Shh/Twist1对大鼠肺动脉内皮细胞间质转化及血管重构的作用机制

目的 探讨Shh/Twist1对低氧诱导的大鼠肺动脉内皮细胞间质转化及血管重构的影响及机制.方法 将原代分离的大鼠肺动脉内皮细胞分为正常对照组(不予低氧处理)和低氧诱导的肺动脉高压(PAH)细胞模型(3％O2低氧处理3 d),PAH细胞模型又分为模型组、Shh抑制组(造模前采用Shh抑制剂预处理细胞)及siRNA-Twist1组(造模前采用siRNA-Twist1预处理细胞);于3％O2培养细胞3 d时,采用划痕实验检测细胞的迁移能力,小管形成实验检测细胞的成管能力,Real-time PCR法检测细胞的CD31、vWF、α-SMA mRNA的表达,Western blot法检测细胞的Shh、Twist1、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶2(MMP2)蛋白的表达.结果 与模型组比较,Shh抑制组和siRNA-Twist1组的迁移和成管能力均降低,差异有统计学意义(P<0.05);Re-al-time PCR及Western blot结果显示,与模型组比较,Shh抑制组和siRNA-Twist1组 α-SMA mRNA及VEGF、MMP2蛋白的表达水平降低,CD31、vWF mRNA的表达升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 抑制Shh/Twist1表达能显著降低大鼠肺动脉内皮细胞的内皮间质转化及血管重构能力.     

双氢青蒿素对低氧下人肺动脉内皮细胞增殖和分泌功能影响

目的探讨双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)对低氧条件下人肺动脉内皮细胞的数量和功能影响,寻找治疗低氧性肺动脉高压的新方法。方法将人肺动脉内皮细胞株进行复苏、传代、鉴定,然后细胞实验分为常氧组、低氧组、低氧+DHA干预组,造模48 h后,分别检测人肺动脉内皮细胞的增殖能力(CCK-8法)、ELISA法检测细胞上清液中超氧物歧化酶(SOD)活性和一氧化氮(NO)含量。结果常氧组、低氧组、低氧+DHA干预组的CCK-8法检测OD值分别为(0.813±0.012)、(0.905±0.018)、(0.842±0.015),各组间比较差异有统计学意义(P0.05);各组SOD活力检测分别为(40.665±0.865)U/mL、(12.988±0.556)U/mL、(26.376±0.831)U/mL,各组间比较差异有统计学意义(P0.05);各组NO含量分别为(23.803±0.778)μmol/L、(48.668±0.881)μmol/L、(37.497±0.793)μmol/L,各组间比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 DHA可以抑制低氧诱导下人肺动脉内皮细胞的增殖能力,改善低氧诱导下SOD活性和抑制低氧诱导下分泌NO的能力;提示DHA对低氧诱导的人肺动脉内皮细胞具有保护作用,推测其对低氧性肺动脉高压的形成可能具有拮抗作用。     

内皮-间质转化参与组织纤维化的研究进展

组织纤维化的典型特征是成纤维细胞过度增殖和细胞外基质过度蓄积。近年来研究表明,成纤维细胞是一组高度异源的细胞群体,除了由局部静止的成纤维细胞活化而来外,还可由上皮细胞、内皮细胞、血管周细胞和骨髓起源的循环祖细胞、单核细胞等转化而来,其中源自内皮细胞的内皮-间质转化是成纤维细胞的重要来源之一,亦是纤维化发生、发展的重要机制之一。     

内皮间质转化在肾脏纤维化中的作用

肾脏纤维化(renal fibrosis,RF)主要表现为肾小管萎缩、肾小球硬化等特征,是所有慢性肾脏病发展为终末期肾脏疾病的共同途径.因此,了解导致RF的基本机制对于开发更好的慢性肾脏病治疗方案至关重要.到目前为止,国内外对RF的发生机制多集中于肾间质成纤维细胞的活化、肾小管上皮细胞的损伤、细胞外基质(extrace...     

