α平滑肌肌动蛋白和转化生长因子β1在小管间质纤维化模型大鼠肾组织中的表达

目的 探讨肾小管上皮细胞－肌纤维母细胞表型转化在肾间质纤维化形成中的作用。方法 制备大鼠单输尿管梗阻模型，在光学显微镜下观察大鼠肾组织病理变化，采用免疫组化法检测肾组织中α平滑肌肌动蛋白（α－SMA）和转化生长因子β1（TGF－β1）的表达，并采用计算机图像软件进行定量分析。结果 肾脏病理检查显示形态学改变符合肾小管间质纤维化的病理变化；在输尿管梗阻14、28d后肾组织α－SMA和TGF－β1表达较对照组增加（P＜0.05）。结论 α－SMA可作为肾小管上皮细胞－肌纤维母细胞表型转化的重要标志物，TGF－β1可能参与了肾小管上皮细胞－肌纤维母细胞表型转化，且是进一步导致肾间质纤维化的重要因素。     

胰岛素样生长因子1对大鼠肾间质纤维化组织中CTGF的表达影响

目的观察胰岛素样生长因子1（IGF-1）对肾间质纤维化大鼠结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法 30只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、IGF-1组,每组10只。应用单侧输尿管结扎制备肾间质纤大鼠模型。假手术组打开腹腔后即缝合;模型组每日腹腔注射生理盐水0.5ml;IGF-1组腹腔注射重组人IGF-1 750ng.kg-1.d-1。术后第14d麻醉大鼠后取材,检测肾功能,观察Ⅳ型胶原蛋白、结缔组织生长因子（CTGF）的表达。结果模型组血肌酐、尿素氮、Ⅳ型胶原蛋白、CTGF的表达水平均高于假手术组,差异有统计学意义（P〈0.05）;IGF-1干预后,IGF-1组血尿素氮、血肌酐、Ⅳ型胶原蛋白、CTGF的表达水平均高于假手术组及模型组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 IGF-1参与梗阻性肾病的病理生理过程,尤其在肾间质纤维增生过程中起着重要作用。     

冬虫夏草对梗阻性肾病大鼠肾间质表皮生长因子及转化生长因子-β1表达的影响

目的探讨冬虫夏草对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的防治作用及可能机制。方法将大鼠分成3组:假手术组(SOR组)、单侧输尿管梗阻手术组(UUO组)和冬虫夏草治疗组(CST组)。无菌条件下UUO组及CST组均进行左侧输尿管结扎手术,而SOR组仅分离左侧输尿管但不结扎及剪断输尿管。于手术当天开始CST组予冬虫夏草菌粉,SOR组及UUO组予蒸馏水,均每天一次性灌胃。于术后第7、14、21、28天分别检测血尿素氮、血肌酐;梗阻肾组织行HE染色,ELISA测定表皮生长因子-β1(EGF)及Western blot检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果 3组大鼠的血尿素氮、血肌酐值于各时间点的差异无统计学意义(P>0.05);CST组HE染色见肾间质纤维化程度较UUO组减轻;CST组肾组织TGF-β1的表达明显低于UUO组(P<0.05),EGF的表达明显高于UUO组(P<0.05)。结论冬虫夏草可能通过调节TGF-β1及EGF的表达而减轻输尿管梗阻引起的肾间质纤维化。     

