血管钙化大鼠肾动脉BMP2/Smad1/Runx2信号通路的表达

目的 观察血管钙化大鼠模型肾动脉上骨形态蛋白2（BMP2）/Smad1/Runt相关转录因子2（Runx2）信号通路的表达及其变化规律,探讨BMP2/Smad1/Runx2信号通路激活在肾动脉钙化中的作用。方法 将24只雄性SD大鼠随机分为对照组和钙化组,钙化组建立维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化模型,对照组给予生理盐水和花生油。6周后采用Von Kossa染色检测肾动脉钙化程度,钙离子试剂盒测定大鼠肾动脉钙含量,实时荧光定量PCR检测肾动脉组织中BMP2、Smad1、Runx2 mRNA水平,免疫组化法观察BMP2、Smad1、Runx2及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果 Von Kossa染色见钙化组大鼠肾动脉有大量黑色颗粒沉淀。钙化组血管钙含量高于对照组（ P<0.05)。与对照组相比,钙化组大鼠肾动脉组织BMP2、Smad1、Runx2 mRNA的水平升高（P<0.05),BMP2/Smad1/Runx2信号通路蛋白在肾动脉的表达亦同步上调,而α-SMA的表达较对照组下降（P<0.05)。相关分析表明,大鼠肾血管钙含量与肾动脉组织BMP2 mRNA（r =0.655, P<0.05)、Smad1 mRNA (r =0.735, P<0.05)、Runx2 mRNA ( r=0.734, P<0.05)均呈正相关。结论 BMP2/Smad1/Runx2通路的表达变化与肾动脉钙化的严重程度相关,提示BMP2/Smad1/Runx2信号通路参与了肾动脉钙化的发生发展。     

慢性肾脏病大鼠血管收缩张力与血管钙化的关系

目的通过检测慢性肾脏病(CKD)大鼠血管收缩张力,探讨其与血管钙化的关系。方法 30只雄性SD大鼠随机分为3组:正常对照组、慢性肾脏病组(CKD组)及慢性肾脏病血管钙化组(CKD+VC组),第4周留取血清学及血管标本,采用离体血管环灌流方法测定胸主动脉张力,硝酸银染色(Von Kossa染色)、钙含量测定和EVG染色检测血管钙化和弹性纤维变化情况,电镜观察平滑肌细胞(VSMCs)的超微结构。结果①CKD+VC组的血管收缩张力与正常对照组比较,最大值(Emax)下降(P=0.001),半数有效浓度(EC50)差异无统计学意义(P>0.05);与CKD组相比,Emax与EC50均无统计学意义(P>0.05)。②光镜结果显示,CKD+VC组可见弹性纤维严重断裂和钙盐沉积,CKD组可见弹力纤维排列紊乱、变细,未见钙盐沉积;电镜结果显示,模型组均可见凋亡VSMCs。结论 VSMCs凋亡和弹性纤维断裂共同参与CKD大鼠胸主动脉张力的下降,而血管钙化对张力的变化无影响。     

大鼠在体钙化心血管和离体钙化平滑肌细胞模型的制备

目的:应用药理学方法建立在体大鼠的心血管钙化模型和体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化模型.方法:每日8时给予大鼠肌注维生素D3(300 000 U/kg体重)和尼古丁(25 mg/kg体重,混入花生油2 mL中) 灌胃,18时再灌胃1次.对照组动物肌注生理盐水和单纯花生油灌胃,方法同钙化组.两组动物以相同饲料饲养4周后进行心功能指标检测.取动脉血检测钙含量,并摘取心脏和主动脉血管称重,用von Kossa 染色方法检测钙沉积.培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞用β-磷酸甘油丙酮酸钠处理,培养14天后收集,检测钙含量并用von Kossa 染色方法检测钙沉积.结果:维生素D3和尼古丁诱导的心血管组织钙化大鼠(VDN组大鼠)体重比对照组轻(P＜0.01),左心室重与体重比值高(P＜0.01),血浆钙水平差异无统计学意义(P＞0.05),但心肌和主动脉钙含量均高于对照组(P＜0.01);心肌和主动脉碱性磷酸酶活性也高于对照组(P＜0.05和P＜0.01);VDN组大鼠von Kossa染色见心脏血管组织有大量钙盐的沉积.VDN大鼠平均动脉压(MBP)、心率(HR)和左心室舒张末期压(LVEDP)并无明显变化(P＞0.05),左心室内压变化速率即 LVdp/dtmax和-LVdp/dtmax均较对照组低(P＜0.05和P＜0.01).体外培养诱导钙化VSMC与对照相比较,钙化VSMC用von Kossa染色见有大量棕黑色颗粒沉积,钙化VSMC的钙含量、45Ca2 摄入及碱性磷酸酶活性均增加(P＜0.01).结论:用药理学方法于在体和离体水平均可以建立简便、经济、可靠、稳定、重现性好的钙化模型.     

