不同干燥方法对远志筒及根中主要化学成分的影响

目的考察晒干、阴干、热风干燥(40、50、60、70℃)、微波干燥和冷冻干燥5种干燥方法对远志筒及根中主要化学成分的影响。方法运用HPLC法测定不同干燥方法对远志筒及根中远志酮III、3,6′-二芥子酰基蔗糖、远志酸、远志皂苷元、细叶远志皂苷的组成和含量变化;采用单因素方差分析和TOPSIS法对数据进行综合分析。结果远志筒和根的干燥方法优选顺序存在差异,远志筒不同干燥方法对有效成分影响的优劣排序为微波干燥60℃热风干燥50℃热风干燥70℃热风干燥冷冻干燥40℃热风干燥阴干晒干;远志根中,不同干燥方法的排序为微波干燥60℃热风干燥阴干晒干50℃热风干燥40℃热风干燥70℃热风干燥冷冻干燥。结论结合生产实践,微波干燥和60℃热风干燥是远志筒和根较适宜的干燥方法,可为远志不同规格药材产地干燥方式的确定提供依据。     

蜜远志配方颗粒质量标准的研究

目的建立蜜远志配方颗粒(蜜远志)的质量标准。方法 TLC法定性鉴别细叶远志皂苷和远志口山酮Ⅲ,HPLC法定量测定细叶远志皂苷、远志口山酮Ⅲ、3,6’-二芥子酰基蔗糖含有量。结果 TLC斑点清晰,分离度好。细叶远志皂苷、远志口山酮Ⅲ、3,6’-二芥子酰基蔗糖分别在0.010 2~1.023 9 mg/mL(R~2=0.999 1)、0.004 0~0.495 6 mg/mL(R~2=0.999 3)、0.005 0~0.545 2 mg/mL(R~2=0.999 3)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为101.29%、97.61%、102.73%,RSD分别为1.99%、0.90%、1.57%。结论该方法稳定可行,可用于蜜远志配方颗粒的质量控制。     

基于指纹图谱和多指标含量测定的蜜远志质量评价

目的 建立指纹图谱和多指标定量的蜜远志质量评价方法。方法 Kromasil 100-5-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）为固定相,以乙腈（A）-0.2%磷酸水溶液（B）为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长318 nm。对16批蜜远志建立指纹图谱,确定共有峰并进行相似度分析结合化学计量学分析。采用Waters Xbridge Shiled RP C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）进行同时测定远志（口山）酮III、3,6''-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志酸、远志皂苷元的含量。结果 在指纹图谱研究中,标定了27个共有峰,结合对照品和HPLC-Q-TOF-MS共指认8个成分,分别为西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志（口山）酮IX、远志（口山）酮III、3,6''-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志酸、远志皂苷元。聚类分析将16批样品分为3类;经主成分分析,主成分1～3是影响蜜远志质量评价的主要因子。多指标含量测定中远志（口山）酮III、3,6''-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志酸、远志皂苷元的质量分数分别为0.027%～0.068%、0.074%～0.798%、1.1%～1.4%、0.15%～0.36%、0.15%～0.37%。经方法学验证,线性关系良好（r≥0.999 6）,平均加样回收率为97.15%～100.9%。结论 所建立的指纹图谱结合多指标含量测定方法准确、高效,特征性强,可为蜜远志饮片的质量评价和临床应用提供有效参考。     

不同来源远志药材有效成分的定量分析

 目的 对不同来源远志药材中有效成分的含量进行分析,以阐明远志药材适宜的产地、栽培品和野生品的质量等同性及合理的采收期。方法 采用2010版《中国药典》远志项下的远志NFDE8酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖和细叶远志皂苷的含量测定方法,对不同来源的远志样品进行分析。结果 不同来源远志药材具有一定差别,其3,6′-二芥子酰基蔗糖含量的变化区间为0.237%~1.704%（n=54）,远志NFDE8酮Ⅲ为0.037%~0.857%（n=54）,细叶远志皂苷为1.44%~3.71%（n=53）。不同产地的远志药材样品以山西和陕西两地所产药材各有效成分含量为高;栽培品和野生品各有效成分的含量没有明显差异;不同采收月份的药材,以春秋两季采收药材有效成分含量为高,且春季稍高于秋季;2~3年生药材各有效成分的含量明显高于1年生样品。结论 采用多指标定量方法可以对远志药材质量进行更为客观和全面的评价。我们的实验结果产地以山西和陕西所产远志药材质量为佳,栽培品与野生品质量基本等同;合理的采收期应该在每年春季的3～5月份,种植年限应在2年以上。     

