靶向干扰CDK2AP1对乳腺癌MCF-7细胞体外迁移和侵袭的影响

目的：探讨靶向干扰细胞周期调节蛋白依赖性激酶2-关联蛋白-1（CDK2AP1）对乳腺癌MCF-7细胞体外迁移和侵袭的影响。方法构建重组慢病毒 pGCLV- CDK2AP1- shRNA及重组空病毒pGCLV- GFP,分别稳定转染乳腺癌细胞系MCF-7,获得乳腺癌细胞株 MCF-7/RNAi- NC 和 MCF-7/RNAi- CDK2AP1。采用定量 PCR 法检测两组 MCF-7细胞株的CDK2AP1mRNA表达,xCELLigence/RT- CIM实时细胞电子分析系统检测细胞迁移能力,Transwel 实验检测细胞的侵袭能力。结果成功构建乳腺癌细胞株MCF-7/RNAi- NC和MCF-7/RNAi- CDK2AP1,相比MCF-7/RNAi- NC细胞组,MCF-7/RNAi- CDK2AP1细胞组的CDK2AP1mRNA表达受到明显抑制,其细胞迁移和侵袭能力均显著下降（P＜0.05）。结论乳腺癌细胞MCF-7中CDK2AP1低表达能有效抑制细胞的体外迁移和侵袭能力。     

miR-584对人胶质母细胞瘤侵袭和迁移能力的影响

目的探讨miR-584对人胶质母细胞瘤U251细胞侵袭和迁移能力的影响。方法将化学合成的miR-584-3p在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,瞬时转染人胶质母细胞瘤U251,细胞分为空白对照组(无转染,其他条件相同)、mimics NC组(转染miR-584-3p mimics阴性对照序列)、miR-584-3p mimics组(转染miR-584-3p mimics)、inhibitor NC组(转染miR-584-3p inhibitor阴性对照序列)和miR-584-3p inhibitor组(转染miR-584-3p inhibitor)。Real-time PCR法检测细胞中miR-584-3p的表达水平;CCK-8法检测细胞增殖能力;划痕实验和Transw ell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果与空白对照组和mimics NC组相比,miR-584-3p mimics组的miR-584-3p表达上调约100倍(P<0.05),细胞增殖能力无明显差异(P>0.05),细胞侵袭和迁移能力明显下降(P<0.05);与空白对照组和inhibitor NC组相比,miR-584-3p inhibitor组的miR-584-3p表达下调至空白对照组的5%(P<0.05),细胞增殖能力无明显差异(P>0.05),细胞侵袭和迁移能力显著增强(P<0.05)。结论 miR-584-3p mimics转染抑制了U251细胞的侵袭和迁移能力;miR-584-3p inhibitor转染能增强U251细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-99a对乳腺癌细胞侵袭和迁移的负向调控机制研究

目的探讨miR-99a对乳腺癌细胞侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7中miR-99a的表达。运用脂质体介导的转染方法分别将miR-99a模拟物（miR-99amimics）、miR-99a抑制物（miR-99ainhibitors）以及相应对照miRNA转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,通过Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕实验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-99a的靶基因,并对靶基因进行验证。结果（1）高转移潜能的MDA-MB-231细胞中miR-99a表达明显低于低转移潜能的MCF-7细胞,划痕实验中转染miR-99amimics的与转染controlmimics的MDA-MB-231细胞比较迁移能力显著减弱（P＜0.05）,而MCF-7细胞转染miR-99ainhibitors后迁移能力明显增强（P＜0.01）。（2）Transwell的侵袭及迁移实验显示,转染miR-99amimics后MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力明显减弱（P＜0.01）;MCF-7细胞转染miR-99ainhibitors后迁移能力增强（P＜0.01）,而侵袭能力基本不变（P＞0.05）。（3）生物信息学方法预测微管相关蛋白（MTMR3）是miR-99a的靶点,实时定量PCR和3′UTR荧光素酶报告基因实验验证了该靶点。（4）干扰了MTMR3后MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。结论（1）miR-99a对乳腺癌细胞的侵袭及迁移发挥负向调控作用。（2）miR-99a可能通过靶向于MTMR3发挥其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的调控作用。     

