印记基因H19和SNRPN CpG位点甲基化状态与精液参数的关联研究

目的:分析印记基因H19和SNRPN印记控制区的各Cp G位点甲基化状态与男性精液参数的关联。方法:选取2014年4至9月于空军总医院男科就诊的符合纳入排除标准的205例男性为研究对象,采用焦磷酸测序法定量分析H19和SNRPN基因的各Cp G位点的甲基化状态,采用典型相关分析印记基因H19和SNRPN的各Cp G位点的甲基化水平与精液参数两组变量的整体相关性。结果:H19基因的Cp G2和Cp G3甲基化水平与精子密度和精子活动力的相关性具统计学意义;SNRPN基因的Cp G5、Cp G6、Cp G7甲基化水平与精子正常形态率的相关性具统计学意义。结论:印记基因H19和SNRPN印记控制区特定Cp G位点甲基化状态与精液参数有关联。     

不同类型精子缺陷与印记基因H19甲基化水平关联性研究

目的:探讨不同类型精子缺陷与印记基因H19印记控制区域甲基化水平的相关性。方法:以2014年4月至2014年9月间入院诊治的男性不育患者为研究对象,排除患有精索静脉曲张、隐睾症、核型异常和Y染色体微缺失的病例,依据临床精液常规检查结果,分别筛选出特发性少精子症患者(浓度20×10~6/m L,其余指标均正常)、特发性弱精子症患者(前向运动精子百分率50%,其余指标均正常)、特发性畸形精子症患者(正常精子形态比率15%,其余指标均正常)各25例;25例正常精液样本作为对照组。采用焦磷酸测序法定量分析各组精子DNA中H19基因印记控制区域的甲基化水平。结果:少精子症组[(75.04±15.35)%]和弱精子症组[(79.48±11.64)%]印记基因H19甲基化水平显著低于正常对照组[(89.10±11.23)%],差异均有统计学意义(P=0.006,P=0.024);畸形精子症组[(87.82±12.10)%]与正常对照组H19基因甲基化水平的差异无统计学意义(P=0.758)。结论:印记基因H19印记控制区域的DNA甲基化程度的降低与少精子症和弱精子症有关联,可能与畸形精子症无关。     

两种实时定量PCR方法检测系统性红斑狼疮患者DNA甲基化状态的比较研究

目的:应用两种不同方法检测系统性红斑狼疮(SLE)患者CD4~+T细胞p16基因甲基化状态,比较两种检测方法的差异。方法:采用以Taqman探针为基础的MSP法(方法1)和以SYBR Green Ⅰ为基础的MSP法(方法2)分别检测40例SLE患者和20例正常人CD4~+T细胞中p16基因启动子区甲基化状态。结果:Taqman探针方法的结果为:SLE患者CD4~+T细胞p16基因甲基化阳性率(35.7%,10/28)高于对照组(10%,2/20),两者比较差异有统计学意义(x~2=4.11,P0.05)。SYBR Green Ⅰ方法的结果为:患者组和对照组的CD4~+T细胞的p16基因均呈高甲基化状态,应用t检验分析发现P0.05,二者无统计学差异。结论:Taqman探针法消除了引物二聚体和非特异性扩增对试验结果的影响,提高了结果的特异性和准确性,被证明是进行DNA甲基化状态检测的可靠方法。     

扬州地方株HPV16 E7基因的克隆及序列分析

目的：了解扬州地区HPV16 E7基因结构特点。方法：从感染HPV16的宫颈癌组织中提取DNA，用PCR技术获得HPV16 E7基因，以pGEM—Teasy为克隆载体构建重组质粒pGEM—T—E7，进行限制性核酸内切酶及核苷酸序列分析。结果：扬州地方株HPV16 E7基因与已报道的标准株(德国)仅在核苷酸序列上有一处突变，即199位的T→C，密码子由T1G变为C3G，而氨基酸序列未发生改变；与其他国家报道的HPV16 E7核苷酸序列也存在一定差异，但同源性均在98．7％以上。结论：扬州地方株HPV16 E7基因的成功克隆，将丰富我国HPV16感染的流行病学资料，为HPV疫苗研制奠定基础。     

