神经母细胞瘤中Trk基因的表达及临床意义

目的本研究通过检测不同分期神经母细胞瘤(NB)患儿中Trk基因家族的表达分布,了解Trk家族表型在不同分期的NB中表达的差异。方法收集2005年-2013年期间中山大学孙逸仙纪念医院儿童肿瘤专科确诊的12例NB患儿病理标本,全部病例取其病理标本切片4张,分别通过免疫组织化学方法检测TrkA、TrkB和Trk C的表达。结果本组NB病例共有Ⅱ期3例,Ⅳ期9例;Ⅱ期NB中有TrkA阳性2例(67%),TrkB阳性2例(67%),TrkC阳性2例(67%);Ⅳ期NB中有TrkA阳性3例(33%),TrkB阳性9例(100%),TrkC阳性2例(22%),分别比较Ⅱ期及Ⅳ期的TrkA、TrkB和Trk C阳性率,发现差异均无显著性(P0.05)。结论不同Trk基因在不同分期的NB中分布各异,TrkA及Trk C在预后较好的Ⅱ期NB中阳性率为67%,TrkB在预后较差的Ⅳ期NB中全部阳性,说明Trk基因家族的表达分布与NB的分期及预后有关。本组病例组间Trk基因分布无显著差异的原因可能与样本量过少有关。     

苦参碱联合顺铂对人肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞PDCD4表达的影响

目的探讨苦参碱及苦参碱联合顺铂对人肾母细胞瘤SK—NEP-1细胞存活及凋亡的影响,以及可能的作用机制。方法苦参碱、顺铂单独及联合作用SK-NEP-1细胞,实验分对照组、顺铂干预组、苦参碱干预组、苦参碱联合顺铂干预组。应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测SK-NEP-1细胞的存活率,用流式细胞仪检测其凋亡率,逆转录聚合酶链反应法检测其PDCD4mRNA的表达。结果各组SK—NEP-1细胞的存活率及凋亡率与对照组比较、相同浓度的苦参碱干预组与苦参碱联合顺铂干预组比较及苦参碱联合顺铂组与J顿铂干预组比较,SK-NEP-1细胞的存活率及凋亡率差异均有显著性（P〈0．05）。各实验组均能提高PDCD4mRNA的表达,与对照组比较,差异有显著性（P〈0．05）。苦参碱联合顺铂组与苦参碱干预组及顺铂干预组比较,SK—NEP-1细胞PDCD4mRNA表达均显著提高（P〈0．05）。结论苦参碱可浓度依赖性的抑制SK-NEP-1细胞的增殖并诱导其凋亡,从而提高对顺铂化疗的敏感性,该作用可能与提高细胞内PDCD4mRNA的表达有关。     

神经母细胞瘤相关基因的研究进展

神经母细胞瘤(Neuroblastoma)是最常见的小儿颅外恶性肿瘤,在小儿所有肿瘤相关死亡中约15%由它所致[1].该肿瘤具有原发部位隐匿,早期诊断困难,恶性程度高、发展迅速和早期转移等临床特点,往往预后较差.一项欧洲人群调查研究显示,神经母细胞瘤患者5年生存率仅为59%[2].……     

促凋亡分子Noxa介导依托泊苷引起的神经母细胞瘤细胞死亡的实验研究

目的:研究化疗药物依托泊苷是否通过促凋亡分子Noxa引起儿童神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞的死亡。方法:培养人NB TB3和TB8细胞,分别给予不同浓度的依托泊苷(0,0.125,0.25,0.5,0.75,1.0 mg/L)处理,并利用CCK8检测细胞存活的变化情况;收集处理不同时间的TB3和T...     