MiR-152-3p靶向PIK3CA基因对乳腺癌细胞生物学特性的调控及其机制

目的探讨miR-152-3p靶向PIK3CA基因对乳腺癌细胞生物学特性的调控及机制。方法选取2016年1月至2017年7月宣城市中心医院保存的乳腺癌组织和相应的正常乳腺组织(距肿瘤边缘> 5 cm)标本各50例,培养乳腺癌MCF-7细胞和正常乳腺上皮细胞MCF-10A,采用反转录定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌组织、正常乳腺组织、MCF-7细胞及MCF-10A细胞中miR-152-3p及PIK3CA mRNA表达。培养MCF-7细胞,待细胞融合度达30%～50%时将细胞分为空白组、阴性对照组、miR-152-3p mimic组、miR-152-3p inhibitor组、si-PIK3CA组和miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组,空白组细胞不转染任何序列,阴性对照组细胞转染miR-152-3p阴性对照质粒,miR-152-3p mimic组细胞转染miR-152-3p mimic质粒,miR-152-3p inhibitor组细胞转染miR-152-3p inhibitor质粒,si-PIK3CA组细胞转染si-PIK3CA质粒,miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组细胞共转染miR-152-3p inhibitor质粒和si-PIK3CA,转然后继续培养24～48 h;采用Western blot法检测各组MCF-7细胞中PIK3CA、细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38和E-cadherin蛋白表达,四甲基偶氮唑盐法检测各组MCF-7细胞增殖活性,划痕实验检测各组MCF-7细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测各组MCF-7细胞侵袭能力。结果乳腺癌组织中miR-152-3p相对表达量显著低于正常乳腺组织,PIK3CA mRNA相对表达量显著高于正常乳腺组织(P <0. 05)。MCF-7细胞中miR-152-3p相对表达量显著低于MCF-10A细胞,PIK3CA mRNA相对表达量显著高于MCF-10A细胞(P <0. 05)。与空白组和阴性对照组比较,miR-152-3p mimic组和si-PIK3CA组MCF-7细胞中PIK3CA、p38、ERK、JNK和E-cadherin蛋白相对表达量显著降低,miR-152-3p inhibitor组MCF-7细胞中PIK3CA、p38、ERK、JNK和E-cadherin蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组与空白组和阴性对照组MCF-7细胞中PIK3CA、p38、ERK、JNK和E-cadherin蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0. 05)。细胞增殖能力实验结果显示,48、72、96 h时,miR-152-3p mimic组和si-PIK3CA组MCF-7细胞增殖能力显著低于空白组和阴性对照组,miR-152-3p inhibitor组MCF-7细胞增殖能力显著高于空白组和阴性对照组(P <0. 05); 48、72、96 h时,miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组与空白组和阴性对照组MCF-7细胞增殖能力比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,空白组与阴性对照组MCF-7细胞迁移和侵袭能力比较差异无统计学意义(P> 0. 05);与空白组和阴性对照组比较,miR-152-3p mimic组和si-PIK3CA组MCF-7细胞迁移和侵袭能力显著降低,miR-152-3p inhibitor组MCF-7细胞迁移和侵袭能力显著增强(P <0. 05); miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组与空白组和阴性对照组MCF-7细胞迁移和侵袭能力比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 miR-152-3p在乳腺癌组织中低表达,miR-152-3p可能参与了乳腺癌的发生与发展,miR-152-3p可能通过抑制PIK3CA表达而抑制MAPK信号通路的激活,进而抑制乳腺癌细胞的生长、增殖及侵袭转移。     

