2006至2014年北京单中心儿童乙型流感病毒流行的监测

目的 了解北京单中心儿童乙型流感病毒的流行趋势,为流感的防控提供数据支持。方法 2006年9月至2014年5月对首都儿科研究所附属儿童医院门诊和急诊采集流感样病例的咽拭子标本,采用传代狗肾细胞(MDCK细胞)行流感病毒和副流感病毒的分离,并用特异性血清对分离到的流感病毒进行凝集抑制试验鉴定型别。同时接种人喉癌细胞（HEp-2）行呼吸道合胞病毒和腺病毒的分离。分为8个监测年度,以2006年9月至2007年8月（2006至2007年）为1个监测年度,余7个年度类推。对8个监测年度乙型流感病毒的流行特征行描述性分析,并与同期甲型流感病毒的流行特点进行比较。结果 6 150份咽拭子标本检测了流感病毒,分离到乙型流感病毒345株（5.6％）,其中166株（48.1%）B/V系毒株和179株（51.9%）B/Y系毒株。①8个监测年度,出现5个乙型流感病毒的流行高峰。除2006至2007年外, 2007至2008、2009至2010、2011至2012和2013至2014年的流行高峰呈隔年流行的特点,月阳性率最高可达46.2%（2008年1月和2012年2月）。2006至2007、2009至2010、2010至2011和2013至2014年,甲型流感病毒阳性率高于乙型流感病毒,且乙型流感流行高峰均出现在甲型流感流行高峰后;2007至2008和2011至2012年,乙型流感病毒阳性率高于甲型流感病毒,且乙型流感病毒流行高峰均出现在甲型流感流行高峰前。②8个监测年度中2006至2007、2007至2008、2010至2011和2011至2012年B/V系和B/Y系乙型流感病毒同时流行,余4个年度为其中之一流行株流行。2009至2010、2011至2012和2013至2014年的流行株与WHO推荐的流感疫苗中的乙型流感病毒型别相匹配。③345例乙型流感病毒阳性患儿中,～12岁以下组中随着患儿年龄增大而乙型流感病毒阳性率增高。结论 2006年9月至2014年5月北京地区儿童乙型流感病毒的流行基本呈现隔年出现高峰的流行趋势。在2个谱系同时流行的4个流行季中,分别以B/V或B/Y系乙型流感病毒为主要流行株。     

实时荧光聚合酶链反应方法在2006年广州地区儿童流行性感冒病毒监测中的应用

目的 应用实时荧光聚合酶链反应(PCR)方法检测流感病毒,并对2006年广州地区儿童感染流感病毒进行流行病学分析.方法 以流感病毒的NP基因序列为参考,综合分析GenBank上的NP基因序列,使用引物和探针设计软件Primer Express设计A/B型流感病毒及A亚型流感病毒各1对特异性引物和1条TaqMan荧光探针,用于分别检测A/B型流感病毒及A亚型流感病毒,建立实时荧光PCR方法,进行灵敏度和特异性检测.采用实时荧光PCR方法,对来自2006年门诊或住院呼吸道感染患儿的12 301份咽拭子或鼻腔抽洗液样本进行检测,并与病毒分离方法进行对照.结果 实时荧光PCR方法共检出1687份阳性样本,总阳性率为13.71%,其中A型773份(45.8%),全部为H1N1型;B型914份(54.2%).1-4月份检出流感病毒阳性525例,其中B型流感病毒455例(86.7%),A型(H1N1)流感病毒70例(13.3%);5-8月份检出流感病毒阳性1118例,其中B型流感病毒419例(37.5%),A型(H1N1)流感病毒699例(62.5%).病毒培养分离阳性为1380份,均为实时荧光PCR方法阳性,占实时荧光PCR方法阳性者的81.80%.结论 实时荧光PCR方法应用于流感病毒的检测具有简便快捷、特异、敏感的特点,2006年广州地区儿童流行性感冒病毒的流行1-4月份以B型流感病毒为主,5-8月份以H1N1亚型流感病毒为主.     

