干扰KIF14基因对子宫内膜癌细胞顺铂耐药的影响

目的:探讨KIF14基因对子宫内膜癌顺铂耐药细胞增殖、凋亡及顺铂敏感性的影响。方法:RT-qPCR和western-blot检测子宫内膜癌细胞Ishikawa及子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP中KIF14水平;将siRNA-KIF14及siRNA-NC转染Ishikawa/DDP细胞作为si-KIF14组和si-NC组,耐药组细胞不做处理,通过克隆形成实验检测干扰KIF14后子宫内膜癌顺铂耐药细胞增殖情况;流式细胞仪检测干扰KIF14后子宫内膜癌顺铂耐药细胞凋亡情况,western-blot检测增殖、凋亡及耐药基因相关蛋白ki-67、Bax、cleaved-Caspase-3、MDR1、P-gp表达水平;取各组细胞加入系列浓度顺铂,MTT法检测干扰KIF14后子宫内膜癌顺铂耐药细胞对顺铂敏感性。结果:与子宫内膜癌细胞Ishikawa相比,KIF14在子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP中高表达(P0.001);与耐药组和si-NC组相比,干扰KIF14后si-KIF14组Ishikawa/DDP细胞克隆形成数目和ki-67蛋白水平下降,细胞凋亡率以及Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平升高,IC50值下降,多药耐药基因MDR1、P-gp蛋白水平下降(均P0.001)。结论:干扰KIF14表达能够抑制子宫内膜癌顺铂耐药细胞Ishikawa/DDP增殖,促进凋亡,增加对顺铂的敏感性。     

miR-183在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达及其对p53蛋白的调节作用

目的探讨miR-183在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达及其对p53蛋白表达和细胞增殖、凋亡的影响。方法采用LipofectaminerTM2000脂质体将miR-183的特异性抑制剂反义寡核苷酸转染到Ishikawa细胞(实验组),不相关序列、脂质体和未转染组细胞分别为阴性对照组、脂质体对照组和空白对照组。采用CCK-8法和流式细胞仪分别检测各组子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖和凋亡情况;采用RT-PCR检测miR-183和p53 mRNA在各组子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达水平;采用Western blot检测p53蛋白在各组子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达水平。结果 CCK-8检测结果显示:转染0~24 h,实验组、空白对照组、脂质体对照组子宫内膜癌Ishikawa细胞增速相似,阴性对照组子宫内膜癌Ishikawa细胞增速略快;转染24~48 h,实验组、空白对照组和脂质体对照组子宫内膜癌Ishikawa细胞增速较快;转染48~72 h,实验组子宫内膜癌Ishikawa细胞较其余3组增长速度快;转染72~96 h,4组子宫内膜癌Ishikawa细胞继续保持增长状态,且达到对数生长期,实验组子宫内膜癌Ishikawa细胞较其余3组增速快。流式细胞学检测结果显示:转染3 d后,实验组较其余3组早期凋亡率明显降低,差异有统计学意义(P0.05);阴性对照组较其余3组早期凋亡率明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。RT-PCR结果显示:实验组miR-183表达水平明显低于其余3组,差异有统计学意义(P0.05);实验组p53 mRNA表达水平明显低于其余3组,差异有统计学意义(P0.05)。Western blot检测结果显示:实验组p53蛋白表达水平明显高于其余3组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-183在子宫内膜癌Ishikawa细胞中有表达,miR-183抑制剂能有效抑制miR-183在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p53蛋白表达。miR-183可能通过抑制p53蛋白表达而抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进凋亡,从而影响子宫内膜癌的发生、发展及预后。     

TRAIL联合紫杉醇对卵巢癌细胞凋亡影响的研究

目的:探讨TRAIL联合紫杉醇对卵巢癌3AO细胞株凋亡的影响,以进一步研究其诱导细胞凋亡的原理。方法:应用MTT法检测TRAIL和紫杉醇作用组的抑制率,并以流式细胞仪检测各组凋亡率。结果:亚毒剂量的TRAIL、紫杉醇及联合作用组致卵巢癌3AO细胞凋亡率分别为17.6%、16.1%、64.3%。单独应用组与联合应用组之间存在显著性差异(P<0.01)。结论:TRAIL在诱导卵巢癌细胞凋亡的同时,也显著提高了其对紫杉醇(taxol)的化疗敏感性。     