MiR-4443通过抑制PEBP1的表达促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-4443对乳腺癌转移的影响。方法 使用高通量测序技术测定检测3例乳腺癌患者原位癌组织及其配对的癌旁组织中miR-4443的表达。使用TCGA数据库验证miR-4443在乳腺癌组织以及正常乳腺组织中的表达水平。以MCF-7细胞（低侵袭性乳腺癌细胞）和MDA-MB-231细胞（高侵袭性乳腺癌细胞）为研究对象,采用RT-qPCR验证miR-4443在这两种细胞株中的表达水平。通过电转染法将miR-4443 mimics（miR-4443模拟物）、mimics-NC（miR-4443模拟物的对照物）或miR-4443inhibitors（miR-4443抑制物）、inhibitors-NC（miR-4443 抑制物的对照物）转染至不同的细胞株,利用RT-qPCR检测miR-4443在转染前后的表达水平,使用流式细胞分析仪分析 miR-4443 表达水平的变化对乳腺癌细胞凋亡的影响,使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-4443表达水平的变化对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。使用生物信息学软件预测miR-4443潜在的靶基因,并进一步使用双荧光素酶报告基因系统验证。采用RT-qPCR和Western blot分别检测不同细胞株中PEBP1（重组人磷脂酰乙醇胺结合蛋白1）在mRNA和蛋白水平的表达。结果 高通量测序技术检测发现在乳腺癌组织中miR-4443的表达远高于癌旁组织（P<0.01）。TCGA数据分析显示,与正常乳腺组织想比,miR-4443在乳腺癌组织中的表达升高（P<0.01）。RT-qPCR显示,与MCF-7细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-4443的表达升高（P<0.01）。与转染mimics-NC相比,MCF-7细胞转染miR-4443 mimics后,miR-4443的表达上调（P<0.01）;而转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞,其表达下调（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照差异无统计学意义（P>0.05）,并且转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照亦差异无统计学意义（P>0.05）。划痕实验及Transwell侵袭实验显示转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力减弱（P<0.01）。相反的,转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞迁移及侵袭能力加强（P<0.01）。生物信息学软件预测发现PEBP1可能是miR-4443的潜在靶基因且与转移的相关程度最高。进一步行双荧光素酶报告基因实验,验证PEBP1是miR-4443的靶基因（P<0.01）。RT-qPCR和Western blot显示,MDA-MB-231细胞中PEBP1在mRNA及蛋白中的水平均低于MCF-7细胞（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均低于对照（P<0.01）;转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均高于对照（P<0.01）。结论 miR-4443通过抑制PEBP1的表达水平促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力,而抑制乳腺癌细胞中miR-4443的表达可能是未来潜在的治疗方法。     

抑制TRIM24基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的抑制作用

目的：探讨抑制TRIM24基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响,阐明TRIM24基因在乳腺癌发生发展中的作用。方法：以脂质体法转染TRIM24 siRNA和阴性对照NC-siRNA至MCF-7细胞作为si-TRIM24组和NC-siRNA组,以未转染的MCF-7细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blotting法检测转染48 h后各组MCF-7细胞中TRIM24 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测各组MCF-7细胞增殖能力,流式细胞术检测各组MCF-7细胞凋亡率,Transwell实验检测各组MCF-7细胞侵袭和迁移数。结果：与对照组和NC-siRNA组比较,si-TRIM24组MCF-7细胞中TRIM24 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,MCF-7细胞增殖能力降低（P<0.05）,MCF-7细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,MCF-7细胞侵袭和迁移数明显减少（P<0.05）。结论：抑制TRIM24基因表达能够明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、侵袭和迁移,且能够诱导细胞凋亡。     

长链非编码RNAAC003973.4对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响研究

目的检测长链非编码RNAAC003973.4在人乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,探讨其对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测20例乳腺癌组织及配对的癌旁组织,以及检测乳腺癌细胞株（BT-549、MDA-MB-231、MCF-7、T47D）和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A中AC003973.4的表达。取AC003973.4表达水平最低的乳腺癌细胞株转染过表达质粒以上调AC003973.4的表达,分别采用MTS法、Transwell迁移和侵袭实验检测AC003973.4对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;生物信息学法预测AC003973.4互补结合的miRNA及下游靶基因,qRT-PCR法检测miRNA和下游靶基因mRNA的表达,Westernblot检测相关蛋白的表达。结果乳腺癌组织AC003973.4表达水平明显低于癌旁组织（P＜0.01）。乳腺癌细胞株AC003973.4表达水平明显低于人正常乳腺上皮细胞（均P＜0.05）,MCF-7细胞中AC003973.4的表达水平最低（P＜0.01）。上调MCF-7细胞AC003973.4的表达后,细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱（均P＜0.05）。AC003973.4可互补结合miR-224-5p,miR-224-5p可互补结合PTEN。上调MCF-7细胞AC003973.4的表达后,miR-224-5p的表达均下调（P＜0.01）,PTENmRNA和蛋白的表达均上调（均P＜0.01）,细胞增殖相关蛋白CDK4、CyclinD1与细胞迁移相关蛋白Zeb-1、N-cadherin表达均下调（均P＜0.01）。结论乳腺癌组织和细胞株中AC003973.4表达水平降低,上调AC003973.4表达可减弱乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其作用机制可能与调节miR-224-5p与PTEN基因的表达有关。     