2000年秋冬至 2002年夏北京地区急性呼吸道感染病毒病原学研究

为了解北京地区婴幼儿急性呼吸道感染的病毒病原。对2000年秋冬至2002年夏收集的1402份临床标本进行了病原分析。所有标本接种Hep-2和MDCK细胞进行病毒分离；鼻咽洗液脱落细胞涂片后经间接免疫荧光检测7种呼吸道病毒。RT-PCR鉴定RSV亚型；血凝及血凝抑制试验鉴定流感病毒型别；nested-PCR检测肠道病毒。1402份标本中672份咽拭子标本取自门诊患儿，730份鼻咽洗液标本取自住院患儿，结果：共有614份标本为病毒阳性，阳性率为43.8%。病毒阳性标本中呼吸道合胞病毒（RSV）占66.1%。并以A亚型为主；RSV阳性标本中91.4%来自诊断为毛细支气管炎的住院患儿。2001-2002年冬春季RSV感染比2000-2001年同期高25.1%。流感病毒阳性标本占总阳性标本的24.4%，其中89.3%来自门诊患儿；2000-2001年以乙型流感病毒为主，2001-2002年以甲3型为主，在冬春季还可检测到腺病毒和副流感病毒，夏季检测不到以上几种呼吸道病毒，利用nested-PCR方法检测2002年夏季收集的标本，发现7月份肠道病毒感染率相当高。提示RSV是北京地区冬春季婴幼儿急性下呼吸道感染首要病毒病原。流感病毒是婴幼儿急性上呼吸道感染首要病毒病原，肠道病毒是夏季婴幼儿呼吸道感染主要病毒病原，病毒分离，免疫荧光和PCR等方法的并用提高了病毒检出率，病毒病原的诊断可为临床诊断和治疗提供可靠依据。     

2001-2005年北京地区婴幼儿甲型流感病毒感染的研究

目的 通过连续的监测,了解北京地区婴幼儿甲型流感的流行规律。方法 2001年10月—2005年8月,采集门诊和住院急性呼吸道感染患儿的标本7338份,分别经传代狗肾细胞进行病毒分离和（或）间接免疫荧光、血凝抑制试验进行流感病毒型别鉴定,采用RT-PCR方法,扩增甲3型流感病毒流行株的血凝素基因HA1区,进行序列分析。结果 （1）从7338份临床标本中,检出甲型流感病毒347份,总阳性率为4．7％。347份甲型流感病毒中,甲1型48份（13．8％）;甲3型273份（78．7％）;暂时无法鉴定亚型的26份（7．5％）。（2）2001-2004年的流行比较局限在当年10月至次年4月,2004年8月—2005年8月均有甲型流感病毒被检测到,在夏季仍可检测到相当多的甲型病毒,尤其是2005年8月甲3型的阳性率达到14．2％,相当于2003-2004年的流行最高峰。4年中每个流行季节都以甲3型流感病毒的流行为主,只在2001-2002年和2004-2005年的流行季节出现了甲1型流感病毒的流行峰。（3）甲1和甲3型流感病毒在门诊患儿中的阳性检出率均高于住院患儿的阳性检出率。在2003年11月—2005年8月期间的236例甲3型感染患儿中,≤2岁者占46．6％,〉5岁者占14．0％;而31例甲1型感染患儿中≤2岁者只占6．5％,〉5岁者占48．0％。（4）对1998-2005年的甲3型流感病毒血凝素基因HA1区的序列分析显示,每一年的甲3型病毒都会出现位于其抗原决定簇关键位点的氨基酸突变。结论2001年10月—2005年8月,北京地区婴幼儿中有甲1和甲3型流感不同程度的流行,甲3型为优势流行株;2004-2005年北京地区甲型流感呈全年的流行态势;氨基酸序列分析提示,1998-2005年期间甲3型流感病毒的抗原性在持续不断地发生漂移。     

儿童急性呼吸道感染病毒感染特点分析

目的分析儿童急性呼吸道感染患儿腺病毒(AdV)感染特点。方法 2009年5月至2009年6月北京儿童医院门诊急性呼吸道感染患儿共492例,入选患儿在就诊当日采集咽拭子标本1份,采用逆转录(RT)-PCR方法进行常见呼吸道病毒核酸检测,包括呼吸道合胞病毒(RSV),鼻病毒(RV),副流感病毒(PIV)1-4型,流感病毒甲型及乙型(IFA、IFB),腺病毒(AdV),肠道病毒(EV),人冠状病毒(HCoV),人偏肺病毒(HMPV)及人博卡病毒(HBoV)。AdV核酸扩增阳性片段进行克隆测序,对序列进行Blast和进化分析以对AdV进行分型。结果 492例急性呼吸道感染患儿的咽拭子标本中,165例检出至少1种病毒,总阳性检出率为33.5%。其中53份检出AdV,检出率为10.8%,在所有检出病毒中阳性率最高。53份AdV阳性标本中共检出3个亚组,7个血清型,以3型(23/53)为主,其次是7(8/53)型和1型(7/53)。结论 2009年春季北京地区AdV有多个血清型流行,以3型为主。AdV仍然是儿童呼吸道感染的重要病原。     