缬沙坦对自发性高血压大鼠肾间质纤维化及转化生长因子-β_1表达的影响

目的:观察转化生长因子-β1(TGF-β1)在自发性高血压大鼠(SHR)肾间质的表达,探讨血管紧张素Ⅱ受体(AT1)拮抗剂缬沙坦(Valsartan)对肾间质纤维化的作用。方法:20只12周龄雄性SHR大鼠随机分为阳性对照组(SHR组)和缬沙坦组(VAL组)各10只,VAL组每只大鼠予以缬沙坦30mg/(kg·d)灌胃,共12周。取10只12周龄雄性WKY大鼠测量不同时期(12周,24周)大鼠尾动脉收缩压(SBP)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、尿β2-微球蛋白(β2-MG)的变化情况;免疫组织化学方法检测TGF-β1、Ⅲ型胶原的蛋白表达,RT-PCR方法检测TGF-β1 mRNA在肾间质的表达水平。结果:①同WKY组、VAL组同期相比,SHR组的SBP、尿β2-MG均显著增高(P<0.05,P<0.01)。②免疫组化显示TGF-β1、Ⅲ型胶原在24周SHR组肾间质的表达明显增多(P<0.05);与SHR组相比,VAL组TGF-β1、Ⅲ型胶原明显减少(P<0.05);PCR显示TGF-β1mRNA在24周SHR组肾间质中的表达较同期WKY组明显增强。结论:TGF-β1是参与高血压肾间质纤维化的重要细胞因子之一;缬沙坦能抑制TGF-β1在SHR肾脏的表达,显著减少尿蛋白,具有抑制肾间质纤维化的作用。     

大黄素对肾纤维化大鼠肾组织中基质金属蛋白酶组织抑制物-1表达的影响

目的 探讨中药大黄素对肾阃质纤维化模型大鼠肾组奴中基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)表迭的影响.方法 160只Wister大鼠随机分成四组:正常对照组、假手术组、模型组及大黄素治疗组.制备单侧输尿管梗阻(UUO)模型.治疗组在UUO的基础上每天以大黄素40 mg/kg灌胃,采用病理及免疫组化的方法动态观察各组大鼠术后d1、d3、d7、d14梗阻饲肾脏的组织学变化和TIMP-1在梗阻肾小管间质中表达情况.结果 模型组TIMP-1的表达持续增加;治疗组TIMP-1的表达水平低于模型组(P<0.01).结论 中药大黄素可以通过抑制TIMP-1的表达来发挥其延缓肾间质纤堆化进程的作用,对肾脏有保护作用.     

加味黄连阿胶汤对顺铂肾毒性大鼠TGF-β_1表达的影响

[目的]观察加味黄连阿胶汤对TGF-β1表达的影响。[方法]将SD大鼠随机分为5组,每组12只。除正常对照组外,其余各组给予DDP5mg/kg,正常对照组用等量生理盐水替代DDP尾静脉注射。加味黄连阿胶汤低剂量组和高剂量组分别给予加味黄连阿胶汤,连用8周,硫代硫酸钠治疗组注射顺铂的同时,给与硫代硫酸钠注射。实验结束时收集24h尿液测尿蛋白、尿NAG的含量,股动脉采血测血肌酐、血尿素氮的水平,剖取肾脏组织行HE、免疫组织化学染色,检测TGF-β1在肾组织的表达情况,图像分析技术测定TGF-β1蛋白表达的平均吸光度值。[结果]模型组大鼠24h尿蛋白定量、NAG含量及血肌酐、血尿素氮均明显高于正常对照组。用药结束后,硫代硫酸钠治疗组及加味黄连阿胶汤各组24h尿蛋白定量、NAG含量及血肌酐、尿素氮均明显低于模型组,与正常对照组相比无显著性差异。与模型组相比,加味黄连阿胶汤各组及硫代硫酸钠治疗组TGF-β1的平均吸光度均有显著差异,且加味黄连阿胶汤各治疗组优于硫代硫酸钠治疗组。[结论]加味黄连阿胶汤能降低顺铂肾毒性大鼠24hUpro、NAG含量及血肌酐、血尿素氮水平,下调肾小管上皮细胞内TGF-β1的表达,减轻顺铂引起的肾小管和肾小管间质损伤。     

水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠转化生长因子-β_1 mRNA和金属蛋白酶组织抑制物-1 mRNA表达的影响