黄芪皂苷在大鼠血管钙化中作用及可能机制

摘要 目的：在大鼠血管钙化模型上用黄芪皂苷注射液腹腔注射观察对血管钙化的影响,并探讨黄芪皂苷在血管钙化中作用及可能机制。方法：采用维生素D3和尼古丁制备大鼠血管钙化模型;运用von Kossa染色、原子吸收测定钙含量及碱性磷酸酶(ALP)活性测定判断血管钙化程度;用生物化学方法测定血管一氧化氮、超氧化物歧化酶和丙二醛含量;原位缺口末端标记法检测血管平滑肌细胞凋亡。结果：VDN处理组大鼠血管von Kossa染色见平滑肌细胞内和细胞间基质有大量棕黑色颗粒聚集;主动脉钙含量和ALP活性分别较对照高3.6和1.7倍(P<0.01),血管钙化后可加重血管组织氧化性损伤,增加血管平滑肌细胞凋亡;而诱导钙化后注射黄芪皂苷明显改善上述指标,减轻血管钙化程度和组织氧化损伤,平滑肌细胞凋亡细胞数量明显减少。结论：黄芪皂苷主要通过抑制血管平滑肌细胞氧化应激和细胞凋亡而减轻血管钙化。     

肺淋巴循环障碍对矽肺发病进程的影响研究

目的 探讨肺淋巴循环障碍对矽肺发病进程的影响。方法 采用胸导管结扎建立肺淋巴循环障碍模型。SPF级成年雄性SD大鼠24只随机分为对照组、结扎对照组、矽肺组、矽肺+结扎胸导管组(以下简称矽肺+结扎组)。每组各6只。对照组不做处理;结扎对照组给大鼠结扎胸导管后正常饲养;矽肺组大鼠采用动式染尘法建立矽肺模型(染尘仓内SiO₂粉尘浓度2 000 mg/m~3,每天给予大鼠动式染尘3 h);矽肺+结扎组大鼠先手术结扎大鼠胸导管,再进行动式染尘,染尘条件与矽肺组相同。HE染色观察肺组织病理变化;天狼猩红染色观察胶原沉积;免疫组化观察肺部淋巴管增生;Western blot检测大鼠肺组织中核转录因子(NF-κBp65)和血管内皮生长因子受体(VEGFR-3)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。结果 HE和天狼猩红染色结果显示,相较于对照组,矽肺组和矽肺+结扎组大鼠肺组织病变更为严重。免疫组化结果显示矽肺组和矽肺+结扎组大鼠肺组织内有淋巴管增生。Western blot结果显示肺组织中NF-κBp65和α-SMA的蛋白含量矽肺+结扎组均高于矽肺组,分别为(2.42±0.05...     

