ATRA对K562细胞HOXA5基因表达与细胞周期、凋亡的影响

目的本研究旨在通过全反式维甲酸(ATRA)对人髓系白血病细胞株K562细胞的干预来分析同源盒基因(HOX)A5的表达变化及其与细胞周期、凋亡的关系,探讨HOXA5在髓系白血病发生、发展过程中的作用,为临床治疗白血病提供实验依据。方法通过细胞增殖-毒性实验(CCK-8)筛选出ATRA干预K562细胞的最佳浓度值。流式细胞术检测10μmol/LATRA分别干预K562细胞24 h、48 h和72 h后,各组细胞的凋亡情况及细胞周期分布的变化。实时荧光定量PCR技术、蛋白免疫印迹法测定K562细胞中HOXA5 mRNA及蛋白的表达情况,并分析HOXA5 mRNA及蛋白的表达与细胞周期、凋亡的关系。结果 K562细胞中可以检测到HOXA5 mRNA及蛋白的表达,ATRA干预K562细胞后HOXA5 mRNA及蛋白的表达量升高,细胞凋亡率明显增加(P0.05),细胞增殖周期被阻抑在G_0/G_1期,细胞增殖受抑,且HOXA5 mRNA及蛋白的表达量与细胞凋亡率呈正相关(r=0.944,r=0.826),与细胞周期G0/G1期增加百分比呈正相关(r=0.870,r=0.962),与S期降低百分比呈负相关(r=-0.946,r=-0.926)。结论 ATRA干预K562细胞后,细胞中HOXA5 mRNA及蛋白的表达量升高;ATRA可能通过上调HOXA5 mRNA及蛋白的表达抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡。     

虎杖苷对THP-1细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制研究北大核心CSCD

目的探讨虎杖苷对急性单核细胞白血病细胞株THP-1增殖及凋亡的影响及可能的作用机制。方法以不同梯度浓度的虎杖苷处理THP-1细胞24 h、48 h,CCK-8法检测细胞增殖活力,并计算半数抑制浓度。取对数生长期的THP-1细胞,分为虎杖苷处理组(处理浓度为半数抑制浓度)和空白对照组(细胞中未施加虎杖苷溶液处理),培养48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Western blot法检测PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、p70 S6K、p-p70 S6K蛋白的表达。结果虎杖苷可有效抑制THP-1细胞的增殖,48 h的半数抑制浓度为1800μmol/L。经1800μmol/L的虎杖苷溶液作用48 h后,THP-1细胞的凋亡率较空白对照组显著增加(P<0.05);细胞周期出现G0/G1期至S期的阻滞,表现为G0/G1期的细胞比例较空白对照组明显上升,S期的细胞比例较空白对照组显著下降(P<0.05);PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、p70 S6K、p-p70 S6K蛋白表达较空白对照组显著降低(P<0.05)。结论虎杖苷可有效抑制THP-1细胞的增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT/mTOR信号通路的抑制表达有关。     

Survivin反义寡核苷酸对k562细胞周期及c-myc的影响

目的 探讨凋亡抑制基因survivin的反义寡核苷酸对白血病细胞k562细胞周期及c-myc的影响。方法 实验分反义组、无义组、脂质体组、空白组，转染后24、48小时流式细胞仪检测细胞周期；免疫组织化学方法检测survivin、c-myc蛋白水平。结果 反义寡核苷酸作用后，k562细胞被阻滞在G0／G1期，G0／G1期细胞明显增多，S期及G1／M期细胞明显减少，细胞周期进程受到明显阻滞，而无义组、脂质体组、空白组细胞周期进程无明显变化（P〈0．05）；反义寡核苷酸作用24小时后细胞内survivin及c-myc的表达水平下降，但与无义组、脂质体组、空白组比较无显著性差异（P〉0．05），而48小时后survivin及c-myc表达水平进一步降低，与各对照组比较有显著性差异（P〈0.05）。结论 survivin反义寡核苷酸能阻滞K562细胞于G0／G1期、并下调c-myc蛋白的表达。     

