患者（Ｐ〈０．００１），急，慢性丙型肝患者血清和慢性丙肝患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶ ＲＮＡ检出率显著高于ＡＬＴ正常的抗－ＨＣＶ阳性     

慢性乙型肝炎患者血清及肝组织中乙型肝炎病毒核心基因的研究

３６例肝穿刺诊断为慢性乙型肝炎患者的肝组织及血清，用ＨＢＶ全基因核酸杂交法及聚合酶链反应（ＰＣＲ）法扩增了病毒的ＰｒｅＣ／Ｃ区基因片段。发现ＰＣＲ法扩增后再经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ吸印转移及核酸杂交（ＰＣＲ－ＳＢＨ）可显著提高检出ＨＢＶ基因的敏感性。对５例无任何血清ＨＢＶ标记者证实在其肝内存在ＨＢＶ基因。用ＡｖａⅡ，ｓａｕ３ＡＩ，ＸｍｎＩ，ＢｓｔＮＩ及ＴａｑＩ酶切图谱分析上述病例的ｃ基因，与ｐＡＤＲ－１Ｃ基因比较，有４例（５份标本）有Ｓａｕ３ＡＩ的异常酶切位点，提示ＨＢＶ不仅ＰｒｅＣ区存在变异株，Ｃ基因中亦可有变异。     

有偿供血员,丙型肝炎及肝癌患者HCV基因分型

为了解本地区ＨＣＶ基因亚型的分布情况，作者对采自６６例有偿供血员、８７例输血后丙型肝炎、１５例散发性丙型肝炎和９例原发性肝癌患者的共１７７份ＨＣＶＲＮＡ阳性的血清标本，进行了ＨＣＶ基因亚型分析。结果发现除２例输血后丙肝患者系ＨＣＶ－Ⅲ感染外，其余被检者均为ＨＣＶ－Ⅱ感染。此结果表明ＨＣＶ－Ⅱ是本地区的ＨＣＶ伏势株     

66例慢性非甲非乙型肝炎患者的丙型肝炎病毒感染研究

以ＨＣＶ－Ｔ３序列为引物，结合ＲＴ－ＰＣＲ和寡聚核甘酸探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，检测６６例慢性非甲非乙型肝炎（ＮＡＮＢＨ）患者的血浆ＨＣＶ－ＲＮＡ，阳性４２例（６３．６％）。同样病例以相当于ＨＣＶＣ区基因编码和ＮＳ３区编码的人工合成肽抗原检测抗ＨＣＶ，阳性４９例（７４．２％）。这６６例慢性ＮＡＮＢＨ病例，抗ＨＣＶ和ＨＣＶ－ＲＮＡ双阳性者３８例（５７．６％）；抗ＨＣＶ阴性而ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性者４例（６．１％）；抗ＨＣＶ阳性而ＨＣＶ－ＲＮＡ阴性者１１例（１６．７％）。其中诊断为散发型ＮＡＮＢＨ者３５例，检出ＨＣＶ－ＲＮＡ者１７例（４８．６％），为输血后ＮＡＮＢＨ者３１例，检出ＨＣＶ－ＲＮＡ者２５例（８０．７％）。     

THE ROLE OF HEPATITIS B VIRUS IN THE ETIOLOGY OF HEPATOCELLULAR CARCINOMA IN AUSTRALIA

:Fifty-three patients with Hepatocellular Carcinoma (HCC) from three Sydney teaching hospitals were examined for possible evidence of Hepatitis B virus (HBV) infection. Hepatitis Surface Antigen (HB_sAg) was positive in 38% of those in whom it was sought, a higher incidence than previously reported in an Australian series. A further 13 patients had antibody to Hepatitis B core (Anti-HB_C), but negative HB_sAg, confirming past exposure to HBV. Where serum was available evidence of HBV infection was obtained in 62% of patients. It is argued that the incidence of HBV infection may be shown to be higher still with the advent of new technology as applied to HBV assays and tissue stains. The need to be aware of the growing evidence of a strong association between Hepatitis B virus and the development of HCC is stressed and the clinical implications are discussed. (Aust NZ J Med 1983; 13: 605–607.)     

HCV RNA及其编码蛋白在肝癌和癌旁肝组织中的表达

本文采用光敏生物素标记的ＨＣＶｃＤＮＡ探针和免疫金银显色法对４２例肝癌和癌旁肝组织中的ＨＣＶＲＮＡ和ＨＣＡｇ进行了检测，发现ＨＣＶＲＮＡ可以感染肝癌细胞，其分布状态及其抗原表达亦与肝组织一致。这些阳性细胞在组织中的感染状态多呈区域性，在此区域又可呈片状、簇状或散在分布。     

慢性丙型肝炎患者血清HCVRNA定量分析：竞争性聚合酶链反应

目的：探讨ＨＣＶ复制水平与肝病进展的关系。方法：用竞争性逆转录聚合酶链反应（ＣＲＴ－ＰＣＲ）定量检测２７例慢性丙肝患者（ＣＨＣ）血清ＨＣＶＲＮＡ。结果：ＣＨＣ患者血清ＨＣＶＲＮＡ水平变化范围１０２～１０６ｃｏｐｉｅｓ／５０ｕｌｓｅｒｕｍ。１３例慢性迁延性肝炎（ＣＰＨ）患者血清ＨＣＶＲＮＡ平均水平（５．０６８±１．０４，Ｌｏｇ１０ｃｏｐｉｅｓ／５０μｌｓｅｒｕｍ）明显低于１０例慢性活动性肝炎患者（ＣＡＨ）（５．７９±０．２５）和４例肝硬化（Ｃｉｒ）患者（５．８３±０．７５），Ｐ值均＜０．０５。血清ＨＣＶＲＮＡ水平同ＡＬＴ水平间呈正相关（ｒ＝０．４９９７，Ｐ值＜０．０５）。结论：表明丙肝病毒感染后病毒血症水平低，ＨＣＶ复制水平与肝损伤相关，在慢性感染中ＨＣＶ仍活跃复制，并与肝病进展相关。     

肝细胞癌患者肝组织中丙型肝炎病毒抗原的定位研究

用过氧化物酶与抗过氧化物酶（ＰＡＰ）法检测了７３例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者肝组织中的丙型肝炎病毒抗原（ＨＣＶＡｇ）和ＨＢｓＡｇ及ＨＢｃＡｇ。结果显示：ＨＣＶＡｇ，ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ的检出率分别为２８．８％，７５．３％和２６．０％，ＨＣＶＡｇ阳性的肝细胞多呈散在分布，ＨＣＶ染色颗粒既可见于细胞浆也可见于细胞核，ＨＣＶＡｇ的检出与ＨＢＶ的感染态多显著相关，提示，ＨＣＶ可在ＨＣＣ患者的肝细胞中表达，Ｈ