抗 HMGB1抗体对小鼠肝纤维化的保护作用

目的：：探讨 HMGB1在 CCL4导致的肝纤维化发生发展中的作用及作用机制。方法：昆明种雄性小鼠30只,随机分为3组：正常组、CCL4肝纤维化组、抗 HMGB1抗体组,建模8周后取肝组织及血清。用 ELISA 法检测血清中 HA、Col-Ⅰ、PⅢP 和 IL-6、TNF-α的含量;用 HE 染色和天狼猩红染色观察肝组织病理改变和胶原纤维形成情况;用 Real time RT-PCR 法检测小鼠肝组织中 TGF-β、α-SMA 和MMP-9 mRNA 的表达。结果：CCL4肝纤维化组小鼠血清 HA、Col-Ⅰ、PⅢP、IL-6、TNF-α含量和肝组织 TGF-β、α-SMA 和 MMP-9 mRNA 表达均明显高于正常组小鼠(P <0.05);而且抗 HMGB1抗体组小鼠血清 HA、Col-Ⅰ、PⅢP、IL-6、TNF-α含量和肝组织 TGF-β1、α-SMA 和 MMP-9 mRNA 表达均明显低于 CCL4肝纤维化组小鼠(P <0.05)。结论：抗 HMGB1抗体可减轻小鼠肝纤维化,减少小鼠炎症因子和纤维化因子的表达;HMGB1可能通过启动炎症反应而促进肝纤维化发生发展。     

黄芪皂苷在大鼠血管钙化中的作用及可能机制

目的 在大鼠血管钙化模型上用黄芪皂苷注射液腹腔注射观察对血管钙化的影响,并探讨黄芪皂苷在血管钙化中的作用及可能机制.方法 采用维生素D3和尼古丁制备大鼠血管钙化模型;运用von Kossa染色、原子吸收测定钙含量及碱性磷酸酶(ALP)活性测定判断血管钙化程度;用生物化学方法测定血管一氧化氮、超氧化物歧化酶和丙二醛含量;...     

三种胶原纤维染色法评价宫腔粘连的比较

目的比较Masson染色、van Gieson染色、天狼猩红(Sirius red)染色三种胶原纤维染色方法在大鼠宫腔粘连模型中的评价效果。方法取24只成年雌性SD大鼠,暴露两侧子宫,左侧子宫剪开宫腔后使用机械性刮宫的方法损伤大鼠子宫内膜层,然后关腹,制作大鼠宫腔粘连模型。右侧子宫作为对照。术后14 d取材,行HE染色、Masson染色、van Gieson染色、天狼猩红染色,对子宫组织纤维化进行评估。结果刮宫后子宫组织HE染色显示子宫内膜上皮层消失,子宫内膜腺体数量显著减少(P0.01)。三种染色法均能清楚地染出胶原纤维。三种染色方法计算出的纤维化面积比,Masson染色(甲苯胺蓝)高于Masson染色(亮绿)、van Gieson染色和天狼猩红染色(P0.01)。天狼猩红染色法能够在偏振光显微镜下明确区分Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维,Masson及van Gieson染色法则不能区分。结论天狼猩红染色较Masson染色和van Gieson染色能够更好地显示宫腔粘连组织的纤维化程度,并能区分胶原纤维的类型。     

双氢青蒿素对胆管结扎致大鼠肝纤维化的治疗作用研究

目的 探究双氢青蒿素（Dihydroartemisinin,DHA）对胆管结扎（Bile duct ligation, BDL）所致的大鼠肝纤维化的初步治疗作用。方法 采用BDL诱导大鼠肝纤维化模型,DHA（14mg/kg）及阳性药物秋水仙碱（0.1mg/kg）干预处理,末次给药24h后,取血清检测ALT、AST、Bilirubin;HE染色、马松染色和天狼猩红染色检测肝组织病理变化;Western blot检测肝组织中肝星状细胞（HSC）活化指标α-SMA与α1(Ⅰ) collagen的表达;免疫荧光检测肝组织TGFβ-RⅡ的表达。体外培养活化的HSC-T6,并用DHA干预处理,Western blot检测α-SMA、α1(Ⅰ) collagen以及TGFβ-RⅡ、p-Smad2、Smad2的表达。结果 血清学指标结果显示,与空白对照组比较,模型组SD大鼠ALT、AST、Bilirubin显著升高,DHA能降低血清中ALT、AST、Bilirubin水平;HE、马松染色、天狼猩红染色结果显示,与模型组比较,DHA能够明显改善肝脏病理组织结构以及胶原纤维的沉积;Western blot结果显示,DHA还可抑制HSC活化的标志物α-SMA、α1(Ⅰ) collagen以及TGFβ-RⅡ、p-Smad2的表达。结论 DHA对BDL诱导的肝纤维化具有显著的保护作用,这一效应主要与其抑制HSC活化以及调控TGF-βⅡ/Smad2信号通路相关。      

