三氧化二砷和细胞分化剂诱导肝癌细胞凋亡的阈值

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)诱导肝癌细胞凋亡的阈值以及与细胞分化剂（CDA－Ⅱ）的协同效应。方法：1．0－5．0μmol/L的As2O3和1.0-5.0g/L的CDA－Ⅱ分别以及联合与肝癌细胞株Bel-7402、HepG2共孵育一定时间后，用活细胞荧光染色法、DNA电泳和流式细胞术分析细胞凋亡率。结果：单用As2O3 1.0μmol/L与对照组比较，差异无显著性（P＞0．05），凋亡阈值是5．0μmol/L；单用CDA－Ⅱ 3．0g/L以上与对照组比较，差异有显著性（P＜0．05）。但两药联合应用的凋亡阈值是1.0μmol/L As2O3＋1.0g/L CDA－Ⅱ。结论：CDA－Ⅱ可以降低肝癌细胞的凋亡阈值，增加肝癌细胞对As2O3的敏感性。     

三氧化二砷对肝癌细胞系BEL—7402的影响

目的 观察不同浓度的三氧化二砷作用不同时间对肝癌细胞BEL－7402的影响及其作用机理。方法 应用不同浓度的三氧化二砷作用于肝癌细胞后，观察肝癌细胞的存活、形态学改变，并通过流式细胞仪和DNA梯状电泳观察细胞凋亡的情况。结果 不同浓度的三氧化二砷作用于肝癌细胞有明显的时间和剂量依赖性，发生作用后细胞生长明显受抑制；有明显的凋亡特征性改变：细胞膜完整、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成；流式细胞仪分析显示，肝癌细胞存在G2／M期阻滞，在G1峰前出现明显的凋亡峰；琼脂糖凝胶电泳出现明显的凋亡特征性梯状条带。结论 三氧化二砷可明显抑制肝癌细胞的生长，其机理主要是诱导肝癌细胞凋亡。     

丁酸钠诱导人肝癌细胞凋亡机制

丁酸钠（NaB）作为一种组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂，已被证实能抑制多种体外培养的肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞衰老和凋亡。我们拟用NaB作用于人肝癌SMMC-7721细胞，采用FCM检测细胞周期、逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法及Western blot方法在mRNA及蛋白水平检测p21WAF。     

三氧化二砷诱导乳腺癌细胞系MCF-7凋亡的实验研究

目的观察不同浓度的三氧化二砷(As2O3)作用不同时间后对乳腺癌细胞系MCF-7的影响及其作用机理。方法应用不同浓度的As2O3作用于乳腺癌细胞后,观察As2O3对乳腺癌细胞生长状态的影响;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察其对MCF-7细胞增殖的影响;应用琼脂糖凝胶电泳和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测As2O3对MCF-7细胞凋亡的诱导作用。结果不同浓度的As2O3作用于乳腺癌细胞有明显的时间和剂量依赖性,As2O3作用后细胞生长明显受抑制,并出现明显的凋亡特征性改变(细胞膜完整、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成);经1、2、4及8μmol/L4个剂量的As2O3处理48h后,琼脂糖凝胶电泳检测到细胞发生凋亡时DNA降解形成梯形分子条带;4μmol/LAs2O3作用24、48及72h后TUNEL法可检测到细胞凋亡水平显著性升高。结论As2O3可明显抑制乳腺癌细胞的生长,其机理主要是诱导乳腺癌细胞凋亡。     

SMMC-7721与Bel-7402人肝癌细胞株生长激素受体的表达及意义

目的了解生长激素受体（GHR）在SMMC-7721与Bel-7402人肝癌细胞株的表达情况,以获得肝癌GHR在细胞水平上的定量表达。方法分别采用放射性配体分析与逆转录-多聚酶链式反应（RT-PCR法）检测GHR在SMMC-7721与Bel-7402肝癌细胞株的表达情况,使用双脱氧末端终止法进行基因测序。结果SMMC-7721与Bel-7402肝癌细胞均可表达GHRmRNA;在蛋白质表达水平发现GHR在7721肝癌细胞的位点数量（Site,103/cell）为3.462±0.632,平衡解离常数（Kd）为0.52±0.05942nmol/L;7402肝癌细胞位点数量为7.348±0.891,Kd为0.63±0.04583nmol/L。结论由于上述两种肝癌细胞株均可表达GHR,因此可为研究rhGH与肝细胞肝癌的生长关系奠定一定的实验基础。     

