WAF1在人脑胶质瘤中的定量检测及与肿瘤病理学相关性的研究

目的 探讨野生型Ｐ＾５３激活片段（ＷＡＦ１）在人脑胶质瘤中的表达及与肿瘤病理学的相关性。方法 用４６例胶质瘤组织及１２例脑外伤组织ＲＮＡ逆转录,然后用ＰＣＲ定量检测ＷＡＦ１ｍＲＮＡ。结果 及外伤ＷＡＦ１ｍＲＮＡ全部表达,用激光扫描仪检测的总面积及百分面积均大于胶质瘤,两者有显著性差异。胶质瘤ＷＡＦ１表达均在病理分级较低级别中。结论 ＷＡＦ１的有无表达及定量多少可以作为判断脑质瘤恶性程度及预后的一个     

脑星形胶质细胞瘤组织P21^WAF1／CIP1mRNA的表达与p53？…

目的：探讨脑星形胶质细胞瘤组织Ｐ２１＾ＷＡＦ１／ＣＩＰ２ｍＲＮＡ的表达与ｐ５３基因突变的关系及其意义。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对３８例新鲜脑星形胶质细胞瘤组织中上述两种基因进行研究。结果：ｐ５３基因在脑星形胶质细胞瘤组织中的突变率为２８．９％（１１／３８），且在Ⅲ、Ⅳ级肿瘤突变率显著高于Ⅰ～Ⅱ级者（Ｐ〈０．０５）；Ｐ２１＾ＷＡＦ１／ＣＩＰ１ｍＲＮＡ在Ⅲ，Ⅳ级中的表达显著低于Ⅰ～     

脑肿瘤微卫星不稳定性和错配修复基因hMLH1,hMSH2蛋白表？…

目的 检测脑肿瘤微卫星不稳定性（ＭＩＮ）和错配修复（ＭＭＲ）基因蛋白表达的情况。方法 选取１２个微卫星多态性位点,以微卫星序列－ＰＣＲ法和免疫组化技术检测３７例胶质瘤、２４例脑膜瘤及６例神经鞘瘤中ＭＩＮ和ＭＭＲ基因ｈＭＬＨ１、ｈＭＳＨ２蛋白表达。结果 胶质瘤ＭＩＮ发生率为２７％（１０／３７）,脑膜瘤ＭＩＮ阳性率仅为４％（１／２４）,神经鞘瘤未见微卫生ＤＮＡ异常。ＡＢＣ免疫组化染色发现１０例ｈＭＬＨ     

p53,CerbB—2和PCNA在脑胶质瘤中表达的意义及其 …

目的 研究７６例脑质瘤的ｐ５３ＣｅｒｂＢ－２和ＰＣＮＡ表达意义及其相关性。方法 应用ＳＰ微波免疫组化技术和统计学分析。结果 （１）在７６例脑胶质瘤组织中；ｐ５３，ＣｅｒｂＢ－２和ＰＣＮＡ的阳性表达率分别是４４．７４％（３４／７６），３４．２１％（２６／７６）和８０．２６％（６１／７６）。（２）ｐ５３的表达强度与胶质瘤的组织学类型和恶性程度呈显著正相关（Ｐ〈０．０１）。（３）ｐ５３ＣｅｒｂＢ－２和Ｐ     