精子DNA碎片指数与精液参数的相关性研究

目的：探讨男性精子DNA碎片与精液常规参数及精子顶体酶活性之间的关系。方法：收集生殖中心门诊553例男性患者精液标本,采用改良精子染色质扩散实验（SCD）检测精子DNA碎片指数（DFI）,按精子DFI结果分为DFI〈15%（I组）、15%≤DFI〈25%（II组）、DFI≥25%（III组）,同时检测精子密度、总数、（a＋b）级精子百分率、畸形率及顶体酶活性,对DFI与精液各项参数的相关性进行分析。结果：精子密度及精子总数与DFI无显著相关性;前向运动精子百分率随DFI升高逐渐降低,III组与I组间存在显著性差异;精子正常形态率随DFI的增加有下降的趋势,但是差异不显著;精子顶体酶活性随DFI升高而降低,组间均有显著性差异。结论：精子DNA碎片指数与前向精子百分率及精子顶体酶活性呈负相关。因此DFI可作为评估精子功能的一个较好的参考指标。     

环磷酰胺对小鼠精子DNA的影响及姜黄素干预作用的研究

目的：探讨姜黄素对抗环磷酰胺致小鼠精子DNA损伤的保护作用。方法：成年昆明小鼠随机分成4组：正常组,模型组,姜黄素低、高治疗组。模型组和姜黄素低、高组小鼠按照40mg／kg,腹腔注射环磷酰胺（cp）,连续5d,同时姜黄素低、高组小鼠每天给予姜黄素混悬液100mg／kg,200mg／kg灌胃;正常组及模型组小鼠予等量0．5％羧甲基纤维素钠灌胃,共28d。观察小鼠精子低渗膨胀率,小鼠睾丸组织匀浆后测定超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）、丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）含量及小鼠精子DNA的完整性。结果：与模型组相比,姜黄素组睾丸组织SOD与GSH—Px含量等均明显升高（P〈0．05、P〈0．01）,MDA、ROS含量明显降低（P〈0．05、P〈0．01）,吖啶橙荧光染色法（AOT）显示：与模型组相比,姜黄素组小鼠精子DNA的完整性明显升高,有明显的统计学意义（P〈0．01）。结论：环磷酰胺可破坏小鼠精子DNA的完整性,导致精子核成熟率下降;姜黄素可以改善环磷酰胺对小鼠精子DNA的氧化作用,提高精子DNA的完整性。     

不育症患者精子DNA损伤的临床分析与治疗研究

目的了解不育症患者的精子DNA损伤情况,并探讨不育症患者精子DNA损伤的治疗方法。方法选取2017年1月至2018年8月广东省妇幼保健院诊治的600例男性不育症患者作为研究对象。采集其精液标本进行精液分析,根据其精液分析结果,将患者分为精液正常组、弱精子症组、少精子症组,再采用精子染色质扩散方法对三组患者的精子DNA完整性进行检测,比较三组患者的精子DNA损伤率、精子DNA碎片化指数(DFI)。按照精子DNA完整性检测结果,将600例不育症患者分为精子DNA损伤组、精子DNA完整组,比较其精子密度、精子活动力、精子存活率、精子形态正常率。采用Pearson相关分析法,研究不育症患者精子DNA损伤与精液分析指标间的相关性。给予精子DNA损伤组患者左卡尼汀口服液治疗,比较治疗前后患者的DFI指数和精液分析指标。结果①弱精子症组、少精子症组、精液正常组的精子DNA损伤率、DFI指数比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),从高至低依次为弱精子症组、少精子症组、精液正常组。②精子DNA损伤组的精子密度、精子活动力、精子存活率、精子形态正常率均低于精子DNA完整组,差异具有统计学意义(P<0.05)。③经相关性分析,不育症患者的精子DNA损伤与精子密度、精子活动力、精子存活率、精子形态正常率等精液分析指标密切相关,呈负相关。④经左卡尼汀治疗后,精子DNA损伤患者的精子密度、精子活动力、精子存活率、精子形态正常率均较治疗前增高,差异具有统计学意义(P<0.05),其DFI指数较治疗前降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论不育症患者的精子DNA碎片化严重,其精子DNA损伤主要与其精液质量有关,临床上可采用左卡尼汀对精子DNA损伤予以治疗,可有效改善其精液质量,减轻其精子DNA碎片化。     

不育症患者性激素水平与精子DNA完整性相关性研究

目的:研究男性不育症患者性激素中卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(TTE)水平与精子DNA完整性之间的相关性。方法:选取该院收治男性不育症患者75例作为研究对象,测定血清性激素中FSH,LH,TTE的含量,进行分组分析,并行精子DNA碎片率检测(DFI),分析三种性激素水平与精子DFI之间相关性。结果:对男性不育症患者血清中FSH、LH、TTE三种性激素进行Spearman相关分析可知,患者血清FSH水平与LH水平呈正相关(r=0.510,P0.001);多元线性回归分析显示,FSH、LH及TTE与DFI呈负相关(R~2=0.899,F=132.898,P0.001)。结论:血清性激素FSH、LH与TTE水平较低可能导致精子DNA损伤程度增加,对男性不育症的诊治有一定指导意义。     

不育患者年龄与精液常规参数及精子DNA完整性的关系研究

目的 探讨年龄对不育患者精液常规参数及精子DNA完整性的影响.方法 选取2015年9月至2019年7月江西省萍乡市妇幼保健院生殖健康科诊治的852例男性不育患者作为研究对象.对其精液检验数据进行回顾性分析.精液质量正常患者纳入正常组(n=339),精液质量异常患者纳入异常组(n=513).比较所有患者、正常组、异常组中...     

