人胃腺癌BGC-823细胞株周期素D1的表达

[目的]探讨反义核酸对周期素D1的表达及对胃癌细胞增殖的影响。[方法]应用免疫荧光组织化学方法结合激光共聚焦显微镜，观察了人胃腺癌BGC-823细胞株反义核酸处理前后周期素D1的表达。[结果]反义核酸处理组周期素D1的表达较空白对照组明显降低。[结论]反义核酸抑制周期素D1的表达并抑制胃癌细胞的增殖。     

survivin 反义核酸增强PANC-1 细胞对5-Fu敏感性的研究

 目的 研究survivin反义核酸诱导胰腺癌细胞株PANC-1的凋亡和增强对5-Fu敏感性的影响。方法 我们应用构建的survivin反义核酸真核表达栽体电转染PAND-1细胞，RT-PCR检测survivin mRNA表达，细胞计数和MTT实验测定转染后细胞对5-Fu敏感性，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 survivin反叉核酸可抑制PANC-1细胞中survivin mRNA的表达，并能抑制PANC-1细胞生长，提高PANC-1对5-Fu敏感性，流式细胞仪检测凋亡率明显增加。结论 survivin反义核酸能增强5-Fu诱导的PANC-1细胞凋亡，联合survivin反义核酸和5-Fu可以改善胰腺癌的治疗效果。     

Cyclin D1基因沉默对K562细胞增殖及凋亡的影响

[目的]利用RNA干扰（RNAi）技术观测其对白血病K562细胞cyelin D1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。[方法]体外构建靶向cyclin D1基因的小发夹RNA（shRNA）表达质粒．通过壳聚糖介导转染K562细胞，Western blot分析检测转染前后cyclin D1蛋白表达变化；集落形成实验检测细胞增殖能力；流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡情况。[结果]构建靶向cyclinD1基因的shRNA表达质粒（pshRNA-419和pshRNA-575）经壳聚糖转染后，能显著抑制cyelin D1基因表达；抑制K562细胞增殖，影响其集落形成能力；细胞阻滞于G0／G1期，细胞凋亡明显。而m—pshRNA-790质粒并无上述生物学效应：[结论]cyclinD1基因表达下调可抑制K562细胞生长影响细胞周期分布并诱导细胞凋亡提示，因可能是白血病治疗的一个有效靶点。     

NF-κB 反义核酸对胰腺癌细胞ICAM-1表达及侵袭转移能力的影响

 目的 研究核因子-KB（NF-KB）亚单位p65反义寡核苷酸（ASODN）对人胰腺癌细胞细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达及侵袭转移能力的影响。方法 设计合成p65ASODN，体外转染人胰腺癌细胞株PANC-1，用流式细胞仪和荧光显微镜检测转染效率，用RT-PCR检测p65及ICAM-1mRNA的表达，用四甲基偶氮唑盐（MTT）法和细胞侵袭实验分析细胞增殖能力和侵袭转移能力的改变。结果 p65ASODN可成功转染PANC-1细胞；转染后，p65及ICAM-1mRNA表达明显减弱（P〈0．01）；细胞增殖活性和侵袭转移能力明显下降（P〈0．01）。结论 脂质体介导的p65ASODN能有效抑制p65基因的表达，从而降低细胞的侵袭转移能力，p65ASODN可能主要通过下调ICAM-1基因的表达发挥抗侵袭转移的作用。     

NF-kB反义核酸对胰腺癌细胞ICAM-1表达及侵袭转移能力的影响

目的研究核因子-KB（NF-KB）亚单位p65反义寡核苷酸（ASODN）对人胰腺癌细胞细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达及侵袭转移能力的影响。方法设计合成p65ASODN，体外转染人胰腺癌细胞株PANC-1，用流式细胞仪和荧光显微镜检测转染效率，用RT-PCR检测p65及ICAM-1mRNA的表达，用四甲基偶氮唑盐（MTT）法和细胞侵袭实验分析细胞增殖能力和侵袭转移能力的改变。结果p65ASODN可成功转染PANC-1细胞；转染后，p65及ICAM-1mRNA表达明显减弱（P〈0．01）；细胞增殖活性和侵袭转移能力明显下降（P〈0．01）。结论脂质体介导的p65ASODN能有效抑制p65基因的表达，从而降低细胞的侵袭转移能力，p65ASODN可能主要通过下调ICAM-1基因的表达发挥抗侵袭转移的作用。     