儿茶酚抑素抑制血管钙化的作用及机制

目的观察儿茶酚抑素(CST)对大鼠血管钙化的影响。方法 24只SD大鼠按随机数表法分为正常组、钙化组和钙化+CST组,每组8只。正常组大鼠在造模当天予生理盐水肌注和花生油灌胃处理,钙化组采用维生素D3和尼古丁诱导大鼠血管钙化模型,钙化+CST组给予CST 2 nmol/(kg·d)腹腔内注射4周,检测血管钙盐沉积(Von Kossa染色);测定大鼠主动脉钙含量(钙离子测试盒)、碱性磷酸酶(ALP)活性(碱性磷酸酶试剂盒)、主动脉组织单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量(均为放射免疫法)。结果维生素D3和尼古丁能够建立典型大鼠血管钙化模型;与正常组大鼠比较,Von Kossa染色示钙化组主动脉有大量黑色颗粒沉淀,经CST干预后,主动脉组织钙盐沉积明显减少;与此同时,钙化组大鼠主动脉组织的钙离子含量及ALP活性明显升高,与正常组大鼠比较,差异均有统计学意义(P<0.05);经CST干预后,钙化+CST组大鼠的钙离子含量及ALP活性明显减轻,与钙化组大鼠比较,差异均有统计学意义(P<0.05);钙化组大鼠血清MCP-1和TNF-α浓度明显高于正...     

醛固酮促进大鼠血管钙化的可能机制

目的:在大鼠血管钙化模型上,探讨醛固酮(aldosterone,Aldo)在血管钙化中的作用及其可能机制。方法:肌注维生素D3和灌胃尼古丁(VDN)诱导大鼠血管钙化,运用von Kossa染色、原子吸收测定钙含量、45Ca2+沉积及碱性磷酸酶(ALP)活性测定判断血管钙化程度,半定量RT-PCR方法测定骨桥蛋白(OPN)mRNA水平;放射免疫法测定血浆和血管组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和Aldo含量。结果:VDN处理组大鼠血管von Kossa染色见平滑肌细胞内和细胞间基质有大量棕黑色颗粒聚集;主动脉钙含量较对照组高5.8倍(P<0.01);血管组织45Ca2+聚积和ALP活性分别较对照组高3倍和2.5倍(P<0.01);血管OPN mRNA表达明显上调58%(P<0.01);AngⅡ和Aldo含量分别较对照组高58%和80%(P<0.01)。运用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)和Aldo受体阻断剂可明显改善上述指标变化,与单纯VDN处理组大鼠相比较,VDN+captopril组主动脉钙含量、45Ca2+聚积及ALP活性分别较单纯钙化组低37%、59%和62%(均P<0.01)。而VDN+spironolactone组分别低32%、44%和60%(均P<0.01)。血管OPN mRNA水平亦较单纯钙化组低30%和29%(P<0.01)。结论:VDN诱导的血管钙化大鼠血管组织AngⅡ和Aldo生成增加,ACEI和Aldo受体阻断剂明显减轻血管钙化,提示Aldo促进血管钙化并参与钙化发生。     

