PCR检测HBV-DNA不同试剂和方法的比较

本文对目前部分市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂进行了灵敏度和检测率的测定，并在检测ＨＢＶ低水平感染中，用ＰＣＲ和斑点杂交作了比较。结果不同公司试剂盒的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度从０．１ｆｇ到１ｐｇ不等，同一公司不同批号的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度也从１００ｆｇ到１００ａｇ不同，差达１０３～１０４倍。ＰＣＲ和斑点杂交在三组不同乙肝标志组中的阳性检测率为ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｅ（－）组：ＰＣＲ７０％，斑点杂交４６．４％；ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｓ（＋）组：ＰＣＲ３５．７％，斑点杂交２．９％；ＨＢｓＡｇ（－）抗ＨＢｅ（＋）抗ＨＢｓ（＋）／ＨＢｃ（＋）组：ＰＣＲ１６．６％，斑点杂交３．３％。三组检测率均Ｐ＜０．０１。因此，目前市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂必须标化，ＰＣＲ更适合于检测ＨＢＶ低水平的感染     

1种新型冠状病毒核酸检测试剂的性能验证

摘要：目的?验证一种新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒的检测性能。方法?依据CNAS-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》，使用2019-nCoV RNA液体性能验证参考品，依次对实时荧光RT-PCR试剂的符合率、检出限、交叉反应、精密度和抗干扰能力进行验证及评价。结果?实时荧光RT-PCR试剂检测2019-nCoV RNA的符合率为100%，检出限为125 copies/mL。该试剂检测人冠状病毒HCoV-OC43、人冠状病毒HCoV-HKU1、人冠状病毒HCoV-229E、人冠状病毒HCoV-NL63、SARS冠状病毒、中东呼吸综合征(MERS)冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒、腺病毒、肠道病毒、肺炎支原体、EB病毒、人巨细胞病毒和结核分枝杆菌无交叉反应；2.0×103?copies/mL和2.0×105?copies/mL的精密度参考品N基因检测的批内变异系数(CV)为0.70%及1.36%，批间CV为1.17%及1.72%；ORF1ab基因的批内CV为0.48%及0.52%，批间CV为1.36%及2.39%；加入内源性干扰物血红蛋白及清蛋白、外源性干扰物利巴韦林及阿奇霉素对2019-nCoV RNA的检测结果无影响。结论?该试剂检测2019-nCoV RNA的符合率、检出限、交叉反应、精密度和抗干扰能力均符合临床分子生物学扩增检验的要求，可为临床提供可靠依据。     

乙型肝炎病毒既往感染和HBsAg阴性慢性肝病患者定性和定量检测HBV-DNA的临床意义

我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染的高发区，人群HBV感染率达60％左右，其中HBV携带率约占10％，不少研究表明，乙肝病毒表面抗原(HBsAg)阴性的HBV病毒标志物阳性者中仍有少部分人为低水平HBV感染。我们对113例HBV既往感染者和34例HBsAg阴性慢性肝病患者进行了HBV-DNA定性和定量检测，并探讨其临床特点，现报告如下。     

HBsAg胶体金检测试剂进货性能验证的探讨

目的通过使用已知水平的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)标准物质和HBsAg阳性标本验证HBsAg胶体金试剂(简称乙肝试纸条)性能,并作对比分析,以确定乙肝试纸条进货性能验证的最佳方法。方法选用不同水平的HBsAg标准物质,分别验证不同厂家乙肝试纸条性能,观察5、10、15、30min后试纸条的变化,同时使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上述标准物质的S/CO值,挑选最合适的HBsAg阳性标本40份验证乙肝试纸条性能。结果用4IU/mL的标准物质验证试纸条性能时,5min后90%试纸条出现反应性结果,15min后全部试纸条出现反应性结果,另外通过倍比稀释方法,得出最低检出限为2IU/mL,不同厂家之间差异无统计学意义(P>0.05);4IU/mL的标准物质通过ELISA得出相应的S/CO在28.00±2.00,而使用S/CO值28.00±2.00的HBsAg阳性标本验证试纸条性能时,试纸条全部出现反应性结果。结论4IU/mL的HBsAg标准物质或ELISA中S/CO在28.00±2.00的HBsAg阳性标本,均能够作为乙肝试纸条进货性能验证的质控品,采用HBsAg标准物质作为阳性质控品,既没有职业暴露风险,又解决了HBsAg阳性标本反复冻融导致抗原活性下降的问题,是乙肝试纸条进货性能验证的最佳选择。     