不同商品等级远志药材的质量分析研究

目的建立不同商品等级远志的主要成分分析方法,探索远志商品等级性状与主要化学成分指标间的关联性。方法采用HPLC法对河北安国药材市场、西安万寿路药材市场、四川荷花池药材市场、安徽亳州药材市场商品等级的远志进行主要成分测定,利用数据处理软件进行各等级与成分间的相关性分析研究。结果不同市场商品等级远志的主要成分测定结果与其商品等级不完全相符。结论药材市场上远志商品等级的划分标准具有一定的局限性,为准确评价远志质量,还需制定新的远志药材等级质量标准,本研究也为远志的综合定量评价提供了一定的参考依据。     

HPLC-MS/MS快速测定远志中远志(口山)酮Ⅲ和 3,6'-二芥子酰基蔗糖的含量

目的: 建立一种远志中远志(口山)酮Ⅲ和3,6'-二芥子酰基蔗糖含量的HPLC-MS/MS分析方法. 方法: 采用ZORBAX Eclipse plus C₁₈色谱柱,(4.6 mm×100 mm, 3.5 μm),流动相乙腈-0.1%甲酸水 (28:72),流速0.3 mL·min^-1,进样量10 μL,柱温20 ℃.质谱条件:电喷雾负离子化模式,多反应监测模式 (MRM),检测离子对分别为m/z 567.2~345.1 (远志(口山)酮Ⅲ),m/z 753.3~205.1 (3,6'-二芥子酰基蔗糖). 结果: 两种成分的线性关系良好,分析过程只需6 min.远志(口山)酮Ⅲ的日内精密度和日间精密度的RSD分别为2.2%,2.5%,回收率为96.1%~101.7%(RSD 2.4%);3,6'-二芥子酰基蔗糖的日内精密度和日间精密度的RSD分别为2.3%,2.4%,回收率为95.7%~101.4% (RSD 2.0%). 结论: 该方法快速、灵敏、选择性好,适合远志中远志(口山)酮Ⅲ和3,6'-二芥子酰基蔗糖的定量分析.     

HPLC同时测定不同产地远志饮片中6种寡糖酯类成分

目的建立HPLC同时测定陕西、河南、山西(太原和沂州地区)、山东和河北省产的远志中6种寡糖酯类成分的方法。方法远志甲醇提取液分析的色谱柱为Kromasil C18(200 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸溶液(B),梯度洗脱;检测波长330 nm。结果 3,6'-二芥子酰基蔗糖、西伯利亚远志糖A5、球腺糖A、tenuifoliside A、tenuifoliside B、tenuifoliside C的线性范围依次为0.109~4.36μg、0.044 3~1.77μg、0.012 2~0.488μg、0.055 0~2.20μg、0.030 7~1.23μg、0.014 2~0.568μg,平均加样回收率为97.2%~100.3%。结论 6个不同产地远志饮片中3,6'-二芥子酰基蔗糖、西伯利亚远志糖A5、球腺糖A、tenuifoliside A、tenuifoliside B、tenuifoliside C的含有量分别为0.442%~0.867%、0.090%~0.272%、0.044 1%~0.080 5%、0.216%~0.283%、0.101%~0.124%和0.037 4%~0.081 8%.     