目的探讨水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠肾脏病理、肾组织Ⅲ型胶原蛋白及转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA和金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)mRNA表达的影响。方法 SD大鼠72只随机分为假手术组、模型组和治疗组,每组24只。行单侧输尿管梗阻(UUO)术诱导肾小管间质纤维化模型。治疗组大鼠给予30 mg.kg-1水飞蓟素,模型组及假手术组给予生理盐水灌胃。分别于UUO术后第7、14、21天各组随机处死8只大鼠,光镜下观察肾组织的病理改变,免疫组织化学法评价肾组织Ⅲ型胶原蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组肾组织TGF-β1mRNA及TIMP-1 mRNA的表达水平。结果各时间点肾小管间质损伤和肾组织Ⅲ型胶原蛋白表达量在治疗组和模型组均较假手术组明显增多(P均<0.01),治疗组较模型组则明显减轻(P均<0.05)。各时间点治疗组和模型组肾脏TGF-β1mRNA和TIMP-1 mRNA表达量明显高于假手术组(P均<0.01),治疗组则明显低于模型组(P均<0.05)。UUO大鼠肾间质中TGF-β1mRNA、TIMP-1 mRNA表达量与肾小管间质损伤评分均呈正相关(r=0.915、0.838、P均<0.01)。TGF-β1mRNA、TIMP-1 mRNA表达量与肾组织Ⅲ型胶原蛋白表达量均呈正相关(r=0.833、0.786、P均<0.01)。结论在UUO大鼠模型中,水飞蓟素通过下调TGF-β1mRNA、TIMP-1 mRNA的表达,减少Ⅲ型胶原的产生,从而发挥延缓肾间质纤维化的作用。     

肝细胞生长因子在慢性肾衰竭大鼠肾组织中表达的研究

目的研究肝细胞生长因子（HGF）对慢性肾衰竭大鼠肾组织中基质金属蛋白酶2（MMP-2）及其抑制剂（TIMP-2）表达的影响,探讨HGF延缓肾衰竭进程的可能机制。方法给大鼠腺嘌呤250mg／（kg·d）灌胃建立慢性肾衰竭模型;对照组用同体积2％淀粉溶液同时间灌胃。免疫组化检测正常对照组、慢性肾衰竭模型组HGF．MMP-2及TIMP-2的表达。结果较正常对照组,各时间点模型组肾脏病理损害进行性加重;免疫组化示,灌胃第7天,HGF、MMP-2表达明显增加至第14,21天,HGF、MMP-2表达缓慢下降;TIMP-2持续上升;HGF表达与MMP-2表达呈正相关,与TIMP-2呈负相关。结论HGF抗肾间质纤维化作用可能与MMP-2、TIMP-2密切相关。     

靶向沉默转化生长因子β1表达的短发夹RNA的筛选

目的:筛选可靶向沉默转化生长因子β1(TGF-β1)表达的短发夹RNA(shRNA)。方法:设计和制备靶向沉默TGF-β1的5条shRNA,并构建靶向沉默TGF-β1的p-Genesil-shRNA真核表达重组质粒及含无关shRNA的pGenesil-1-shRNA-vect对照质粒,酶切和测序方法进行鉴定。通过脂质体介导分别将p-Genesil-1-shRNA-vect质粒和各重组表达质粒转染入高糖或AngⅡ环境激活的HKC细胞(分别命名为p-Genesil-1-vect细胞及p-Genesil-shRNA1~5细胞),Western blot方法检测沉默TGF-β1表达的效果。结果:酶切和测序结果显示,5种重组质粒均可切出与预计相符的目的片段,所有shRNA编码序列与设计一致。与HKC细胞相比,高糖或AngⅡ刺激的HKC细胞和pGenesil-1-vect细胞中TGF-β1表达均增高(F=74.188,P<0.001),而后二者之间TGF-β1表达差异无统计学意义(P>0.05)。与高糖或AngⅡ刺激的p-Genesil-1-vect细胞相比,高糖或AngⅡ刺激的各组p-Genesil-shRNA细胞中TGF-β1表达均降低(F=139.695,P<0.001)。结论:筛选出1条可靶向沉默TGF-β1表达的shRNA。     