新型冠状病毒核酸检测的性能验证及评价

目的验证实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)检测系统的主要性能。方法参考《医学实验室质量和能力的要求》第1部分通用要求GB/T22576.1-2018和第10部分分子生物检验学领域的要求GB/T22576.10-2018对该实验室RT-qPCR检测SARS-CoV-2核酸的检测系统的符合率、重复性、检出限、抗干扰能力、交叉反应等性能特征进行验证及评价。结果该实验室与国家卫生健康委临床检验中心2020年第1、2次SARS-CoV-2室间质评标本的阳性符合率为92%,阴性符合率为100%,总符合率为95%,其中有1例阳性标本未检出阳性,系标本浓度低于最低检测限;弱阳性标本检测的靶基因ORF-1ab和N的Ct值的批内变异系数(CV)分别为1.38%和1.16%,批间CV分别为1.84%和1.72%,均小于5%;检测限浓度(500 copies/mL)标本5次重复检测SARS-CoV-2核酸结果均为阳性;在加入严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)、磷酸盐缓冲液(PBS)、人冠状病毒NL63(NL63)、人冠状病毒HKU1(HKU1)、人冠...     

HBV-DNA定量与乙肝病毒感染免疫学检测结果对比分析及意义

本文采用荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)和ELISA两种方法同时检测了 310份血清 ,并对结果进行了对比分析 ,结果显示 :80例HBsAg (+)、HBeAg (+)、HBcAg (+)组的血清HBVDNA检出率为 92 5 % (74例 ) ,平均拷贝数为 4 10× 10 10 /ml,6 8例HBsAg (+)、HBeAb (+)、HBcAb (+)组血清HBVDNA检出率为32 35 % (2 2例 ) ,平均拷贝数为 1 31× 10 9/ml,70例HBsAg (+)、HBeAb (+)组血清HBVDNA检出率为45 71% (32例 ) ,平均拷贝数为 4 0 8× 10 8/ml;32例HBV M全阴性组血清HBVDNA检出率为 6 .6 7% (2例 ) ,平均拷贝数为 1 5 4× 10 8/ml。结果表明 :HBV -M阴性的病人也可能有HBVDNA阳性 ,因此为临床提供HBV感染、复制及传染性的判断以及指导治疗 ,应选择乙肝两对半标志物检测的同时做PCRHBVDNA定量检测     

13种呼吸道病原体多重检测试剂的性能验证

目的对13种呼吸道病原体多重检测试剂盒(PCR毛细管电泳片段分析法)进行性能验证。方法参照CNAS-GL039:2019《分子诊断检验程序性能验证指南》和厂商性能确认方法,用包含13种病原体(经参比方法测序法确认)的临床咽拭子样本进行方法符合率验证,用国家参考品、慢病毒载体和质粒混合样本(包含所有13种病原体)进行检出限验证,用包含其他7种病原体的临床咽拭子样本进行交叉反应验证,用分别添加终浓度为5%的全血、1.2 mg/mL的硫酸沙丁胺醇的临床咽拭子样本进行抗干扰能力验证,以试剂盒说明书的性能指标作为结果判断标准。结果包含13种病原体的临床咽拭子样本经本试剂盒检测,各自出现所检测病原体的特征峰,满足方法符合率的验证要求;以国家参考品、慢病毒载体和质粒混合后的样品重复检测20次,对应的13种病原体均为阳性,满足检出限的验证要求;包含其他7种病原体的临床咽拭子样本均未出现本试剂盒所检测的病原体特征峰,满足交叉反应的验证要求;分别添加终浓度为5%的全血、1.2 mg/mL的硫酸沙丁胺醇的临床咽拭子样本检测结果与未添加干扰物质的对照组检测结果相同,满足抗干扰能力的验证要求。结论 13种呼吸道病原体多重检测试剂盒各项性能验证参数与厂商声明的标准一致,可正式应用于临床检测。     

HBV-DNA定量检测的临床意义

血清乙肝病毒(HBV)抗原抗体五项指标(HBV-M)是临床诊断乙型肝炎的常用指标.因HBV为逃避人类免疫清除不断地发生变异,故定量观察血清HBV-DNA含量对诊断和治疗慢性乙型肝炎具有重要意义.我们对350例不同HBV-DNA表现形式的患者采用PCR荧光定量法进行HBV-DNA含量检测,探讨其临床意义,现报告如下.     

PCR在检测HBV DNA中的应用

ＰＣＲ在检测ＨＢＶＤＮＡ中的应用汤继光，黄立东，范友谊，李玉强，杨爱民，徐云，周光炎目前，国内文献报道用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，大多集中在方法学上［１，２］。我们用ＰＣＲ技术和酶联免疫试验（ＥＬＩＳＡ）同时检测了６１２...     