RNA干扰对神经母细胞瘤细胞VEGFA的mRNA表达的影响

目的 构建表达VEGF-A的短发夹RNA真核表达载体,并通过其介导的RNA干扰作用,研究对人神经母细胞瘤细胞株IGR-N-91细胞中VEGF-A的mRNA表达的影响.方法 根据VEGF-A的cDNA序列合成两对寡核苷酸片段,退火后分别插入真核表达载体组成重组质粒.对重组质粒进行PCR、测序鉴定验证后,经Western Blot筛选RNA干扰效果最佳的质粒,然后将该质粒转染人神经母细胞瘤细胞株IGR-N-91.转染48 h后提取总RNA,逆转录为CDNA,经RT-PCR半定量检测VEGF-A mRNA的表达水平.结果 成功构建含有VEGF-A的RNA干扰片段真核表达载体,经Western Blot筛选后分别得到RNA干扰效果最佳的片段.RT-PCR结果表明质粒转染人神经母细胞瘤后VEGF-A的mRNA的表达升高.结论 成功构建含有人VEGF-A的RNA干扰片段的真核表达载体,该重组质粒转染人神经母细胞瘤IGR-N-91细胞后VEGF-A的mRNA表达升高.     

术前化疗对小儿进展期神经母细胞瘤血管形成状态的影响及其临床意义

目的 探讨术前化疗对进展期（Ⅲ、Ⅳ期）小儿神经母细胞瘤血管形成状态的影响及其可能的作用机制和临床意义。方法 利用第Ⅷ因子相关抗原（Ｆ８－ＲＡ）抗体,应用免疫组化法检测小儿神经母细胞瘤中的微血管计数。结果 １５例进展期（Ⅲ、Ⅳ期）小儿神经母细胞瘤患儿中,术前化疗组９例,平均微血管数为２５．６３。非术前化疗组６例,平均微血管数为３９．００,明显高于术前化疗组（Ｐ〈０．０５）;术前化疗组患儿的平均生存时     

化疗对小儿神经母细胞瘤的VEGF表达的影响

目的研究化疗对小儿神经母细胞瘤的VEGF表达以及血管形成状态的影响。方法收集自1993年12月~2000年12月住院治疗的神经母细胞瘤患儿中保存完好的60例肿瘤组织的石蜡标本(包括手术切除和肿瘤活检),按术前有无化疗情况分为术前化疗组(34例)和未化疗组(26例),进行VEGF和CD31免疫组化分析。结果60例标本中VEGF阳性表达36例,其中术前未化疗组VEGF表达阳性率为76.9%(20/26);术前化疗组VEGF表达阳性率为47.1%(16/34)。①两组VEGF表达阳性率比较χ2=5.84,P<0.05。②有远处转移组(Ⅳ期)与无远处转移组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期)VEGF表达阳性率比较2χ=4.051,P<0.05。③微血管计数未化疗组为25.73±5.85,术前化疗组为15.64±5.17,t=7.08,P<0.001。结论神经母细胞瘤转移与肿瘤组织中VEGF过度表达有密切关系。术前化疗能抑制神经母细胞瘤组织中的VEGF表达,从而抑制肿瘤新生血管形成,防止肿瘤转移和复发。     

神经母细胞瘤中hTR、hTERT基因的表达

目的探讨人端粒酶RNA（hTR）、人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因在神经母细胞瘤自然逆转成熟及恶性增殖中的表达及其意义。方法应用原位杂交方法检测34例神经母细胞瘤、5例神经节神经母细胞瘤、8例神经节细胞瘤、16例胎儿肾上腺髓质、20例新生儿肾上腺髓质中hTR、hTERT基因的表达。结果hTR、hTERT基因在病理分型F型中的阳性表达均为46．15％（6／13）；uF型中阳性表达分别是85．71％（18／21）、90．48％（19／21）；两组比较差异有显著性意义（X^2=6．05，P〈0．05；X^2=8．10，P〈0．05）。在神经节神经母细胞瘤中hTR、hTERT基因的阳性表达均为20％。神经节细胞瘤中hTR、hTERT基因的阳性表达分别是25％、12．5％；二组与神经母细胞瘤比较差异有显著性意义（X^2=11．70，P〈0．05；X^2=10．81，P〈0．05）。在胎儿及新生儿肾上腺髓质中hTR、hTERT基因为弱阳性及阴性。结论在神经母细胞自然逆转成熟及恶性增殖是时hTR、hTERT起了重要的作用，当hTR、hTERT基因表达减弱，神经母细胞具有自然逆转成熟的趋势，当hTR、hTERT基因表达阳性，提示神经母细胞增殖力增强，因此hTR、hTERT基因的表达可作临床判断预后的指标。     