低氧/低氧诱导因子-1α通过TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞上皮间质转化

目的：探讨低氧/低氧诱导因子-1α（HIF-1α）对人肝内胆管上皮细胞（HIBEC）上皮-间质转化（EMT）的诱导作用及其分子机制。方法：HIBEC在1%氧浓度的低氧环境中培养,分析细胞迁移、侵袭能力的变化,以及EMT相关标志E-钙黏蛋白和S100A4的表达水平。以HIF-1α的siRNA和转化生长因子-β1（TGF-β1）抑制剂LY364947分别沉默或抑制HIF-1α和TGF-β1,再重复上述实验。结果：与常氧培养相比较,低氧条件下,HIBEC的细胞迁移和侵袭能力明显增强,上皮细胞标志物E-钙黏蛋白表达明显下降,间质细胞标志物S100A4表达明显升高（P＜0.05）。以HIF-1α的siRNA和TGF-β1分别沉默或抑制HIF-1α和TGF-β1后,上述低氧引起的HIBEC生物学变化均受到明显抑制（P＜0.05）。结论：低氧可以通过活化HIF-1α诱导HIBEC发生EMT,这种诱导作用主要是通过TGF-β1完成的。     

内皮-间质转化与心血管疾病的研究进展

内皮-间质转化(EndMT)参与了多种心血管疾病的病理生理过程.近来研究发现,EndMT在动脉粥样硬化、肺动脉高压、静脉移植重建、静脉血管重构等多个病理阶段均起到重要作用,提示其在心血管疾病的防治方面具有重要意义.本文主要对EndMT与心血管疾病的研究进展作一综述,旨在探讨一些可行的治疗方案.     

内皮—间质转化的研究进展

内皮一间质转化(EndMT)是内皮细胞受到外界刺激失去内皮细胞特征,获得间质细胞或肌成纤维细胞表型,表达间质细胞产物的一种生物过程。EndMT不仅在心脏和血管生长发育中发挥重要作用,其在纤维化疾病和肿瘤中也广泛研究。文章对EndMT的信号调节机制及其近期在纤维化和肿瘤发生中的研究进行总结,为临床疾病的治疗提供新的靶点。     

低氧诱导金属硫蛋白对甲状腺乳头状癌上皮间质转化的影响

目的 研究低氧诱导金属硫蛋白(metallothioneins,MTs)对甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法 以人甲状腺乳头状癌NPA细胞为研究模型,将其分为正常氧组(21%O2)、低氧组(5%O2)和MTs-siRNA干扰低氧组,Western blot、RT-PCR方法检测各组细胞MTs、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)和间质细胞波形蛋白(Vimentin)的表达,Transwell/Matrigel方法检测各组细胞侵袭转移细胞数.结果 低氧可诱导NPA细胞表达MTs,并伴随有EMT标志性分子E-cadherin表达的下调和Vimentin表达的升高,侵袭细胞数由正常氧组15.6±2.8增加到40.3±5.1,迁移细胞数由25.1±5.6增加到48.7±7.6,均有统计学差异(P<0.01);MTs靶向干扰可有效抑制低氧诱导的MTs蛋白表达,同时E-cadherin表达回升,Vimentin表达下降,侵袭细胞数仅增加到25.7±4.2,迁移细胞数仅增加到35.5±5.4,与低氧组比较均有统计学差异(P<0.05).结论 低氧所诱导表达的MTs对人PTC细胞发生EMT有促进作用,MTs靶向干扰可使EMT受到部分抑制.     

原代大鼠肺动脉平滑肌细胞的提取和鉴定以及缺氧对其增殖的影响

目的提取SD大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）并原代培养,为研究肺血管疾病提供体外模型,研究缺氧对大鼠PASMCs增殖的影响。方法组织贴壁法分离大鼠PASMCs,光镜观察细胞形态、透射电镜、α肌动蛋白（α-SM-actin）细胞免疫化学和细胞免疫荧光法进行鉴定。原代培养的PASMCs分别于常氧和/或低氧下培养2、6、12、24及48 h,用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法和增殖细胞核抗原（PCNA）细胞免疫化学法检测细胞增殖情况。结果光镜下PASMCs细胞为长梭形,呈典型的＂峰-谷＂状结构。免疫学检测显示胞浆被染成棕黄色,阳性率达96%以上。透射电镜下细胞呈长梭形,胞浆内有密斑、密体和大量肌丝,细胞器较少。MTT检测结果示各时间点缺氧组PASMCs吸光度（A值）均高于相对应的常氧组;与常氧组比较,低氧组A值在12 h时开始增加（P〈0.05）,24 h时增加最显著（P〈0.01）。与缺氧2 h组比较,A值在缺氧12 h开始增高（P〈0.05）,缺氧24 h增高最显著（P〈0.01）,而缺氧48 h与缺氧24 h基本一致。PCNA免疫学结果与MTT结果基本一致。结论用组织块贴壁法提取PASMCs,简单易行,且能得到纯度高、稳定生长的PASMCs。缺氧可以促进PASMCs的增殖。     