反义寡核苷酸阻断NF-кB对胰腺癌细胞增殖活性影响的研究

目的:研究核因子-кB(NF-кB)亚单位p65反义寡核苷酸(ASODN)对人胰腺癌细胞增殖活性的影响,探讨p65 ASODN治疗胰腺癌的可行性.方法:设计合成p65 ASODN,体外转染人胰腺癌细胞株PANC-1,用流式细胞仪和荧光显微镜检测转染效率,用RT-PCR分析p65 mRNA的表达,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和克隆形成试验分析细胞增殖能力.结果:流式细胞仪和荧光显微镜检测表明,p65 ASODN可成功转染PANC-1细胞;转染后,RT-PCR结果显示反义治疗组、空脂质体组和空白对照组p65 mRNA相对表达量分别为0.24±0.05、0.37±0.04和0.39±0.03,反义治疗组p65基因表达显著下降,P=0.000;MTT检测结果显示,在转染后24、48和72 h,反义治疗组吸光度(OD)值均降低,细胞增殖受到抑制,抑制作用在转染后48 h最为明显,P＜0.01;克隆形成试验结果显示,反义治疗组、空脂质体组和空白对照组的克隆形成率分别为(149±3.3)%、(23.3±2.0)%和(25.8±2.5)%,反义治疗组克隆形成率显著下降,P=0.000.结论:脂质体介导的p65 ASODN能有效抑制胰腺癌PANC-1细胞株p65基因的表达,从而降低细胞增殖活性,可能对胰腺癌有治疗作用.     

c-raf-1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞受照后Ki-67表达的影响

[目的]探讨癌基因c-raf-1的反义寡核苷酸埘人卵巢癌细胞受照后Ki-67表达的影响。[方法]设立c-raf-1正义寡核苷酸组和非处理组（仅加入等量的脂质伴)作对照，用RT-PCR检测卵巢癌细胞处理前后c-raf-1表达水平的变化，用免疫组化技术检测人卵巢癌细胞株SKOV3在脂质体-c-raf-1反义寡核苷酸作用前后受^60Coγ射线照射后细胞Ki-67的表达情况。[结果]c-raf-1反义寡核苷酸能抑制c-raf-1癌基因的表达，经脂质体介导的c-raf-1反义寡核苷酸作用的卵巢癌细胞经γ射线照射后其Ki-67表达较转染正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下调，而转染c-raf-1正义寡核苷酸组和单纯照射组相比无明显差异。[结论]c-raf-1反义寡核苷酸通过抑制c-raf-1的表达降低人卵巢癌细胞株SKOV3受照射后的增殖能力。该作刚可能与c-raf-1反义寡核苷酸抑制了引起肿瘤细胞辐射抗拒的细胞信号传导途径有关。     

过表达lnc-TNFAIP3基因对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响

目的:应用慢病毒转染方法构建lnc-TNFAIP3基因过表达的胰腺癌细胞株,并观察其细胞行为学变化。方法:过表达质粒和慢病毒制备,转染进人胰腺癌细胞株PANC-1中,采用CCK-8、平板克隆实验检测其细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果:lnc-TNFAIP3基因过表达慢病毒成功转染PANC-1细胞,其细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱,细胞周期和细胞凋亡无显著差异,相关蛋白表达无显著差异。结论:转染过表达lnc-TNFAIP3基因的慢病毒构建的人胰腺癌细胞系PANC-1细胞行为发生了变化,提示lnc-TNFAIP3可能是一个有前景的胰腺癌治疗靶点,为lnc-TNFAIP3基因在胰腺癌中的研究提供了理论和实验数据。     