复方桔梗止咳片中远志、甘草的含量测定及质量情况分析

目的:建立复方桔梗止咳片中远志(3,6'-二芥子酰基蔗糖)和甘草(甘草酸)中成分的含量测定方法,了解复方桔梗止咳片的整体质量情况,保障公众用药安全有效。方法:采用HPLC,MG C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0. 05%磷酸水溶液(18∶82)检测远志(3,6'-二芥子酰基蔗糖),(35∶65)检测甘草(甘草酸),进样量20μL,柱温30℃,流速1. 0 m L·min-1,检测波长320 nm检测远志(3,6'-二芥子酰基蔗糖),250 nm检测甘草(甘草酸)。结果:3,6'-二芥子酰基蔗糖在0. 105 8～2. 643 8μg呈良好的线性关系(r=0. 999 5),甘草酸在0. 077 0～5. 773 0μg呈良好的线性关系(r=1. 000 0),3,6'-二芥子酰基蔗糖和甘草酸的平均回收率分别为96. 2%和95. 6%,RSD分别为1. 2%和0. 9%;通过对178批样品中远志和甘草成分的含量测定,发现部分生产企业存在不投、少投或用劣质药材(饮片)投料现象,且不同生产企业、同一企业不同批号之间的质量情况差异较大。结论:该方法简便、准确、重复性好、灵敏度高,为复方桔梗止咳片的全面质量控制提供了科学依据。     

远志HPLC指纹图谱及rbcL序列分子鉴定研究

目的 建立14批不同产地远志药材HPLC指纹图谱并利用化学计量学方法对其进行质量评价。采用DNA分子鉴定技术对远志药材进行物种鉴定,为远志药材质量控制提供依据。方法 选用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,0.5μm）,流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长316 nm,进样量10μL,运用软件“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（2012版）对14批远志药材进行相似度评价,确认共有峰,对测定结果进行聚类分析和主成分分析,并结合正交偏最小二乘-判别分析对样品进行模式识别。提取14批远志以及白薇、瓜子金样品的DNA进行序列分析和物种鉴定,并从NCBI数据库下载混淆品的序列,借助MEGA-X计算遗传距离并构建系统发育树。结果 建立了14批远志药材的HPLC指纹图谱,标定了20个共有峰,相似度均大于0.918,化学计量学分析将14批远志药材分为3类。经DNA分子鉴定,14批远志药材均为远志科植物远志Polygala tenuifolia,遗传距离和NJ树分析可将远志与混淆品区分开。结论 所建立的H...     

基于“五原则”的开心散质量标志物（Q-Marker）的预测分析

开心散是治疗“好忘”的经典名方,现收录于《古代经典名方目录（第一批）》,可治疗心失所养、痰阻心窍、心肾不交所致之善忘。临床常用于改善记忆力衰退、语言障碍、认知功能障碍、人格改变等神经精神疾病的症状。通过梳理开心散的化学成分、质量控制、药动学、药理作用以及临床应用等相关文献,基于“五原则”对开心散的中药质量标志物（quality marker,Q-Marker）进行预测分析,人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、细叶远志皂苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖、远志(口山)酮III、茯苓酸、β-细辛醚、α-细辛醚的专属性高、可测性强,可作为开心散的Q-Marker,为其质量控制研究提供参考。     

远志药材UPLC指纹图谱及多指标性成分测定方法的建立

目的建立远志药材UPLC指纹图谱及多指标性成分测定的方法,用于不同规格等级远志药材的质量评价。方法采用UPLC法,建立不同规格等级远志药材的指纹图谱,并测定远志药材中sibiricose A5、sibiricose A6、lancerin、sibiricoxanthone B、glomeratose A、7-O-methyl mangiferin、polygalaxanthone Ⅲ、3,6′-disinapoyl sucrose、tenuifoliside A、tenuifoliside C 10种指标性成分的含量,同时建立综合质量评价函数。结果建立的指纹图谱及含量测定方法符合方法学要求,指纹图谱共标定37个共有峰,指认出其中22个峰;不同规格等级远志药材样品间的相似度在0.927~0.971;10种指标性成分含量均有不同程度的差异,综合质量评价函数表明大筒远志药材样品的整体质量优于中筒远志药材样品,野生远志药材样品的整体质量优于栽培品。结论建立的指纹图谱结合多指标成分测定的方法可用于远志药材样品的综合质量评价。     