聚合酶链反应检测血透患者血清中HBV DNA的临床意义

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了４２例维持性血液透析患者血清标本的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，以评价ＰＣＲ技术在调查透析中心ＨＢＶ感染的流行病学方面的应用价值。结果在４２例标本中有１７例ＨＢＶＤＮＡ阳性（４０．５％），与常规血清标志物相比较，ＨＢｓＡｇ阳性者其ＨＢＶＤＮＡ阳性率为６０．９％，而全部血清标志物均阴性者其ＨＢＶＤＮＡ阳性率为１３．３％。提示：ＰＣＲ方法是监测中心透析ＨＢＶ传染的更灵敏、更可靠手段。它也是对ＨＢＶ变异类型的鉴别及疗效评价方面的一个重要方法。     

荧光定量聚合酶链反应检测库存血浆HBV-DNA及HCV-RNA

目的 调查库存血中HBV-DNA及HCV-RNA的阳性率。方法 采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法,对合格库存血浆进行微量汇集池标本(10份×50μl汇集)中的HBV-DNA和HCV-RNA测定,再对阳性汇集池中的标本进行单份检测。结果 250份(分25个汇集池)受检血浆中HCV-RNA阳性1份(0.4％),HBV-DNA阳性2份(0.8％)。结论 荧光定量PCR检测微量血浆汇集池标本法筛查血液病毒核酸是提高输血安全性的一种先进方法。     

聚合酶链反应检测血透患者血清中HBV—DNA的临床意义

乙型病毒性肝炎是维持性血液透析患者严重的感染并发症之一,它可以在患者之间交叉传播,引起透析中心肝炎的流行。而血清中HBV-DNA的存在,一直被看作是病毒复制的标志物,且与活动性肝病及传染性有关。本文采用聚合酶链反应(PCR)对透析中心42例维持性血液透析患者血清中HBV-DNA进行检测,并与常规血清标志物进行比较,以评价PCR方法在调查透析中心HBV感染的流行病学意义。 1 材料和方法 1.1 标本来源 维持性血透患者42例,男28例,女14例,平均年龄为45.3±10.8岁。透析治疗时间平均为     

荧光定量PCR检测HBV-DNA室内质控物的制备及初步应用

目的：制备HBV-DNA荧光定量PCR检测的室内质控物,并对其应用价值进行初步评价。方法：留取单-乙肝模式的混合血清样本,并用正常人血清将收集的血清稀释至所需的浓度,用与待检血清相同的仪器、同一品牌的HBV-DNA定量试剂盒进行检测,确定其靶值,计算x^-、s、CV,绘制质控图。结果：自制的室内质控物高低值的变异范围分别为1.10%、1.01%（CV〈5%）,稳定性好。结论：临床实验室可以用单-乙肝模式的混合血清制备HBV-DNA定量检测的质控物,其制备容易,测定结果稳定,有一定的临床实用价值。     

DA3200-ABI7500全自动核酸提取平台高敏HCV RNA定量检测性能验证

目的 验证DA3200-ABI7500全自动核酸提取高敏检测HCV RNA方法 性能.方法 参考美国临床实验室标准化协会批准指南(CSLI-EP),采用DA3200全自动核酸提取平台及荧光定量PCR检测HCV RNA,评价检测方法 的核酸提取纯度、精密度、正确度、线性范围、分析灵敏度、特异度和抗污染能力等性能指标.结果...     

HBV-DNA实时荧光定量检测程序的测量不确定度评估及分析

目的根据国际标准化组织(ISO)15189实验室认可要求,评估乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量检测程序的测量不确定度。方法采用室内质控获得的中间精密度计算HBV-DNA测量重复性引入的测量不确定度,采用卫生部室间质量评价结果计算HBV-DNA偏倚引入的测量不确定度,将二者合成计算出合成标准不确定度和扩展不确定度。结果 HBV-DNA在室内质控水平为4.03(对数的倒数)时实验室内测量重复性引入的相对测量不确定度为3.45%,HBV-DNA偏倚引入的相对测量不确定度为5.27%。相对合成标准不确定度为6.30%;相对扩展不确定度为12.60%;而HBV-DNA在该水平的相对测量不确定度可表示为(4.03±12.60)%。结论 HBV-DNA实时荧光定量检测程序的测量不确定度可作为检验结果质量持续改进的依据,并用于解释临床结果。     

终点法荧光定量PCR检测HBV-DNA的临床应用

目的运用终点法荧光定量PCR检测HBV-DNA,探讨其临床应用价值。方法运用本研究组制备的引物和荧光探针分别将HBV-DNA质粒及临床标本进行普通PCR和实时荧光定量PCR反应,再将普通PCR产物在荧光测定仪上测定荧光强度,与实时荧光定量PCR结果相比较,观察其符合程度。另外,运用相同方法比对本研究制备的PCR体系与市售荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA的符合程度。结果终点法荧光定量PCR与实时荧光定量PCR检测HBV-DNA质粒及临床标本结果一致(P>0.05),与市售荧光定量PCR试剂比较,其符合程度较高(P>0.05)。结论终点法荧光定量PCR检测临床HBV-DNA标本稳定可靠,可作为荧光定量PCR的应用方法之一在基层医院推广应用。