三氧化二砷对维甲酸耐药的神经母细胞瘤细胞SK-N-AS中HoxC9表达的影响

目的 本研究通过检测三氧化二砷(ATO)处理前后维甲酸(RA)耐药的SK-N-AS细胞中HoxC9以及EZH2的表达,初步探寻ATO促进RA耐药的NB细胞分化的具体机制.方法 用CCK-8试剂盒测定ATO对NB细胞SK-N-AS增殖抑制率,倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,并测量神经突触总长度值.利用质谱技术和非标定量...     

术前多基因联合检测指导化疗对进展期神经母细胞瘤儿童手术切除率及预后的影响

目的 探索术前多基因联合对进展期神经母细胞瘤(NB)患儿手术切除率及预后的影响.方法 收集2013年1月至2015年l月本院收治的采取手术治疗的进展期(Ⅲ、Ⅳ期) NB 患儿 46例,均经病理确诊.根据INSS 分期及COG危险度分层,本组病例Ⅲ期 19 例 (41.3%) ,Ⅳ期 27 例 (58.7%) ,中危15例(32.6%),高危31例(67.4%).46例患儿均行术前新辅助化疗及手术治疗.依据术前是否行多基因联合检测分为多基因联合检测化疗组和常规化疗组.多基因联合检测组患儿,根据药敏结果参考选择化疗方案,如常规方案中有一种药物敏感,则可选择该方案进行化疗.如常规方案中无敏感药物或化疗两个疗程后评估提示化疗效果欠佳,则根据药敏结果选用包含至少一个敏感药物的化疗方案.结果 3例ERCC阴性中危患者最初使用方案无铂类药物,肿瘤缩小不满意,后根据药敏检测更换包含铂类药物方案后肿瘤缩小明显,均在更换方案后2~3个疗程行手术,其余4例中危患儿均提示TOPOIIα高表达,选用了OPEC方案及卡铂+足叶乙甙/阿霉素轮换.高危患儿中5例TOPOI阴性患儿最初均使用CT方案,第二或三个疗程时根据药敏结果换用OPEC方案.其余患儿检测结果提示对铂类、足叶乙甙或蒽环类其中之一敏感,使用OPEC方案化疗.多基因联合检测组术前化疗3~6个疗程,平均 4.6个疗程,常规化疗组术前化疗4~8个疗程,平均 5.6个疗程.多基因联合检测组患儿肿瘤瘤体缩减率明显高于常规化疗组.两组患儿手术切除率差异无统计学意义.本资料所有患儿均获得随访,随访时间14~30个月,平均21个月,总体生存率为60.9%,中危组患儿2年生存率为80%,高危组期患儿2年生存率51.6%.多基因联合检测化疗组2年生存率为中危85.7%,高危53.8%,总生存率为65%,常规化疗组2年生存率为中危75%,高危50%,总生存率为57.7%.两组相比差异无统计学意义.结论 进展期神经母细胞瘤患儿联合检测ERCC1、TOPOI 和TOPOIIα表达指导个体化化疗,有效率有所提高,化疗不良反应减少,改善了患儿生活质量.     

Expression and clinical significance of stem cell marker CD133 in human neuroblastoma