丹参酮ⅡA对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响

目的探索丹参酮ⅡA对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法培养人子宫内膜癌Ishikawa细胞株,按照丹参酮ⅡA浓度的不同将实验分为5组,A组为空白对照组(0μg/m L),B组为溶剂对照组(0.25%DMSO),C组为低浓度组(1μg/mL),D组为中浓度组(5μg/mL),E组为高浓度组(25μg/mL)。通过处理不同时间(24 h、48 h、72 h)后,观察各组细胞的生长状态及形态学变化;采用CCK 8法检测各组细胞的体外增殖情况;采用Flow Cytometry法检测细胞的凋亡率和周期分布情况。结果随着丹参酮药物浓度和作用时间的增加,细胞数量逐渐减少、贴壁性变差、细胞碎片及漂浮细胞增多。Ishikawa细胞的增殖率逐渐下降,Ishikawa细胞的凋亡率和G 2/M期细胞百分比增加,呈时间浓度依赖性增加。结论丹参酮ⅡA可以抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖,促进其凋亡,并可诱导其发生G 2/M期阻滞。     

热化联合对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响

目的研究热化联合对肺部肿瘤细胞生长的影响及其可能的机制。方法参考临床常用剂量,采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇(热化联合组)、43℃加热联合120μg/L紫杉醇并加入30μmol/L活性氧(ROS)特异抑制剂NAC(NAC组)、单纯使用120μg/L紫杉醇(单纯化疗组)处理H446细胞,以未处理的H446细胞作对照,应用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,荧光法检测细胞内活性氧(ROS),蛋白免疫印记法(Western blotting)检测Caspase-3的表达,SPSS 13.0对数据进行统计分析。结果热化联合组细胞凋亡率高于其余各组(P<0.05);ROS在热化联合组增高(P<0.05),NAC可抑制其表达;Caspase-3表达在热化联合组中表达明显增高(P<0.05),但可被NAC抑制(P<0.05)。结论热化联合应用可以明显诱导H446细胞发生凋亡,可能是通过诱导ROS的产生,通过caspase途径实现的。     

LINC 01118通过调控vimentin蛋白影响卵巢癌细胞紫杉醇耐药

目的探讨LINC 01118对人卵巢癌细胞紫杉醇耐药的影响,并研究其调控机制。方法利用RT-qPCR测定两组卵巢癌紫杉醇耐药细胞系及亲本细胞系中LINC 01118的表达水平;利用Lipofectamine TM2000将siRNA-LINC 01118、siRNA-LINC 01118+GV 230-vim以及相关对照转染至卵巢癌紫杉醇耐药细胞SKOV 3-TR 30中,RT-qPCR验证siRNA对LINC 01118的靶向沉默效率;利用MTT法测定转染后SKOV 3-TR 30细胞对紫杉醇的敏感性;利用流式细胞仪测定转染后SKOV 3-TR 30细胞的凋亡率;利用免疫印迹实验(Western blot)测定转染后vimentin蛋白,耐药蛋白MRP 1、MDR 1及ABCG 2的表达水平。结果RT-q PCR实验结果显示,LINC 01118在卵巢癌紫杉醇耐药细胞中的表达水平显著高于其亲本细胞(P<0.05);转染siRNA-LINC 01118可明显抑制SKOV 3-TR 30细胞中LINC 01118的表达(P<0.05);MTT实验结果显示,抑制LINC 01118的表达显著增加了SKOV 3-TR 30细胞对紫杉醇的敏感性(P<0.05),过表达vimentin能逆转抑制LINC 01118表达时卵巢癌耐药细胞对紫杉醇的敏感性增加现象(P<0.05);流式细胞术结果显示,抑制LINC 01118表达显著增加了SKOV 3-TR 30细胞的凋亡率(P<0.05);Western-blot实验结果显示,抑制LINC 01118表达后,vimentin蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),耐药蛋白MRP 1、MDR 1及ABCG 2的表达均显著减少(P<0.05)。结论LINC 01118在卵巢癌紫杉醇耐药细胞中异常高表达;抑制LINC 01118表达可以逆转卵巢癌细胞紫杉醇耐药,诱导细胞凋亡;LINC 01118可以通过正向调控vimentin蛋白影响卵巢癌细胞紫杉醇耐药。     

