酶标记抗人IgM McAb及其初步鉴定应用

采用辣根过氧化物酶(HRP),以改良过碘酸钠法标记了国内三个单位制备的6种抗人IgM单克隆抗体(McAb),并对其进行了初步鉴定和应用,结果显示这些HRP标记抗体的效价高低不一。分析表明McAb与多克隆抗体一样,其标记前的效价高低是决定HRP标记后效价高低的关键因素。选择高效价的HRP-抗人IgM McAb用于ELISA间接夹心法中检测病人血清特异性IgM抗体,其特异性和敏感性与采用HRP-羊抗人μ链免疫血清检测结果基本相同。     

两株抗小鼠胰腺癌McAb特性的初步研究

本文报告用盐析,DEAE纤维素层析或亲和层析法纯化2B6、2B102株抗小鼠胰腺癌McAb杂交瘤培养上清及其小鼠腹水中的McAb,并经SDS-PAGE鉴定,FITC标记后,用直接荧光免疫法分析其在35例人类各     

小鼠杂交瘤腹水、实体瘤及血清中单抗滴度观察

<正> 单克隆抗体(McAb)的生产常规都是将杂交瘤细胞注入同系小鼠腹腔诱发其产生腹水而获得。但在制备腹水的过程中,常可见到小鼠腹腔生长成大量实体瘤而影响腹水的产生。为了能及时获得所需的McAb,我们在制备抗B型葡萄球菌肠毒素(SEB)McAb腹水的过程中,比较了实体瘤与相应鼠腹水和血清中所含特异性McAb的滴度。     

小鼠抗星形胶质细胞上调基因1(AEG-1)单克隆抗体的制备及应用

目的制备并纯化具有高特异性的抗星形胶质细胞上调基因1(AEG-1)单克隆抗体(mAb),并进行异硫氰酸荧光素(FITC)标记,鉴定标记的mAb与肿瘤细胞的结合能力。方法小鼠腹水诱生法制备并纯化抗AEG-1 mAb,Western blot法和免疫组织化学染色检测mAb的纯度及免疫活性。流式细胞术检测FITC标记mAb的标记效率,流式细胞术及免疫细胞化学染色检测FITC标记mAb与肿瘤细胞的结合能力。结果纯化得到了具有较高纯度的抗AEG-1 mAb,免疫活性良好;流式细胞术检测结果显示,FITC标记的mAb标记的肿瘤细胞表面荧光强度明显增加,标记率可达到90%以上;FITC标记的mAb可特异性识别并结合AEG-1阳性表达的肿瘤细胞,还能与小鼠体内注射的肿瘤细胞结合,在BALB/c小鼠血液中可检测出荧光染色阳性的肿瘤细胞。结论成功制备出小鼠抗AEG-1 mAb并进行了FITC标记,标记的mAb在体内外均可与肿瘤细胞特异性结合。     

抗人淋巴细胞T8抗原样McAb的研制和初步鉴定

用杂交瘤技术,将经人外周血E花环阳性细胞免疫小鼠脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合后,产生一分泌IgG_1亚型McAb杂交瘤株。其所分泌抗体经微量放射免疫测定及间接免疫荧光法分析,表明它只能与T细胞系、76％的胸腺细胞及22％的外周血T淋巴细胞反应,不与其它各种不同细胞反应。将此抗体所识别入外周血T淋巴细胞亚群与抗Leu-2a识别T8~+细胞、抗Leu-3a识别T4~+细胞比较,发现此抗体与抗Leu-2a识别同一群细胞。此抗体能从T细胞表面沉淀出30KD(还原条件)或78KD(非还原条件)分子,并完全阻断FITC标记抗Leu-2a与T细胞的结合,说明此抗体是识别T8抗原样的McAb。     

抗癌胚抗原鼠/人嵌合抗体的体内及体外活性

由于鼠源性McAb在人体长期反复应用可产生人抗小鼠抗体(HAMA),近年来人们采用构建鼠/人嵌合抗体以降低鼠McAb的免疫原性。本文作者用基因工程方法构建了抗癌胚抗原(CEA)鼠/人嵌合抗体基因,并在小鼠骨髓瘤细胞中表达出嵌合抗体。活性检测结果表明;所制备的嵌合抗体既保持了亲代鼠McAb的特异性亲和力。又具有更强的体内及体外生物学活性。     

人胱抑素C单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备人胱抑素C(Cystatin C,Cys C)的单克隆抗体(McAb),并建立检测人血清Cys C的颗粒增强透射免疫浊度分析法(PETLA).方法:构建人Cys C的原核表达载体pET32a( )/Cys C,纯化Cys C重组蛋白并免疫BALB/c小鼠,杂交瘤技术制备Cys C的McAb;以自制的McAb包被乳胶颗粒,建立PETIA法测定血清Cys C,并对其分析性能进行初步方法学评价.结果:建立分泌抗Cys C单克隆抗体的杂交瘤细胞株3株,其分泌的McAb为IgG1,Western blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合;将杂交瘤细胞注射于小鼠腹腔,腹水中Cys C McAb效价为1∶4×106;用自制的McAb建立定量测定Cys C的PETIA,方法学评价试验结果证实我们建立的PETIA法,与进口试剂有很好的可比性,具有较满意的方法学性能.结论:成功制备了抗Cys C单克隆抗体,该抗体可用于建立定量检测Cys C的PETIA法.     