miR-197靶向调节CD82对结肠癌细胞侵袭转移的影响

【摘要】 目的 探讨下调microRNA-197 (miR-197)对结肠癌HCT116细胞侵袭转移能力的影响及其作用机制。方法 将对数生长期HCT 116细胞随机分为miR-197反义寡核苷酸（inhibitor）组、无义序列阴性对照（NC）组、空白对照（Mock）组,采用脂质体介导转染法,将miR-197反义寡核苷酸（miR 197 inhibitor）转染HCT116细胞。运用荧光定量PCR (qRT-PCR)检测miR-197的表达水平;通过生物信息学预测miR-197靶基因,应用Western blot法检测CD82蛋白的表达;采用transwell小室实验检测HCT116细胞的侵袭、迁移能力的改变。结果 miR-197反义寡核苷酸转染HCT116细胞后,inhibitor组miR-197的表达较NC组和Mock组明显降低(P＜0.05);下调miR-197的表达后,inhibitor组的CD82蛋白表达较其余两组显著增加(P＜0.05);转染miR-197反义寡核苷酸的HCT116细胞的侵袭与迁移能力inhibitor组较NC组、Mock组均降低 (P＜0.05)。结论 下调结肠癌HCT116细胞中miR-197的表达能抑制肿瘤细胞的侵袭和转移,其机制可能与其靶点CD82表达增加有关,这将为结肠癌的治疗提供新的靶点。     

MiR-671-3p靶向DEPTOR而抑制乳腺癌细胞的增殖与侵袭

目的 研究miR-671-3p对乳腺癌细胞增殖、侵袭生物学功能的影响及其可能的作用机制。方法 以实时荧光定量PCR方法检测正常乳腺上皮细胞（MCF-10A）与乳腺癌细胞（MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3）中miR-671-3p表达情况;检测miR-671-3p 在MCF-7细胞中的转染效率;通过CCK-8法检测miR-671-3p对MCF-7细胞增殖的影响;通过Transwell实验、划痕实验检测miR-671-3p对MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响;Targetscan预测miR-671-3p的靶基因,并通过双荧光素酶法和Western blot法对靶基因DEPTOR进行验证,并检测DEPTOR的表达。结果 miR-671-3p在乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3的表达量低于乳腺正常上皮细胞MCF-10A的表达。通过mimics、inhibitor分别促进、抑制miR-671-3p在MCF-7细胞中的表达后,结果显示miR-671-3p对乳腺癌细胞的增殖有抑制作用（P<0.05）,对肿瘤细胞的侵袭和迁移有抑制作用（P<0.05）。双荧光素酶结果 显示DEPTOR蛋白为miR-671-3p的直接作用靶点,过表达miR-671-3p可直接抑制DEPTOR蛋白的表达。结论 miR-671-3p直接靶向作用于DEPTOR蛋白从而抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。     

