青紫薯色素对 60Co辐射小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用及其机制

①目的探讨青紫薯色素对^60Coγ-射线单次辐射小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的保护作用及其体外抗氧化作用机制。②方法建立^60Co辐射（强度为3 Gy）对体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞损伤病理模型,分为6组：对照组、^600Co模型组、0．625g／L青紫薯色素组、1.250g／L青紫薯色素组、2．500g／L青紫薯色素组、^60Co＋1 g／L Vit C组。琼脂糖凝胶电泳观察DNA Ladder;流式细胞仪PI染色测定细胞凋亡率;Fluo-3-AM荧光染色测定细胞内游离Ca^2＋浓度;免疫细胞化学法测定P53蛋白的表达;原位杂交检测细胞p21 mRNA的表达;化学发光法和电子自旋共振（ESR）捕集技术检测青紫薯色素对超氧阴离子（O2^-）、羟自由基（OH^＋）、过氧化亚硝基（ONOO^-）和脂类自由基的清除作用。③结果0．625～2．500g／L浓度范围内青紫薯色素能抑制^60Co辐射所致淋巴细胞DNA梯状带的出现,降低淋巴细胞凋亡率,降低淋巴细胞内游离Ca^2＋浓度,抑制^60Co辐射后小鼠胸腺淋巴细胞P53蛋白在胞浆的表达,抑制^60Co辐射后小鼠胸腺淋巴细胞p21 mRNA的表达,同时青紫薯色素还可有效清除O2^-、OH^＋、ONOO^-和脂类自由基。④结论青紫薯色素能抑制^60Co辐射诱导的淋巴细胞凋亡,对^60Co辐射损伤的小鼠胸腺淋巴细胞具有保护作用。其作用机制与青紫薯色素能清除氧自由基、降低细胞内游离Ca^2＋浓度、减少DNA的断裂、抑制突变型P53蛋白的表达、抑制p21基因的表达,影响淋巴细胞凋亡的信号转导中的基因调控有关。     

青紫薯色素保护小鼠抗60Co γ-射线辐射所致氧化损伤的作用

①目的探究青紫薯色素对60Co γ-射线辐射损伤小鼠的保护作用及机制.②方法复制60Co γ-射线(辐射强度为6 Gy)对雄性昆明种小鼠辐射损伤的病理模型.实验设计分为6组对照组,60Co模型组,小剂量青紫薯色素组(青紫薯色素15 mg/kg),中剂量青紫薯色素组(青紫薯色素150 mg/kg),大剂量青紫薯色素组(青紫薯色素1 500 mg/kg)和尼尔雌醇阳性对照组(尼尔雌醇2 mg/kg),均灌胃给药,连续1个月.全血细胞分析仪计数小鼠外周血白细胞总数;计算小鼠的胸腺系数和脾脏系数;酶生化法测定小鼠脑、胸腺、肝、脾、肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活性,活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量以及总抗氧化能力(T-AOC);油镜下检测小鼠骨髓细胞的微核率和染色体畸变率.③结果在6 Gy 60Co γ-射线辐射情况下,青紫薯色素(灌胃剂量为15～1 500 mg/kg)能升高小鼠胸腺系数和脾脏系数,显著提高小鼠脑、胸腺、肝、脾、肺组织中SOD和GSH-px活性及T-AOC,减少上述组织中ROS、MDA含量(F=14.07～1 315.68,q=5.51～80.49,P<0.01).青紫薯色素的作用呈剂量依赖性.但青紫薯色素不能抑制辐射所致的小鼠白细胞总数下降、骨髓细胞产生微核及染色体畸变.④结论青紫薯色素能抑制60Co辐射诱导的小鼠脑、胸腺、肝、脾、肺组织的氧化损伤,对60Co辐射损伤小鼠具有保护作用.其机制与青紫薯色素提高各组织中GSH-px、SOD活性及T-AOC,减少氧自由基的产生,抑制脂质过氧化有关,同时与青紫薯色素刺激胸腺和脾脏细胞的增殖有关.     