Ⅱ型糖尿病肾病大鼠肾动脉与肾内小动脉钙化及BMP2和Runx2的表达

【摘要】 目的 观察Ⅱ型糖尿病肾病（DN）大鼠肾动脉与肾内小动脉钙化以及骨形态发生蛋白2（BMP2）和成骨特异性转录因子2(Runx2)的表达。方法 将24只大鼠随机分为对照组（N组）和Ⅱ型糖尿病肾病组（DN组, STZ加高脂高糖饮食诱导的Ⅱ型DN大鼠模型）,分别于12周,16周处死大鼠。全自动生化分析仪检测大鼠血糖、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、胱抑素C（CysC)及24 h尿蛋白水平。CVon Kossa染色观察肾动脉及肾内小动脉钙盐沉积情况,免疫组化检测肾动脉及肾内小动脉BMP2及Runx2蛋白表达。结果 DN组大鼠各时间点血糖、尿素氮、胱抑素C、肌酐及24小时尿蛋白水平均较N组明显升高(均P＜005)。 Von Kossa染色可见N组大鼠肾动脉及肾内小动脉各时间点均无明显钙盐沉积,而DN组大鼠肾动脉第12周时即有黑色颗粒沉积,16周时黑色钙盐沉积进一步增多,但各时间点肾内小动脉均无明显黑色颗粒沉积。DN组大鼠肾动脉上可见BMP2及Runx2的较多表达,较N组明显升高（P＜005）;肾内小动脉也可见BMP2及Runx2少量表达,但与N组相比差异无统计学意义（P＞005）。结论 Ⅱ型糖尿病肾病模型大鼠早期肾动脉即可出现血管钙化,但肾内小动脉无明显钙化,提示糖尿病血管钙化较多发生在大血管,而不易发生在脏器内小动脉。     

益生菌对慢性阻塞性肺疾病大鼠肠道菌群和炎症反应的影响

目的 探讨益生菌对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠肠道菌群和炎症反应的影响。方法 将30只雄性大鼠随机分为对照组、COPD组和治疗组,每组10只。烟雾刺激和脂多糖（LPS）灌胃复制COPD大鼠模型,并给予治疗组大鼠0.9 CFU/g/（kg·d）益生菌灌胃28 d。观察各组大鼠的一般情况,采用苏木精-伊红染色和Masson染色观察肺组织病理和纤维化改变;免疫荧光双染观察α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清C反应蛋白（CRP）、白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;选择性培养基分离培养肠道菌群并计算菌落均值。结果 对照组大鼠饮食活动均正常,毛发顺滑。COPD组大鼠食量减少,呼吸急促,咳嗽频繁,毛发干枯凌乱,但口服益生菌后,治疗组大鼠的症状有一定程度缓解。光镜下可见对照组肺组织形态正常,无炎症浸润和纤维化;COPD组大鼠肺组织存在严重的细支气管管腔狭窄变形、炎症浸润和肺泡纤维化,但口服益生菌后可有效改善。COPD组大鼠肺支气管α-SMA阳性表达较对照组明显增加,但治疗组肺支气管α-SMA阳性表达有所减少。COPD组和治疗组大鼠血...     

吡非尼酮通过抑制TGF-β1通路和炎症反应预防大鼠尿道损伤后的纤维化及狭窄

目的 探讨吡非尼酮对大鼠尿道损伤后狭窄形成的预防作用及可能机制。方法 选取SD雄性大鼠30只,随机分为3组（10只/组）：阴性对照组、阳性对照组及吡非尼酮组。吡非尼酮组：切开后尿道海绵体建立大鼠尿道损伤模型,按100 mg·kg-1·d-1腹腔注射吡非尼酮;模型组：同对照组构建大鼠尿道损伤模型,腹腔注射等量溶剂;假手术组：不予尿道损伤处理,但腹腔注射等量溶剂。术后2周逆行尿道造影观察尿道狭窄,留取尿道损伤组织,行HE染色观察尿道组织形态学变化,Masson染色检测胶原变化,免疫组化及Western blot检测a-SMA和TGF-β1的蛋白表达,qRT-PCR检测大鼠尿道组织中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的表达。结果 吡非尼酮组大鼠较阴性对照和阳性对照组体质量下降,逆行尿道造影显示阳性对照组大鼠尿道显著变窄,吡非尼酮组大鼠尿道较阳性对照组大鼠明显好转（P<0.05）。HE染色显示阳性对照组尿道上皮细胞增生,管腔狭窄,炎性细胞增多;吡非尼酮组病理学表现与阴性对照组相似。Masson染色显示吡非尼酮组较阳性对照组胶原纤维含量少,排列规则有序。免疫组化和Western blot结果表明阳性对照组尿道a-SMA和TGF-β1表达显著高于阴性对照组（P<0.05,P<0.01）,而吡非尼酮能够抑制TGF-β1和α-SMA的表达。qRT-PCR结果显示吡非尼酮能够抑制损伤组织中TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症因子的基因表达（P<0.05,P<0.01）。结论 吡非尼酮可预防尿道损伤后纤维化及狭窄,并可能与抑制TGF-β1通路和炎症反应相关。     