阿托伐他汀抑制脑胶质瘤细胞的增殖和促进凋亡：基于上调miR-146a表达与抑制PI3K/Akt信号通路

目的 探究阿托伐他汀（AVT）对人脑胶质瘤细胞生物学行为的影响及其对miR-146a/PI3K/Akt信号通路的作用。方法 将人脑胶质瘤细胞U251分为4组：对照组（Conrtrol）、AVT组、AVT+转染miR-146a无关片段组（AVT+miR-146a NC）、AVT+转染miR-146a干扰组（AVT+miR-146a inhibitor）。Control组不加任何药物,AVT组加入8.0 μmol/L 的AVT,AVT+miR-146a NC组转染miR-146a NC后加入8.0 μmol/L 的AVT,AVT+miR-146a inhibitor组转染miR-146a inhibitor后加入8.0 μmol/L 的AVT。RT-PCR检测miR-146a表达,MTT检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移情况,Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达。结果 药物干预48 h,与Control组相比,AVT组细胞miR-146a表达、细胞凋亡率均明显升高（P<0.01）,细胞增殖率、侵袭指数、迁移指数、p-PI3K和p-Akt蛋白表达均明显降低（P<0.01）。与AVT组相比,AVT+miR-146a inhibitor组细胞miR-146a表达、细胞凋亡率均明显降低（P<0.01）,细胞增殖率、侵袭指数、迁移指数、p-PI3K 和p-Akt蛋白表达均明显升高（P<0.01）,AVT+miR-146a NC组上述指标无显著性差异（P>0.05）。结论 AVT能够抑制人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡,其机制与上调miR-146a表达,抑制PI3K/Akt信号通路相关。     

miR-375逆转MCF-7/Adr耐药性的功能研究

目的 研究乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7/Adr高表达miR-375后对阿霉素敏感性的影响.方法 将miR-375模拟物(miR-375 mimics)和mimics negative control(NC)分别转染MCF-7/Adr;阿霉素处理后用WST-1法检测耐阿霉素细胞的增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;细胞划痕实验、transwell迁移、侵袭实验检测MCF-7/Adr细胞的迁移和侵袭能力.结果 在MCF-7/Adr细胞中高表达miR-375可以提高其对阿霉素的敏感性并促进其凋亡;高表达miR-375的MCF-7/Adr细胞周期阻滞在G1期;转染miR-375后对MCF-7/Adr细胞的迁移、侵袭能力有抑制作用.结论 MCF-7/Adr细胞中高表达miR-375可以增加其对阿霉素的敏感性.     

miR-506在乳腺肿瘤细胞增殖及转移中的作用

目的分析miR．506与乳腺癌增殖转移的关系。方法miR-506minics／inhibitor／NC瞬转入MDA—MB一231乳腺癌细胞后进行CCK-8细胞增殖,细胞计数,集落形成,Transwell小室实验及Real—TimePCR。结果miR-506相关核苷酸（mimics、inhibitor、NC）瞬转入细胞后第1天miR-506inhibitor即显现出促进细胞增殖的效应,第3天后miR-506mimics开始出现明显的细胞增殖抑制效应;集落形成实验中miR-506mimics组细胞所形成的集落数量明显少于miR-506 inhibitor组和NC组;Transwell小室实验显示三种miR．506mimics所转染细胞的穿过膜的数量少于miR-506inhibitor组和NC组。Real—TimePCR显示,与miR-506 inhibitor组相比,miR-506mimics组酌5、MMP2基因表达增高,而RASSFl基因降低。结论miR-506过表达可以明显的抑制细胞的增殖能力,单克隆集落形成能力和侵袭转移能力,即miR-506高表达可以抑制乳腺癌细胞的恶性表型。这种作用可能与p65、MMP2及RASSFl表达有关。     

