蛋白质组学在肿瘤标志物研究中的进展

随着人类基因组计划的完成，功能基因组学研究日益深入，蛋白质组学就成为人们研究的热点。广义上讲，蛋白质组（proteome）是指“一个细胞或一个组织基因组在一定条件下所表达的全部蛋白质”。蛋白质组学（proteomics）是指以蛋白质组为研究对象，从整体的角度，分析细胞内动态变化的蛋白质组成与活动规律。     

肿瘤蛋白质组学研究技术

 后基因组时代,生命科学的主要任务是认识基因组的功能.蛋白质是基因功能表达的执行体,要了解基因的全部信息,就必须对基因编码的蛋白质作深入的研究.由此,蛋白质组这一全新概念应运而生.蛋白质组（proteome）指的是一个基因组所表达的蛋白质.而蛋白质组学是指应用各种技术手段来研究在特定时间、环境下某个细胞/组织基因组表达的全部蛋白质.蛋白质组学提供了关于蛋白质的丰度、位、化学修饰以及蛋白质间相互作用等许多信息.其目的在于发现新的早期检测标记、治疗性分子靶标及对临床疗效和毒理性做出评价.本文就蛋白质组学研究技术及在肿瘤蛋白质组中的应用略做介绍.     

蛋白质组学技术及其在肿瘤转移相关蛋白筛选中的应用

转移是恶性肿瘤的重要生物学行为，肿瘤转移过程的发生是多步骤、多因素、多基因共同参与的复杂病理过程。包括转移相关基因的突变、激活，肿瘤细胞的黏附、迁移、增殖，细胞外基质降解，组织免疫性及肿瘤血管增生因子等的变化并通过细胞基因表达调控机制的调节发生作用，最终由功能性蛋白表达来完成。近年来，蛋白质组学技术的应用和飞速发展，为生命活动的执行者一蛋白质的研究带来了广阔的前景。蛋白质组（proteome）是指细胞或组织在特定时间和空间上表达的基因组编码的全部蛋白质，蛋白质组学（proteomics）是研究细胞内全部蛋白质的组成和动态变化的一门新兴学科。     

蛋白质组学在乳腺癌中的研究与应用

蛋白质组(proteome)最早是由澳大利亚学者Wilkins及其导师Williams于1994年提出的,定义为单个细胞、器官或组织类型所表达的全部蛋白质。由于同一基因组在不同的细胞和不同的组织中的表达情况各不相同;即使是同一细胞,在不同的发育阶段、不同的生理条件甚至不同的环境影响下,其     

蛋白质组学在肿瘤标志物研究中的进展

随着人类基因组计划的完成,功能基因组学研究日益深入,蛋白质组学就成为人们研究的热点。广义上讲,蛋白质组(proteome)是指“一个细胞或一个组织基因组在一定条件下所表达的全部蛋白质”。蛋白质组学(proteomics)是指以蛋白质组为研究对象,从整体的角度,分析细胞内动态变化的蛋白质组成与活动规律[1]。肿瘤发生过程中,细胞恶变前后的表达蛋白质组发生了变化。应用蛋白质组学研究技术比较肿瘤发生过程中蛋白质的变化,可以发现肿瘤相关的特异蛋白质,不仅为肿瘤诊断提供分子标志,也可能为肿瘤的治疗和药物开发提供靶标。本文就比较蛋白质组学技…     

SELDI-TOF-MS技术早期诊断结直肠癌的应用进展

<正>蛋白质是遗传信息表现的功能形式。1883年Mulder用"protein"一词来表示这类生物大分子。蛋白质组(proteome)指由一个基因组表达的全部蛋白质,1995年Wilkins提出,源于蛋白质(protein)和基因组(genome)两单词的组合。蛋白质组学(proteomics)是研究基因组编码的全部蛋白质的结构和功能的学科。蛋白质组学研究技术将是阐明癌症发生的本质及提供有效防治措施的最有力手段~[1]。     