抗解脲脲原体单克隆抗体的制备

作者用提纯的解脲脲原体抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞FO融合,获得3株稳定分泌抗解脲脲原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体,并对杂交瘤细胞株进行了鉴定。用ELISA法测定该抗体腹水效价为1:64000～1:2048000,1F9、2B2抗体的Ig类型为IgG1,5H1为IgG2b。建立的3株能稳定分泌抗解脲脲原体的McAb杂交瘤细胞林,经液氮冻存后复苏,其分泌抗体能力不受影响。     

一种简便快速筛选双位点单克隆抗体方法的建立

本文建立了一种无需对单克隆抗体(McAb)进行纯化和酶标记,利用市售酶标记抗体既可筛选双位点McAb的简易方法。其基本原理是,首先将待筛选McAb与酶标抗体制成McAb-酶标抗体复合物,再以此复合物作示踪剂进行夹心ELISA。若夹心孔OD492值高于第一、二阴性对照孔之和者, 提示所筛选McAb可能为双位点抗体。文中还对应用该方法时的注意事项进行了讨论。     

兔抗单克隆个体基因型抗体的制备鉴定

利用具有抑制恶性疟原虫生长能力的94D_1株单克隆抗体(McAb)免疫家兔。得到抗血清后,经Seharose 4 B—正常BALB/c小鼠IgG固相反复吸附3次以上,以除去其抗同种型和同种异型抗体,然后再经Sepharose4 B—9~4D_1株McAb亲和层析柱提纯,得到抗9_4D_1个体基因型抗体。这种抗体经免疫双扩散、IFA封闭试验、SPRIA等方法鉴定,证明具有较高的特异性。在双扩散中,仅与9_4D_1株McAb产生沉淀线;在IFA封闭试验中,能抑制     

小鼠抗兔IgG单克隆抗体的制备与应用

制备小鼠抗兔IgG的mAb,经标记HRP和FITC后,应用于ELISA、Western blot、免疫组织化学染色试验以及FCM.以正常兔IgG为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过常规B淋巴细胞融合技术,获得两株分泌抗兔IgG mAb的杂交瘤细胞株,间接ELISA腹水效价均达1 ×10-7,且亚类均为IgG1(κ).抗体经鉴定、纯化后,以改良的过碘酸钠法标记HRP,本室常规方法标记FITC.FITC标记的2A1 mAb的F/P值为4.1,2F11的F/P值为2.7.HRP标记抗体的效价和工作浓度分别:2A1为1:25600和1:3200,2F11为1:102400和1:25600.在相同工作浓度条件下,ELISA、Western blot的实验结果,HRP标记的2F11 mAb明显优于商品化抗兔pAb,而且,2A1和2F11mAb经标记后还可用于免疫组化和FCM,显示出很好的应用前景.     

抗乙醇诱导的大鼠肝脏微粒体细胞色素P-450单克隆抗体的制备及特性鉴别

从乙醇处理的大鼠分离细胞色素P-450(EtOH-P-450)。纯化后免疫BALB/c雌鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓癌细胞制备杂交瘤。应用固相放射免疫法筛选单克隆抗体(McAb)产生杂交瘤。试验中使用~(35)[S]蛋氨酸标记的大鼠抗小鼠k链McAb作为第二抗体(Yelton,D.E,etal:HYbriboma 1。5-11。1981)。分离31个单独的产生一种单一鼠免疫球蛋白     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗体的研究——Ⅱ、单克隆抗体介导ADCC效应的探讨

本文用HSV-1SM44株感染BHK细胞,经放射性同位素~(51)Cr标记制备靶细胞,以正常小鼠脾细胞为效应细胞,应用5株抗HSV McAb,建立了McAb介导ADCC-~(51)Cr释放试验的测定方法,对McAb介导的ADCC效应测定的有关试验条件做了选择,确定了最适工作条件。ADCC测定结果表明,5株抗HSV McAb介导ADCC的活性不同,McAb 1A12,2A8,1G8无ADCC活性;而1D10和2C5 2株McAb 1:10稀释时的~(51)Cr释放率分别为27.09和25.07％,进一步稀释至10~(-2)或10~(-3)时,这2株McAb仍有ADCC活性。结果提示,不同的HSV抗原决定簇诱导产生的抗体,在介导ADCC免疫保护作用上是有差异的。并为McAb用于临床治疗HSV感染的可能性提供了实验资料。     

结合点与Fcε受体相同的单克隆抗体

IgE 抗体与肥大细胞及嗜硷性粒细胞上FcεR 有较高亲和性。IgE 通过其Fc 段与FcεR 结合,然而它们相互间的结合点仍未找到,本文作者采用McAb 对此进行了研究。作者提纯了一种Anti-IgE McAb(84-1C)。是用小鼠IgE 免疫大鼠,取大鼠脾细胞与小鼠X_(63-AG8.653)骨髓瘤细胞融合制备。用放射免疫测定法证明84-1C McAb能与RBL 细胞(大鼠嗜硷性粒细胞)上FcεR 竞争游离的IgE,阻断IgE 与RBL 的结合。若将复盖有IgE 的RBL 细胞与84-1C 孵育,可见到84-1C 不与细胞上IgE 结合,这说明84-1C 的结合点在Fc 段上。当IgE 结合RBL 时,其Fc 段被细胞上FcεR 占据,从而     