男性不育患者年龄与精子DNA碎片和精液常规参数的相关性分析

目的:分析男性不育患者年龄与精子DNA碎片率和精液常规参数的相关性.方法:按照年龄将85例男性不育患者分为三组.20～29岁组(n=31),30～ 35岁组(n=28),36 ～ 50组(n=26),采用染色质扩散(SCD)实验检测精子DNA碎片率,按照世界卫生组织标准检测精液常规各参数.采用SPSS 13.0软件包进行统计处理,分析精子DNA碎片率和精子参数在各组的差异及年龄与精子DNA碎片率和精液参数的相关性.结果:年龄与精子活力存在负相关关系(r=-2.31,P＜0.05),但与精子密度,精子形态和精子DNA碎片无相关性.精子密度与精子形态存在正相关关系(r=0.528,P＜0.01),与精子活力存在正相关关系,(r=0.31,P＜0.01).精子DNA碎片率与精液常规各参数无相关性.结论:随着男性年龄的增长,精子的活力可能降低,并影响男性的生育力,精子DFI与精液常规各参数无相关性.故精子DNA碎片检测可作为精液常规分析的补充,进一步反映男性的生育能力.     

不同卵子质量下精子DNA碎片对体外受精临床结局的影响

目的 探讨不同卵子质量下精子DNA碎片对体外受精(IVF)临床结局的影响.方法 回顾性分析2018年9月至2019年12月在金华市人民医院生殖医学中心接受IVF治疗的896组不孕不育夫妇.促排卵方案根据女方卵巢储备功能制定,正常行促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)长方案(LP,593例),下降行GnRH-a短方案...     

A high prevalence of parvovirus B19 DNA in patients with psoriasis

Psoriasis is a common inflammatory skin disease. Infectious models are considered to be of pathophysiological importance in psoriasis. The immunological profile of stable psoriasis plaques suggests that viral antigens may be important. Human parvovirus B19 (PVB19) is a single-stranded DNA virus that causes various clinical symptoms. Several case reports have suggested associations between PVB19 infection and various chronic autoimmune and dermatologic diseases. There has so far been no information regarding the role of PVB19 in psoriasis, except psoriatic arthritis. In this report, to investigate the role of PVB19 in psoriasis, we analyzed PVB19 DNA of peripheral blood from psoriatic patients (n = 47) in comparison with blood donors (n = 20). We also determined the presence of anti-PVB19 IgG and IgM antibodies by using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). We found that the presence of PVB19 DNA in patients with psoriasis (38%) was significantly higher than in controls (0%, P < 0.01). Anti-PVB19 IgG antibodies were detected in 79% of the cases while only 6% had anti-PVB19 IgM antibodies. PVB19 DNA presence was associated with seropositivity for anti-PVB19 IgG (P < 0.05) but not with IgM antibodies, indicating subclinical activation of latent infection. No correlation was found between the presence of PVB19 DNA and a patient’s age, sex, type of psoriasis, or psoriasis area and severity index. The data demonstrated a statistically significant association between psoriasis and PVB19. Therefore, we suggest that PVB19 infection may be of pathophysiological importance in psoriasis.     

Reduction in DNA methyltransferases and alteration of DNA methylation pattern associate with mouse skin ageing

Understanding molecular mechanisms of skin ageing is critical for developing effective anti‐ageing strategies. Recently, it has been suggested that epigenetics maybe be involved in tissue ageing and age‐related diseases; however, the evidence regarding skin ageing has been very limited. We ran a pilot study in mouse skin to test whether DNA methyltransferases (Dnmts), DNA demethylases such as ten‐eleven translocation enzymes (Tets) and DNA methylation of gene promoters change with age by quantitative RT‐PCR and methylated DNA immunoprecipitation (MeDIP)‐chip. We discovered that the expression of Dnmt3a, Dnmt3b and Tet2 declines significantly with skin ageing. The genome‐wide DNA methylation analysis indicates that both hypermethylation and hypomethylation in promoters of genes are taken place. Functional category of those genes suggests that inhibition of cell proliferation and activation of immune response are important adaptations likely induced by skin ageing. These findings shed new light on epigenetic regulation of skin ageing.