MicroRNA-129-2靶向调控SOX4抑制食管癌细胞增殖与侵袭转移的研究

目的探讨 MicroRNA-129-2（miR-129-2）在体内外抑制食管癌细胞增殖和侵袭转移的作用及可能机制,为食管癌的预后评估及靶向治疗提供新的思路。方法将 miR-129-2 mimics 及 miR-129-2 mimics NC 基因序列分别转染到食管癌 NMC109细胞中,并设为 miR-129-2 mimics 高表达组和 miR-129-2 mimics 阴性对照组（miR-129-2 mimics NC 组）,将非转染的 NMC109细胞设为空白对照组。体外实验：运用 MTT 法检测3组细胞的增殖能力、Transwell 法检测细胞侵袭能力、蛋白印迹法检测 SOX4蛋白表达。采用裸鼠体内移植瘤形成实验检测3组细胞在体内环境下的增殖能力。结果 miR-129-2 mimics 组的食管癌细胞增殖活性及侵袭能力较 miR-129-2 mimics NC 组及空白对照组明显减弱（P ＜0.001）,而空白对照组与 miR-129-2 mimics NC 组食管癌细胞增殖性及侵袭性无明显差异（P ＞0.05）;miR-129-2 mimics 组的食管癌细胞中,SOX4的表达下调（P ＜0.001）;miR-129-2 mimics 组裸鼠移植瘤体积及重量明显减小（P ＜0.001）,而 miR-129-2mimics NC 组及空白对照组无明显差异（P ＞0.05）。结论 miR-129-2具有抑制食管癌细胞 NMC109增殖和侵袭转移的作用,其作用机制可能与靶向下调 SOX4基因表达有关。     

miR-21靶向E2F1对三阴性乳腺癌细胞恶性生物学活性及裸鼠肿瘤抑制率的影响

目的 探究miR-21靶向E2F1对三阴性乳腺癌细胞恶性生物学活性及裸鼠肿瘤抑制率的影响。方法将MDA-MB-231细胞分为5组,即MDA-MB-231组、miR-21 inhibitor组、miR-NC inhibitor组、siRNA-E2F1组和siRNA-NC组。检测细胞中miR-21表达（RT-PCR法）;分别检测细胞增殖（MTT法）、侵袭（Transwell法）、迁移（划痕实验）和凋亡能力（流式细胞仪）;检测细胞中E2F1蛋白表达;检测miR-21与E2F1的靶向关系（双荧光素酶实验报告）。结果MDA-MB-231细胞中miR-21表达明显高于MCF10A细胞（P<0.05）;miR-21 inhibitor组细胞细胞中miR-21表达明显低于MDA-MB-231组（P<0.05）。与MDA-MB-231组相比,miR-21 inhibitor组细胞吸光度值、侵袭能力、迁移能力和细胞中E2F1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡能力明显升高（P<0.05）;MDA-MB-231组细胞吸光度值、侵袭、迁移、凋亡能力和细胞中E2F1蛋白表达与miR-NC inhibitor组相比差异无统计学意义（P>0.05）。预测软件显示E2F1的3′UTR端与miR-21有碱基互补结合点位。通过向MDA-MB-231细胞中转染野生型E2F1（E2F1-WT）时,miR-21组荧光素酶活性明显低于miR-NC组（P<0.05）;miR-21组和miR-NC组突变体荧光素酶活性相比差异无统计学意义（P>0.05）。与siRNA-NC组相比,siRNA-E2F1组细胞增殖、侵袭、迁移和细胞中E2F1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡能力明显增加（P<0.05）。与miR-NC inhibitor组裸鼠移植肿瘤第8天时相比,miR-21 inhibitor组裸鼠肿瘤体积明显降低,肿瘤抑制率为45.3%（P<0.05）。结论低表达miR-21可抑制三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭,促进凋亡,且抑制裸鼠移植瘤体积,其作用机制可能与抑制E2F1表达有关。     