儿童恶性脑胶质瘤P53与细胞增殖核抗原表达的预后价值

目的探讨Ｐ５３与细胞增殖核抗原（ＰＣＮＡ）在儿童恶性脑胶质瘤表达的预后价值。方法采用ＡＢＣ免疫组化方法对３３例儿童恶性脑胶质瘤Ｐ５３与ＰＣＮＡ表达进行回顾性研究。结果３３例儿童恶性脑胶质瘤中Ｐ５３表达阳性１５例（４５％），ＰＣＮＡ表达阳性２９例（８８％）。间变性星形细胞瘤、胶质母细胞瘤及髓母细胞瘤Ｐ５３蛋白表达的阳性比例分别为５／１２、９／１６、１／５，肿瘤Ｐ５３蛋白阴性者其细胞增殖活性均较阴性者高（Ｐ＜００５）；ＰＣＮＡ标记指数与肿瘤的恶性程度呈正相关（Ｐｅａｒｓｏｎ列联系数＝０．５６，Ｐ＜００１）。Ｐ５３或ＰＣＮＡ表达阳性者存活率分别显著低于Ｐ５３或ＰＣＮＡ表达阴性者（Ｐ＜００５，Ｐ＜００１）。结论Ｐ５３基因突变以及由此导致的细胞异常增殖与儿童恶性脑胶质瘤的发生和发展有关；ＰＣＮＡ能较好地反映胶质瘤的恶性程度，其表达检测对临床预后判定有重要参考价值。     

脑星形细胞瘤增殖活性的研究：FCM分析和PCNA表达的研究

目的探讨星形细胞瘤的增殖活性,及星形细胞瘤的ＤＮＡ倍体特性、细胞周期分布和增殖细胞核抗原标记指数（ＰＣＮＡ－ＬＩ）与病理分级的关系。方法应用流式细胞术（ＦＣＭ）和ＰＣＮＡ免疫染色对５０例星形细胞瘤新鲜组织标本进行ＦＣＭ检测以及ＰＣＮＡ阳性表达的研究。结果（１）ＦＣＭ测定结果示Ⅰ～Ⅳ级星形细胞瘤的异倍体率分别为９．１％、１２．５％、３０．８％和８０％。Ⅰ～Ⅳ级星形细胞瘤的ｓ期比例（ＳＰＦ）分别为１４．１２±４．８９％、１５．９１±１６．６４％、２５．１８±１４．８０％、４１．９２±１７．８４％。（２）正常对照组均未见ＰＣＮＡ阳性表达;Ⅰ～Ⅳ级星形细胞瘤的ＰＣＮＡ－ＬＩ分别为２８．６４±１３．７５％、４５．７５±２２．１４％、６４．３８±１９．１７％和８３．７±６．９９％。结论（１）ＦＣＭ直接评估星形细胞瘤的增殖活性,异倍体和ＳＰＦ有助于病理分级。（２）ＰＣＮＡ－ＬＩ可作为评估增殖活性的良好指标,尤其在Ⅰ级与Ⅱ级判别困难时,ＰＣＮＡ－ＬＩ具有重要价值。     

神经纤维瘤病1型基因32、33号外显子突变的检测

目的检测中国人神经纤维瘤病１型（ＮＦ１）基因３２、３３外显子突变。方法应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲＳＳＣＰ）法分析１４个ＮＦ１家系６２名成员及３０名正常对照外周血白细胞ＤＮＡ的ＮＦ１基因３２、３３号外显子。结果３个家系（２１．４％）、４例ＮＦ１患者（１１．１％）ＮＦ１基因３２号外显子的ＤＮＡＳＳＣＰ发生泳动变位,可能为ＮＦ１基因３２号外显子发生突变。家系中其他成员及正常对照无此现象。通过３种不同的ＳＳＣＰ实验条件,未发现３３号外显子异常泳动变位。结论３２号外显子可能为中国人ＮＦ１基因突变热点之一。本研究方法对ＮＦ１症状前诊断和产前诊断有重要应用价值。     

脑肿瘤中P53基因突变与突变型P53蛋白表达的研究

采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）法对４１例脑肿瘤进行Ｐ５３基因突变的检测，并与抗突变型Ｐ５３蛋白单抗的免疫组化染色结果相对照，结果显示脑肿瘤中Ｐ５３基因突变率为３４．１％（１４／４１），胶质瘤为２８％（１０／３６）。Ｐ５３基因突变与突变型Ｐ５３蛋白表达具有高度一致性，且二者均与脑肿瘤的分化程度有关。Ｐ５３基因突变及蛋白的表达不仅出现在高恶度胶质瘤及转移癌，而且可出现在低恶度胶质瘤中，表明Ｐ５３基因的突变在脑瘤的发生、发展过程中起重要作用。     