福辛普利对肾间质纤维化大鼠转化生长因子β激活激酶表达的下调作用

目的观察福辛普利对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾脏转化生长因子β激活激酶(TGF-activated kinase1,TAK1)表达的影响,及其对肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的保护作用。方法采用单侧输尿管结扎术致RIF大鼠模型。72只大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组、UUO模型组及福辛普利治疗组,每组24只。治疗组于术后2d给予福辛普利10mg/(kg.d)灌胃,假手术组与模型组每天给予等量生理盐水灌胃。各组分别于术后7、14、21d处死8只大鼠,采用HE及Masson染色观察梗阻侧肾脏病理变化,原位杂交、RT-PCR及Western blot检测肾组织TAK1的表达。结果模型组大鼠梗阻侧肾脏肾小管间质损伤指数明显高于同期假手术组(P0.05),福辛普利干预后肾小管间质损伤指数明显降低(P0.05);TAK1mRNA和蛋白表达情况:模型组各时间段TAK1表达升高,且随着病理损害的进展呈现下降趋势,但表达量仍显著高于同期假手术组(P0.05),经福辛普利干预后表达显著下降(P0.05)。结论福辛普利可能通过下调TAK1表达,从而减轻UUO术后肾组织间质纤维化的病程进展。     

选择性环氧化酶2抑制剂对梗阻性肾病大鼠肾组织中核因子кB和转化生长因子β_1的调节

目的:探讨塞来昔布与吲哚美辛比较对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型肾脏的保护作用及可能机制。方法:将塞来昔布和吲哚美辛应用于UUO大鼠,4周后测定血清肌酐及尿素氮水平,放射免疫法测定大鼠尿液血栓烷素B(2TXB2)浓度,免疫组化法检测肾脏核因子кB(NF-кB)和转化生长因子β(1TGF-β1)的表达。结果:塞来昔布及吲哚美辛均降低尿TXB2浓度,塞来昔布组更为显著;与对照组相比,其余3组NF-кB及TGF-β1的蛋白表达水平均显著上升,肾间质纤维化严重;塞来昔布治疗后,上述蛋白表达水平显著下调,肾间质纤维化程度明显减轻。结论:塞来昔布能减轻UUO大鼠肾间质纤维化,下调NF-кB的表达,减少肾间质单核巨噬细胞浸润可能是其机制之一。     

肾络通对肾间质纤维化实验大鼠Ⅲ型胶原及转化生长因子-β1的影响

目的观察肾络通对实验大鼠肾间质纤维化的拮抗作用并探讨其作用机制。方法选择健康、雌性SD大鼠50只,采用单侧输尿管结扎诱导的大鼠肾间质纤维化模型,将其随机分为缬沙坦组、肾络通组、肾络通加缬沙坦组与模型组,并设假手术组。观察实验大鼠梗阻侧肾脏组织形态学改变及ColⅢ、TGF-β1蛋白及其mRNA的表达。结果模型组及各治疗组与假手术组相比均呈现程度不同的病理损害。ColⅢ蛋白的沉积:阳性面积、积分光密度5组间比较差异均有显著性意义(P<0.01),各治疗组与模型组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。TGF-β1蛋白及其mRNA的表达、分布及半定量分析结果:5组间比较差异均有显著性意义(P<0.01),各治疗组与模型组比较,TGF-β1的表达间差异均有显著性意义(P<0.05)。结论输尿管梗阻后肾组织呈现程度不同的病理损害,肾间质ColⅢ沉积明显增加,这可能与TGF-β1蛋白及其mRNA的表达增加有关。肾络通及缬沙坦对其有一定的抑制作用,且肾络通与缬沙坦联合用药的作用比单一用药更强。     

