多巴胺抑制PC12细胞增殖和诱导凋亡作用的研究

目的　研究多巴胺(DA)对PC12细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用,探讨帕金森病(PD)神经元的死亡机制。方法　应用免疫组织化学、流式细胞仪、电镜及电泳技术,研究DA对大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞的增殖抑制及诱导凋亡的作用。结果　适当浓度(0.5mmol/L)DA能显著抑制PC12细胞的生长并诱导其凋亡,在作用时间较短时(<12h)表现为对PC12细胞的生长抑制,此时流式细胞仪检测未见凋亡峰,但细胞周期显示S期细胞明显抑制。此时Bcl-2染色呈强阳性,电镜下细胞形态基本正常,可见线粒体、内质网肿胀及核分裂相减少。当作用时间延长时(>24h),流式细胞仪可见典型亚二倍体凋亡峰,此时电泳可见典型DNA“阶梯状”电泳带,电镜可见核浓缩、染色体边聚等凋亡特征性核结构改变,Bcl-2染色阳性率降低。结论　DA具有抑制PC12细胞增殖和诱导凋亡作用,细胞凋亡参与了PD的病变过程。     

6羟多巴胺诱导PC12细胞凋亡的研究

为探讨帕金森病(PD)黑质多巴胺神经元的死亡机制。本文用DNA末端标记法,借助荧光显微镜观察6羟多巴胺对儿茶酚胺细胞株PC12细胞凋亡的影响。结果发现:低浓度范围内的6羟多巴胺可诱导PC12细胞凋亡,而单胺摄取抑制剂脱甲丙咪嗪则可抑制其诱导的细胞凋亡。本文提示凋亡可能参与了PD早期病变过程。     

6—羟基多巴胺诱导PC12细胞凋亡及其可能分子机制

探讨神经毒素 6 羟基多巴胺 (6 OHDA)诱导PC12细胞死亡本质及其可能分子机制。不同剂量 6 OHDA处理PC12细胞 2 4h后 ,分别用流式细胞仪、透射电镜、TUNEL染色和DNA电泳检测细胞凋亡 ;5 0 μmol/L 6 OH DA处理PC12细胞 2 0h后 ,用RT PCR检测caspase 3表达 ;用westernblot检测Caspase 3p32蛋白酶原的切割。结果如下 :①流式细胞仪检测PC12细胞凋亡百分率 ,对照组为 1.10 %± 1.14% ,30 ,4 0 ,5 0 μmol/L 6 OHDA处理组分别为 4 .73 %± 1.0 6% ,10 .15 %± 1.2 1%和 19.94 %± 2 .5 1% ,较对照组均有显著性差异 (P <0 .0 1)。 4 0 ,5 0 μmol/L 6 OHDA处理组透射电镜、TUNEL染色均证实存在大量凋亡细胞 ;5 0 μmol/L 6 OHDA处理组DNA电泳呈现一定间隔的“梯状”条带。② 5 0 μmol/L 6 OHDA处理组caspase 3mRNA水平增高约一倍 ,并且检测到Cas pase 3p2 0活性片段。本研究提示 6 OHDA能诱导PC12细胞凋亡 ,并呈剂量依赖性 ;激活Caspase 3蛋白酶可能参与 6 OHDA诱导PC12细胞凋亡过程     

含巯基抗氧化剂对多巴胺诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的 观察不同的抗氧化剂对多巴胺诱导的PC12细胞凋亡的保护作用,探讨帕金森病(PD)神经元的死亡机制.方法 应用TUNEL染色及电泳技术,观察4种不同的抗氧化剂对多巴胺(DA)诱导的PC12细胞凋亡的保护性作用. 结果 适当浓度的多巴胺可诱导PC12细胞凋亡,抗氧化剂GSH及N-AC在10mmol/L浓度下能显著抑制DA诱导的PC12细胞凋亡(P<0.05),而相同浓度的维生素C及维生素E则无保护作用.结论 细胞凋亡可能参与了PD的发病过程,适当的抗氧化剂对于DA诱导的细胞凋亡具有保护作用.     