替尼泊甙治疗恶性脑胶质瘤的远期结果

报道替尼泊甙－ＣＣＮＵ治疗恶性脑胶质瘤９６例随诊１～１０年的远期结果．男性６６例、女性３０例．年龄５～７４岁，平均３９．７岁。治疗周期总数４４８个，平均５个／例．远期结果计：ＣＲ１８例、ＰＲ２１例，ＲＲ率４０．７％；ＳＤ１９例、ＰＤ３７例、ＥＤ１例．存活率为：１年８５％、３年２６％、５年１４．６％、１０年１％。目前仍存活之１４例中已逾５年者５例．平均有效时限为ＣＲ组２１２周、ＰＲ组１２１周、ＳＤ组４６周、ＰＤ组１２周。平均存活时限为ＣＲ组２４１周、ＰＲ组１３３周、ＳＤ组５７周、ＰＤ组１８周。     

经DNA测序证实的肝豆状核变性基因突变热区的研究

目的研究我国肝豆状核变性（ＷＤ）基因突变的特征。方法应用聚合酶链反应－单链构像多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术，结合ＤＮＡ测序技术，筛查４０个ＷＤ家系的５６例患者及无亲缘关系的６０名正常人的ＷＤ基因第５、８、１４号外显子（ｅｘｏｎ５，ｅｘｏｎ８，ｅｘｏｎ１４）的突变及多态。结果２１例患者（来自１５个ＷＤ家系）在ｅｘｏｎ８检出２种错义突变，占３７．５％（１５／４０），其中２例（来自同一家系）发生Ａｒｇ７７８Ｇｌｎ纯合子突变（２．５％），８例（分别来自８个ＷＤ家系）发生Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ纯合子突变（２０．０％），余１１例（来自６个ＷＤ家系）发生Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ杂合子突变（１５．０％，６／４０）。此外，在第８号外显子区域发现了两种多态；在ｅｘｏｎ５和ｅｘｏｎ１４侧翼的内含子区域各发现了１种新多态。这是我国首次经ＤＮＡ测序证实的ＷＤ基因突变热区。结论ｅｘｏｎ８为我国ＷＤ病人基因突变的热区之一，这对于建立准确快速的ＷＤ直接基因诊断方法具有重要意义，该测序方法对明确基因变异的具体部位和内容的具有一定的重要性。     

重组腺病毒介导P21WAF1/CIP1过量表达治疗人脑胶质瘤的实验研究

目的 研究基因转移P21^WAF1/CIP1过量表达对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响和治疗作用。方法 本文构建缺陷型重组腺病毒载体：在CMV启支子控制下的人P21 cDNA（Ad-P21），其编码入P21蛋白。通过渡式细胞仪、RT－PCR进行P21表达检测；应用TUNEL法、免疫组化荧光显微镜和流式细胞仪进行相关凋亡检测、分析。结果 RT－PCR检测五株亲本胶质瘤细胞表达P21^WAF1/CIP1 cDNA，而流式细胞仪未检测到P21表达；Ad-P21转导的胶质瘤细胞株均过量表达P21；在体内外Ad-P21能诱导胶质细胞瘤向终末分化、凋亡或诱导炎症反应抑制肿瘤生长或消退。结论 基因转移P21^WAF1/CIP1为研究基因治疗恶性脑胶质瘤提供了有效的手段。     