2-甲氧雌二醇诱导人子宫内膜癌细胞株凋亡的实验研究

目的:探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对人子宫内膜癌细胞株KLE细胞凋亡的影响。方法:选用人子宫内膜癌细胞株KLE进行体外培养,实验组加入不同浓度2-ME,对照组不含2-ME。用电子显微镜(电镜)观察细胞形态变化;流式细胞仪(FCM)观察细胞的凋亡率及细胞周期的变化,以及免疫组织化学方法检测P53和Bcl-2的表达强度。结果:2-ME作用后G0/G1期细胞增加,并伴随G0/G1期细胞的增加,出现细胞凋亡峰和凋亡率的升高(P<0.05)。电镜下观察到KLE细胞染色体边集、核固缩、凋亡小体,P53和bc1-2阳性表达率明显下降。结论:2-ME对人子宫内膜癌KLE细胞株有诱导凋亡作用。     

子宫内膜癌组织中肾上腺髓质素表达及其与微血管密度的相关性研究

目的:探讨肾上腺髓质素(ADM)在子宫内膜癌组织中的表达及其与微血管密度(MVD)的关系。方法:2004年1～12月在吉林大学第二医院妇产科采用免疫组织化学染色对14例正常子宫内膜,15例高分化腺癌,15例中低分化腺癌,7例腺癌伴鳞状上皮分化,9例透明细胞癌中的ADM的表达及MVD进行检测。结果:①子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中ADM表达与MVD均呈正相关(P<0.05);②正常子宫内膜与子宫内膜癌组织中ADM表达无显著性差异(P<0.05);③在子宫内膜癌各病理类型及手术-病理分期组中ADM阳性表达率无显著性差异(P<0.05);④子宫内膜癌组织学分级与淋巴结有无转移的ADM阳性表达率有显著性差异(P<0.05)。结论:ADM是调节正常子宫内膜与子宫内膜癌组织血管生成的重要因子,可能作为估计内膜组织恶性潜能及判断内膜癌预后的辅助指标,并为子宫内膜癌的抗血管生成及抗癌治疗提供新的分子靶点。     

高危早期子宫内膜癌紫杉醇行PT方案化疗后CA125变化的临床意义

目的研究分析高危早期子宫内膜癌紫杉醇行PT方案化疗后CA125变化的临床意义。方法回顾性分析2011年10月—2012年10月期间,我院收治的12例高危早期子宫内膜癌患者的临床资料,对所有患者均采用紫杉醇联合卡铂或顺铂化疗治疗,监测患者术前、术后和辅助化疗的血清CA125水平。结果治疗后患者的血清CA125水平较之治疗前相比发生明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);经辅助化疗后,血清CA125水平较之术前、术后发生明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),对所有患者进行平均1年的随访无复发病例。结论血清CA125水平与组织类型相关,对高危早期子宫内膜癌紫杉醇行PT方案化疗后CA125水平下降明显,是治疗高危早期子宫内膜癌的理想方式,值得临床推广。     

PTEN和VEGF蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

目的:研究PTEN、VEGF在子宫内膜样腺癌中的表达及其临床意义,探讨其与子宫内膜样癌发展及生物学行为的相关性。方法:收集92例子宫内膜病理标本,应用免疫组织化学法(SP法)检测PTEN及VEGF的表达情况。结果:PTEN和VEGF在子宫内膜良、恶性病变组织中的阳性表达率相比差异有统计学意义(P<0.05);在子宫内膜癌高中分化组与低分化组中阳性表达率相比差异有统计学意义(P<0.05);在无肌层浸润或浸润深度≤1/2组与浸润深度>1/2组中的阳性表达率相比差异有统计学意义(P<0.05);VEGF在无淋巴结转移的子宫内膜癌组织中及有转移中的阳性表达率相比差异有统计学意义(P<0.05);PTEN阳性表达率与VEGF阳性表达率呈现出负相关性(γ=-0.633,P<0.05)。结论:PTEN阳性表达与子宫内膜癌的组织学分级及肿瘤侵袭性呈负相关,VEGF阳性表达与子宫内膜癌的组织学分级、肿瘤侵袭性及淋巴结转移呈正相关;二者在子宫内膜癌发生和发展中呈拮抗作用,表达呈负相关。监测PTEN和VEGF的表达,可以作为判断肿瘤恶性程度的指标。     