L-dopa诱导PC12细胞凋亡及相关基因表达的实验研究

目的 探讨Ｌ－ｄｏｐａ在帕金森氏病（ＰＤ）治疗中的神经毒性作用及其毒性机制。方法以ＰＣ１２细胞为多巴胺神经元的细胞模型,利用ＤＮＡ凝胶电泳及图像分析仪、ＴＵＮＥＬ法、流式细胞术及免疫荧光技术检测不同浓度的Ｌ－ｄｏｐａ对ＰＣ１２细胞的凋亡诱导作用及凋亡相关基因Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ表达的改变。结果 ２０μｍｏｌ／Ｌ、５０μｍｏｌ／Ｌ、１００μｍｏｌ／Ｌ、１５０μｍｏｌ／Ｌ处理组凋亡率分别为２．５％、１２     

6-OHDA诱导PC12细胞凋亡及作用机制

目的 探讨6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导PC12细胞损伤的可能作用机制.方法 不同剂量6-OHDA加入培养的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cell,PC12)24h后,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率以及Bax、Bcl-2的蛋白表达.结果 在加入不同浓度的6-OHDA时PC12细胞活力显著下降,细胞凋亡百分率对照组为8.73±1.09,不同浓度的6-OHDA处理组显著上升,分别为10.97±1.52、25.77±0.95、57.94±1.23,较对照组有显著性差异(P<0.01),并且Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升,Bcl-2/Bax比值和正常组比较有显著性差异(P<0.01).结论 6-OHDA能显著诱导PC12细胞损伤,并呈剂量依赖性,其作用机制涉及到促进细胞内bax,以及抑制Bcl-2的表达.     

硫丹对PC12细胞增殖的影响及诱导其凋亡的研究

目的观察硫丹(ES)对培养的PC12细胞增殖和形态学的影响及其诱导PC12细胞凋亡作用.方法不同浓度MPP+和ES分别干预PC12细胞24h,利用TUNEL染色、流式细胞仪、电镜检测观察其结果.结果①1 mmol·L-1MPP+组细胞数明显下降并有形态学改变;而0.03 mmol·L-1ES组细胞数就明显下降和有形态学改变,以0.01 mmol·L-1组最明显.②MPP+和ES均可诱导PC12细胞凋亡,电镜下0.06mmol·L-1ES组有较多凋亡细胞和少量坏死细胞.结论ES对PC12细胞有毒性作用,其机制可能与细胞凋亡有关.     

胰岛素可抵抗MPP^＋诱导的PC12细胞的凋亡

目的观察胰岛素在MPP+诱导PC12细胞凋亡中的干预作用.方法应用MTT法研究细胞活性的改变,应用HOECHST33258染色结合荧光显微镜技术及流式细胞技术检测不同药物对PC12细胞的凋亡诱导作用,应用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定胰岛素受体(insulin receptor,IR)mRNA的改变.结果①MPP+诱导PC12细胞凋亡,胰岛素可以抵抗此凋亡作用;②以上两种处理,均未见到胰岛素受体mRNA的改变,推测胰岛素受体的自身磷酸化有改变.结论胰岛素可以抵抗MPP+诱导的PC12细胞的凋亡.     

胰岛素受体磷酸化增加对MPP＋诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的:研究胰岛素抗MPP 诱导PC12细胞凋亡中胰岛素受体(IR)的变化。方法:应用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定胰岛素抗MPP 诱导PC12细胞凋亡过程中IRmRNA的基因表达,免疫沉淀Western印迹分析技术测定相同条件下IR的蛋白表达,应用IR自身磷酸化的特异阻断剂HNMPA-AM3,通过MTT法观察PC12细胞生存率的改变、瞬转IR质粒后再次观察细胞生存率的改变及进一步通过免疫沉淀Western印迹分析技术检测IR蛋白质磷酸化水平。结果:IR磷酸化程度的变化与细胞生存率的变化有关,HNMPA-AM3可阻断胰岛素对MPP 诱导的PC12细胞的抗凋亡作用,IR可增强胰岛素的抗凋亡作用。结论:IR磷酸化增加可抵抗MPP 诱导的PC12细胞的凋亡。     