靶向CD44的shRNA片段逆转人胰腺癌细胞株PANC-1侵袭表型机制

目的:利用RNA干扰技术沉默人胰腺癌细胞株PANC-1中CD44的表达,观察其对肿瘤侵袭性的抑制效果。方法:设计合成有效地干扰CD44的shRNA序列。结果:通过平板克隆形成实验、软琼脂集落形成试验、Transwell小室侵袭实验发现,胰腺癌细胞株转染干扰CD44的shRNA序列后,其相关的增殖以及侵袭能力明显受抑制。Western Blot发现随着CD44的下调,AKT被逐渐上调,而p-ERK、p-AKT却被逐渐下调。结论:靶向CD44的shRNA技术可有效降低人胰腺癌细胞株PANC-1的侵袭能力,可能的机制与影响其下游的p-AKT、p-ERK表达有关。针对CD44的RNA干扰具有潜在的临床价值。     

反义Bmi-1对Raji细胞的抑制作用

 目的　观察反义Bmi-1对B淋巴细胞白血病Raji细胞的抑制作用并探讨其机制。方法　在体外转染中通过阳离子脂质体法将反义质粒导入Raji细胞中,以G418进行筛选得到阳性克隆;以MTT法和体外集落形成实验检测反义Bmi-1表达质粒对Raji细胞增生的抑制作用;利用流式细胞仪分析细胞周期;采用免疫荧光组化法检测反义Bmi-1对Raji细胞的p16蛋白的上调作用。结果　转染反义Bmi-1表达质粒组与对照组（空白对照及空质粒组）相比较,生长速度明显变慢,转染反义Bmi-1表达质粒组与对照组（空白对照及空质粒组）相比较,生长速度明显变慢,克隆形成能力明显下降,空白对照组细胞集落数为（89.7±8.07）／103细胞,空质粒组细胞集落数为（81.3±6.91）／103细胞,转染反义质粒组细胞集落数为（50.0±5.21）／103细胞（P＜0.01）;与对照组细胞相比反义组G1期所占比例明显上升（P＜0.05）;p16蛋白表达也明显增强。结论　反义Bmi-1对Raji细胞的体外生长具有明显的抑制作用。     

miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为

目的：探讨miR-192-5p靶向E盒锌指结合同源框2(ZEB2)对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响及其作用机制。方法：利用TCGA数据库数据分析miR-192-5p和ZEB2在胰腺癌组织中的表达及两者的相关性。采用qPCR法和WB法分别检测人正常胰腺上皮细胞HPNE和胰腺癌PANC-1细胞中miR-192-5p和ZEB2的表达水平。利用脂质体转染技术转染PANC-1细胞,实验分为miR-192-5p mimic组、Mimic NC组、miR-192-5p inhibitor组、Inhibitor NC组、Mimic NC+pcDNA3.1组、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1组、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1-ZEB2组。CCK-8法、克隆形成、划痕愈合、Transwell实验分别检测转染PANC-1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。qPCR法、WB法、双重免疫荧光实验检测PANC-1细胞中ZEB2、E-cadherin、vimentin的表达水平。通过生物信息学网站预测miR-192-5p的靶基因,并利用双...     