大鼠闭合性脑损伤后不同脑区蛋白质表达的差异比较

目的研究大鼠脑损伤后大脑皮质、海马和脑干中蛋白质表达的特点及差异。方法56只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、手术对照组及损伤组,后者于损伤后4 h、8 h、12 h、24 h和48 h不同时间取材观察。复制Marmarou’s落体打击脑损伤模型,应用弱阳离子交换芯片（WCX-2）和固定金属亲和吸附芯片（IMAC-Cu）结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术分析大鼠闭合性脑损伤后皮质、海马和脑干中蛋白质表达谱的变化。结果（1）在WCX-2芯片上,大脑皮质中共捕获404个蛋白质峰;海马中共捕获364个蛋白质峰;脑干中共捕获495个蛋白质峰。在IMAC-Cu芯片上,皮质中共捕获203个蛋白质峰;海马中共捕获345个蛋白质峰;脑干中共捕获107个蛋白质峰。（2）与手术对照组相比,损伤组大脑皮质在两种芯片上共有38个蛋白质峰的相对强度差异有统计学意义（P〈0.05）;海马在两种芯片上共有49个蛋白质峰的相对强度差异有统计学意义（P〈0.05）;脑干在两种芯片上共有27个蛋白质峰的相对强度有显著性差异（P〈0.05）。结论（1）脑损伤可引起不同脑区中蛋白质表达谱发生变化。（2）不同脑区蛋白质表达谱存在差异。     

蛋白质组学及其在肿瘤研究中的应用

蛋白质组（PROTEOME）是“PRO TEins”和“genOME”的组合,意思是“Proteins expressed by a genome”,即“由一个基因组表达的全部蛋白质”,这是蛋白质组的广义概念。从狭义上讲,蛋白质组是指不同时期细胞内蛋白质的变化,如异常细胞和正常细胞之间,不用药细胞和用药细胞之间的蛋白质水平上的差别,这是蛋白质组在应用上最具前景的方面。蛋白质组学（protemics）是以蛋白质组为研究对象,分析细胞内动态变化蛋白质的组成成份、表达水平与修饰状态,了解蛋白质之间的相互作用与联系,在整体水平上研究蛋白质的组成与调控的活动规律。用蛋白质组学来研究肿瘤,有利于筛选肿瘤标志蛋白,确定肿瘤治疗靶标,寻找新的肿瘤特异抗原,解决早期诊断难题。     

深低温冻存胃癌样本的核酸与蛋白质质量控制研究*

目的:探索上海市瑞金医院低温冻存0~ 10年胃癌样本的核酸与蛋白质质量。方法:随机抽取2003年至2014年间库存手术切除胃癌标本24对（共48份）。 1% 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 与RNA 纯度及完整性,同时增加了RIN 值评估法检测RNA 完整性;BCA 法检测样本蛋白质浓度,考马斯亮蓝法测定蛋白质分子完整性。结果:将组织标本按冻存年限分成四组（< 2 年、3～5 年、6～8 年和> 9 年）,各组之间DNA 完整性差异无统计学意义（P > 0.05）,正常胃组织的DNA 降解程度比胃癌组织高（P = 0.023）;四组之间的RIN 值检测显示,冻存6 年以上组的RIN 值有明显下降（P = 0.018）;各组间的蛋白质浓度无显著性差异,考马斯亮蓝法测定蛋白质分子条带完整性存在显著性差异。冻存> 9 年组仅出现少量低分子量条带（平均 36.5 kD）,冻存 6～8 年组尚有中等分子量（平均 65.63kD）条带,冻存3～5 年组有高分子量（平均127.5 kD）条带,冻存短于2 年组仍可见大分子量（平均160 kD）条带。结论:长期低温冻存对DNA 影响最小,超过5 年组RNA 和大分子量蛋白质降解较多,但中小分子量蛋白质保存完好。      

SELDI技术预测恶性肿瘤患者化疗后血糖变化的临床研究

目的应用弱阳离子芯片结合表面增强飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术筛选与恶性肿瘤化疗后血糖变化情况、相关的血清蛋白质组指纹并建立预测模型。方法应用SELDI—TOF—MS、CM10蛋白质芯片技术检测182例恶性肿瘤患者化疗前血清样本的蛋白质谱,经过2年随访按化疗后的血糖情况分为血糖正常组（136例）、糖耐量异常组（27例）和糖尿病组（19例）,利用Biomarker或Wizard软件回顾性地分析比较各组间化疗前的血清蛋白质指纹图谱,Biomarker Pattern软件建立预测模型。结果M／Z为5298和9608的两个蛋白质组成的诊断模型可将患者在化疗前准确分为糖尿病组与糖耐量异常组,灵敏度和特异度分别为81．481％（22／27）和100．00％（17／17）,准确度为88．64％（39／44）;M／Z为10324、2761和4084的3个蛋白质组成的诊断模型可将糖尿病组与血糖正常组准确分组,灵敏度和特异度分别为62．35％（53／85）和88．24％（15／17）,准确度为66．67％（68／102）;M／Z为5895、6010、6099、3930、5430和2495的6个蛋白质组成的诊断模型可将糖耐量异常组与血糖正常组准确分组,灵敏度和特异度分别为77．65％（66／85）和96．30％（26／27）,准确度为82．14％（92／112）。结论SELDI—TOF—MS技术筛选出恶性肿瘤化疗后3组血糖情况的化疗前的蛋白质指纹,建立血糖正常组、糖耐量异常组和糖尿病组的诊断模型,用于肿瘤患者化疗后血糖变化的早期预测。     