奥氮平对无血清诱导PC12细胞凋亡的影响

目的:探讨奥氮平对无血清诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:以神经生长因子(NGF)诱导后的PC12细胞作为细胞模型,采用无血清培养诱导细胞凋亡。给予奥氮平后,采用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期以及Hoechst33342染色观察细胞形态学的改变。结果:奥氮平(100μM)组培养72h的细胞活性与对照组相比差异显著(P<0·05),奥氮平(12·5、25、50、200μM)组与对照组无明显差异;而各浓度氟哌啶醇组的细胞活性均低于对照组;流式细胞仪结果显示血清组、奥氮平组、氟哌啶醇组、对照组的调亡率依次是17·9%、36·6%、59·8%、51·9%,其中对照组、氟哌啶醇组大部分细胞滞留于G1期;奥氮平组Hoechst33342染色偶见凋亡细胞,以核浓缩为主,而对照组、氟哌啶醇组多见核碎裂。结论:奥氮平能保护PC12细胞免于无血清培养诱导的凋亡,可能是其神经保护作用机制之一。     

L—dopa诱导PC12细胞凋亡及Bcl—2、Bax表达的改变

目的：探讨L－dopa治疗帕金森病（PD）疗效减退的机制及其毒性作用机制。方法：以PC12细胞为多巴胺神经元的细胞模型,利用PI／HO33342双染结合荧光显微镜技术、电镜技术、流式细胞术及免疫荧光技术检测不同浓度的L-dopa对CPC12铁凋亡诱导作用及凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的改变。结果50、100、150μmol/L不同浓度L－dopa处理组凋亡率分别为12．4％、24．4％、37．2％、PI／HO33342双染可区别凋亡,坏死和正常细胞,且可以见到染色质碎裂;电镜下可见早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞,给予L-dopa处理后,Bcl-2的表达量减少,与凋亡率呈显著负相关;Bax的表达量增加,与凋亡率呈显著正相关。结论：L－dopa诱导PC12细胞凋亡且呈量效关系,提示L－dopa可能是通过凋亡途径损害多巴胺神经元导致疗效减退,其机制可能是通过改变Bcl-2/Bax的比值来介导细胞凋亡。     

Lactacystin诱导PC12细胞致帕金森病的实验研究

目的应用蛋白酶体抑制剂Lactacystin构建帕金森病细胞模型,从泛素-蛋白酶体功能角度探讨帕金森病的发病机制。方法Lactacystin(0、5、10、15和20μmol/L)分别处理PC12细胞24h,MTT法检测细胞活力;HE染色观察包涵体生成;免疫组织化学法观察α-synuclein在胞内聚集情况;AO/EB双染及电镜检测细胞凋亡。结果10μmol/L Lactacystin作用24h后细胞活力开始显著低于对照组(P<0.01),随着浓度大,细胞活力进一步下降,呈浓度依赖性(P<0.01);HE染色显示胞浆核周出现圆形或椭圆形嗜伊红的包涵体;免疫组化显示包涵体α-synuclein染色呈强阳性;10μmol/L Lactacystin作用细胞24h后AO/EB双染提示细胞早期凋亡;电镜显示细胞核变小偏位,部分胞核固缩、趋边、凝聚。结论Lactacystin对多巴胺能神经元有毒性作用,可形成胞浆内包涵体并诱导细胞凋亡。蛋白酶体功能异常可能在帕金森病发病机制中发挥重要作用。     