2009 甲型H1N1流感流行期间北京急性呼吸道感染儿童常见呼吸道病毒的研究

目的 了解2009至2010年甲型H1N1流感大流行期间北京地区急性呼吸道感染患儿中,除流感病毒外的其他几种常见呼吸道病毒感染的流行情况。 方法 设计并建立检测包括呼吸道合胞病毒（RSV）A/B亚型,副流感病毒(PIV)1、2、3型,腺病毒(ADV)和人博卡病毒(HBoV)在内的多重实时荧光PCR方法,并应用该方法对2009年6月至2010年2月甲型H1N1流感大流行期间,对首都儿科研究所附属儿童医院就诊的急性呼吸道感染患儿中甲型H1N1流感病毒检测阴性的咽拭子标本进行上述呼吸道病毒的核酸检测。 结果 新建立的多重RT-PCR方法最低可检测的目标基因含量为10~300拷贝数,未见与其他非目标病毒的交叉反应。本研究共检测标本849份,病毒检测总阳性率为39.0%（331份）,5岁以下占87.6%（290/331份）。各病毒的检测阳性率分别为RSV-A亚型1.4%（12份）,RSV-B亚型8.4%（71份）,PIV-1型8.2%（70份）,PIV-2型0.5%（4份）,PIV-3型3.9%（33份）,ADV 13.9%（118份）,HBoV 2.7%（23份）。 RSV检出以B亚型为主（85.5%）,流行高峰在2009年11月至2010年2月。PIV检出以PIV-1型及PIV-3型为主,PIV-1型的流行高峰在2009年7月至2009年10月,PIV-2型及PIV-3型的流行高峰在2009年6～9月。ADV病毒在研究期间均有较高检出率（平均为13.9%）,HBoV的流行高峰在2009年9～12月。 结论 除流感病毒外,ADV、RSV-B及PIV可能也是2009甲型H1N1流感流行期间引起儿童急性呼吸道感染的重要病原。比较以往的资料可见各病原在2009甲型H1N1流感流行期间的流行季节性及检出率基本未受到新型流感病毒的影响。     

2016—2019年苏州大学附属儿童医院呼吸道感染住院患儿流感监测分析（附742例报告）

目的　探讨苏州大学附属儿童医院呼吸道感染住院患儿流感监测情况。方法　分析2016年1月至2019年12月在苏州大学附属儿童医院呼吸科7322例因急性呼吸道感染（ARTI）住院患儿流感病毒感染资料。采用RT-PCR法进行流感病毒的检测,并进行A/H1N1及A/H3N2、B/Victoria及B/Yamagata的亚型鉴定。结果　（1）7322例住院患儿中,共检出流感病毒阳性742例（10.1％）,2016—2019年各年分别为10.4%、8.6%、6.0%、15.2%。（2）流感病毒-A检出阳性率（6.7%）高于流感病毒-B（3.6%）,以A/H1N1亚型最常见（45.0%）,其他依次为B/Victoria（26.4%）、A/H3N2（19.1%）、B/Yamagata（7.5%）,有4例A/H1N1+B/Yamagata混合感染、10例A/H3N2+ B/Victoria混合感染。（3） ＞3～5岁组流感病毒阳性率最高（14.3%）,其次是＞1～3岁组（12.0%）,流感病毒-B发病年龄［38.0（13.0,56.0）个月］大于流感病毒-A［16.0（7.0,38.0）个月］（Z＝-6.456,P＜0.001）。（4）以冬季阳性检出率最高,占流感总检出率的54.9%,其次是春季（36.0%）,2017年12月至2018年2月有一流行高峰。（5）流感病毒易发生混合感染（64.4％）,最常见的混合感染病原是流感嗜血杆菌（21.2%）,其次是肺炎链球菌（17.5%）和肺炎支原体（15.0%）。（6）95.8%的住院患儿流感合并肺炎,最主要的症状是发热（86.7%）、咳嗽（98.1%）,其次是消化道症状（51.5%）。结论　流感病毒是苏州大学附属儿童医院呼吸道感染住院患儿的重要病原,以A/H1N1亚型最常见,不同年份、季节、月份及年龄流行的流感病毒亚型存在一定差异。＞3～5岁年龄组最多,冬季发病率最高,以肺炎为主要疾病表现,主要临床表现是发热和咳嗽,流感病毒易发生混合感染,多数患者预后良好,均未发生死亡。     