Survivin反义寡核苷酸对k562细胞周期及c-myc的影响

目的探讨凋亡抑制基因survivin的反义寡核苷酸对白血病细胞k562细胞周期及cmyc的影响。方法实验分反义组、无义组、脂质体组、空白组,转染后24、48小时流式细胞仪检测细胞周期;免疫组织化学方法检测survivin、cmyc蛋白水平。结果反义寡核苷酸作用后,k562细胞被阻滞在G0/G1期,G0G1期细胞明显增多,S期及G2M期细胞明显减少,细胞周期进程受到明显阻滞,而无义组、脂质体组、空白组细胞周期进程无明显变化(P<0.05);反义寡核苷酸作用24小时后细胞内survivin及cmyc的表达水平下降,但与无义组、脂质体组、空白组比较无显著性差异(P>0.05),而48小时后survivin及cmyc表达水平进一步降低,与各对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论survivin反义寡核苷酸能阻滞K562细胞于G0/G1期、并下调cmyc蛋白的表达。     

PTEN基因敲减及RESC救援后人T淋巴细胞增殖和信号通路的变化

目的：构建人PTEN基因RNA干扰（RNAi）及其逃避RNAi策略结构（RESC）救援的慢病毒载体。观察PTEN基因敲减前后及RESC救援后人T淋巴细胞信号通路、细胞增殖和细胞周期的变化,为进一步研究淋巴细胞性白血病的发病机制提供依据。方法：利用慢病毒载体系统,构建人PTEN基因RNAi及其RESC救援的慢病毒载体,转染T淋巴细胞,建立PTEN基因敲减及RESC救援的细胞模型T-LC-shPTEN和T-LC-rrshPTEN;分别应用Western blot法、MTT法和流式细胞术检测PTEN基因敲减前后及RESC救援后PTEN蛋白的表达和AKT通路的活化情况、细胞增殖及细胞周期的变化。结果：慢病毒介导的RNAi能有效下调PTEN基因的表达。PTEN基因表达下调后,T淋巴细胞生长受到促进,G0/G1期细胞减少,S期细胞和G2/M期细胞增多,PI3K/AKT通路激活。而RESC救援则能够完全恢复PTEN基因RNAi所造成的现象。结论：成功构建了人PTEN基因RNAi及其RESC救援的慢病毒载体。PTEN基因敲减后,通过激活PI3K/AKT通路促进T淋巴细胞生长。［中国当代儿科杂志,2010,12(12)：979-983］     

FMS样酪氨酸激酶3靶向RNA干扰对急性单核细胞白血病细胞株THP-1增殖和凋亡的影响

目的探讨短发夹状干扰RNA（shRNA）诱导FMS样酪氨酸激酶3（FLT3）的靶向抑制对急性单核细胞白血病（AMOL）细胞株THP-1增殖、凋亡的影响。方法设计并体外转录合成FLT3靶向shRNA（FLT3-shRNA）,转染THP-1细胞。以半定量逆转录PCR（RT-PCR）、流式细胞法（FCM）检测细胞FLT3在mRNA、蛋白水平表达,细胞计数试剂8（CCK-8）检测细胞增殖活力,FCM法检测细胞周期,DNA梯度条带（DNA Ladder）和Annexin V—FITC染色法分析细胞凋亡。结果合成的FLT3-shRNA 15nmol／L转染48h对FLT3 mRNA和蛋白的抑制率分别达（72．95±2．07）％、（65．39±5．57）％。shRNA干扰后细胞增殖活力受到抑制,48h抑制率达（36．66±3．67）％,72h达（35．56±0．73）％。转染48h细胞周期出现G0／G1期到S期的阻滞,FLT3-shRNA组G0／G1期的细胞百分比（65．71±4．47）％明显高于对照组,S期（25．11±2．70）％低于对照组。FLT3-shRNA作用48h有明显的凋亡条带出现,Annexin V-FITC检测细胞的早期凋亡率（18．59±2．07）％明显高于对照组。结论由shRNA诱导的FLT3靶向干扰可有效的抑制THP-1细胞增殖、诱导凋亡,显示其在儿童AMOL治疗中具有潜在的价值。     