三氧化二砷诱导胆囊癌细胞凋亡涉及CD133表达下调机制的细胞研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人胆囊癌(GBC)细胞凋亡及对干细胞标志物CD133表达的作用。方法:用Hoechest染色、流式细胞仪和DNA凝胶电泳研究As2O3诱导GBC细胞凋亡及对CD133+GBC细胞的作用。Western印迹法检测CD133蛋白表达,RT-PCR检测CD133 mRNA表达。结果:As2O3能诱导GBC细胞凋亡、减少CD133+GBC细胞的数量,同时能降低GBC细胞CD133的蛋白及mRNA表达。结论:As2O3可能通过抑制干细胞标志物CD133表达而实现其对体外人GBC细胞的诱导凋亡作用。     

bcl-2 mRNA、baX mRNA表达在三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡中的意义

目的 分析三氧化二砷(As2O3)诱导肝癌细胞凋亡中凋亡相关基因bcl—2 mRNA、bax mRNA表达的意义。方法 采用电镜、流式细胞仪、电泳及半定量RT—PCR方法检测不同剂量三氧化二砷诱导人肝癌细胞株bel—7402后凋亡的出现及bcl-2mRNA、bax mRNA的表达。结果 0．5にmol/L As2O3处理肝癌细胞未见凋亡，8μmol/L As2O3诱导肝癌细胞出现明显凋亡。对照组和药物组未检测到bcl-2 mRNA的表达，随浓度增加，bax mRNA的表达上调。结论 As2O3通过诱导凋亡抑制肝癌细胞株bel-7402的增殖，凋亡诱导基因bax mRNA的表达上调与此过程有关。bcl—2mR—NA表达与此过程无关。     

紫杉醇对肝癌细胞增殖抑制和诱导凋亡的效应研究

紫杉醇(paclitaxel,商品名Taxol)是一种促进细胞微管聚合、抑制微管解聚的新型抗肿瘤药,目前临床上已用于治疗卵巢癌、乳腺癌、肺癌,而对肝癌的治疗还在试验研究阶段。紫杉醇诱导肝癌细胞凋亡和抑制增殖能力的分析对于探讨临床应用有积极意义。我们采用ATP生物发光法进行肿瘤化疗药敏试验(TCA)检测肝癌细胞BEL7402对紫杉醇的敏感性,以及诱导肝癌细胞凋亡、抑制细胞增殖情况,并与5氟脲嘧啶(5Fu)对比分析。一、材料与方法1.材料:人肝癌细胞株BEL7402由广东省药学院黄树林教授惠赠。试剂:RPMI1640培养基和胰蛋白酶均为Gbico产品。ATP…     

survivin基因反义寡核苷酸对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞凋亡与细胞周期的调控作用

目的研究survivin基因反义寡核苷酸转染对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期、细胞凋亡的作用及其可能的作用机制。方法采用脂质体介导survivin基因反义寡核苷酸转染人肝癌SMMC-7721细胞,透射电镜观察细胞超微结构,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,RT-PCR方法检测cyclin B1 mRNA的表达。结果survivin反义寡核苷酸转染后细胞内cyclin B1表达由0.36±0.03增加至0.91±0.03,同时G2-M期细胞及凋亡细胞比例分别由5.81%及0.7%明显增加至42.11%及31.35%,同时细胞超微结构呈典型凋亡样改变。结论survivin基因反义寡核苷酸转染细胞后可以通过诱导cyclinB1的表达,导致G2-M期阻滞,从而诱导细胞凋亡的发生。survivin基因反义寡核苷酸转染可以作为治疗肝癌的重要新方法。     

维生素K3对肝癌细胞株的生长抑制作用及其与三氧化二砷的联合效果

目的 探讨维生素K3(VK3)对肝癌细胞的凋亡诱导作用及其与三氧化二砷(As2O3)的联合效果.方法 体外培养人肝癌细胞株(HepG2),分别以VK3,As2O3以及二者联合孵育细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测对肝癌细胞的抑制率,Annexin-v/Pl双染色流式细胞技术检测凋亡细胞的百分数,用激光共聚焦显微镜,TUNEL观察细胞凋亡后的形态.结果 体外实验表明VK3能抑制HepG2细胞生长并呈剂量和时间依赖性(P=0.002),细胞死亡方式以凋亡为主;VK3与As2O3联合应用时,二者具有协同作用(P=0.005).结论 笔者的研究表明VK3能抑制肝癌细胞生长,并且与As2O3联合时有协同作用,降低了As2O3的副作用,为肝癌的治疗提供了广阔的前景.     