表面增强激光解吸技术预测胃癌术后转移复发的临床研究

 目的　应用表面增强激光解吸（SELDI）技术筛选胃癌术后转移相关的血清蛋白质组指纹并建立预测模型。方法　应用CM10弱阳离子芯片结合表面增强飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术检测60例胃癌根治术后患者和26名健康对照血清样本的蛋白质谱，经过2年随访分为转移组（22例）和无转移组（38例），利用Biomarker Wizard软件比较各组间的血清蛋白质指纹图谱，Biomarker Pattern软件建立预测模型。结果　术后转移患者和健康对照相比有 74个蛋白质峰差异有统计学意义，术后无转移患者和健康对照相比有69个蛋白质峰差异有统计学意义，术后转移患者和无转移患者相比有14个蛋白质峰有显著性差异，质荷比（m／z）为4768和8841的两个蛋白质组成的诊断模型可将无转移胃癌患者与转移胃癌患者准确的分组，在学习模式下，灵敏度和特异度分别为95.46 %（21／22），86.84 %（33／38），准确度为90 %（54／60）。在测试模式下，灵敏度和特异度分别为81.82 %（18／22）和84.21 %（32／38），准确度为83.33 %（50／60）。结论　SELDI-TOF-MS技术可筛选出胃癌转移复发相关的蛋白质组指纹，在m／z为4768和8841的两个蛋白质峰建立的决策树模型可用于对术后胃癌患者转移、复发的早期预测。     

血浆外泌体中的CD48蛋白作为潜在的肝细胞癌诊断标志物的研究

背景与目的：约60%的肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者在晚期才被确诊,因而无法得到及时有效的治疗,目前临床上常用于HCC诊断的血清标志物的灵敏度均偏低。本研究通过分析血浆外泌体蛋白质组的表达差异,鉴定可能用于HCC诊断的候选外泌体蛋白质标志物。方法：首先,采用鸟枪法蛋白质组质谱分析方法,对发掘人群[包括4名健康对照者（healthy control,HC）组和4例HCC患者组]的血浆外泌体进行全蛋白质组的定性和定量分析,并筛选差异表达蛋白质。然后,采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）在独立的验证人群[包括56例HCC患者组、20例肝硬化（liver cirrhosis,LC）患者组和48名HC组]中进行验证实验,并评估候选蛋白质分子在HCC诊断中的潜在价值。结果：在发掘人群中,共鉴定到1 434种血浆外泌体蛋白质,其中的CD48蛋白在HCC患者中的表达水平显著高于HC组个体。进一步采用ELISA在独立验证人群中证实CD48蛋白在HCC患者中的表达水平显著高于LC和HC个体,受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线的曲线下面积（area under curve,AUC）为0.886。当联合检测血浆外泌体中的CD48蛋白和血浆中的甲胎蛋白（alpha-fetoprotein,AFP）时,AUC可提升至0.970。结论：血浆外泌体中的CD48蛋白可能作为HCC的候选诊断标志物,当其与AFP联合应用时可能进一步提高HCC的临床诊断能力。     