miR-100及miR-99a影响儿童急性淋巴细胞白血病细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨miR-100及miR-99a在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的作用及其作用机制,为寻求新的靶向治疗方法提供依据。方法用实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)技术检测2007年3月至2012年9月中山大学附属第一医院71例初发急性髓细胞白血病(AML)患儿、111例初发ALL患儿及10例原发性免疫性血小板减少症(ITP)患儿的骨髓标本中miR-100及miR-99a的表达;用在线miRNA数据库预测miR-100及miR-99a的可能靶基因,并通过双荧光报告及蛋白印迹技术(Western Blot)对可能的靶基因进行验证;用瞬时转染方法使ALL细胞系过表达miR-100及miR-99a,用Western Blot检测此时靶蛋白的表达;用细胞计数试剂-8(CCK-8)和流式细胞技术研究过表达miR-100/miR-99a及沉默其靶基因后对ALL细胞增殖、凋亡的作用。结果与初发AML及ITP患儿比较,miR-100及miR-99a在初发ALL患儿中呈低表达;双荧光报告验证了FKBP51基因是miR-100及miR-99a的靶基因之一,在细胞系中过表达miR-100或miR-99a能抑制FKBP51靶蛋白的表达;过表达miR-100/miR-99a或小干扰RNA(si RNA)沉默其靶基因后可以抑制细胞增殖,促进氟美松诱导的细胞凋亡。结论 miR-100及miR-99a通过对靶基因FKBP51的调控影响ALL细胞增殖、凋亡,靶向增强miR-100及miR-99a的表达有可能成为一种治疗儿童ALL的新方法。     

甲基化抑制剂对CEM细胞EphB4基因表达及细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨甲基化抑制剂5-氮杂-2'脱氧胞苷（5-aza-2'-deoxycytidine,5aza-CdR）对人急性淋巴细胞白血病细胞株CEM中抑癌基因EphB4的转录调控作用及对CEM细胞增殖凋亡的生物学影响,为寻找肿瘤治疗新靶点提供实验依据。方法：采用亚硫酸氢盐修饰后测序法检测EphB4基因甲基化水平,荧光定量PCR法(Q-PCR)和Western blot方法检测5-aza-CdR处理前后EphB4基因mRNA及蛋白表达水平;MTS法检测不同剂量(1.0、2.5、5.0 μmol/L) 的5-aza-CdR作用于CEM细胞0 h、24 h、48 h、72 h、96 h对CEM细胞存活率的影响,流式细胞仪分析5-aza-CdR作用96 h对CEM细胞周期及凋亡的影响。结果：CEM细胞中存在EphB4基因的甲基化,甲基化水平为31.4%;不同浓度5-aza-CdR作用后CEM细胞甲基化水平均下降。5-aza-CdR作用使CEM细胞中EphB4 基因的mRNA和蛋白表达上升;5-aza-CdR明显抑制CEM细胞增殖,并与药物浓度及作用时间呈正相关。5-aza-CdR处理 96 h后,早期凋亡由4.1%上升为24.8%。用药96 h后,CEM细胞G1期由62.4% 降至46.8%,G2期由2.1%升至16.2%,细胞阻滞于G2期。结论：特异性甲基化转移酶抑制剂5-aza-CdR能使CEM细胞中沉默的EphB4基因重新表达,并可抑制白血病细胞增殖和诱导其凋亡。     