三氧化二砷对原发性肝癌的作用及其机理研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞系BEL-7402的影响及其作用机理,并观察不同应用途径对原发性肝癌患者的治疗效果。方法 观察As2O3作用后肝癌细胞的形态学改变、并通过流式细胞仪和DNA梯状电泳观察细胞凋亡的情况,应用逆转录聚合酶链式反应和荧光分光光度计检测半胱氨酸蛋白酶-3的变化情况。观察其对裸鼠移植瘤生长抑制的效果。并分别通过静脉滴注和动脉持续灌注观察其对原发性肝癌患者的治疗效果。结果 不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞有明显的时间和剂量依赖性,发生作用后细胞生长明显受抑制,有明显的凋亡特征性改变;流式细胞仪分析存在G2／M期阻滞,在G1峰前出现明显的凋亡峰;琼脂糖凝胶电泳出现明显的凋亡特征性梯状条带。随着As2O3作用时间的延长,半胱氨酸蛋白酶-3的mRNA无明显变化,而半胱氨酸蛋白酶-3蛋白质的活性逐渐增高。不同浓度的As2O3对于裸鼠肝癌移植模型有明显的抑制生长作用。对28例患者的静脉输注治疗可明显改善患者的生存质量,并且具有毒副作用小的特点。43例动脉灌注治疗患者中,30例肿瘤体积缩小或不变,有效率为69．8％,19例甲胎蛋白下降或降至正常。结论 As2O3可明显抑制肝癌细胞的生长,其机理主要是诱导肝癌细胞凋亡;凋亡的可能机理是通过半胱氨酸蛋白酶-3起作用,作用位点是在酶的前体水平;应用As2O3连续区域化疗对原发性肝癌有很好的治疗效果。     

三氧化二砷诱导人胃癌MKN45细胞凋亡及其分子机制的初步研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人胃癌细胞的生物学效应及其作用机制。方法胃癌细胞经As2O3处理后,用台盼蓝方法检测As2O3的IC50,采用流式细胞仪、DAPI荧光染色、原位末端标记(TUNEL)及DNA电泳检测细胞凋亡。结果As2O3在一定浓度范围内以浓度依赖的方式抑制胃癌细胞生长,其IC50为(11.05±0.25)μmol/L。经1～10μmol/LAs2O3处理胃癌细胞后,流式细胞仪检测出凋亡峰,流式细胞光度计下可见明显的凋亡细胞形态特征,琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯形条带。结论As2O3在体外可诱导胃癌细胞的凋亡,这是其对胃癌细胞产生生物学效应的基础。     

亚砷酸在原发性肝癌介入治疗中的疗效观察

目的观察亚砷酸（As2O3）在原发性肝癌介入治疗中的疗效。方法对43例患者采用Seldinger技术，应用亚砷酸及碘油对原发性肝癌患者进行介入治疗。结果其中无完全缓解（CR）病例，部分缓解（PR）18例、无变化（SD）17例、进展（PD）8例，客观有效率（CR＋PR）41．86％，获益率（CR＋PR＋SD）81．39％。29例血清AFP阳性的患者AFP下降率为55．17％（16／29）。主要毒副反应有发热、食欲减退及腹胀。结论亚砷酸应用于原发性肝癌的介入治疗，疗效确切，操作简单易行，毒副作用小，值得临床推广应用。     

三氧化二砷诱导肝癌Bel-7402细胞凋亡与线粒体跨膜电位关系的研究

目的研究三氧化二砷（As2O3）诱导人肝癌细胞系Bel-7402细胞凋亡及与线粒体跨膜电位的关系。方法应用不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞后，观察As2O3对肝癌细胞生长状态的影响；通过噻唑蓝（MTT）比色法观察其对Bel-7402细胞增殖的影响；利用共聚焦显微镜及流式细胞术观察经Annexin V-FITC／PI双染后的细胞早期凋亡；通过共聚焦显微镜及流式细胞仪检测线粒体跨膜电位（MMP）的改变情况；并通过底物染色法反映Caspase-3的活性。结果不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞后有明显的时间和剂量依赖性；经Annexin V-FITC／PI双染后，可观察到Bel-7402细胞的早期凋亡现象，2μmol／L As2O3作用24h细胞凋亡率为9．89％，作用48h细胞凋亡率为48．53％，而4μmol／L As2O3作用24h细胞凋亡率为18．27％，作用48h细胞凋亡率为67．52％；经As2O3药物作用后，细胞线粒体膜电位水平下降，且与药物作用时间和药物浓度有关（P〈0．05）；同时Caspase-3活性被激活。结论As2O3可明显抑制肝癌细胞Bel-7402的生长，并使细胞线粒体膜电位下降，诱导肝癌细胞凋亡。     