酒精性肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1／Smads信号分子表达的变化

目的观察TGF-1／Smads信号分子在酒精性肝纤维化大鼠肝组织中的变化,探讨酒精性肝纤维化的发病机制。方法50只SD大鼠,随机分成模型组和对照组各25只。模型组用56度白酒灌胃（15m1．kg-1·d-1）致肝纤维化,对照组以等量生理盐水代替灌胃。6个月后全部处死取肝待检。采用HE染色观察肝纤维化程度,免疫组化法观察肝组织中TGF-β1蛋白的表达水平,RT-PCR法观察肝组织中TGF—β1和SmadsmRNA的表达水平。结果6个月酒精灌胃能成功制作大鼠酒精性肝纤维化模型。和对照组相比较,模型组肝组织中TGF—p1蛋白表达水平显著升高（P〈0．01）,TGF-β1,smad3,samd4mRNA表达水平显著升高（均P〈0．01）,而smad7mRNA水平显著降低（P〈0．05）。结论TGF-βl／Smads信号通路参与酒精性肝纤维化的形成过程,其中Smad7起着对肝纤维化负调控的作用。     

硒对肾间质纤维化大鼠肾组织结缔组织生长因子表达及肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的探讨硒对肾间质纤维化大鼠肾组织结缔组织生长因子（CTGF）表达及肾小管上皮细胞表型转化的影响。方法以单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型。将54只SD大鼠随机分为假手术组（A组）、单侧输尿管梗阻（UUO）组（B组）、U-UO+硒组（C组）,每组18只。C组给予亚硒酸钠0.2mg/（kg·d）灌胃。A、B组给予同等剂量0.9%氯化钠溶液灌胃。术后第7、14、21天各组随机处死6只大鼠,肾组织行HE、Masson染色评定肾间质纤维化程度,免疫组织化学半定量法检测CTGF和α-平滑肌肌动蛋白（α- SMA）的表达。Western印迹法检测肾组织CTGF蛋白表达。化学比色法检测肾组织氧化指标谷胱甘肽过氧化物酶（GSH- Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的表达水平。结果术后各时点C组肾间质纤维化程度较B组明显减轻（P＜0.05）,肾组织CTGF和α- SMA的表达强度明显低于B组（P＜0.05或0.01）、GSH- Px和SOD水平明显高于B组（P＜0.05）,MDA含量明显低于B组（P＜0.05）。B组肾组织中CTGF、a- SMA表达量之间呈正相关（P＜0.05）,CTGF和a- SMA表达量与肾间质纤维化病变程度呈正相关（P＜0.05）。结论硒可以减轻UUO模型大鼠肾间质纤维化程度,其机制可能与硒的抗氧化作用、下调肾组织CTGF的表达、抑制肾小管上皮细胞－肌成纤维细胞转分化有关。     

氯沙坦钾对1型糖尿病大鼠肾组织转化生长因子-β1和结缔组织生长因子表达的影响

目的研究氯沙坦钾对1型糖尿病大鼠肾组织转化生长因子-β1（TGF-β1）和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法建立链脲佐菌素（STZ）诱导的1型糖尿病大鼠模型,随机分为正常对照组（A组）、糖尿病组（B组）、氯沙坦钾治疗组（c组）,每组18只。4周、8周、12周后观察大鼠血糖、尿白蛋白排泄率的变化和肾组织TGF-β1、CTGF的表达水平以及TGF-β1、CTGFmRNA的表达;光镜下观察12周后肾组织的形态变化。结果①各组大鼠血糖、尿白蛋白排泄率、TGF-β1、CTGF的表达水平和TGF-β1、CTGFmRNA的表达除了血糖以外的指标,与A组比较,B组和C组明显增高（P〈0．05）,与B组相比,C组有所下降（P〈0．05）;②光镜下观察12周后B组肾小球肥大,肾小管扩张明显,C组肾小球肥大和肾小管扩张程度较轻。结论氯沙坦钾可下调TGF-β1、CTGF的表达,可减少肾组织的损害。     