环状RNACdr1as/miR-7/SP1轴调控乳腺癌细胞侵袭和转移的研究

目的探讨环状RNACdr1as/miR-7/SP1轴调控乳腺癌细胞发生侵袭和转移的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR技术检测乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞转染miR-7模拟物、sh-Cdr1as、转录因子SP1siRNA前后,正常乳腺MCF-10A细胞及乳腺癌组织中环状RNACdr1as、miR-7、SP1mRNA的表达水平;MDA-MB-231、MCF-7细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）及波形蛋白（Vimentin）mRNA的表达水平;采用Transwell实验分析MDA-MB-231、MCF-7细胞的侵袭和迁移能力;Westernblot法检测MDA-MB-231、MCF-7细胞中E-cadherin及Vimentin蛋白的表达情况。结果与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231、MCF-7细胞环状RNACdr1as表达上调,miR-7表达下调,SP1mRNA表达上调（均P＜0.05）。与转染前相比,MCF-7、MDA-MB-231细胞转染sh-Cdr1as后,miR-7表达上调（均P＜0.05）,SP1mRNA表达下调（均P＜0.05）;而转染miR-7mimics后,SP1mRNA表达下调（均P＜0.05）。与转染前相比,MDA-MB-231、MCF-7细胞转染sh-Cdr1as后,侵袭细胞数明显减少（均P＜0.05）。与乳腺导管原位癌患者相比,乳腺浸润性导管癌环状RNACdr1as表达上调（P＜0.05）;与无腋窝淋巴结转移患者相比,有腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者环状RNACdr1as表达上调（P＜0.05）;Pearson相关性分析显示环状RNACdr1as与miR-7的表达存在负相关（r=-0.541,P＜0.05）,miR-7与SP1mRNA的表达也存在负相关（r=-0.467,P＜0.05）。MDA-MB-231、MCF-7细胞转染SP1siRNA后,E-cadherinmRNA、蛋白表达均上调（均P＜0.05）,VimentinmRNA、蛋白表达均下调（均P＜0.05）。结论乳腺癌细胞环状RNACdr1as表达上调,通过环状RNACdr1as/miR-7/SP1调控轴促使癌细胞发生上皮间质转化,使乳腺癌细胞发生侵袭和转移。环状RNACdr1as可能成为乳腺癌治疗的新靶点。     

miR-4324与Talin2在乳腺癌中高表达

目的 探讨miR-4324对踝蛋白2(Talin2)调控和乳腺癌细胞的影响及临床意义。方法 利用免疫组化法检验Talin2在乳腺癌组织（BCT）和对应癌旁乳腺组织（PCBT）的表达,结合病理资料分析Talin2与乳腺癌预后及病理特征间的关联;qRT-PCR法测定miR-4324在BCT和PCBT的表达;人乳腺癌细胞株（SKBR-3）体外培养,分为Control对照组（正常培养)及相关转染组（转染相关片段）：miR-4324 mimics组;miR-4324 inhibitor组;miR-4324 NC组;si-Talin2组;miR-4324 inhibitor+si-Talin2组。通过细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭实验,检测SKBR-3的生物学活性改变;通过qRT-PCR及Western-blot实验测定Talin2的表达;利用荧光素酶活性实验验证miR-4324对Talin2靶向表达;利用Transwell回复实验验证miR-4324调控Talin2影响SKBR-3细胞的迁移能力。结果 Talin2在BCT中的表达高于PCBT,并与淋巴结转移、HER-2的高表达有关（P<0.0...     

miR-384增加乳腺癌MCF-7细胞多西他赛敏感性

【摘要】 目的 探讨miR-384对乳腺癌MCF-7细胞多西他赛（DOC）敏感性的影响。 方法 乳腺癌MCF-7细胞分成Control组（空白对照）、miR-NC组(转染模拟物阴性对照）、miR-384组(转染miR-384模拟物）、miR-NC+DOC组（转染模拟物阴性对照,DOC处理）、miR-384+DOC组（转染miR-384模拟物,DOC处理）,MTT测定细胞增殖,克隆形成实验测定细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡。在线靶基因预测软件预测性别决定区Y框蛋白4(SOX4)可能是miR-384的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。Western blot测定细胞中SOX4蛋白表达。pcDNA3.1-SOX4和miR-384模拟物共转染,以DOC处理,检测SOX4对上调miR-384联合DOC对乳腺癌MCF-7细胞增殖、克隆和凋亡的影响。 结果 与miR-NC组比较,miR-384组和miR-NC+DOC组细胞中miR-384表达水平升高,细胞增殖和克隆能力降低,细胞凋亡率升高（均P＜0.05）。与miR-NC+DOC组比较,miR-384+DOC组细胞增殖和克隆能力降低,细胞凋亡率升高（均P＜0.05）。miR-384靶向抑制SOX4蛋白表达。pcDNA3.1-SOX4能够逆转上调miR-384联合DOC对乳腺癌MCF-7细胞增殖、克隆和凋亡的影响。 结论 miR-384靶向调控SOX4,增加乳腺癌MCF-7细胞DOC敏感性。     