MiR-99a调控CTDSPL影响儿童急性髓性白血病细胞增殖及凋亡

目的探讨miR-99a对儿童急性髓性白血病(AML)的影响及其作用机制,为寻找新的靶向治疗方法提供理论依据。方法用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测57例AMLL患儿及10例对照患儿的骨髓标本中miR-99a的表达;在细胞系水平通过对miR-99a过表达或抑制表达,利用MTT细胞增殖及双染凋亡试验研究miR-99a对AML细胞增殖、凋亡的影响。用在线软件预测miR-99a可能的靶基因,并通过双荧光报告及蛋白印迹技术对其靶基因进行验证。结果miR-99a在AML患儿初诊时高表达,在完全缓解(CR)时低表达;miR-99a促进AML细胞的增殖,抑制其凋亡;采用双荧光报告及蛋白印迹技术在细胞系中验证出CTDSPL可能是miR-99a的靶基因;并通过蛋白印迹技术在AML患儿标本中验证出miR-99a抑制CTDSPL蛋白的表达。结论miR-99a通过靶向负调控CTDSPL基因影响AML细胞增殖及凋亡,靶向抑制miR-99a表达可能成为治疗AML的一个新策略。     

热休克蛋白70在人白血病细胞HL-60中表达研究

目的 探讨热休克蛋白70(HSP 70)在人白血病细胞的表达。方法 人白血病细胞HL-60经42℃休克2 h,分别于休克后4、8、12、16、24、48 h收集细胞爬片,采用ENVISION免疫组织化学法检测HSP 70在细胞中表达;为明确热休克处理前后白血病细胞表达量变化,采用间接免疫荧光法定量分析细胞休克前及休克后12 h HSP 70表达;应用DNA倍体检测分析HSP 70表达与细胞周期关系。结果 免疫组织化学和免疫荧光检测显示热休克后白血病细胞中HSP70表达明显增加,以12 h达高峰;DNA倍体分析在整个细胞周期HSP 70均有表达,G1期与G2期表达量基本一致。与休克前相比,经热休克处理人白血病细胞HL-60中HSP 70表达明显增高;HSP 70表达与细胞周期并无明显关系。结论 初步了解白细病细胞HSP 70表达规律,为今后进行HSP 70抗原肽提取和纯化及抗癌免疫研究奠定基础。     

In vitro test-system for chemo- and thermosensitivity: an analysis of survival fractions and cell-cycle distributions in human Ewing's sarcomas as a modelfor tumors in pediatric oncology