CoCl_2对原代培养的猪肺动脉内皮细胞钙离子的影响

目的探讨氯化钴(CoCl2)对原代培养的猪肺动脉内皮细胞钙离子浓度的影响。方法原代培养猪肺动脉内皮细胞,分别用不同浓度的CoCl2刺激2min,用双波长荧光分光光度计观察细胞质内钙离子浓度的变化;另外,用1mmol/L的CoCl2刺激细胞不同时间,观察细胞质内钙离子浓度的变化。结果不同浓度的CoCl2对猪肺动脉内皮细胞内钙离子浓度无显著影响;1mmol/L的CoCl2刺激细胞不同时间也对细胞内钙离子浓度无显著影响。结论与物理缺氧方法不同,化学缺氧试剂CoCl2对原代培养的猪肺动脉内皮细胞的钙离子浓度没有明显影响,表明猪肺动脉内皮细胞对CoCl2的刺激有一定的耐受性。     

低氧对肺动脉内皮细胞一氧化氮合酶及细胞间黏附因子-1表达的影响

目的通过检测低氧状态血管内皮细胞一氧化氮合酶（eNOs）及细胞间黏附因子（ICAM1）表达的变化．探讨低氧对血管内皮细胞功能的影响。方法采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）及Western blot测定低氧条件下不同时间点大鼠动脉内皮细胞中eNOS、ICAM-1 mRNA及蛋白质的表达变化情况。结果同常氧组相比，低氧1h时eNOS、IcAM-1 mRNA及蛋白表达无变化．而6、12、24h时eNOS、ICAM-1mRNA及蛋白表达明显升高（P〈0.05），但eNOS mRNA与ICAM-1mRNA的表达变化在同一时间点并不一致。结论低氧状态下血管内皮细胞eNOS与ICAM-1表达升高，可能参与了低氧性肺血管疾病的发病机制。     

猪肺动脉内皮细胞培养液对离体大鼠心脏的影响

为了探讨心肌再灌注损伤时,内皮细胞的损伤与心肌损伤之间的因果关系。本实验收集经缺氧再给氧处理的培养猪肺动脉内皮细胞培养液灌流Langendorff大鼠心脏(实验组),观察其对心脏功能与生化指标的影响,并设立相应的对照组。在20—30min的观察期内,与对照组比较实验组的冠脉灌注压(CPP),冠脉流出液中磷酸肌酸激酶(CPK)与乳酸脱氢梅(LDH)显著升高;心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)与ATPase活性明显下降,丙二醛(MDA)水平略高,心率(HR)减慢,心律失常,室内压最大上升速率( dp/dt_(max))降低;室内压最大下降速率(-dp/dtmax)与室内压(LVSP)无明显差异。结果表明:经缺氧再给氧处理的培养猪肺动脉内皮细胞培养液可引起离体大鼠心脏损伤,因此提示,心脏内皮细胞的损伤可能是心肌再灌注损伤的起因。     

Effects of L-Tetrahydropalmatine on NOSⅢ Gene Expression in Hypoxia and Cultured Porcine Cerebral Arterial Endothelial Cells during Reoxygenation

L- Tetrahydropalmatine (L- THP) ,a kind of al-kaloid extracted from traditional Chinese medicineRhizoma corydalis,posseses sedative,analgesic andhypnotic effects.Recently,it has been demonstratedthat L- THPalso had calcium- antagonistic and antiar-rythmic effects.Studies showed that L- THP had aprotective effect on acute focal and global cerebral is-chemia- reperfusion injury[1,2 ] .Many studies provedthat the production of NO wasincreased significantlyduring ischemia- reperfusion.The o…     