胶质瘤患者抑癌基因RASSF1A启动子区甲基化研究

目的探讨RASSF1A抑癌基因在胶质瘤组织及脑正常组织中甲基化程度及与临床特征的关系。方法46例脑胶质瘤组织及6例脑正常组织采自手术患者。用甲基化特异性聚合酶链反应（MS—PCR）方法检测46例胶质瘤（其中包括星形细胞瘤19例，室管膜瘤16例，胶质母细胞瘤11例）及6例脑正常组织中RASSF1A基因甲基化状态。并对RASSF1甲基化发生率与临床各因素之间的关系进行分析。结果（1）46例脑胶质瘤组织DNA标本中RASSF1A基因甲基化发生率为65．2％（30／46）；6例脑正常组织中RASSF1A基因启动子未发生甲基化；RASSF1A在胶质瘤和脑正常组织之间发生甲基化率比较差异有显著性，（P=0．017，P〈0．05）。在46例脑胶质瘤中RASSF1A有30例发生甲基化，其中低级别组14例（14／26），高级别组16例（16／20），两组之间甲基化率比较无明显差异，（P〉0．05）。其中星形细胞瘤，室管膜瘤，胶质母细胞瘤甲基化发生频率分别为63．2％（12／19），68．8％（11／16），63．6％（7／11）。在各组之间甲基化发生率比较均无统计学意义，（P〉0．05）。②RASSF1A基因甲基化程度与脑胶质瘤病理分型、肿瘤大小之间无显著相关性。结论RASSF1A在胶质瘤中有甲基化发生，在脑正常组织中未发生甲基化，检测胶质瘤中RASSF1A基因启动子区甲基化情况对临床判断肿瘤发生发展有指导意义。     

A functional role of the cyclin-dependent kinase inhibitor 1 (p21WAF1/CIP1) for neuronal preconditioning

Hypoxic preconditioning is thought to rely on gene products regulated by hypoxia-inducible factor (HIF)-1. Here, we show that the HIF-1 target gene cyclin-dependent kinase inhibitor 1, p21^WAF1/CIP1, is essential for neuroprotection by hypoxic/aglycemic or erythropoietin preconditioning using wild-type and p21^WAF1/CIP1-deficient neurons. Furthermore, overexpression of wild-type p21^WAF1/CIP1 or phospho-mutants significantly increased cell death after hypoxia/aglycemia. Moreover, deferoxamine-induced endogenous tolerance did not involve p21^WAF1/CIP1 expression in cortical neurons. Our data suggest that balanced expression and potentially posttranslational regulation of p21^WAF1/CIP1 is required for hypoxic preconditioning.     

B细胞易位基因1在脑胶质瘤组织中的表达及意义

目的探讨B细胞易位基因1(BTG1)和人10号染色体磷酸酶张力蛋白样同源物(PTEN)在脑胶质瘤组织中的表达及其与肿瘤分级的关系和意义。方法采用免疫组织化学染色(EnVision法)分别检测80例脑胶质瘤及25例正常脑组织中BTG1和PTEN的表达,并采用Western blot检测随机抽取的4例脑胶质瘤及4例正常脑组织中二者的表达。结果 BTG1在胶质瘤和正常脑组织中的阳性表达率分别为73.8%、96.0%,PTEN在脑胶质瘤的表达率分别为77.5%、100%,差异均具有统计学意义(P0.05);二者的表达与世界卫生组织(WHO)胶质瘤组织学分级呈负相关(P0.05),但与患者性别及肿瘤直径无关(P0.05)。结论 BTG1和PTEN在胶质瘤的发生及发展过程中起重要作用,二者表达检测可为肿瘤的组织学分级提供参考,也提示BTG1和PTEN作为新型抑癌基因可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点。     