右美托咪定对盲肠结扎穿孔术诱导的脓毒症大鼠急性肺损伤保护作用及其与磷酸化JAK激酶2/酪氨酸磷酸化通路的关系

目的:探讨右美托咪定对盲肠结扎穿孔术(CLP)诱导的脓毒症大鼠急性肺损伤保护作用及其与磷酸化JAK激酶2(p-JAK2)/酪氨酸磷酸化(p-STAT3)通路的关系。方法:30只健康成年雄性无病原体Wistar大鼠,随机分为对照组、模型组和DEX组,每组10只。通过ELISA法检测大鼠肺组织中的炎症细胞因子水平。通过组织学HE染色和TUNEL细胞染色分析大鼠肺组织损伤。通过市售检测试剂盒分析血清氧化应激水平。通过qRT-PCR检测肺组织凋亡相关基因的mRNA表达。通过蛋白印迹分析检测p-JAK2和p-STAT的蛋白表达。通过体内注射的FITC-BSA的光密度测量大鼠血管通透性。结果:模型组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白1 (MCP-1)水平较对照组升高(均P<0.05),而白细胞介素-10(IL-10)水平较对照组降低(P<0.05),DEX组TNF-α、IL-6、和MCP-1水平较模型组降低(均P<0.05),IL-10水平升高(P<0.05)。模型组HE染色和TUNEL染色评分较对照组升高(均P<0.05),...     

人主动脉瓣间质细胞原代培养及体外钙化模型的建立

目的原代培养人主动脉瓣间质细胞并建立体外瓣膜细胞钙化模型,诱导人主动脉瓣间质细胞向成骨细胞分化,并观察其表型变化。方法采用胶原酶两次消化法原代培养人主动脉瓣间质细胞,取传代3～7代间质细胞,随机分为2组,实验组以钙化诱导培养基培养,对照组以标准培养基培养。1周后,行von Kossa染色观察钙化结节形成情况,分光光度计测定碱性磷酸酶活性,免疫荧光染色检测瓣膜间质细胞表型蛋白,real-time PCR及蛋白质印迹分析检测成骨相关因子的表达,评价模型建立情况。结果培养1周后实验组出现钙化结节,每孔钙化结节数量[(51.20±14.31)个]高于对照组[(3.60±1.82)个],差异有统计学意义(P<0.05),同时实验组碱性磷酸酶活性较对照组升高(约上升4倍,P<0.05),细胞收缩表型平滑肌肌动蛋白(α-SMA)增高。Real-time PCR及蛋白质印迹分析提示,实验组中成骨相关因子Runx2、osteocalcin及osteopontin在mRNA及蛋白水平均较对照组升高,磷酸化Smad1/5/8蛋白表达也同时升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功建立了人主动脉瓣间质细胞体外诱导钙化模型,诱导后间质细胞呈现相对激活状态,表型向收缩表型和成骨表型转化,为今后实验提供了可靠的细胞模型。     

IL-35亚基EBI3、P35对系统性硬化症小鼠肺部和皮肤炎症及肺纤维化的影响

目的：研究白细胞介素（IL）-35亚基对系统性硬化症（SSc）小鼠肺部和皮肤炎症及肺纤维化的影响。方法：将24只雌性BALB/c小鼠随机分为4组：正常对照组、SSc模型组、SSc+EB病毒诱导的基因3抗体（SSc+EBI3 mAb）组和SSc+IL-12A P35抗体（SSc+P35 mAb）组，除正常对照组外，其余各组小鼠注射博来霉素构建SSc模型。造模后，SSc+EBI3 mAb组和SSc+P35mAb组分别腹腔注射100μL的EBI3 mAb、P35 mAb。采用苏木精—伊红（HE）染色观察小鼠皮肤和肺组织炎症病理改变，Masson染色观察肺纤维化程度，免疫组化法检测皮肤和肺组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清IL-35、IL-6、IL-10水平。结果：与对照组相比，SSc模型组小鼠皮肤厚度增加，肺纤维化评分、皮肤和肺组织炎症评分、血清IL-35水平及皮肤和肺组织α-SMA表达水平均升高，血清IL-10水平降低（均P<0.05）。与SSc模型组比较，SSc+EBI3 mAb组和SSc+P35 mAb组小鼠皮肤厚度增加，血清IL-...     

