难辨梭菌感染的诊断进展

难辨梭菌是伪膜性结肠炎及抗生素相关腹泻的主要病原菌。实验室诊断难辨梭菌的传统方法：细菌培养和组织培养检测毒素。细菌培养敏感，但时间长，缺乏特异性。组织培养高度敏感，高度特异。但设备条件及技术水平要求高。新近开发的酶联免疫检测试剂盒，快速检测难辨梭菌毒素，是缺乏组织培养条件的小型实验室首选方法。分子诊断技术，如基因探针技术，聚合酶链反应极有价值地充实了难辨梭菌的常规诊断。使难辨梭菌感染的诊断迈上新的     

难辨梭菌分子分型技术

难辨梭菌，抗生素相关腹泻及伪膜性结肠炎的感染因子，是医院内获得性腹泻最常见的病因，并已造成多起老年病人及免疫低下病人的暴发流行。分子分型方法，全细胞可溶性蛋白图谱分析技术，基因组核酸酶切电泳，脉冲场凝胶电泳及ＰＣＲ分型技术。对确定难辨梭菌流行株，控制其传播，指导临床治疗具有重要意义。     

难辨梭菌感染的诊断进展

难辨梭菌是伪膜性结肠炎及抗生素相关腹泻的主要病原菌。实验室诊断难辨梭菌的传统方法：细菌培养和组织培养检测毒素。细菌培养敏感，但时间长，缺乏特异性。组织培养高度敏感，高度特异。但设备条件及技术水平要求高。新近开发的酶联免疫检测试剂盒，快速检测难辨梭菌毒素，是缺乏组织培养条件的小型实验室首选方法。分子诊断技术，如基因探针技术，聚合酶性反应极有价值地充实了难辨梭菌的常规诊断。使难辨梭菌感染的诊断迈上新的台阶。     

北京市某院难辨梭菌临床分离株耐药性及毒素基因携带情况分析

目的了解航天中心医院难辨梭菌临床分离株的耐药性及毒素基因携带情况。方法收集不明原因腹泻患者的粪便样本335例,采用TaqMan-MGB探针实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)进行菌属鉴定及毒素基因检测。对tpi基因阳性样本进行厌氧培养、分离及药物敏感性试验。回顾性分析分离出A~+B~+菌株和A~-B~+菌株患者的临床资料。结果 335例粪便样本中,56例(16.7%)检出难辨梭菌tpi基因,其中10株(17.9%)A~-B~+菌株、46株(82.1%)A~+B~+菌株。检出菌株对阿莫西林、甲硝唑、克林霉素、万古霉素、莫西沙星、氨苄西林-舒巴坦及美罗培南的耐药率分别为7.1%、10.7%、75.0%、0、57.1%、5.4%、8.9%。有29株(51.8%)菌对克林霉素、莫西沙星双重耐药。分离出2种菌的患者病史、临床用药史、常规实验室检测指标差异均无统计学意义(P0.05)。结论航天中心医院难辨梭菌临床分离株以多重耐药模式多见,A~+B~+菌株和A~-B~+菌株感染患者临床特征无差异。     

难辨梭菌分子分型技术

难辨梭菌，抗生素相关腹泻及伪硬性结肠炎的感染因子，是医院内获得性腹泻最常见的病因，并已造成多起老年病人及免疫低下病人的暴发流行。分子分型方法，全细胞可溶性蛋白图谱分析技术，基因组核酸酶切电泳，脉冲场凝胶电泳及PCR分型技术。对确定难辨校菌流行标，控制其传播，指导临床治疗具有重要意义。     

一种用于艰难梭菌分离培养的新型显色培养基的性能评价

目的评价自主研发的艰难梭菌显色培养基(CDCA)性能。方法选用艰难梭菌及其他细菌的标准株进行CDCA显色的特异性评价;将艰难梭菌标准菌株梯度稀释后测定BD公司CDSA、生物梅里埃公司CDIF和CDCA的灵敏度。收集临床120份粪便样本分别采用3种培养基进行艰难梭菌分离培养,并对生长菌落进行质谱鉴定和tpi基因检测,以3种平板中任1种能培养出艰难梭菌的样本定义为真阳性。结果在CDCA平板上除了梭形梭菌、双酶梭菌、第三梭菌、脆弱拟杆菌等菌种能够少量生长并显色外,对其他实验菌种均有抑制作用。CDSA、CDIF和CDCA检测艰难梭菌的灵敏度分别为2.0×10~5 CFU/mL、8.0×10~1 CFU/mL和4.0×10~2 CFU/mL。120份标本中检出艰难梭菌31份(25.8%),CDSA、CDIF和CDCA培养阳性标本分别为25份(20.8%)、28份(23.3%)和26份(21.7%),3种显色培养基对临床腹泻标本检测阳性率差异无统计学意义(χ~2=0.418,P=0.811)。3种显色培养基的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为:CDCA 83.8%、100%、100%、94.7%;CDIF 90.3%、98.9%、96.6%、96.7%;CDSA 80.6%、100%、100%、93.7%。结论本实验室研发的CDCA的特异性和灵敏度较高,可用于临床艰难梭菌的初步分离。     