BACKGROUND: Tumor cell resistance to anticancer drugs is the primary reason for treatment failure in childhood cancer. Resistance can exist at the onset of treatment or can become clinically apparent under selective pressure of drug exposure. In vitro predictive tests are important for the experimental study of drug resistance. Although in vitro studies appear to be fairly good for predicting drug resistance, they are rarely used in the routine management of individual cases. An exception that proves the rule is the MTT- (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5- diphenyltetrazoliumbromide) assay in children with acute lymphoblastic leukemias (ALL), which can be correlated with the clinical outcome in this group of patients. In the present study we used a predictive test-system to evaluate the synergistic cytotoxic effects of chemotherapy +/- hyperthermia with respect to cell cycle disturbance. METHODS: As a tumor model two well defined human Ewing's sarcoma cell lines VH64 and SK-ES-1 were treated for 1 h with cis-diamminedichloroplatinum II (cDDP) (0.1, 0.5, 1, 3, 5 micro g/ml) or 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-5-(4,6-0-)-ethylidene-beta-D-glycopyranoside (VP-16) (1, 5, 10, 20, 50 micro g/ml) +/- hyperthermia (42 degrees C, 43 degrees C); control: 37 degrees C, without chemotherapy. Cell survival was tested using the XTT- (2,3-bis[2-Methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl]-2H-tetrazolium-5-carboxanilide) assay. Assay conditions were optimized for each tumor cell line, extinction was measured 72 h post treatment at 450 nm in an ELISA-reader. Cell cycle fractions (G0/G1-, S-, G2/M-phase) were determined immediately, 12 h and 24 h after treatment by labeling proliferating tumor cells with bromodeoxyuridine (BrdU) and measuring DNA-content with propidium-iodide (PI) and analyzed by flow cytometry. RESULTS: Survival fractions: Hyperthermia alone at 43 degrees C reduced tumor cell survival to 51 % in SK-ES-1 and 74 % in VH64. cDDP (5 micro g/ml): reduction of survival fraction to 23 % in SK-ES-1 and 33 % in VH64. cDDP (5 micro g/ml) + hyperthermia (43 degrees C): enhanced reduction of tumor cell survival compared to 37 degrees C to 11 % in SK-ES-1 and 8 % in VH64. VP-16 (50 micro g/ml): survival fraction of 18 % in SK-ES-1 and of 31 % in VH64. In contrast to cDDP, chemosensitivity of the tumor cells to VP-16 could not synergistically be enhanced by using hyperthermia. Cell cycle analysis: Hyperthermia alone at 43 degrees C induced an accumulation in G2/M and a slight reduction in G0/G1-phase 24 h after treatment, whereas the S-phase was not markedly affected. cDDP (5 micro g/ml) alone led to a prominent S-phase arrest and a G0/G1 decrease 24 h after treatment. Simultaneous application of cDDP (5 micro g/ml) + hyperthermia (43 degrees C) however significantly reduced S-phase cells. VP-16 (50 micro g/ml) alone induced a temporary S-phase arrest 12 h after treatment and a delayed G2/M-arrest after 24 h. Additional hyperthermia at 43 degrees C did not show further effects on VP-16 induced cell cycle disturbances. CONCLUSIONS: Test-system discloses treatment-specific alterations in tumor cell survival and cell cycle distribution, e. g. synergistic enhancement of cDDP cytotoxicity by heat application, which might predict chemo- and thermosensitivity.     

hsacirc0005777在肝母细胞瘤中的表达及对细胞增殖周期的影响研究

目的探索环状RNA hsa_circ₀005777在肝母细胞瘤中的表达及对肝母细胞瘤细胞增殖周期的影响。方法实验细胞包括人肝母细胞瘤细胞株HepG2和HUH6, 将实验细胞培养在含10%胎牛血清及1%双抗的DMEM培养基中, 置于37℃、5% CO2的恒温培养箱中。实验组织标本包括肝母细胞瘤肿瘤及癌旁组织标本, 来源于中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科住院患儿手术切除的组织。所有肿瘤组织标本和癌旁组织标本在手术切除后, 均立即浸泡在RNA later保存液中防止RNA降解, 随后放在-80℃冰箱保存。在肝母细胞瘤细胞株中转染hsa_circ₀005777过表达质粒, 为过表达组;未转染过表达质粒的细胞株作为阴性对照, 为对照组。检测内容包括:①鉴定hsa_circ₀005777在肝母细胞瘤细胞株中的性质及分布情况;②检测hsa_circ₀005777在肝母细胞瘤肿瘤、癌旁组织组织标本和肝母细胞瘤细胞株中的表达情况;③检测过表...     

Improved outcome in childhood acute myeloid leukemia in Singapore with the MRC AML 10 protocol

BACKGROUND: The introduction of the United Kingdom Medical Research Council's 10th AML trial (MRC AML 10) protocol incorporating high-dose anthracycline therapy has improved outcome of children with acute myeloid leukemia (AML). In this study, we review the results of childhood AML therapy in a Singapore university hospital over the last 17 years emphasizing toxicity and outcome. PROCEDURE: Retrospective analysis revealed 34 children with AML between 1988 and 2003. Prior to September 1996, therapy consisted of: POG-8498 (n = 10), others (n = 9). From September 1996, all but one of 15 children received MRC AML 10 treatment. RESULTS: At the time of analysis, 17 had died from disease, and 17 patients were alive among whom 2 had relapsed. MRC AML 10-treated patients (n = 14) had significantly better 3-year overall, event-free, and disease-free survival (74% vs. 35%, 77% vs. 20%, 83% vs. 31%; P = 0.019, P = 0.002, and P = 0.010, respectively) and were likelier to achieve complete remission (CR) than non-MRC AML 10 patients (P = 0.102). Among patients who achieved CR, MRC AML 10-treated patients were significantly more likely to achieve CR after only one cycle of chemotherapy (P = 0.016). Hematologic toxicity was similar among the different regimens (P = 0.9). CONCLUSIONS: These findings suggest that MRC AML 10 treatment results in significantly superior survival, without excess toxicity. Future studies should attempt to elucidate the relative importance of individual MRC AML 10 components and reduce the high cumulative anthracycline dose without compromising outcome.     