急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物中呼吸道合胞病毒亚型的检出分析

目的探讨急性呼吸道感染患儿呼吸道合胞病毒(RSV)亚型的流行规律。方法应用直接免疫荧光法筛检2006年1月至2012年12月苏州地区42 208份来自急性呼吸道感染住院患儿的鼻咽分泌物标本的RSV病毒抗原;随机抽取不同年份RSV流行季节的RSV阳性标本,采用实时荧光PCR鉴定亚型。结果 RSV流行呈季节性,当年11月至次年3月为高峰期,而当年5至9月为RSV检出低谷期;从2006年至2012年,不同年份间高峰期的RSV阳性检出率差异有统计学意义(χ2=280.09,P0.01)。在398份不同年份高峰期的RSV抗原阳性标本中,检出A亚型319份(80.15%),B亚型63份(15.83%),未检出16份(4.02%),不同年份高峰期之间RSV亚型分布的差异有统计学意义(P0.01)。多数年份RSV流行以A亚型为主,在高峰期RSV检出率最低的2008—2009年A、B亚型同时流行,随后的2009—2010年以B亚型为主。结论苏州地区2006年至2012年,前四个流行季RSV检出率呈现周期性隔年增高趋势,之后两个流行季RSV感染呈持续高发趋势,急性呼吸道感染住院患儿RSV以A亚型为主。     

2006-2008�궬������³ľ���к�������ȾסԺ����������ԭ�о�

目的了解冬春季呼吸道感染住院患儿中7种常见呼吸道病毒的感染状况。方法采集2006年11月至2007年5月及2007年11月至2008年5月于新疆维吾尔自治区人民医院儿科住院的共479例呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物,用直接免疫荧光方法,检测呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)、甲型流感病毒(IfuA)、乙型流感病毒及副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(ParaⅠ、Ⅱ、Ⅲ)型7种常见呼吸道病毒抗原。结果 2006—2007年冬春季7种病毒阳性检出率为24.3%,2007—2008年冬春季阳性检出率为41.8%。2年冬春季7种病毒中RSV检出率均占首位,分别为20.1%及32.3%。结论 RSV感染是新疆维吾尔自治区人民医院冬春季呼吸道感染住院患儿的最主要呼吸道病毒病原。ADV及ParaⅢ型感染位居第二、三位,而其他4种病毒感染少见。     

2004年11月～2005年3月北京地区儿童流行性感冒病原学检测分析

目的对北京地区2004年11月～2005年3月流行性感冒患儿进行病原学检测及分析。方法狗肾传代细胞（MDCK）进行流感病毒分离，用血凝试验、血凝抑制试验进行型和亚型的鉴定；用快速酶联免疫法检测A型及B型流感病毒抗原试剂盒检测患儿咽拭子中的流感病毒抗原。结果217例患儿中111例检测出流感病毒，检出率为51％（111／217），流感病毒A型28例（28／111），占检出数的25．3％，流感病毒B型82例（82／tit），占检出数的73．8％，流感病毒A＋B型1例（I／111）。占检出数的0．9％。111例流感病毒检测阳性患儿中病毒分离与快速诊断二项同时阳性75例。二者阳性符合率67．5％。结论北京地区2004年11月～2005年3月流感流行季节流感病毒以B型为优势株。流感快速诊断试剂盒可快速、准确地检测出流感病毒及型别。     

Antibody responses to influenza B viruses in immunologically unprimed children

The cocirculation in several parts of the world of influenza viruses B/Yamagata/16/88 and B/Victoria/2/87, which are genetically and antigenically divergent, has prompted the question of whether immunization with one viral antigen is sufficient for protection against both strains. Twenty-three high-risk infants and young children were immunized with a commercial trivalent influenza vaccine containing the antigens of influenza virus B/Yamagata/16/88. When antibodies against influenza viruses B/Yamagata/16/88 and B/Victoria/2/87 were determined, increases developed uniformly to both in the sera of primed children previously exposed to influenza virus B/Victoria/2/87 by immunization or infection. Antibodies against B/Yamagata/16/88 developed in the sera of unprimed children with titers similar to those of the primed children. However, antibodies to B/Victoria/2/87 were not detected in the sera of the unprimed children. These data suggest that children without appropriate immunologic priming may not be protected against an infection with a B/Victoria/2/87 strain after vaccination with a B/Yamagata/16/88 strain. Immunization with more than one influenza B virus strain may be desirable in some high-risk pediatric patients if divergent influenza B viruses circulate.     