肠道微生物群疗法防治复发性艰难梭菌感染研究进展

在抗菌药物和后抗菌药物时代,艰难梭菌感染的发病率、复发率和死亡率仍显著上升,是目前重要的医院获得性感染之一。反复艰难梭菌感染是诊治过程中的一大难点,3次或3次以上感染后复发率高达60%。正常肠道的菌群破坏是复发性艰难梭菌感染的重要发病环节。因此,在重建肠道稳态上发展而来的微生物群疗法似乎可以有效地预防和治疗复发性艰难梭菌感染。本文对粪便微生物群移植、标准化微生物群疗法、益生菌、非产毒型艰难梭菌在复发性艰难梭菌感染防治中的研究进展进行综述,旨在为临床诊治提供依据。     

检测艰难梭菌感染的五种方法比较

目的 比较分析用于美国医院临床微生物实验室的5种艰难梭菌感染检测方法 ,从中选择1种适于早期诊断艰难梭菌感染的灵敏、特异、简单、快速及经济的实验方案.方法 对174份临床送检的腹泻患者粪便标本同时用TGC、Premier Toxin A&B EIA(A/B-EIA)、C.Diff Quick Chek Complete(D-EIA)、BD GeneOhm Cdiff assay(BD-PCR)和实验室发展的PCR(LD-PCR)方法 进行艰难梭菌的检测.以金标准TGC法作为参比标准,评价各种检测方法 的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值.结果 TGC法检测174份腹泻患者大便标本,艰难梭菌感染的阳性率为13.8%(24/174).与TGC法比较,4种检测方法 的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为:A/B-EIA 62.5%、99.3%、93.8%、94.3%;D-EIA 66.7%、98.7%、88.9%、94.9%;BD-PCR 83.3%、98.7%、90.9%、97.4%;LD-PCR 79.2%、93.3%、65.5%、96.6%.所有标本中,至少1种方法 检测为阳性的标本共计34份,其中15份标本5种方法 检测结果 均为阳性.D-EIA法检测结果 中,18份标本GDH及毒素A/B均为阳性,23份仅GDH阳性,133份GDH及毒素A/B均为阴性.18份D-EIA检测阳性标本全部与BD-PCR检测结果 一致,16份与TGC法检测结果 一致.24份TGC阳性标本中,有22份包括在41份GDH抗原呈阳性的标本中.D-EIA检测为假阴性的8份标本中,4份BD-PCR检测为阳性.根据本实验结果 ,D-EIA与BD-PCR相结合的二步法检测方案灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为83.3%、98.7%、90.9%、97.4%.结论 从技术角度评价,以BD-PCR法为最优.结合D-EIA与BD-PCR的二步法检测方案,是对临床送检标本进行艰难梭菌感染检测的灵敏、特异、简便、快速、经济的检测方案.     

艰难梭菌感染实验室诊断方法的研究进展

艰难梭菌是一种专性厌氧革兰阳性芽孢杆菌,一般认为是环境和人类肠道中的正常菌群.长期应用抗生素、免疫抑制剂或化疗药物使耐药的艰难梭菌产毒株过度繁殖并释放毒素是导致艰难梭菌相关性腹泻(CDAD)的主要因素.CDAD的发病率在全球范围内不断上升,尤其是高产毒株在北美地区引起了医院内的暴发流行,引起了世界范围的关注.在此对艰难梭菌的致病机制和实验室诊断方法的研究进展进行阐述,为CDAD的早期诊断和治疗提供新思路.     