质谱检测T细胞非霍奇金淋巴瘤患者差异蛋白质的表达及其临床价值

 【摘要】　目的　研究T细胞非霍奇金淋巴瘤（T-NHL）患者血清差异蛋白质质谱的表达及其临床价值。方法　应用蛋白芯片表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术wcx-2芯片检测36例T-NHL患者和30例弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者血清蛋白质质谱,用生物化学法测定T-NHL患者血清乳酸脱氢酶（LDH）水平,用酶联免疫吸附法（ELISA）测定β2-微球蛋白（β2-MG）水平。分析T-NHL患者与DLBCL患者间质谱检测差异表达的蛋白质,同时分析差异蛋白质丰度与疾病分期、LDH及β2-MG水平的相关性。结果　与DLBCL患者比较,在T-NHL患者血清中共检测出9个差异蛋白质,其相对分子质量分别为1142.67、1451.43、1472.49、1512.03、3194.22、3267.41、3933.86、4593.12、9182.24。这些差异蛋白质的表达水平在T-NHL不同分期间差异无统计学意义（均P＞0.05）。4593.12和9182.24蛋白质质谱在T-NHL中高表达,在这两种蛋白质阳性组中,LDH表达水平分别为（290.82±29.95）U／L、（283.94±100.94）U／L,明显高于阴性组的（169.22±55.42）U／L、（169.50±59.25）U／L（t＝-3.199,P＝0.004;t＝-2.378,P＝0.026）,两组蛋白质的峰值与LDH的水平呈正相关（r＝0.265,r＝0.178,均P＜0.01）;在这两种蛋白质阳性组与阴性组间β2-MG表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。其他7种蛋白质在T-NHL患者血清中低表达,LDH、β2-MG水平在这些蛋白质质谱中差异无统计学意义（均P＞0.05）。结论　相对分子质量为4593.12和9182.24的蛋白质可能是鉴别T-NHL的特异血清学标志,它们可和LDH联合用于评估患者的肿瘤负荷,为临床治疗提供一定的指导。     

基于iTRAQ蛋白质组学技术对前列腺癌血清标志物的筛查

目的:应用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）蛋白质组学技术筛选前列腺癌血清中的差异表达蛋白质,提供新的候选标志物。方法:收集4组患者的外周血清标本:良性前列腺增生（BPH）（n=10）、高级别前列腺上皮内瘤变（HGPIN）（n=10）、局限性前列腺癌（localized PCa）（n=10）以及伴有远处转移的前列腺癌（metastatic PCa）（n=10）。每组10例患者的血清样本进行等体积混合后,应用iTRAQ技术联合液相串联质谱分析（LC-ESI-MS/MS）对蛋白质进行鉴定和相对定量。结果:在患者外周血清中共鉴定到蛋白质825个。相对于良性前列腺增生,在前列腺癌组中表达差异在1.2倍以上的蛋白质13个,其中9个表达上调,4个表达下调。结论:基于iTRAQ技术的蛋白质组学方法有助于鉴定出前列腺癌相关的差异蛋白质,为进一步探索前列腺癌肿瘤标志物提供了新的思路和线索。     

DIAPH3对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制

背景与目的：胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,但其发病机制尚不清楚。Diaphanous相关成蛋白3（diaphanous-related formin 3,DIAPH3）对多种肿瘤的发生、发展具有重要作用,但其在胃癌中的作用未见报道。探讨DIAPH3在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法：利用基因表达谱分析（gene expression profiling interactive analysis,GEPIA）数据库在线分析DIAPH3在胃癌组织中的表达;收集2020年1月—2020年12月年新乡医学院第四临床学院病理科保存的62例胃癌患者的石蜡包埋组织及配对癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色方法检测胃癌组织中DIAPH3的表达,并进行临床病理学相关性分析;采用蛋白质印迹法（Western blot）检测敲低或过表达DIAPH3后对DIAPH3、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）及N-钙黏蛋白（N-cadherin）蛋白质水平的变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测敲低或过表达DIAPH3后对DIAPH3转录水平表达的影响。利用细胞计数试剂盒-8（cellcounting kit-8,CCK-8）实验检测细胞增殖;利用划痕愈合实验检测细胞迁移;利用transwell小室实验检测细胞侵袭。结果：GEPIA数据库在线分析显示,与胃癌癌旁组织相比,DIAPH3 mRNA在胃癌组织中表达升高（P ＜ 0.05）;胃癌组织中DIAPH3的阳性表达率为70.97%（44/62）,高于胃癌癌旁组织16.13%（10/62）,差异有统计学意义（P ＜ 0.01）;与高中分化组比较,低分化组DIAPH3表达升高（P ＜ 0.05）;与无淋巴结转移组相比,有淋巴结转移组DIAPH3表达升高（P ＜ 0.05）。干扰DIAPH3组细胞增殖活力、细胞迁移率和细胞侵袭数均低于阴性对照组（P ＜ 0.05）;过表达DIAPH3组细胞增殖活力、细胞迁移率和细胞侵袭数均高于过表达对照组（P ＜ 0.05）。过表达DIAPH3后干扰cyclin D1,胃癌细胞株的增殖活力低于过表达DIAPH3组,高于过表达对照组（P ＜ 0.05）。过表达DIAPH3后干扰vimentin,胃癌细胞株的细胞迁移率和细胞侵袭数低于过表达DIAPH3组,高于过表达对照组（P ＜ 0.05）。与干扰对照组相比,干扰DIAPH3组E-cadherin蛋白质表达增加,DIAPH3、cyclin D1、vimentin和N-cadherin蛋白质表达降低（P ＜ 0.05）;与过表达对照组相比,过表达DIAPH3组中E-cadherin蛋白质表达降低,DIAPH3、cyclin D1、vimentin和N-cadherin蛋白质表达增加（P ＜ 0.05）。在敲低或过表达DIAPH3胃癌细胞株中,DIAPH3在mRNA水平均显著降低或升高（P ＜ 0.05）。结论：DIAPH3可促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用与上调cyclin D1、促进上皮-间充质转化有关。     