壳聚糖对人子宫内膜癌细胞影响的实验研究

目的:研究壳聚糖对人子宫内膜癌Ishikawa细胞的影响,为将壳聚糖做为宫内节育器材料提供依据。方法:以添加不同浓度壳聚糖培养的细胞为实验组,正常培养的细胞为空白对照组,使用添加20%胎牛血清和添加阿霉素培养的细胞为阳性对照组。各组细胞处理48h后,噻唑蓝法测定细胞增殖活性及毒性,5-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入法测定DNA合成情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:与空白对照组比较,在壳聚糖浓度≤10μg/ml时各实验组细胞增殖能力无明显变化(P﹥0.05),细胞DNA合成速率无明显影响(P﹥0.05);壳聚糖浓度≤100μg/ml无明显的细胞毒性产生;在10μg/ml浓度壳聚糖组细胞周期分析时G1期、G2期、S期均无明显变化(P﹥0.05)。结论:壳聚糖浓度在<10μg/ml对Ishikawa细胞的增殖生长、DNA合成与细胞周期均无明显影响,≤100μg/ml未见细胞毒性产生。壳聚糖具有作为宫内节育器的生物缓释材料使用的前景。     

PROGRAMMED CELL DEATH AND SURVIVAL PATHWAYS IN PROSTATE CANCER CELLS

Programmed cell death, or apoptosis, is a series of morphologically and biochemically related processes. The extrinsic (death receptor mediated) and intrinsic (mitochondrial-mediated) apoptotic pathways can be triggered by physiological and pharmacological substances. However, other molecular events influence the sensitivity of prostate cancer cells to apoptotic stimuli, leading to marked variations in the responsiveness of prostate cancer cell lines to individual stimuli. Modulation of apoptotic responses by over expression of anti-apoptotic proteins (NF-κB, IAPs and Bcl-2), or attenuation of pro-apoptotic proteins (PTEN and Bax) may be responsible for the variations in sensitivity of these cell lines to hormone and chemotherapy. The expression of anti- and pro-apoptotic proteins in some of the widely used in vitro models of prostate cancer is reviewed.     

拓扑替康和顺铂联合化疗对子宫内膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:观察拓扑替康、顺铂及二者联合对子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:建立裸鼠移植瘤模型,成瘤后40只裸鼠随机分为4组,顺铂组:3 mg/kg;拓扑替康组:5 mg/kg;联合用药组:顺铂3 mg/kg+拓扑替康5 mg/kg;对照组:生理盐水。腹腔注射药物,每4天1次,共4次。测量肿瘤体积、绘制肿瘤生长曲线、计算抑瘤率,用流式细胞术检测肿瘤细胞生长周期。结果:抑瘤率分别为顺铂组41.53%、拓扑替康组34.12%、联合用药组90.53%,联合用药组的抑瘤率明显高于顺铂组及拓扑替康组(P<0.05)。联合用药组G0/G1期细胞数量明显高于拓扑替康组、对照组(P<0.05)。结论:联合应用拓扑替康和顺铂抑制子宫内膜癌的作用强于单独应用拓扑替康、顺铂。     

Evaluation of the Ishikawa cell line bioassay for the detection of estrogenic substances from sediment extracts

This study examines the application of Ishikawa human endometrial adenocarcinoma cells to measure the estrogenic activity of fractionated extracts of sediments from Tokyo Bay, Japan. Estrogen stimulates alkaline phosphatase activity in this cell line. The results of these assays were compared with those of a yeast estrogen screen (YES) assay. The Ishikawa cell line bioassay showed higher sensitivity to 17beta-estradiol (median effective concentration [EC50], 10.7 pM) than did the YES assay (EC50, 480 pM). Fractionation of sediment extracts (all samples collected from 5 sites) showed that the nonpolar fraction was poisonous to yeast cells; the estrogenic activity of this fraction, therefore, could not be measured by YES. However, the nonpolar fraction did not kill the Ishikawa cells. The 17beta-estradiol-equivalent values of 15 extracts (3 fractions from each of 5 sediment samples) ranged from 5.7 to 697 pg/g dry weight according to the Ishikawa cell line bioassay. Chemical analysis using gas chromatography-mass spectrometry revealed that the highest concentrations of endocrine-disrupting chemicals were observed at the sampling station near the sewage treatment plant. The results support that the Ishikawa cell line bioassay is suitable for measuring the estrogenic activity of sediment samples.     