miR-373抑制剂对乳腺癌细胞生长的影响

目的探索miR-373抑制剂对乳腺癌细胞系MCF-7生长的影响。方法设计并合成miR-373抑制剂,通过脂质体转染至MCF-7细胞,采用荧光定量聚合酶链式反应检测转染后细胞内miR-373的表达水平,同时检测Caspase-3与Caspase-8的表达情况,并应用MTT实验检测miR-373抑制剂对MCF-7细胞生长的影响。结果 miR-373抑制剂能有效抑制MCF-7细胞中miR-373的表达。转染后,MCF-7细胞中Caspase-3与Caspase-8的mRNA水平均升高（P〈0.05）。miR-373抑制剂对MCF-7细胞的生长有明显的抑制作用,抑制率随浓度升高而增加（P〈0.05）。结论 miR-373抑制物可有效抑制MCF-7细胞增殖,有望成为治疗乳腺癌的新靶点。     

miR-548c-5p对乳腺癌细胞MCF-7的影响

目的研究miR-548c-5p转染乳腺癌MCF-7细胞株后对细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度的miR-548c-5p（50、75、100、125、150nmol／L）分别在24、48、72h不同时间点对细胞增殖的影响;miR-548c-5p转染MCF-7乳腺癌细胞株后,荧光定量PCR法检测其转染效率;划痕实验检测细胞迁移能力的变化;流式细胞术分析干扰后细胞周期的变化;荧光显微镜观察转染后乳腺癌细胞凋亡的变化。结果使用RNA干扰技术成功地将miRNA转染入乳腺癌细胞株,使得miR-548c-5p的表达升高。转染后48hmiR-548c-5p浓度为125nmol／L时,对乳腺癌细胞的抑制作用最明显。miR-548c-5p表达上调后细胞G0／G1明显增多,而s期明显减少（P〈0．01）,能-定程度上抑制细胞的迁移。荧光显微镜观察发现早期凋亡细胞升高。结论miR-548c-5p通过干扰细胞周期,增加G0／G1期的乳腺癌细胞数,进而抑制细胞增殖。抑制乳腺癌细胞株MCF-7的迁移能力并显著促进其凋亡。miR-548c-5p影响乳腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡,有望成为乳腺癌诊疗的靶点之一。     

miR-367通过靶向调控TET2对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-367通过靶向调控10-11异位的甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 方法将人子宫内膜癌HEC-1A细胞分为5组:空白组(NG)、阴性转染组(mimics NC)、miR-367过表达组(miR-367 mimics)、inhibitor NC组、miR-367 inhibitor组。qRT-PCR检测HEC-1A细胞中TET2 mRNA、miR-367表达水平;MTT法检测细胞增殖情况;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;TargetScan数据库预测miR-367的靶基因并用双荧光素酶报告基因实验加以验证;Western blotting检测TET2、c-myc、cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平。 结果与NG、mimics NC组相比,miR-367 mimics组HEC-1A细胞TET2 mRNA表达水平下降(P < 0.05),miR-367表达水平升高,24、48 h细胞存活率上升,侵袭、迁移细胞数增加(P < 0.05),TET2蛋白表达水平降低(P < 0.05),MMP-2、MMP-9、c-myc、cyclin D1蛋白表达水平升高(P < 0.05)。与NG、inhibitor NC组相比,miR-367 inhibitor组HEC-1A细胞TET2 mRNA表达水平升高(P < 0.05),miR-367表达水平下降,24、48 h细胞存活率降低,侵袭、迁移细胞数减少,TET2蛋白表达水平升高(P < 0.05),MMP-2、MMP-9、c-myc、cyclin D1蛋白表达水平降低(P < 0.05)。TargetScan数据库预测显示miR-367是TET2潜在靶基因。荧光素酶报告实验结果显示,miR-367 mimics+WT组HEC-1A细胞荧光素酶活性低于miR-367 NC+WT组(P < 0.05),miR-367 NC+MUT组与miR-367 mimics+MUT组荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。 结论miR-367过表达可能通过靶向抑制TET2促进子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、迁移和侵袭。