聚酯型儿茶素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的 探讨聚酯型儿茶素（ＴＳ）的抗癌作用机制。方法 应用四氮唑蓝快速比色（ＭＴＴ）法,透视电镜,琼脂糖凝胶电泳,流式细胞术等方法研究ＴＳ诱导体外培养的人肝癌细胞凋亡。结果 ５０－８００ｍｇ／Ｌ ＴＳ对人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞的生长有明显的抑制作用,且量效关系明显。４００ｍｇ／Ｌ ＴＳ作用于ＳＭＭＣ－７７２１细胞２４ｈ后,透射电镜观察到凋亡小体;ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳上可见典型的“阶梯状”：     

全反式维甲酸和三氧化二砷协同诱导胰腺癌细胞凋亡

目的研究与三氧化二砷（As2O2）具有协同效应治疗胰腺癌的药物。方法以胰腺癌细胞系SWl990为研究对象，观察5-氟尿嘧啶（5-Fu）、健择（Gemcitabine）和全反式维甲酸（AT—RA）与As2O3共同作用对细胞的影响。通过台盼蓝拒染法检测细胞生长和细胞活力，流式细胞仪检测AnnexinV或PI阳性细胞的含量，评价以上药物对细胞增殖和凋亡的作用。结果5-Fu和Gemcitabine与As2O3无协同效应。单独应用As2O3或ATRA均抑制SWl990细胞生长，不诱导细胞凋亡。其中，对照组活细胞密度为（8．5±0．3）×10^5个／ml，As2O3组为（4．4±0．1）×10^5个／ml，ATRA组为（6．7±0．2）×10^5个／ml。但是，As203和ATRA共同处理SWl990细胞后，细胞生长明显抑制，并诱导细胞凋亡。对照组活细胞密度为（8．5±0．3）×10^5个／ml，As2O3＋ATRA组为（3．3±0．1）×10^5个／ml；对照组细胞活力为（92，0±1．2）％，As2O3组为（90．0±1．3）％，ATRA组为（93．0±1．4）％，As2O3＋ATRA组为（65．0±2．1）％；对照组Annexin V和PI阳性细胞的含量为（6．0±1．2）％，As2O3组为（11．0±3．3）％，ATRA组为（5．0±1．4）％，As2O3＋ATRA组为（37．0±5．3）％。结论As2O3和ATRA可协同诱导胰腺癌细胞凋亡，两者联合应用可能作为胰腺癌辅助治疗的另一选择。     

三氧化二砷抗肝癌作用及其肾毒性作用的实验研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）抗肝癌作用及其对肾脏的毒副作用并探讨其作用机制。方法：二乙基亚硝胺灌胃制备大鼠肝癌模型。以As2O3或顺铂注射于大鼠腹腔，第7、14、28天获取肝癌结节，光、电镜下观察肝癌细胞形态学变化，流式细胞仪检测凋亡及细胞动力学变化。第28天获取肾脏，光镜下观察肾脏组织形态学变化，免疫组织化学SP法检测bcl-2、增殖细胞核抗原（PCNA）表达变化。结果：As2O3诱导大鼠肝癌细胞凋亡，出现典型形态学改变；引起肝癌细胞凋亡率上开，中剂量组（1mg/kg体重）显著上升，明显高于顺铂组（P＝0．000）。顺铂组大鼠肾脏（4／7）镜下出现肾小管上皮细胞浊肿、变性，集合管内蛋白管型出现，而砷剂组无明显改变（P＝0．013）；砷剂组肾上管上皮细胞bcl-2表达增加（P＝0．005），PCNA标记指数无明显改变，顺铂组PCNA LI明显升高（P＝0．001）。结论：As2O3可诱导大鼠肝癌细胞凋亡，且优于顺铂；与顺铂相比，无明显肾毒性。     

三氧化二砷对乳腺癌细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的研究低氧条件下人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S血管内皮生长因子(VEGF)的表达及三氧化二砷(As2O3)对其表达的影响。方法建立MD-MBA-435S细胞体外低氧培养模型。采用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)、免疫细胞化学染色和Wester blot分别检测0．5、2．0、5．0μmol／L As2O3对缺氧12h后乳腺癌细胞VEGF基因及蛋白的表达变化；噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度As2O3对乳腺癌细胞生存的影响。结果高浓度As2O3可以抑制乳腺癌细胞的生存，而低浓度则对此影响较小。缺氧12h后VEGF mRNA和蛋白皆明显增加；3种浓度As2O3对常氧下乳腺癌细胞VEGF mRNA和蛋白无明显影响，而对缺氧12h后细胞VEGF mRNA和蛋白的表达明显抑制，且呈剂量递增效应。结论缺氧可以显著增加乳腺癌细胞VEGF的表达；常氧下As2O3对乳腺癌细胞VEGF的表达无明显抑制，而在低氧下可以明显抑制，其机制可能是通过调控VEGF的上游基因实现的。