NDRG1基因在胶质瘤中的表达及意义

目的 分析NDRG1基因在人脑胶质瘤组织中的表达情况. 方法 收集北华大学附属医院和第四军医大学西京医院神经外科自2006年2月至2007年6月手术治疗的83例胶质瘤患者的瘤组织(Ⅰ级19例、Ⅱ级22例、Ⅲ级25例、Ⅳ级17例)及12例正常脑组织,应用实时荧光定量PCR和蛋白印迹(Western blot)检测脑组织中NDRG1 mRNA和NDRG1蛋白的表达水平.结果胶质瘤组织中NDRG1 mRNA表达量和NDRG1蛋白表达量均明显低于正常脑组织,且PCR结果显示除Ⅱ、Ⅲ级比较无明显变化外,分级从Ⅰ级到Ⅳ级逐渐上升的过程中,NDRG1的表达逐渐下降,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 NDRG1在胶质瘤组织中呈低表达,而且其表达高低与胶质瘤的分级有关,提示其对胶质瘤的发生或发展有重要作用.     

p53-independent transient p21(WAF1/CIP1) mRNA induction in the rat brain following experimental traumatic injury

The expression of the cyclin-dependent kinase inhibitor p21(WAF1/CIP1) mRNA after traumatic brain injury in rats was investigated using an in situ hybridization technique, along with regulating gene p53 and stress response gene hsp70 mRNA levels. At 3 h postinjury, p21(WAF1/CIP1) mRNA was markedly increased in the cortex, white matter, thalamus, CA2, a part of CA1,3 and dentate gyrus of the injured side. Hybridization signals remained elevated at 6 h in injured cortex and hippocampus and returned to the baseline by 24 h post-insult. On the other hand, p53 mRNA induction was not observed in any brain sections throughout the post-injury time course. Slight expression of hsp70 mRNA was detected in the injured cortex 3-6 h following injury and this was similar to the temporary pattern of p21(WAF1/CIP1) mRNA expression. This study showed p21(WAF1/CIP1) mRNA to be transiently induced after traumatic brain injury, independent of p53, this possibly being an early stress response to protect cells by arresting them in the cycle and allow DNA repair.     

人脑胶质瘤中ATM、ATR、Chk1和Chk2基因表达研究

目的 研究ATM、ATR、Chk1和Chk2在人脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤发生的关系. 方法 采用SYBRTM Green实时定量PCR技术检测35例人原发脑胶质瘤组织和10例正常脑组织中的ATM、ATR、Chk1和Chk2的表达水平. 结果 ATR、Chk1和Chk2基因在各级脑胶质瘤中表达较正常脑组织升高,差异均有统计学意义(P<0.05).其中,ATR和Chk2基因表达在Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级胶质瘤组织之间差异均无统计学意义(P0.05),而Chk1,在Ⅳ级胶质瘤中的表达较Ⅱ级、Ⅲ级胶质瘤明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).ATM基因表达量在正常脑组织和各级脑胶质瘤中差异无统计学意义(P0.05). 结论 ATR、Chk1和Chk2在人脑胶质瘤中表达上调,说明这些基因可能与人脑胶质瘤的发生有关.其中,Chk1表达与肿瘤恶性程度有关.可作为判别胶质瘤病理级别的辅助指标.     

脑胶质瘤中HINT1基因甲基化状态的研究

目的探讨脑胶质瘤中HINT1基因启动子区的甲基化状态。方法采用双酶切联合定量PCR法和MSP法检测70例脑胶质瘤和30例正常脑组织中HINT1基因启动子区域甲基化状况。结果经双酶切后实时荧光定量PCR和MSP法检测,正常脑组织和胶质瘤HINT1基因启动子区域呈非甲基化状态,与性别、年龄和病理分级无明显的相关性。结论脑胶质瘤中HINT1基因启动子区域呈非甲基化状态。     

IDH1 R132H突变对不同级别胶质瘤的影响及相关因素分析

目的 检测人脑不同级别胶质瘤组织中IDH1 R132H突变及胶质瘤细胞系IDH1表达情况,探讨IDH1 R132H突变对不同级别胶质瘤的影响.方法 采用q-PCR法检测U87、U251、LN-229、HS683、U118等胶质瘤细胞系中IDH1表达情况,回顾性收集70例经手术切除、病理确诊的胶质瘤组织标本(实验组)及同...