血清蛋白质谱模型对胃腺癌诊断的应用性研究

[目的]探讨用蛋白质芯片技术筛选胃腺癌患者血清蛋白质表达谱，寻找血清中的标志性蛋白。[方法]采用蛋白质生物芯片表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI）技术，运用SAX2（Strong Anionic Exchanger）蛋白质芯片检测胃腺癌患者，胃炎患者和健康者血清，建立诊断模型，然后进行单盲模型验证。[结果]发现5910Da,5084Da和8691Da的三个蛋白质荷比峰（M/Z）在胃腺癌和健康组比较中具有显著性差异。5910Da,6440Da的两个蛋白质荷比峰（M/Z）在胃腺癌和胃炎组中比较具有显著性差异。[结论]建立了胃腺癌的血清蛋白指纹质谱，为以后的胃癌蛋白质组学研究奠定了一定的基础，建立了以5910Da,5084Da,8691Da和6440Da四个蛋白质峰为模型区分胃腺癌与非胃腺癌的血清蛋白表达质谱诊断模型，为胃腺癌的临床诊断提供了一条崭新的途径和方法。     

三七总皂苷对顺铂肾损害大鼠肾组织差异表达蛋白质的影响

目的 探讨三七总皂苷（panax notoginsenosides,PNS）对顺铂肾损害大鼠肾组织差异表达蛋白质的影响。方法 实验大鼠随机分为正常对照组、顺铂模型组和PNS治疗组,对大鼠给药处理10 d后,检测大鼠血清尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）和尿N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶（NAG）的水平,并做肾脏病理检查;采用SELDI-TOF-MS技术筛选大鼠肾组织的差异表达蛋白质,并通过MALDI-TOF-MS/MS、Western blot实验予以鉴定。结果 顺铂模型组大鼠血清BUN、Scr和尿NAG的水平均显著高于正常对照组（P均〈0.05）。电镜下可见肾小管上皮细胞的线粒体明显损伤,说明顺铂肾损害大鼠模型制作成功。PNS干预可使大鼠血清BUN、Scr和尿NAG的水平显著低于顺铂模型组（P〈0.05）,肾小管上皮细胞的线粒体损害程度较顺铂模型组明显改善,提示PNS对其有保护作用。筛选出顺铂模型组与正常对照组肾组织差异表达的蛋白质20个,其中7个蛋白质在顺铂模型组中的表达下调2倍以上;顺铂模型组与PNS治疗组肾组织差异表达的蛋白质18个,其中11个蛋白质在PNS治疗组中的表达下调;有6个共同的差异表达蛋白质在顺铂模型组较正常对照组的表达上调或下调,在PNS治疗组可回调到接近正常对照组水平。差异表达蛋白质m/z 10815.42被鉴定为线粒体热休克蛋白,m/z 16021.67被鉴定为血红蛋白β1亚基、血红蛋白β2亚基。结论 顺铂肾损害可伴随多种蛋白质的表达变化,这些差异表达蛋白质可能与顺铂损害肾脏以及PNS的保护作用有关。通过对其分离和鉴定,进一步了解其性质,将有助于全面、系统地探讨顺铂肾损害以及PNS保护作用的机制。     