远志叶绿体基因组序列特征与系统发育分析

目的 解析远志Polygalatenuifolia叶绿体基因组信息序列特征和确定其在远志属的系统位置。方法 获得远志叶绿体基因组序列,借助Ge Seq、Chloroplot、MISA、REPute、Tandem repeats finder、CodonW、Geneious、IRscope、MAFFT7和IQtree2.0.5等生物信息学工具进行序列分析、密码子偏好分析、远志属基因组比较分析和系统发育研究。结果 远志的叶绿体基因组全长165 423 bp,为典型的环状四段式结构;包括1个大单拷贝区（large single copy,LSC;83 699 bp）,1个小单拷贝区（small single copy,SSC;8044 bp）和1对反向重复区（inverted repeats,IRs;36 840 bp）,该基因组共注释到135个基因,包括8个rRNA基因、38个tRNA基因和89个蛋白编码基因。该基因组中共检测到161个SSR位点,223条散在重复序列,90条串联重复序列;亮氨酸（Leu）是远志叶绿体基因组中使用次数最高的氨基酸（10.21%）,同义密码子相对使用频次（RS...     

远志bZIP基因家族的鉴定及表达分析

目的 鉴定远志Polygala tenuifolia bZIP基因,为远志抗逆性改良及次生代谢调控研究提供参考。方法 基于远志三代全长转录组数据库,采用生物信息学方法对远志bZIP基因家族成员进行鉴定和分析,并利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术分析其在不同组织及处理中的表达特性。结果 共鉴定得到27个含有特征性保守结构域的PtbZIP基因,编码蛋白质的氨基酸数量为143 aa（PtbZIP24）～846 aa（PtbZIP9）,相对分子质量范围为16201.52～92932.30,等电点（pI）介于4.59～9.69,其中25个家族成员为不稳定蛋白,所有家族成员均为亲水性蛋白。蛋白二级结构主要由α螺旋和无规卷曲构成,均无信号肽,存在多种互作现象。进化树分析将27个PtbZIP蛋白分为A、B、C、D、F、G、I、S 8个亚组,其中G亚组含有PtbZIP家族成员数量最多（共有8个）,占总数的29.63%,没有PtbZIP基因被归类到E和K组。PtbZIP家族基因的密码子偏好性较弱,适应性较弱。表达模式分析显示,PtbZIP4/15在叶中的表达量最高,茎和根次之;PtbZIP8/24在茎中的表达量最高,叶和根次之;PtbZIP1/17的表达量为根＞叶＞茎;其余21个的表达模式均为根＞茎＞叶。qPCR结果表明,PtbZIP26基因受脱落酸、壳聚糖的诱导,且能显著应答干旱和盐胁迫。结论 鉴定了远志bZIP家族基因及其分子特征,为进一步研究PtbZIP基因在调控远志发育及次生代谢物合成方面的生物学功能奠定基础。     

远志花粉活力与柱头可授性分析

目的:研究远志花粉活力和柱头可授性,以期为远志的有性繁殖和杂交育种工作研究提供科学依据。方法:用I2-KI法,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)法测定不同开花天数(开花前一天、第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天、第8天)的远志花粉活力变化,并比较2种染色方法对远志花粉活力的染色效果。用I2-KI法分别测定1 d中不同时间段的远志花粉活力、不同贮藏方法(湿法保存的花朵和干法保存的花朵)的远志花粉活力及不同贮藏条件(4,26,-20,-80℃)条件下贮藏不同时间(2,4,8,24,48,72 h)远志花粉活力。用联苯胺-过氧化氢法测定其柱头可授性。结果:(1)远志的花粉活力随着散粉时间的延长而逐渐降低,在开花后第4天花粉活力最高;(2)在一天8:00~18:00中,10:00~16:00的花粉活力较强;(3)干燥花粉在-20℃贮藏的条件下能延长花粉的贮藏时间;(4)开花后第5天柱头可授性最强。结论:可以采集花后第4天的花粉对花后第5天的柱头进行人工授粉杂交,为远志良种选育提供理论依据。     