难辨梭状芽孢杆菌检测与临床应用

肠道的正常菌群对于致病菌提供了一个生态学的屏障 ,由于抗生素的使用破坏了这种保护 ,可能引起一些内源性细菌的过度生长或医院感染获得病原菌。难辨梭状芽孢杆菌就是其中一种。它是抗生素相关腹泻和伪膜性肠炎腹泻的一个重要原因[1 ,2 ] 。在腹泻患者粪便中分离出难辨梭状芽孢杆菌并呈A毒素阳性是抗生素相关性腹泻的重要标志。本试验探讨难辨梭状芽孢杆菌培养及难辨梭状芽孢杆菌A毒素在抗生素相关性腹泻中的应用及临床价值。一、材料和方法1 .病例选择 :1 999年 1月～ 2 0 0 1年 1 2月选择经抗生素治疗 1周以上出现腹泻的成人患者 ,患者…     

MALDI-TOF MS自建库在红色毛癣菌感染中的临床快速诊断价值

目的建立并评价实验室自建的红色毛癣菌基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)数据库的可行性。方法将红色毛癣菌标准菌株ATCC 28188用沙保罗葡萄糖琼脂(SDA)平板28℃培养5d,分别用双甲酸夹心法和甲酸提取法作为蛋白提取方法,利用MALDI-TOF MS对标准菌株进行质谱数据采集,建立2种不同蛋白提取方法的菌株数据库"双甲酸夹心法自建库"和"甲酸提取法自建库";并用2种蛋白提取方法对21株红色毛癣菌临床分离株进行蛋白提取后,分别选取"双甲酸夹心法自建库+Bruker商品库"、"甲酸提取法自建库+Bruker商品库"和"Bruker商品库"做质谱鉴定,从而对各数据库的鉴定效果进行评价。结果"甲酸提取法自建库+Bruker商品库"对21株红色毛癣菌临床分离株的鉴定得分显著高于其余两组,差异有统计学意义(P<0.05),匹配率为21/21;"Bruker商品数据库"与"Bruker商品数据库+双甲酸夹心法自建库"的鉴定得分比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验室建立的"甲酸提取法自建库+Bruker库"对红色毛癣菌的鉴定能力好,适用于临床微生物实验室。与待测菌统一培养条件所建立的数据库丰富了原有的数据库信息,使待测菌的鉴定更为准确。双甲酸夹心法操作简便,但对红色毛癣菌蛋白提取的效果欠佳。     

MALDI-TOF-MS检测分枝杆菌属正确率的荟萃分析

目的对MALDI-TOF MS快速检测分枝杆菌属的正确率进行荟萃(meta)评价。方法收集1990-2015年,国外公开发表的关于MALDI-TOF MS检测分枝杆菌的文献,按meta分析的要求对文献进行检索、筛选,对纳入的文献进行质量评价,对符合条件的研究进行meta分析。结果共有11篇文献纳入,对各文献的研究进行数据提取后合并MALDI-TOF MS鉴定分枝杆菌属的正确率,结果正确率为91%。结论 MALDI-TOF MS对分枝杆菌属的鉴定有较好的准确性。     

质谱技术在感染性疾病诊断中的应用进展

质谱（mass spectrometry,MS）技术,尤其是基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption/ion-ization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）,具有简便、快速及特异地分析微生物生物大分子标记物质谱图,从而实现临床微生物检验中细菌、真菌及病毒在属、种、株水平上的鉴定。MS在菌血症、尿路感染、毒素检测及耐药监测方面显示出巨大的优势,有望成为临床微生物实验室感染性疾病常用诊断方法。     

Mass spectroscopic characteristics of low molecular weight proteins extracted from calcium oxalate stones: preliminary study

It is believed that boundary compositions of matrix proteins might play a role in stone formation; however, few proteomic studies concerning matrix proteins in urinary stones have been conducted. In this study, we extracted low molecular weight proteins from calcium oxalate stones and measured their characteristic patterns by mass spectroscopy. A total of 10 stones were surgically removed from patients with urolithiasis. Proteins were extracted from the stones and identified by one-dimensional electrophoresis (sodium dodecyl sulfate buffer [SDS]-polyacrylamide gel electrophoresis [SDS-PAGE]). After in-gel digest, samples were analyzed by the surface-enhanced laser desorption ionization-time of flight (SELDI-TOF) technique. The peptide sequences were analyzed from the data of mass spectroscopy. Proteins were identified from Database Search (SwissProt Protein Database; Swiss Institute of Bioinformatics; http://www.expasy.org/sprot) on a MASCOT server (Matrix Science Ltd.; http://www.matrixscience.com). A total of three bands of proteins (27, 18, and 14 kDa) were identified from SDS-PAGE in each stone sample. A database search (SwissProt) on a MASCOT server revealed that the most frequently seen proteins from band 1 (27 kDa) were leukocyte elastase precursor, cathepsin G precursor, azurocidin precursor, and myeloblastin precursor (EC 3.4.21.76) (leukocyte proteinase 3); band 2 (18 kDa) comprised calgranulin B, eosinophil cationic protein precursor, and lysozyme C precursor; band 3 (14 kDa) showed neutrophil defensin 3 precursor, calgranulin A, calgranulin C, and histone H4. The modifications and deamidations found from the mass pattern of these proteins may provide information for the study of matrix proteins. Various lower molecular weight proteins can be extracted from calcium oxalate stones. The characteristic patterns and their functions of those proteins should be further tested to investigate their roles in stone formation.     