雌激素对MPP+诱导的PC12细胞损伤的防护作用

目的　探讨在离体的细胞培养物中 ,雌激素 (estrogen ,E)对 1 甲基 4 苯基吡啶离子(MPP+ )诱导的帕金森模型是否具有保护作用。方法　以PC12细胞为多巴胺能神经元的细胞模型 ,将MPP+ 或E加入培养的PC12细胞 ,四甲基偶氮唑盐 (MTT)法检测细胞活性及代谢状态 ,SABC法检测酪氨酸羟化酶 (TH)的含量 ,流式细胞术检测细胞凋亡率 ,比较各组的差异。结果　随MPP+ 浓度增加 ,细胞活性下降 ,MPP+ 浓度为 2 5 0 μmol/L时 ,吸光度A570 值为 0 30± 0 0 7,符合帕金森病细胞模型 ;随E浓度增加 ,细胞活性升高 ,呈量效依赖关系 ;当雌激素浓度 >10nmol/L ,细胞活性无明显增加。单纯用E组A570 值为 0 6 1± 0 17,比空白对照组 (0 4 9± 0 11)、MPP+ 组 (0 30± 0 0 7)、E +MPP+ 组 (0 5 6± 0 16 )细胞活性高 (P <0 0 5 ) ;TH阳性细胞平均吸光度E组 (0 4 6± 0 0 6 )比空白对照组 (0 2 2± 0 0 7)、MPP+ 组 (0 10± 0 0 3)、E +MPP+ 组 (0 2 4± 0 0 4 )高 (P <0 0 5 ) ;凋亡率E组(11 5 % )比对照组 (31 3% )、MPP+ 组 (6 3 5 % )、E +MPP+ 组 (33 6 % )低 (P <0 0 5 ) ,每组细胞数为 2× 10 5个 /ml。E +MPP+ 组比MPP+ 组细胞活性高 ,TH含量高 ,凋亡率低 (P <0 0 5 )。结论　雌激素对PC12细胞可     

美满霉素对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的在离体细胞培养中探讨美满霉素(Minocycline,MC)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP )诱导的帕金森病细胞凋亡模型的保护作用.方法将MC或MPP 加入培养的PC12细胞中,建立多巴胺神经元凋亡模型,四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞代谢活性,电泳法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果MPP 浓度为10μmol/L时建立多胺神经元凋亡模型;MC 100 μmol/L预处理可明显升高MPP 处理的PC12细胞活性;MC MPP 组细胞凋亡率显著低于MPP 组(P＜0.01),但仍明显高于阴性对照组(P＜0.05).结论MC对MPP 诱导的细胞凋亡有一定的保护作用.     

PC12细胞缺氧后细胞凋亡与DNA损伤相关基因表达关系的研究

目的 探讨PC12细胞缺氧后细胞凋亡与DNA损伤的关系。方法 采用TUNEL法,结合应用流式细胞术观察PC12细胞缺氧培养不同时间点细胞凋亡现象,以及DNA损伤相关基因表达的改变。结果 在缺氧0.5h开始出现凋亡细胞,引时P53、P21^waf1/cip1蛋白表达开始增高。至缺氧1h凋亡细胞达高峰,此时P53、P21蛋白表达最高（P＜0.05）。至缺氧6－12h,则以坏死为主,此时以上基因表达均减弱。结论 PC12细胞在缺氧早期（0.5-2h）主要出现以凋亡为主的细胞死亡,伴有DNA损伤相关基因表达的动脉改变,提示缺氧后PC12细胞凋亡部分是由于DNA损伤严重、损伤不能及时修复所致。     

1—甲基—4—苯基吡啶诱导PC12细胞凋亡的研究

为探讨帕金森病(PD)黑质多巴胺神经元的死亡方式,本文用DNA未端标记法,借助荧光显微镜观察黑质神经毒素MPP~+对儿茶酚胺细胞株PC12细胞凋亡的影响。结果发现,低浓度的MPP~+(20～80uM)可诱导PC12细胞凋亡,高浓度时(10～200uM)则主要引起细胞坏死。本文提示凋亡可能参与了PD多巴胺神经元死亡的早期阶段。     