二苯乙烯苷对低氧肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨二苯乙烯苷对低氧肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响及其机制。 方法 SD大鼠PASMCs经低氧及TSG干预24h后, CCK-8检测细胞增殖及TSG的细胞毒作用,流式细胞仪分析细胞周期,实时定量PCR(RT-PCR)检测HIF-1α mRNA的表达,酶标仪检测活性氧(ROS)的产生。 结果 二苯乙烯苷能够抑制低氧PASMCs增殖,阻滞细胞周期于G₀/G₁~S期,并且实验浓度的二苯乙烯苷无明显细胞毒作用,进一步的研究发现二苯乙烯苷能够抑制HIF-1α mRNA的表达及ROS的产生。 结论 二苯乙烯苷可抑制低氧PASMCs增殖,其机制可能与抑制HIF-1α mRNA的表达及ROS产生有关。     

同型半胱氨酸对大鼠脑微血管内皮细胞抑制的实验研究

目的通过培养的大鼠脑微血管内皮细胞(BMVEC),研究不同浓度的同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞损伤的影响。方法将培养的BMVEC分成两大组,将其与不同浓度的Hcy(50、200μmol/L和1、2 mmol/L)和(或)无CuSO4(4μmol/L)共同培养18 h,分别利用噻唑蓝、细胞苏木精-伊红染色和流式细胞仪技术观察BMVEC细胞的生长及凋亡情况。结果BMVEC在CuSO4的协同下与不同浓度的Hcy培养18 h后,细胞活力A值呈现剂量依赖性的降低,超过1 mmol/L的Hcy对BMVEC已经形成了显著的抑制和毒性效应,滞留于G1期的细胞比例增加。结论高浓度的Hcy具有内皮细胞毒作用,可以抑制细胞的生长。     

贯叶连翘提取物对百草枯所致的急性肺微血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨贯叶连翘提取物（HP）在百草枯（PQ）诱导的大鼠肺微血管内皮细胞（rPMVECs）急性损伤中的作用和对活性氧族物质（ROS）产生的影响。方法原代培养rPMVECs,分为PQ中毒组、HP干预组以及空白对照组。同时向PQ中毒组和HP干预组加入PQ溶液（0．1mmol／L）0．5h后开始计时,再向HP干预组分别添加三种不同浓度的HP溶液（250mg／L、10mg／L、1mg／L）。采用四氮唑盐（MTT）比色法观察不同时同点（3、12、24、48、72h）和不同浓度的HP对rPMVECs生长抑制率的影响,同时用分光光度比色法测定相应的细胞上清液中总超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。结果在0．1mmol／L的PQ诱导rPMVECs损伤后,随着HP浓度的增高和作用时间的增长,HP可明显减缓rPMVECs生长抑制率的升高;三种浓度的HP几乎在各个时同点均能明显减缓总SOD的活力的下降（P〈0．05）;72h时,三种浓度的HP均能明显减缓MDA含量的增加（P〈0．05）,而在其它时间点,三种浓度的HP几乎不能明显减缓MDA含量的增加。结论HP对PQ诱导的急性rPMVECs损伤具有保护作用。     

异搏定对缺氧和缩血管物质促肺动脉平滑肌细胞增生的影响

采用~３Ｈ－ＴｄＲ掺入、结晶紫染色以及ＰＣＮＡ免疫细胞化学方法观察异搏定对缺氧和４种缩血管物质促肺动脉平滑肌细胞增生的影响。结果发现：①４种缩血管物质（ＥＴ－１、ＡＴⅡ、Ａ_（２３１７８）、ＫＣｌ）均有不同程度的促肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）ＤＮＡ合成的作用,其作用可被Ｃａ~（２＋）通道阻滞剂异搏定阻断;②缺氧所致ＰＡＳＭＣ增殖的３项指标变化同样可被异搏定阻断。表明［Ｃａ~（２＋）］ｉ升高可能为缺氧和缩血管物质引起肺血管ＳＭＣ收缩和增生的信息传递的共同途径。     

缺氧诱导因子1与缺氧性肺动脉高压的研究进展

缺氧诱导因子1（HIF-1）是在缺氧条件下,广泛存在于哺乳动物和人体内的重要的转录调节因子.对低氧时组织细胞的信号转导起着重要的中介作用,通过对缺氧反应基因在转录水平的调节,从而使机体对缺氧刺激作出适应性的病理生理反应.HIF-1通过影响缺氧性肺血管收缩、肺血管重建、炎症发生及细胞凋亡等过程,参与缺氧性肺动脉高压（PHP）的形成.国内外学者通过对HIF-1与HPH相关性的探索和研究为临床HPH的治疗提供了一个新靶点.