卵叶远志叶绿体基因组序列特征与系统发育分析

目的 解析卵叶远志Polygala sibirica叶绿体因组的序列特征和系统发育关系。方法 利用CTAB法提取卵叶远志叶片基因组DNA，通过IlluminaHi Seq平台测序，再用Get Cellelle组装叶绿体基因组，通过MEGA11构建邻接法（neighbor-joining,NJ法）系统发育树。结果 卵叶远志的叶绿体基因组全长165192bp,GC含量为36.70%，共编码124个基因，其中包含8个rRNA基因、42个tRNA基因和74个蛋白编码基因；相对同义密码子使用度显示，67.29%的密码子的使用度>1，密码子偏好A、T结尾；共检测到287个简单重复序列（simple sequence repeats,SSR），其中以单核苷酸重复次数最多，占80.61%，单核苷酸主要由A和T组成，这表明在碱基形成过程中A和T被频繁使用；边界分析显示，9种远志属植物叶绿体基因组边界较为稳定，卵叶远志、香港远志P. hongkongensis、远志P. tenuifolia、瓜子金P. japonica和合叶草P. subopposite基因结构存在相似性；变异分析显示，9种远志属...     

远志细胞色素P450家族PtCYP72A546克隆、亚细胞定位与表达分析

目的 旨在克隆获得远志Polygala tenuifolia 细胞色素P450（cytochrome P450,CYP450）基因CYP72A546的基因开放阅读框（open reading frame,ORF）,并对其理化特性、系统进化关系、组织表达、激素与非生物胁迫下的表达等展开分析。方法 基于远志全长转录组文库筛选并克隆远志细胞色素P450家族基因PtCYP72A546,通过生物信息学在线软件分析其编码的氨基酸序列,预测蛋白理化性质、结构域等分子特征;利用MEGA11分析进化关系,并采用实时荧光定量PCR（qPCR）方法检测不同组织、激素及非生物胁迫的相对表达量。结果 从远志中成功克隆得到远志细胞色素P450家族基因PtCYP72A546,其ORF序列全长共计1 560 bp,编码519个氨基酸,相对分子质量为59 770,系疏水性稳定蛋白,含有1个保守结构域,不具有跨膜结构,二级结构主要为α-螺旋和无规卷曲,亚细胞定位分析表明PtCYP72A546-GFP融合蛋白定位于内质网。qPCR结果显示,远志根中CYP72A546表达量显著高于茎和叶片;200 μmol/L脱落酸（abscisic acid,ABA）和200 μmol/L壳聚糖（chitosan,CHT）处理下,CYP72A546均于12 h达峰值,分别为空白对照的7.45倍和5.49倍;在非生物（干旱、盐）胁迫处理下,CYP72A546的表达均先受抑制（6 h）,再上调后缓慢下降。结论 通过对远志CYP72A546基因的克隆、鉴定与分析,为深入研究其在远志三萜皂苷合成途径的功能奠定基础。     

从农艺性状及化学成分测定分析远志药材商品品规和良种选育的合理性

通过对18份具有不同农艺性状特征的远志样品进行农艺性状(株高、根直径、根长、第一侧根分叉高度、侧根数、根重)分析,并采用HPLC对18份远志样品的3个指标性化学成分(细叶远志皂苷、远志酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖)进行含量测定,最后通过散点图分析6个农艺性状与3个指标性化学成分的相关性。研究发现18份远志样品中的3个指标性化学成分含量与远志根直径均无明显相关性,且细叶远志皂苷含量与其余5个农艺性状也无明显相关性;远志酮Ⅲ在主根长较短、第一侧根分叉高度较短,侧根数较多的远志样品中含量较高;3,6'-二芥子酰基蔗糖在主根长较长的远志样品中含量较高。可见现行远志药材商品规格标准及等级划分与良种选育方法,并不符合优等药材其体内指标性化学成分含量较高的药典标准,所以急需制订出具有科学数据支撑的远志商品规格等级标准及良种选育方法。