冷缺血损伤对大鼠供肾转化生长因子β1表达的影响

目的探讨冷保存对转化生长因子β1(TGFβ1)在大鼠肾小管上皮细胞表达的影响。方法选择Wistar大鼠40只,采取原位灌注整块肾脏切取,HC-A(肾脏保护液)灌注,在0～4℃下分别保存0,12,24,36和48h,采用免疫组织化学术,原位杂交术分别检测肾小管上皮细胞TGFβ1表达水平。结果在0h组,12h组大鼠肾小管上皮细胞中TGFβ1极少表达,两组TGFβ1蛋白,mRNA平均阳性单位(PU值)分别为(6.37±2.77),(5.29±2.15);(6.11±1.82),(5.90±2.40);差异均无显著性(P>0.05)。随着冷缺血时间延长至24、36及48h,TGFβ1蛋白,mRNA表达逐渐增加[24h组PU值分别为(10.20±3.27),(11.32±3.34);36h组PU值分别为(13.84±3.91),(15.47±4.21);48h组PU值分别为(17.17±3.96),(19.01±3.53)],各组间比较差异有显著性(P<0.05),各组与0h,12h组相比较差异亦有显著性(P<0.05)。结论冷缺血损伤促进大鼠肾脏转化生长因子-β1表达增加,促进细胞外基质的合成。     

复方四逆散对肝纤维化大鼠转化生长因子-β_1表达的动态影响

目的观察复方四逆散对肝纤维化大鼠血清转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,探讨其对肝纤维化的作用机制。方法 Wistar大鼠随机分成正常组和肝纤维化组、四逆散组、三七总皂苷组和复方四逆散组,采用CCl4形成肝纤维化模型,酶联免疫吸附法(ELISA法)测定血清中不同时段TGF-β1水平。结果复方四逆散组能更显著降低肝纤维化大鼠血清中TGF-β1水平,减轻肝纤维化程度。结论复方四逆散能有效抗大鼠肝纤维化,其作用机制可能与通过抑制TGF-β1表达和分泌有关。     

局灶节段硬化性肾炎患者血清肝细胞生长因子及肾组织中β-转化生长因子水平与肾纤维化的相关性

目的研究局灶节段硬化性肾炎(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)患者血清肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、肾脏组织中β-转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)与肾纤维化程度的相关性。方法选择2004年3月-2007年11月我院收治的FSGS患者80例,均行肾穿刺病理活检确诊。免疫组化SABC法检测肾组织中TGF-β水平,用放射免疫法检测肾脏组织匀浆Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)水平,生物素-亲和素酶联免疫吸附试验(ABC-ELISA)测定血清HGF水平,对检测结果进行相关性分析。结果FSGS患者血清HGF水平与肾组织中的Ⅳ-C水平呈负相关(P<0.05);肾组织中的TGF-β水平与Ⅳ-C水平呈正相关(P<0.05)。结论血清HGF、肾组织中的TGF-β对评估肾纤维化程度有一定的参考价值。     

丹参对大鼠肾问质纤维化肾组织TSP-1、VEGF及TGF-β1表达的影响

目的观察丹参提取液对肾纤维化模型大鼠肾组织血小板反应蛋白1（TSP-1）、血管内皮生长因子（VEGF）及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响。方法用单侧输尿管结扎方法复制大鼠肾纤维化模型,同时给予丹参提取液灌胃预防,并设立空白对照组、模型对照组,分别于造模2周后取大鼠肾脏组织,分别采用Masson染色观察各组大鼠肾组织病理变化,并采用免疫组织化学方法测定肾间质TSP-1、VEGF、TGF-β1的表达。结果丹参组VEGF表达明显增加,而TSP-1和TGF-β1的表达量明显低于模型组（P〈0．05）;丹参组和空白组比较,二者对TSP-1、TGF-β1及VEGF表达的影响无显著差异（P〉0．05）。结论丹参提取液可能通过调控TSP-1、TGF-β1及VEGF的表达,从而干预肾纤维化的发生。