儿童急性髓细胞性白血病WAVEl基因对耐药相关基因表达影响的研究

目的 探讨儿童急性髓细胞性白血病(AML)中WASP家族Verprolin同源蛋白1(WAVE1)基因参与P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRPl)、肺耐药相关蛋白(LRP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)表达和调控的机制.方法 将52例患儿依据是否在随访期内持续缓解(CCR)分为难治/复发组和缓解组,应用实时定量PCR(RQ-PCR)法和蛋白印迹(Western blot)分别检测52例AML患儿治疗前及疾病发展过程中骨髓单个核细胞(BMMCs)中WAVE1、p-gp、MRPl、LRP及BCRP蛋白和基因mRNA的表达水平.将PCDNA3.1-WAVE1真核表达质粒转染HL60细胞构建WAVE1高表达HL-60细胞,将WAVE1基因的特异性小片段干扰RNA(WAVE1 siRNA)转染HL60/ADR构建WAVE1低表达HL60/ADR细胞;Western blot和RQ-PCR法检测基因转染前后白血病细胞系WAVE1、MRPl及BCRP蛋白及基因的表达水平.结果 ①复发/难治组病例的WAVE1及耐药相关基因水平明显高于缓解组患儿WAVE1基因表达水平(P<0.05);②同一患儿初治及复发时的WAVE1基因水平明显高于缓解期表达水平(P<0.05);③与HL60细胞相比较,HI.60/ADR细胞WAVE1 mRNA及蛋白表达水平增加3.53倍及95%;④转染WAVE1后HL60细胞系MRPl mRNA和蛋白表达水平分别增加16.54倍、129%,BCRP mRNA和蛋白表达水平分别增加4.93倍及96%,而转染WAVE1 siRNA的HL60/ADR细胞MRPl mRNA和蛋白的表达水平为干扰前的0.11倍及43%,BCRP mRNA和蛋白的表达水平为转染前的0.14倍及71%.结论 WAVE1与儿童AML的病程及预后相关,参与了髓系白血病细胞多药耐药的形成并可影响MRP及BCRPl等多个重要的耐药相关基因的表达和作用.     

儿童急性髓细胞白血病WT1基因表达及其临床意义

目的研究急性髓细胞白血病(AML)患儿WT1基因表达情况及其与临床预后的关系。方法采用实时荧光定量PCR方法检测45例非M3儿童AML的WT1表达水平,并回顾性分析其与AML预后的关系。结果骨髓幼稚细胞比例60%的AML患儿WT1表达水平高于幼稚细胞≤60%的患儿(P0.05)。M2病例组初诊时WT1表达量低于非M2病例组(P0.05)。完全缓解组患儿的WT1表达量显著低于初诊组和复发组(P0.01)。诱导化疗结束时WT1高表达组的2年无病生存率(DFS)低于WT1低表达组(P0.05)。诱导化疗结束时WT1下降程度≥1个数量级病例组的2年总生存率(OS)和DFS高于WT1下降程度1个数量级病例组(P0.05)。AML患儿骨髓复发2~3个月前WT1表达呈上升趋势。结论 WT1表达水平与儿童AML预后密切相关,动态监测WT1表达在指导儿童AML个体化治疗、预后评估和复发预测方面具有重要临床应用价值。     