Annexin A2单克隆抗体制备及初步鉴定

制备Annexin A2特异性单克隆抗体(McAb),为Annexin A2的体内外功能的研究提供有力的抗体工具。以原核表达的全长p36蛋白(Annexin A2单体)免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备针对Annexin A2的McAb。以间接ELISA法筛选出目的杂交瘤细胞株并进行染色体计数;分析McAb的亚型,检测其效价、浓度及亲和常数;以细胞荧光染色,Western blot和RT-PCR鉴定McAb特异性。结果得到1株能稳定分泌特异性针对p36的McAb的细胞株F8,其抗体亚类重链为IgG2a,轻链为κ型;腹水纯化后效价为1∶4 000;亲和常数为3.4×109L/mol。成功获得了能稳定分泌AnnexinA2特异性McAb的细胞株。     

重组人碱性成纤细胞生长因子单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的制备重组人碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF)单克隆抗体,鉴定其特性,建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法以rhbFGF为免疫原,免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合技术建立能稳定分泌抗rhbFGF杂交瘤细胞株,制备抗rhbFGF单克隆抗体,采用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗体亚类,间接ELISA法检测抗体效,Western blot鉴定抗体特异性。HRP标记McAb并建立夹心ELISA检测方法。结果获得2株(分别命名2D3、5F7)可分泌特异性McAb的强阳性细胞株,腹水抗体效价在10-5以上,IgG亚类均为IgG1,轻链为K链。Western blot证明2株McAb特异性良好,双抗体夹心ELISA检测rhbFGF最低检测限达到2 ng/ml。结论成功制备高效价的抗rhbFGF单克隆抗体,建立抗rhbFGF双抗体夹心ELISA定量检测方法。     

低血清培养杂交瘤细胞及提高单克隆抗体产量的研究——Ⅰ、静止培养条件下的研究

单克隆抗体(McAb)在诊断,免疫纯化和治疗等领域的应用日益广泛,使得对McAb的需求量不断增加。小鼠腹水法简便易行,但腹水含有大量杂蛋白,包括小鼠正常Ig。这就给提纯工作带来了困难。所以目前多用体外培养法大量生产McAb。遗憾的是杂交瘤细胞通常需在含有较高浓度(10～20％)小牛血清的培养液中生长繁殖,且培养上清中的抗体浓度比小鼠腹水的抗体浓度低得多。但也用有低血清培养杂交瘤细胞的成功报道。同时改善培养条件可提高培养上清液中的抗体浓度。为了使发酵罐能在成本较低的情况下生产较高滴养度的McAb。我们首先对静止培养的杂交瘤细胞进行了两个方面的研究——驯化适应低血清培的杂交瘤细胞株和添加蛋白质不同水解物以提高培养上清中的抗体产量。     

McAb生产的一种鉴定技术铟玻片免疫试验的应用

常规技术生产McAb已得到广泛应用,其中筛选阳性克隆是最费时但又十分重要的步骤。各种酶联、荧光与放免等方法都在McAb筛选中得到相应的发展及应用,但这些方法无一不需要一种标记的抗原或抗体试剂。 铟玻试验不需要标记试剂即可用于抗原抗体反应,并可用于McAb筛选。本文用微量ELISA方法为对比,对铟玻试验有关因素进行了系统研究,结果表明,本法简便易行,敏感性与特异性高,结果判定迅速,是一种值得推广应用的筛选McAb技术。     

分泌抗脲酶单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

脲酶是一种植物蛋白酶,可催化其底物中的脲素分解产氨,使底物溶液的pH值升高,溶液中的溴甲酚紫指示剂由黄色转变为紫色。脲酶的另一特点是活性不受叠氮钠抑制,由于人和动物的组织细胞无内源性脲酶存在,在检测细胞表面抗原时,不存在类似内源性过氧化物酶形成的非特异性染色。但脲酶标记抗体的过程繁杂,对酶的活性有影响,我们应用淋巴细胞杂交瘤技术,获得6株分泌抗脲酶单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,将抗脲酶McAb应用于非标记脲酶酶免疫实验中,获得了满意结果。现将实验程序及结果报告如下。     

抗人IL-5单抗的制备、特性及其在ELISA中的应用(文摘)

IL-5是一种对于不同的靶细胞具有不同免疫调节活性的细胞因子,它在B细胞以及其他造血细胞(如T细胞和嗜酸性粒细胞)的生长和分化过程中起着重要的作用。Harada(1987)和Schumacher等(1988)曾报道抗小鼠IL-5的大鼠单克隆抗体(McAb)与人IL-5有交叉反应性。本文报告抗人IL-5的小鼠McAb的制备。这种小鼠McAb可用于免