流感病毒快速检测方法在儿童流感样病例病原诊断中的应用

目的 对一种流感病毒快速检测方法在儿童流感样病例病原诊断中的应用效果进行评估。方法 2010年12月至2011年4月采集流感样病例患儿咽拭子标本350例,使用甲型及乙型流感病毒抗原检测试剂盒（QuickNaviTM-Flu,胶乳免疫层析法）进行抗原检测,并与病毒分离法进行比较。对于抗原检测和病毒分离法结果不相符的标本采用RT-PCR验证。结果 QuickNaviTM-Flu抗原快速检测流感病毒的结果与病毒分离法的一致性好,其检测甲型流感病毒的敏感度为89.9%,特异度为94.4%。经RT-PCR验证,14例抗原检测与病毒分离法结果不相符样本中13例结果为阳性(与抗原检测一致),使得该抗原检测方法的敏感度和特异度升至91.0%和99.6%。抗原检测乙型流感病毒经RT-PCR验证前后的结果一致,敏感度和特异度分别为87.5%和100%。该方法检测出的阳性标本中包括了甲3型、乙型（Victoria和Yamagata系）流感病毒和新发的2009甲型H1N1,并与常见的呼吸道病毒之间无交叉反应。结论 QuickNaviTM-Flu作为流感病毒抗原检测的试剂盒,可一次同时检测出甲型和乙型流感病毒,耗时短,操作简便,具有良好的敏感度和特异度,适用于流感样病例病原的快速诊断。     

Influenza B infections in children: A review

Influenza B (IFB) virus belongs to the Orthomyxoviridae family and has two antigenically and genetically distinct lineages; B/Victoria/2/87-like (Victoria lineage) and B/Yamagata/16/88-like (Yamagata lineage). The illness caused by IFB differs from that caused by influenza A. Outbreaks of IFB occur worldwide and young children exposed to IFB are likely to have a higher disease severity compared with adults. IFB mostly causes mild to moderate respiratory illness in healthy children. However, the involvement of other systems, a severe disease especially in children with chronic medical conditions and immunosuppression, and rarely mortality, has been reported. Treatment with oseltamivir or zanamivir decreases the severity of illness and hospitalization. Due to the enormous health and economic impact of IFB, these strains are included in vaccines. IFB illness is less studied in children although its impact is substantial. In this review, the epidemiology, clinical manifestations, treatment, prognosis, and prevention of IFB illness in children are discussed.     

2004年北京婴幼儿中甲3型流感病毒血凝素基因特性对其抗原性改变的提示

目的了解2004年流感流行季节（2004年8月—2005年4月）北京地区婴幼儿急性呼吸道感染患儿中分离到的甲3型流感病毒是否存在抗原性的改变以及其变异程度。方法提取1株于2004年3月和32株于2004年流感流行季节从北京地区急性呼吸道感染患儿中分离到的甲3型流感病毒的病毒RNA,经RT—PCR扩增得到HA1区基因片段并进行核苷酸序列测定,使用生物信息软件分析HA1区基因序列。结果所测定的血凝素HA1区基因均为987bp,编码一个含329个氨基酸的蛋白质。将33株甲3型流感病毒流行株的血凝素（HA1）氨基酸序列与近年WHO推荐的参考疫苗株比较,我们发现一致的多处位点的氨基酸突变,而且突变位点涉及2个抗原决定簇（A、B）和受体结合部位。而2004年3月分离到的毒株在进化分析和氨基酸变异上均不同于2004年流行季节的毒株。结论对血凝素基因HA1区的序列分析结果提示2004-2005年流行季节的甲3型流感病毒较春季的流行株和2004年疫苗株出现了较大的漂移,提示其抗原性可能出现了改变。这种变异对于病毒抗原性的影响以及对于疫苗效果评价的意义值得密切关注。