miR-429通过下调PTEN并激活PI3K/AKT信号通路促进胰腺癌PANC-1细胞对卡培他滨耐药

目的:探讨miR-429 靶向PTEN并通过PI3K/AKT信号通路调控胰腺癌PANC-1 细胞对卡培他滨的耐药性及其作用机制。方法：建立胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP后,采用qRT-PCR和Western blotting 实验检测miR-429 和PTEN在胰腺癌细胞中的表达情况,平板克隆形成实验、CCK-8 法和Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术检测敲降miR-429 对胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP 细胞增殖、凋亡和卡培他滨耐药性的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-429 与PTEN 的靶向关系,Western blotting 实验进一步检测miR-429 对PTEN-PI3K/AKT信号通路的调控作用。结果：miR-429 在胰腺癌PANC-1 细胞和PANC-1/CAP细胞中的表达水平高于人胰腺导管上皮细胞（HPDE6-C7）（P<0.05 或P<0.01）,敲降miR-429 可显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力、促进细胞凋亡及下调细胞卡培他滨耐药性,且双荧光素酶报告基因证实miR-429 靶向作用PTEN并下调其表达水平（P<0.05 或P<0.01）;敲降miR-429 可通过靶向上调PTEN并阻断PI3K/AKT信号通路进而显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力,从而下调PANC-1/CAP细胞对卡培他滨的耐药性（P<0.05 或P<0.01）。结论：miR-429/PTEN-PI3K、AKT信号通路与胰腺癌卡培他滨耐药性存在调控关系,且敲降miR-429 可逆转PANC-1/CAP对卡培他滨的耐药性。     

CDCA7通过与MCM3相互作用介导胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移

目的:探讨细胞分裂周期相关蛋白7(cell division cycle-associated protein 7,CDCA7)对人胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,及其可能的作用机制.方法:利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达谱数据动态分析(Gene Expre...     

Brucein D induces apoptosis in pancreatic adenocarcinoma cell line PANC-1 through the activation of p38-mitogen activated protein kinase

Pancreatic cancer is a malignant disease with extremely high mortality. Our previous work found that Brucea javanica fruit possesses potent anti-pancreatic cancer activity. In the present study, brucein D (BD), a quassinoid found abundantly in B. javanica fruit, was evaluated for its anti-proliferative and apoptogenic actions. BD inhibited the growth of three pancreatic cancer cell lines, i.e., PANC-1, SW1990 and CAPAN-1, but exerted only modest cytotoxicity on non-tumorigenic Hs68 cells. Hoechst 33342 staining and Cell Death Detection ELISA^PLUS assay revealed that BD-induced DNA fragmentation in PANC-1 cells. Moreover, subG1 phase was observed in the BD-treated cells. Western blot experiments indicated that BD exposure augmented caspase 3, 8, 9 and bak protein levels, while attenuating the expression of bcl-2. Furthermore, BD treatment promoted phosphorylation of p38-MAPK. The selective p38-MAPK inhibitor SB203580 effectively mitigated the BD-induced apoptosis in PANC-1 cells, suggesting that p38-MAPK signaling pathway was involved in the BD-induced apoptosis in pancreatic cancer cells. Taken together, our results provide experimental evidence to support the traditional use of B. javanica fruit in cancer treatment, and render BD a promising chemical candidate for further development into anti-pancreatic cancer agent.     

结缔组织生长因子对胰腺癌细胞增殖和转移的影响

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞增殖和转移的影响.方法 采用实时定量聚合酶链反应(PCR)和免疫组化方法,分别检测胰腺癌细胞株PANC-1和50例胰腺癌组织中CTGF的表达.采用重组腺病毒介导的CTGF转染PANC-1细胞使CTGF高表达,以RNA干扰方法使CTGF表达缺失,分别通过四甲基偶氮唑蓝(MMT)法、划痕实验、体外侵袭实验观察PANC-1细胞增殖和转移能力的变化.结果 实时定量PCR和免疫组化检测均显示,CTGF在PANC-1细胞及胰腺癌组织中高表达.CTGF转染后,CTGF转染组PANC-1细胞比空载体对照组增殖能力和修补划痕能力明显增强,200倍显微镜视野下的穿膜细胞数为34个,比空载体对照组(11个)明显增多.干扰CTGF后,siCTGF转染组细胞比空载体对照组增殖能力和修补划痕能力明显降低,200倍显微镜视野下的穿膜细胞数为6个,比空载体对照组(15个)明显减少.结论 CTGF在胰腺癌中高表达,其表达的高低对胰腺癌细胞的增殖和转移有显著影响.