青紫薯色素对β淀粉样肽诱导神经细胞毒性的作用

①目的探讨青紫薯色素对口淀粉样肽诱导神经细胞毒性的保护作用及其机制。②方法建立β淀粉样肽诱导的PC-12神经细胞毒性病理模型,MTT法测定青紫薯色素对PC-12神经细胞增殖活性的影响,流式细胞仪检测PC-12神经细胞的凋亡率、线粒体膜电位、细胞内Ca^2＋浓度和Caspase-3的活性。③结果青紫薯色素可以剂量依赖性地提高PC-12细胞的增殖活性,降低β淀粉样肽诱导的PC-12细胞凋亡率,减轻线粒体膜的损伤,降低细胞内钙离子的浓度,抑制Caspase-3的活化。④结论青紫薯色素通过抑制Caspase-3的活化,减轻线粒体膜的损伤,降低细胞内Ca^2＋的浓度,起到减轻β淀粉样肽诱导的PC-12细胞损伤的作用。     

电离辐射对小鼠胸腺bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的作用机制

目的:研究不同剂量X射线照射对小鼠胸腺bcl-2 蛋白表达及细胞凋亡的作用机制.方法:用免疫组织化学、图像分析技术及透射电镜技术分别检测小鼠胸腺bcl-2蛋白表达及细胞凋亡.结果:假照组胸腺实质内bcl-2蛋白表达主要分布于髓质,胸腺皮质内可有少量凋亡的胸腺细胞.2 Gy照射后4、8和12 h胸腺髓质内bcl-2表达减少,皮质内出现许多典型的凋亡细胞;0.075 Gy照射后bcl-2蛋白表达增多,皮质内凋亡细胞减少,且可见较多的细胞分裂像.结论:不同剂量电离辐射对胸腺细胞凋亡的影响与胸腺髓质内bcl-2蛋白表达水平有关.     

前凋亡因子Bim在小鼠胸腺细胞自然凋亡中的作用

目的研究前凋亡因子Bim在小鼠胸腺细胞自然凋亡中的作用。方法体外培养BALB/c小鼠胸腺细胞不同时间,AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR半定量法分析不同时间点(0,1,2,4,8h)Bim mRNA表达。结果①体外培养的小鼠胸腺细胞随培养时间发生自然凋亡,流式细胞术检测显示随培养时间延长,各时间点细胞凋亡百分比较对照组高(vs Oh,P<0.05);②RT-PCR显示在一定时间内前凋亡因子Bim mRNA随培养时间延长表达增高(vsOh,P<0.05),在Bim 3个异构体中以BimL作用为主。结论Bim参与小鼠胸腺细胞的自然凋亡过程,是重要的细胞凋亡促进因子。     

小鼠胸腺实质内凋亡细胞分布的观察

目的：探讨非生理条件对细胞凋亡的影响。方法：采用ＨＥ和ＤＮＡ染色的方法，在４℃组织培养条件下观察了小鼠胸腺实质内凋亡细胞的分布。结果：胸腺皮质、髓质内均有发生典型核形态改变的细胞，其细胞核的形态大小不一，具有这种核形态改变的细胞随体外培养时间的延长而增多。结论：体外非生理环境培养可诱导胸腺实质内各种细胞凋亡和坏死     

紫薯花青素抗结肠癌作用及其诱导细胞凋亡机制

目的: 探讨紫薯中原花青素(PCI)对人结肠癌细胞(HCT-116)的细胞毒性作用,阐明其诱导细胞凋亡的机制。方法: 取处于对数生长期HCT-116细胞和人成纤维细胞HF-91随机分为对照组(PBS组)、阳性药组[25 mg·L^-1顺铂(DDP)]和PCI组(终浓度分别为25、50和100 mg·L^-1)。采用CCK8法检测细胞增殖抑制率,AO/EB法荧光显微镜观察细胞凋亡情况,流式细胞术检测JC-1线粒体膜电位变化,qPCR法检测p53和caspase-3 mRNA表达水平。结果: 与DDP组比较,100 mg·L^-1 PCI组HCT-116细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05),各浓度PCI组HF-91细胞增殖抑制率明显降低(P<0.05),且呈浓度依赖性。与DDP组比较,50和100 mg·L^-1 PCI组HCT-116细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,DDP组和不同浓度PCI组HCT-116细胞中caspase-3和p53 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);与DDP组比较,不同浓度 PCI组HCT-116细胞中caspase-3 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05),100 mg·L^-1 PCI组HCT-116细胞中p53 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),且呈浓度依赖性。结论: 紫薯花青素对消化系统肿瘤细胞具有较强的毒性作用,而对正常细胞毒性较小。     