Treatment of Clostridioides (Clostridium) difficile infection

Abstract

Clostridioides (formerly: Clostridium) difficile infection (CDI) is a major cause of diarrhoea for inpatients as well as outpatients. Usually, CDI is healthcare-associated but the number of community-acquired infections is increasing. CDI is generally associated with changes in the normal intestinal microbiota caused by administration of antibiotics. Elderly and immunocompromised patients are at greater risk for CDI and CDI recurrence. Recently, the treatment options of CDI have undergone major changes: current recommendations speak against using metronidazole for primary CDI, fidaxomicin and bezlotoxumab have been added to the treatment armamentarium and microbial replacement therapies have emerged. Several other therapies are undergoing clinical trials. In this article, we review current treatment guidelines, present the most recent data on the options to treat CDI and glance towards future developments.

• KEY MESSAGES

• The cornerstones for the treatment of CDI are vancomycin and fidaxomicin. Metronidazole should be used only in mild-to-moderate disease in younger patients who have no or only few risk factors for recurrence.

• In recurrent CDI, bezlotoxumab infusion (a monoclonal antibody against C. difficile toxin B) may be considered as an adjunctive therapeutic strategy in addition to the standard care provided to patients with several risk factors for recurrence.

• Faecal microbiota transplantation (FMT) should be offered to patients with frequently recurring CDI.

     

医院分离耐碳青霉烯类药物鲍曼不动杆菌亲缘性的研究

目的通过分析鲍曼不动杆菌(Ab)碳青霉烯类药物耐药和敏感菌株蛋白指纹图谱,了解碳青霉烯类药物耐药菌株亲缘性远近的临床应用价值。方法收集临床分离对碳青霉烯类药物耐药(22株)和敏感的Ab(18株),利用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)检测细菌蛋白质指纹图谱。采用Biomarker Wizard 3.1软件分析碳青霉烯类药物耐药和敏感Ab相关差异蛋白,采用SPSS 19.0对差异蛋白进行聚类分析,追溯其临床感染的亲缘性。结果碳青霉烯类药物耐药与敏感的Ab菌株间蛋白质谱的表达差异有统计学意义(P0.05)。聚类分析结果显示碳青霉烯类药物耐药Ab在院内的分布以A型为主,B型次之。结论聚类分析碳青霉烯类抗菌药物耐药的Ab蛋白质谱结果能够判断细菌亲缘关系远近,可为Ab感染和临床流行病学调查提供理论依据。     

MALDI-TOF MS检测人乳头瘤病毒18种基因型的性能评价研究

目的采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)检测系统检测18种高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV),建立MALDI-TOF MS检测系统的性能评价方案。方法对MALDI-TOF MS检测系统进行性能评价,验证其准确度、精密度、检测下限和抗交叉反应能力是否符合要求。初筛选取深圳市罗湖区人民医院的347份宫颈脱落细胞标本,分别采用MALDI-TOF MS、之江和Cobas48003种检测系统对HR-HPV进行检测,比较检测结果的一致性。以Cobas4800为参考标准,对MALDI-TOF MS和之江HR-HPV检测系统的灵敏度和特异度进行评价。结果MALDI-TOF MS检测系统与Sanger测序法检测结果的符合率为100.00%,结果完全一致;18种HPV型别检测下限为102~103 copy/mL,批内和批间精密度均为100.00%。多种相近生殖道病原微生物之间均无交叉反应。MALDI-TOF MS、之江和Cobas4800检测系统3种检测方法总符合率为92.51%,MALDI-TOF MS与之江检测系统检测结果的一致性高达96.83%。以Cobas4800检测系统为参考方法,MALDI-TOF MS检测系统的灵敏度和特异度均高于之江检测系统。结论MALDI-TOF MS检测系统对18种HR-HPV检测性能良好,可满足临床和科研中HPV核酸通量检测的需求。     