银杏叶提取物对百草枯诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的:探讨银杏叶提取物(EGb761)对百草枯(PQ)诱导PC12细胞凋亡的保护作用。方法:4-甲基偶氮唑蓝(MTT)检测PC12细胞活性;流式细胞仪(FCM)测定PC12细胞凋亡百分率;Hoechst33342染色观察细胞凋亡;罗丹明123(Rh123)染色检测细胞线粒体膜电位(MMP)。结果:EGb76120,40μg·mL-1可明显减轻PQ对PC12细胞的细胞毒性,EGb761可使细胞活性增强,降低凋亡百分率,减少细胞凋亡数目,抑制细胞MMP的下降。结论:EGb761对PQ诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与抑制PQ引起的细胞MMP下降有关。     

骨髓基质干细胞与受损PC12细胞的共育体系减少PC12的凋亡

目的 建立体外骨髓基质干细胞(MSCs)与Aβ1-40损伤PC12的共育体系,探讨共育体系抑制Aβ1-40致PC12凋亡的效应与可能机制.方法 分别培养MSCs与PC12,以Aβ1-40刺激PC12后,用转移筛网转移PC12.实验分A组正常培养的PC12+MSCs共育;B组Aβ1-40刺激的PC12+MSCs共育;C组正常PC12的培养上清+MSCs;D组受损PC12上清+MSCs;E组普通1640培养的MSCs.用PI和Annexin-V进行细胞的双染凋亡检测及电镜检测PC12凋亡,以ELISA方法检测各组中上清液的TGF-β、NGF、BDNF、bFGF含量.结果 骨髓基质干细胞与Aβ1-40损伤PC12共育组即B组凋亡细胞数最少(B组46.17%±8.28%,对照组86.39%±9.34%,F=61.637,P＜0.01),ELISA结果显示各组均能检测到bFGF,B组上清中bFGF分泌最高[B组(598.76±41.32)pg/ml,对照组(296.43±47.86)pg/ml,F=24.15,P＜0.01)],各组均检测到TGF-β、NGF和BDNF分泌,但差异无统计学意义.结论 MSCs与Aβ1-40刺激的PC12的共育体系能减少受损PC12的凋亡.     

人工合成多肽FGL对神经细胞模型PC12细胞增殖与凋亡的影响**

背景: FGL是NCAM的核心活性多肽片段,可直接作用于成纤维细胞生长因子受体1,激活NCAM的信号传导途径。目的：观察FGL人工合成多肽联合培养对PC12细胞增殖和凋亡的作用。方法：将培养的PC12细胞分为对照组和实验组,实验组预先加入1%的FGL多肽溶液。分别于培养1,3,5,7,9 d采用细胞计数试剂8法检测细胞增殖情况。将PC12细胞分为正常组、实验组和损伤组,损伤组加入H2O2刺激16 h。实验组加入H2O2与FGL人工合成多肽刺激16 h,流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光定量PCR法检测PC12中的核转录因子κB mRNA表达。结果与结论：FGL人工合成多肽与PC12复合培养细胞生长良好,可明显促进PC12细胞的活性并且减低PC12 细胞凋亡并可明显降低凋亡模型中PC12细胞核转录因子κB基因的表达。说明FGL多肽可以明显促进PC12细胞增殖,并可以抑制PC12细胞凋亡。     

蛋白酶体抑制诱导的PC12细胞帕金森病模型

目的探讨蛋白酶体抑制剂对PC12细胞的作用以及用该药物制作帕金森病(PD)模型的可能性。方法用不同浓度蛋白酶体抑制剂PSI作用于PC12细胞24、48、72 h后,以MTT法检测细胞活性,荧光染色检测凋亡细胞百分率,HE染色观察细胞形态变化,透射电镜观察细胞超微结构变化。结果不同浓度PSI作用于PC12细胞24 h时,细胞存活率无变化;作用48~72 h时,1~20μmol/L PSI使细胞存活率分别降至47.03%~58.98%和19.58%~34.72%;凋亡细胞由1.15%升至5.27%。HE染色显示经PSI处理的PC12细胞胞浆内有嗜酸性包涵体出现,透射电镜下细胞呈凋亡的超微结构特点。结论PC12细胞蛋白酶体受抑模拟了PD的两大病理特点,蛋白酶体功能异常可能是PD的发病因素之一,短期抑制PC12细胞的蛋白酶体功能可作为PD的细胞模型。