Background  Recent evidences indicate that CD133, a kind of transmembrane protein, can be used as a marker to isolate stem cells from tumors originating from neural crest. This study was undertaken to explore the expression and clinical significance of stem cell marker CD133 in neuroblastoma (NB). Methods  Immunohistochemical staining was used to detect the expression of CD133 in 32 patients with NB and 8 patients with ganglioneuroblastoma (GNB). The relationships were analyzed among CD133 expression, international neuroblastoma staging system (INSS) stages, pathological classification, and postoperative survival time of NB patients. Results  The expression rates of CD133 in NB and GNB were 46.9% (15/32) and 37.5% (3/8) respectively, mainly in cytoplasm of neuroblastoma cells. The expression rates of stage 1–2, stage 3–4 and stage 4S were 30.7%, 57.9% and 37.5%, respectively. The differences in various stages were significant (P<0.05). The positive rate of CD133 in patients with unfavorable histology (52.4%) was significantly higher than that in patients with favorable histology (36.8%) (P=0.007). The survival time of CD133 negative patients was significantly longer than that of CD133 positive patients (P=0.026). Conclusions  CD133 which might be correlated with the development and progression of NB can serve as one of the important indicators for prognosis of NB.     

KAI1/CD82在神经母细胞瘤转移中的表达及意义

目的探讨KAⅠ1／C硝2在神经母细胞瘤转移中的表达及意义。方法选取40例各期神经母细胞瘤、9例节细胞神经瘤蜡块标本，应用免疫组织化学方法检测KAⅠ1基因的蛋白产物CD82的表达水平。结果无转移组中的CD82的阳性率为71．43％．有淋巴结或远处转移的其阳性率为34．74％．节细胞神经瘤中CD82的表达阳性率为22．22％，有或无转移的神经母细胞瘤组之间及无转移的神经母细胞瘤和节细胞神经瘤组之间的差异有统计学意义．神经母细胞瘤中KAⅠ1／CD82的表达水平与是否转移有相关性，与是否进行过化疗无关，与转移为其他器官或骨髓也无相关性。结论KAⅠ1／CD82的表达水平与神经母细胞瘤的转移潜能呈负相关。     

儿童急性白血病mdrl,bcl-x_L/bcl-XS和bcl-2/bax基因表达水平改变及其临床意义

目的　 通过检测儿童急性白血病多药耐药基因及细胞凋亡调控基因表达水平的改变 ,分析不同类型白血病的主要耐药机制。 方法 　采用RT PCR检测 75例儿童急性白血病骨髓细胞mdr1、Bcl 2、Bax、bcl xL 和Bcl xs基因的mRNA表达水平 ,同时分析化疗效果。结果 　ANLL耐药组mdrl基因和bcl 2基因表达率明显升高。其中7/14例mdrl阳性表达的未缓解患者同时具有Bcl 2基因的表达 ;ALL耐药组中Bcl 2 /Bax和bcl xL/bcl XS的比值升高明显高于药物敏感组。结论 　儿童ALL和ANLL存在不同的耐药机制。     

免疫组织化学染色法检测神经母细胞瘤骨髓转移的临床意义

目的研究免疫组织化学染色检测神经母细胞瘤骨髓转移的临床意义。方法建立免疫组化检测体系,选择Ⅳ期神经母细胞瘤患儿28例,诊断及诱导结束后分别采集骨髓进行免疫组织化学检测,临床随访生存情况。结果免疫组化检测方法的灵敏度为10-5,诊断时19例患儿骨髓有形态学转移,免疫组化检测所有病例骨髓神经母细胞瘤细胞阳性;诱导治疗后13例骨髓肿瘤细胞在免疫组化水平消失,11例未消失,4例病情进展死亡。随访(3.5±0.7)年,完全缓解组中位无病生存时间(4.1±0.7)年,部分缓解组中位无复发时间(2.8±0.5)年,两组比较差异显著(t=3.9,P=0.001);部分缓解组100%复发,完全缓解组46.1%复发,两组复发率差异有显著性(P=0.006)。两组4年无病生存率29.2%。结论免疫组织化学法检测骨髓神经母细胞瘤较形态学灵敏,具有预后判断作用;诱导治疗清除骨髓转移之神经母细胞瘤者较不清除者预后好。     