促红细胞生成素通过上调α-Klotho减轻大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的 观察促红细胞生成素（EPO）对钙化血管平滑肌细胞（VSMCs）中α-Klotho蛋白表达的影响，研究α-Klotho在EPO减轻血管钙化中的作用。方法 采用高磷刺激大鼠VSMCs钙化，实时聚合酶链反应检测钙化相关基因的表达变化，von Kossa染色和钙含量检测钙化情况，应用siRNA技术敲低VSMCs中α-Klotho的表达，Western blotting检测VSMCs中α-Klotho的蛋白表达。结果 与高磷刺激的钙化模型组相比，EPO下调了钙化VSMCs中骨钙素和Cbfα-1的mRNA水平（P <0.01），并减少了钙盐沉积和钙含量（P <0.01）。Western blotting结果发现，EPO可使钙化VSMCs中α-Klotho蛋白表达水平上调1.19倍（P <0.05）。敲低VSMCs中α-Klotho后，EPO抑制骨钙素和Cbfα-1 mRNA表达的作用下调。而且，α-Klotho敲低使EPO抑制钙盐沉积和钙含量的作用被阻断。结论 α-Klotho参与了EPO减轻VSMCs钙化的作用，该实验结果为防治血管钙化提示了可能的干预靶点。     

高脂饲料及维生素D3联合应用建立大鼠动脉粥样硬化模型

目的 建立适合于心血管疾病研究的大鼠动脉粥样硬化模型。方法 健康Wistar大鼠24只，雌雄各半，随机分为3组：高脂＋VD3组、高脂组、对照组。检测血清总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、Ca^2＋，分离各组大鼠主动脉弓，置于10％中性福尔马林中固定，作HE染色及von Kossa染色。结果 试验后，高脂饲料＋VD3组及高脂饲料组血清TC、TG水平均明显升高，同对照组相比P〈0．01，高脂饲料＋VD3组血钙水平明显高于高脂饲料组和对照组。高脂饲料组可见大鼠主动脉壁管壁明显增厚，中膜平滑肌细胞增生；高脂饲料＋VD3组可见血管内较典型的动脉粥样斑块。von Kossa染色有大量黑色钙沉积于血管中膜。结论 用大剂量维生素D3腹腔注射，联合应用高脂饲料喂养的方法可建立理想的动脉粥样硬化模型。     

罗格列酮延缓糖尿病大鼠血管钙化的发展

目的: 观察罗格列酮对糖尿病大鼠钙化血管的治疗作用及对骨转录因子Msx2表达的影响.方法: 在高脂饮食加小剂量链脲佐菌素腹腔注射处理的基础上,加用维生素D3和尼古丁处理,制备糖尿病合并血管钙化大鼠模型(糖尿病合并血管钙化组),给予部分糖尿病合并血管钙化组大鼠罗格列酮灌胃 (2 mg·kg-1,每天1次,共8周)处理(罗格列酮组),同时设立空白对照组.实验第21周末,处死各实验组大鼠,检测各组大鼠的代谢指标,进行血管 von Kossa染色,检测血管钙含量和碱性磷酸酶活性,应用real-time PCR方法检测 Msx2 mRNA 及蛋白免疫印迹方法检测 Msx2 蛋白在血管中的表达变化.结果: 与对照组相比,糖尿病合并血管钙化组大鼠血管内存在弥漫性的钙盐沉积,血管内钙含量增高,碱性磷酸酶活性增强,Msx2 mRNA和蛋白表达明显增高 (均P<0.05);而给予罗格列酮处理后,钙盐在血管内的沉积明显减少,钙含量和碱性磷酸酶活性分别下降8.37%、10.59%,Msx2 mRNA和蛋白表达也分别下降 36.73 %、 42.55 %(与糖尿病合并血管钙化组相比,均P<0.05).结论: 罗格列酮可以延缓糖尿病大鼠血管钙化的发展,并可以减少钙化血管中Msx2的表达.