miR-100对儿童急性髓系白血病细胞增殖和分化的影响

目的从miR-100的基因调控水平探索儿童急性髓系白血病(AML)发生和发展机制。方法收集48例初发AML患儿及5例非血液病患儿的骨髓样本,用qRT-PCR方法研究miR-100在AML细胞中的表达,并筛选其可能的靶基因;用Northern Blot、慢病毒构建等体外实验验证miR-100与SCP3之间的靶对关系;分析miR-100基因调控的分子机制。结果在AML细胞中,miR-100显著高表达;高表达miR-100可阻滞HL-60细胞的分化;miR-100的靶基因是SCP3,它通过转录后抑制作用抑制SCP3蛋白的合成;miR-100通过调控其靶基因SCP3,抑制AML细胞的分化并促进其增殖。结论 miR-100参与AML的发生和发展,有可能成为今后治疗AML的新靶标,为治疗儿童AML提供了新思路。     

siRNA抑制K562细胞survivin基因的初步研究

目的 利用RNA干扰(RNAi)技术,以survivin为靶基因,设计针对survivin的siRNA,通过Hiperfect介导转染K562细胞,研究survivin基因在白血病发生发展中的作用,为以survivin为靶点的白血病治疗奠定基础.方法 体外化学合成抑制survivin基因的siRNA片段,通过Hiperfect转染到K562细胞内,以无关siRNA、Hiperfect和未转染的细胞为对照,采用SYBR Green荧光染料Ⅰ的实时荧光定量RT-PCR方法检测siRNA的抑制效果,利用流式细胞仪Annexin Ⅴ-FITC/PI法检验细胞凋亡率,用四氮唑盐(MTT)法观察转染后48 h,72 h对细胞增生的影响.结果 siRNA转染K562细胞后,SYBR Green荧光染料Ⅰ的实时荧光定量RT-PCR结果显示survivin mRNA的表达量48 h、72 h分别比空白组下降了85.21%、94.35%,细胞生长受抑制,增殖能力减弱,其增殖抑制率于转染后48 h、72 h分别为45.02%和50.88%,细胞的凋亡率升高,分别为12.28%、21.55%.结论 靶向survivin的siRNA能特异性下调目的基因的表达、并能在体外抑制白血病细胞株的生长.survivin将成为白血病基因治疗的一个新靶点.     

长链非编码RNA linc00467在儿童急性髓系白血病中的表达及耐药中的作用研究

目的 研究长链非编码RNA linc00467在儿童急性髓系白血病（AML）中的表达及功能。方法 采集2016年5月至2018年6月确诊的5例儿童AML病例的骨髓标本,以进行骨髓检查提示为正常的3例儿童骨髓标本作为对照。通过实时荧光定量PCR检测并比较linc00467在两组样本中的表达量。通过慢病毒系统在AML细胞（HL-60）中过表达linc00467（linc00467过表达组）,以表达绿色荧光蛋白（GFP）的空载体转入AML细胞作为对照（GFP对照组）;通过慢病毒系统将干扰序列插入AML细胞中（sh-linc00467干扰组）,以插入随机序列作为对照（sh-NC对照组）。检测各组细胞增殖情况及对阿霉素耐药性的影响。结果 与对照组儿童相比,linc00467在儿童AML中表达上调。过表达与干扰linc00467表达对细胞增殖无明显影响（P > 0.05）。相比于GFP对照组,过表达linc00467在0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 μg/mL阿霉素浓度作用下均可增强HL-60细胞活性（P < 0.05）。相比于sh-NC对照组,干扰linc00467的表达在0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 μg/mL阿霉素浓度作用下均可降低HL-60细胞活性（P < 0.05）。与未处理组相比,阿霉素处理HL-60细胞后linc00467表达量升高（P < 0.05）。结论 linc00467有促进AML细胞对阿霉素耐药的生物学功能,为AML新的治疗药物开发提供了依据。