MiR-483-3P下调RIOK3蛋白表达促进神经母细胞瘤的增殖和迁移

目的探讨microRNA-483-3P(miR-483-3P)对神经母细胞瘤细胞的增殖、侵袭及迁移能力的影响,预测并验证miR-483-3P的靶基因及其对靶基因的影响。方法 miRNA微阵列芯片结果发现miR-483-3P在神经母细胞瘤中表达上调,差异倍数显著,并居于差异表达miRNA的首位。利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的miR-483-3P inhibitor、miR-483-3P inhibitor的阴性对照序列分别瞬时转染人人神经母细胞瘤SH-SY-5Y细胞株中,RT-qPCR技术检测各组中miR-483-3P的表达水平,CCK-8法检测各组癌细胞的增殖情况,Transwell小室实验检测各组癌细胞的体外侵袭和迁移能力。利用生物信息学软件预测miR-483-3P的靶基因并用荧光素酶报告基因检测实验、Western blot实验加以验证。结果与癌旁正常组织相比,miR-483-3P在神经母细胞瘤中高表达(P0.01);与阴性对照组相比,癌细胞转染miR-483-3P inhibitor后,miR-483-3P表达显著下调(P0.01),细胞的增殖情况和体外迁移能力均降低(P0.05)。生物信息学软件预测出RIOK3是miR-483-3P的靶基因之一,当细胞转染了miR-483-3P inhibitor后荧光酶活性升高(P0.01)。与阴性对照组相比,当细胞转染了miR-483-3P inhibitor后在蛋白质水平RIOK3表达升高(P0.01)。结论.RIOK3是miR-483-3P的靶基因之一,miR-483-3P能下调RIOK3的表达并显著促进神经母细胞瘤细胞的增殖和体外迁移。     

miRNA338调节人神经母细胞瘤细胞中CXCR4表达的研究

目的 微小RNA( microRNA,miRNA)是一类非编码小分子RNA组成的家族,能够通过降解靶mRNA或抑制其翻译过程参与调节基因表达.本研究旨在探索上调miR338水平后人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中CXCR4表达变化,进而了解miR338调节神经母细胞瘤侵袭与转移的分子机制.方法 将人工合成的成熟miR338前体(pre-mir-338)转染入SH-SY5Y细胞,而后利用实时荧光定量RT-PCR检测转染前后各组细胞miR338的表达水平.应用半定量RT-PCR及Western蛋白印迹法分别从mRNA水平、蛋白水平检测各实验组CXCR4的表达变化.结果 实时荧光定量PCR法检测对照组及各实验组细胞miR338基因含量,发现转染了pre-mir-338的10 nM,30 nM,50 nM,100 nM组miR338含量分别为空白对照组的1.32倍,1.62倍,1.90倍及1.86倍,差异具有统计学意义(P＜0.05),成功将pre-mir-338转染入细胞达到miR338过表达的目的;转染组(10 nM组、30 nM组、50nM组)CXCR4基因mRNA相对光密度值分别为0.75±0.06,0.58±0.08,0.24±0).05,依次降低,均明显低于空白对照组1.11±0.08,空载对照组1.04±0.08(P＜0.05).转染组CX-CR4蛋白0).24±0.06较未转染组0.56±0.08降低(P＜0.05).结论 miR338能够通过下调神经母细胞瘤细胞CXCR4 miRNA及蛋白的表达参与调节肿瘤的侵袭与转移,人工合成的pre-mir-338有望通过替代方式为神经母细胞瘤的治疗提供新的途径.     

双酚A对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖的影响

目的探讨双酚A（BPA）对人神经母细胞瘤SK—N—SH细胞增殖的影响及其可能机制。方法SK—N—SH细胞经培养扩增后分为5组：组1，无干预（对照组）；组2，加17p雌二醇（E2）；组3，加BPA；组4，同时加E2和ICI 182，780；组5，同时加BPA和ICI182，780。分别在0h、24h、48h和72h进行光吸收度值（AV）检测，在72h进行流式细胞仪DNA增殖指数（PI）检测。结果组3的AV在24h、48h、72h均明显增加，分别是组1的1．53、1．25、1．20倍，72h时的PI是组1的1．42倍。组2的结果与组3相似。组4、5中细胞增殖受到ICI182，780的明显抑制。结论BPA能促进人神经母细胞瘤SK—N-SH细胞的体外增殖，该促增殖作用可能是通过雌激素受体依赖途径实现的。