Cytotoxicity of alpha-tocopheryl succinate, malonate and oxalate in normal and cancer cells in vitro and their anti-cancer effects on mouse melanoma in vivo

alpha-Tocopheryl succinate (TS), which is known to induce apoptosis selectively in cancer cells, has attracted attention as a chemotherapeutic agent. Recently, we found that alpha-tocopheryl malonate (TM) and alpha-tocopheryl oxalate (TO), among the alpha-tocopheryl esters tested, have high apoptogenic activity as well as TS. In this study, we investigated the characteristics of their cytotoxicity on normal cells and cancer cells in vitro, and their anti-cancer effects on mice inoculated with melanoma B16-F1 cells in vivo. The order of in vitro cytotoxicity was TO > or = TM > TS in all cell lines examined. Addition of exogenous superoxide dismutase (SOD) and the antioxidant N-acetyl cysteine (NAC) inhibited TS- and TM- but not TO-induced cell deaths. A selective cytotoxic effect on cancer cells was observed with TS but not with TM or TO. c-Jun N-terminal kinase (JNK) inhibitor II prevented cell death induced by TS but did not prevent cell deaths induced either by TM or TO. Intravenous administration of vesiculated TS and TM to mice inoculated with melanoma B16-F1 cells prevented tumor growth and enhanced the mean survival time, but TO administration killed the mice due to its acute high toxicity. From these results, we discussed the characteristics of their selective cytotoxicity toward tumor cells in vitro and anti-cancer effects in vivo.     

17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞增殖及p38表达的影响

目的:探讨不同浓度的17β-雌二醇(E2)对雌激素受体(ER)阴性的JEC细胞和ER阳性的Ishikawa子宫内膜腺癌细胞系细胞的增殖及细胞内p38蛋白表达的影响。方法:选用人子宫内膜腺癌细胞系JEC和Ishikawa进行体外培养,加入含不同浓度E2培养液,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)的方法,观察子宫内膜腺癌细胞系JEC和Ishikawa细胞的增殖活性及P-p38的表达。结果:①MTT法观察细胞增殖:10-7、10-8和10-9 mol/L E2作用JEC细胞4、5天后OD值与对照组比较有差异(P<0.05),其中10-7 mol/L E2组在第5天OD值与对照组比较差异较显著(P<0.01);而不同浓度E2作用Ishikawa细胞均能促进增殖(P<0.05)。②共聚焦显微镜测定细胞内P-p38蛋白的表达:10-7 mol/L的E2作用JEC 4、5天后可使细胞内P-p38表达增加,平均荧光强度值与对照组相比有统计学意义(P<0.05);10-7 mol/L的E2作用Ishikawa 3、4天后P-p38表达增加,与不加E2对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:子宫内膜腺癌细胞系JEC细胞和Ishikawa细胞均可受到雌激素的调控,一定浓度的雌激素能促进ER阴性JEC细胞和ER阳性的Ishikawa细胞增殖,且均能使细胞内P-p38表达增加。     

Citrus Limonin Lacks the Antichemotherapeutic Effect in Human Models of Breast Cancer

Background/Aims: Chemicals that interfere with reactive oxygen species metabolism can act as potential candidates for the treatment of cancer. Some of the glucosides of citrus limonin inhibit the endogenously generated reactive oxygen species. The aim is to study the interactions of limonin with chemotherapy. Methods: Breast cancer cell lines MCF-7 (p53 wild type) and MDA-MB-231 (p53 mutant) as well as the nontumorigenic epithelial cell line MCF-10 were used to screen the effect of limonin at 1-, 5- and 10-μM concentrations with camptothecin for apoptosis and NF?B, p38 and ERK-MAPK signaling kinase assays. The effect of cyclophosphamide and limonin on MDA MB 231 xenografts was also studied. Results: Our results indicate that limonin did not inhibit camptothecin-induced apoptosis in human breast cancer cells in vitro through noninterference of camptothecin-induced phosphorylation of p38 MAPK and ERK-MAPK. Using an in vivo model of human breast cancer, limonin in combination with cyclophosphamide was not found to inhibit the cyclophosphamide-induced tumor regression through a reduced mitotic index of tumor xenograft cells when compared to treatment with cyclophosphamide alone. Conclusion: Both in vitro and in vivo results suggest that limonin could be beneficial for breast cancer patients undergoing chemotherapy.