优化差速离心法在血培养报警瓶MALDI-TOF MS细菌鉴定中的应用

目的评价用于血培养报警瓶基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorptionionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)细菌直接鉴定的前处理方法。方法建立优化差速离心法流程。收集首都医科大学附属北京同仁医院2015年10月至12月外周血培养报警标本100例(均为单一菌),以转种培养后菌落MALDI-TOF MS鉴定为金标准,对比差速离心法优化前后、BRUKER SEPSITYPER试剂盒(简称试剂盒法)鉴定结果,评价优化差速离心法的准确率。收集2016年1月至10月外周血及体液培养报警标本516例(经革兰染色确认为细菌),对优化差速离心法进行大样本应用研究。结果优化的差速离心法、试剂盒法及优化前的差速离心法鉴定准确率分别为97%、94%及92%,差异无统计学意义;优化的差速离心法鉴定分值2.0的例数则多于其他两种方法,与优化前相比差异具有统计学意义(χ~2=3.916,P=0.048)。516例样本单一菌486例,混合菌30例。优化的差速离心法鉴定准确率为92.2%(476/516)。外周血及其他体液样本鉴定准确率分别为96.5%(179/289)、86.8%(197/227),差异有统计学意义(χ~2=16.92,P0.01)。单一菌鉴定准确率为97.1%(472/486),其中革兰阳性球菌和阴性杆菌分别为96.9%、99.1%,均明显高于阳性杆菌(55.6%),差异有统计学意义(χ~2=25.329,P0.01;χ~2=48.526,P0.01)。混合菌鉴定准确率为13.3%(4/30)。体液样本混合菌比例为11%(25/227),显著高于外周血[1.7%(5/289),χ~2=20.008,P0.01]。结论优化差速离心法鉴定率高、成本低、易操作,优于试剂盒法,对单一细菌MALDI-TOF MS血培养报警直接鉴定更具临床应用价值。     

miR-146a rs2910164 C>G基因多态性与先天性心脏病易感性的研究

目的研究中国汉族人群中miR-146a rs2910164 C>G基因多态性与先天性心脏病发生危险因素关系。方法采用以医院为基础的病例-对照研究,运用质谱SNP分型技术对120例法洛四联症(TOF)患儿,124例大动脉转位(TGA)患儿和136例对照人群进行了miR-146a rs2910164 C>G基因多态性分析,计算各种基因型的先心发生风险及其95%可信区间。结果 miR-146a rs2910164 C>G基因多态三种基因型CC,CG,GG在TOF组、TGA组以及对照组的频率分别为33.9%(CC),49.2%(CG),16.9%(GG);36.1%(CC),51.6%(CG),12.3%(GG)以及35.8%(CC),51.5%(CG),12.7%(GG);通过Logistic回归分析,发现携带miR-146a rs2910164 CG或GG等位基因型与TOF和TGA的发病风险无明显相关。结论 miR-146a rs2910164 C>G基因多态性可能不是先天性心脏病发生的危险因素,相关结果需要进一步研究证实。     

基于基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪快速鉴定结果的阳性血培养中常见细菌直接药物敏感性试验的评估

目的 :为有效缩短阳性血培养中常见细菌药物敏感性(药敏)试验的报告周转时间,探讨在基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)直接鉴定结果的基础上,对阳性血培养中的常见细菌直接进行药敏试验的可行性。方法:应用MALDI-TOF MS直接鉴定阳性血培养中的细菌,对其中能够准确鉴定的常见细菌直接进行纸片扩散法(Kirby-Bauer法,K-B法)和自动微量稀释测最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)法药敏试验(直接药敏试验)。同时,将血培养阳性细菌按常规操作流程转种至合适的培养基,培养过夜后获得的纯菌落再进行K-B法和MIC法常规药敏试验。将直接药敏试验结果与常规药敏试验结果进行比对。结果:以常规药敏试验结果为标准,革兰阳性球菌的K-B法和MIC法直接药敏试验结果与之符合率分别为98.5%和98.4%,小误差率均为0.9%,大误差率分别为0.6%和0.7%;革兰阴性杆菌的K-B法和MIC法直接药敏试验结果的符合率分别为97.8%和98.1%,小误差率分别为1.4%和1.1%,大误差率分别为0.8%和0.9%。以血培养阳性报警为起始时间,阳性血培养中细菌直接药敏试验的报告周转时间约为24 h,而常规药敏试验的报告周转时间约需48 h。结论:阳性血培养中常见细菌的直接药敏试验结果与常规药敏试验结果高度相符,且直接药敏试验的报告周转时间可提前至24 h。因此,结合MALDI-TOF MS快速鉴定的结果,对阳性血培养中的常见细菌直接进行药敏试验可在临床微生物室中推广应用,为临床及时、合理和有效的抗生素治疗提供可靠依据。