应用液体蛋白芯片飞行时间质谱系统研究胃癌的血清蛋白差异表达谱*

目的:应用液体蛋白芯片飞行时间质谱系统分析胃癌患者血清蛋白质表达谱,寻找具有潜在诊断意义的血清标志物。方法:收集血清样本62 例,其中正常对照组（N 组）16 例,胃癌组（T 组）28 例,验证组18 例。经WCX磁珠纯化、MALDI-TOF-MS 及ClinproTools生物信息学方法研究其血清蛋白表达谱,并筛选出差异蛋白质峰,运用数据挖掘算法,构建胃癌的血清蛋白诊断模型,并在验证组中验证其准确性。结果:1）通过对比胃癌组和正常组的血清蛋白质谱图,分析得到 25 个具有显著差异的蛋白质峰,其中差异最显著的前两位质核比分别为 5 248.49 m/z和5 754.25 m/z,其灵敏度分别为 84 .61 %和73 .07 %,特异性分别为 100%和93 .75 %,能很好地区分胃癌组和正常组。2）通过 ANN 的数据挖掘的方法,在具有显著差别的 25 个蛋白质峰中,筛选了组合能力最强的6 个蛋白峰（分别为4 268.05 m/z、5 636.53 m/z、5 248.49 m/z、2 933.15 m/z、1 450.13 m/z和1 349.4m/z）,建立了胃恶性肿瘤的诊断模型,其识别率为100%,预测能力为 90 .59 %,准确性为 100%。将已知信息的验证组 18 例分别代入已建立的模型,特异性和灵敏性分别为75 %和100%。结论:液体蛋白芯片飞行时间质谱系统作为研究蛋白表达谱的工具,能够用于筛选潜在的胃恶性肿瘤的血清标志物,利用其优点并结合统计学的方法,建立血清学胃癌的诊断模型,能为胃恶性肿瘤的筛查提供帮助。      

热休克蛋白70与肿瘤的关系

热休克蛋白（ＨｅａｔＳｈｏｃｋＰｒｏｔｅｉｎ,ＨＳＰ）是由Ｒｉｔｏｓｓａ在１９６２年研究果蝇唾液腺染色体时发现的,将２５℃培养的果蝇幼虫置于３０～３２℃的环境中,发现其巨大的唾液腺染色体上出新的膨突。继后正常蛋白质的合成被抑制,却合成了一组特殊的蛋白质,由于是在热刺激下产生的一组蛋白质,故称其为热休克蛋白（ＨＳＰ）。后来,人们发现除高温外的各种刺激如缺血、缺氧、重金属、病毒感染、恶性变等均可诱导ＨＳＰ的合成,并关闭正常蛋白的合成,故也有人称其为应激蛋白［１～４］。在ＨＳＰ家庭中ＨＳＰ７０是功能最广研究最…     

双向凝胶电泳—飞行时间质谱法分析人肺鳞细胞NCI—H520蛋白质组成分

目的：建立和优化肿瘤蛋白质组研究的方法系统,并分析人肺鳞癌细胞蛋白质组。方法：用固相 ｐＨ梯度双向凝胶电泳分离人肺鳞癌细胞系ＮＣＩ－Ｈ５２０总蛋白,银染显色,ＰＤＱｕｅｓｔ ２ＤＥ软件分析,对部分蛋白质 点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（ｍａｔｒｉｘ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｌａｓｅｒ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ ｏｆ　ｆｌｙｉｎｇ　ｍａｓｓ　 ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ, ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ）测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱,用 ＰｅｐｔＩｄｅｎｔ软件查询 ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ数据库。结果：获得了分辨 率和重复性均较好的双向电泳银染图谱,图像分析探测到３块胶的平均蛋白质点数为（１１４６±１１６）,平均匹配的点 数为（８５１±９５）,匹配率达 ７３． ７％, ３ 块胶在蛋白质点位置上具有较好的重复性, ＩＥＦ方向的平均偏差为（１． ５２± ０．２２）ｍｍ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ方向的平均偏差为（１．９７ ± ０．１３）ｍｍ。随机取６０个蛋白质点进行胶内原位酶解－质谱指纹图 分析得到了５４个蛋白质点的肽质指纹图,查询数据库初步鉴定了４４个蛋白质,其中部分是与细胞周期有关的蛋 白,部分是与信号传导有关的蛋白,部分