扇贝多肽对60Co辐射小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用研究

辐射对人类健康有着至关重要的影响。长期过量的辐射将导致机体产生一系列损伤，因此，研究放射损伤防治手段，寻找行之有效的防治药物，已引起人们的普遍关注。以往抗辐射剂大都源于陆地，而对来自海洋生物的抗辐射作用的活性物质研究较少。海洋化合物以其独特的结构已在抗菌、抗病毒、止血、镇痛、抗炎、抗肿瘤及心血管病等方面得到广泛应用。     

低剂量X线照射诱导小鼠胸腺细胞凋亡适应性反应的相关凋亡基因p53、Bcl-2和Bax蛋白表达

目的：探讨低剂量辐射诱导胸腺细胞凋亡适应性反应的相关基因蛋白调控机制。方法：用X射线全身照射Kunming系雄性小鼠,其诱导剂量（D1）为25、50、75、100和200 mGy（剂量率12.5 mGy•min^-1）,攻击剂量（D2）为1.5 Gy（剂量率287 mGy•min^-1）,D1和D2间隔6 h。通过流式细胞仪检测胸腺细胞凋亡相关基因p53、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。 结果：D2组与假照射组比较,其胸腺细胞Bcl-2蛋白阳性百分率明显降低（P<0.05）,Bax蛋白明显增加（P<0.05）,而Bcl-2/Bax比值非常明显降低（P<0.001）;p53蛋白非常明显增加（P<0.001）。D1+D2组与D2组比较,D1在25～75 mGy时,Bcl-2蛋白阳性百分率不同程度增加,Bax蛋白不同程度降低,而Bcl-2/Bax比值非常明显增高（P<0.01）;p53蛋白明显降低（P<0.001或P<0.05）。 结论：在25～75 mGy低剂量辐射诱导小鼠胸腺细胞凋亡的适应性反应中,其相关凋亡基因蛋白Bcl-2表达增加,Bax降低,Bcl-2/Bax比值增高,p53降低,导致凋亡的胸腺细胞减少。     

白念珠菌菌血症诱导小鼠皮质胸腺细胞凋亡

采用白念珠菌诱导小鼠胸腺内细胞凋亡 ,对其发生部位和累及的胸腺内细胞表型进行了研究。结果发现 :静脉注射白念珠菌入小鼠体内 6h后 ,开始出现胸腺细胞凋亡 ;1 2h ,1 8h和 2 4h胸腺凋亡细胞百分率不断增加 ;CD3+和CD8+细胞百分率均较对照组有明显的下降 ;胸腺内细胞凋亡主要发生在皮质区 ,而髓质区则少。表明白念珠菌能诱导小鼠胸腺细胞凋亡 (主要是未成熟CD3+CD4+CD8+细胞及少量成熟的CD3+CD4- CD8+细胞 )     

四生汤对照射小鼠胸腺淋巴细胞凋亡和抗氧化能力的作用

目的探讨四生汤对受辐射小鼠胸腺淋巴细胞抗氧化能力及细胞凋亡的影响及作用机制。方法建立60Co（辐射强度为3Gy）对体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤模型。实验设计分为5组：对照组,60Co模型组,高、中、低剂量四生汤组。MTT法检测细胞活性;酶生化法测定各组小鼠胸腺细胞胞浆超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量;流式细胞仪测定小鼠胸腺淋巴细胞凋亡率,免疫细胞化学法检测各组Bcl-2和Bax的表达。结果在强度为3Gy60Co辐射情况下,1%-4%浓度范围内四生汤能显著提高小鼠胸腺淋巴细胞的活性;显著提高细胞浆中SOD活性,降低MDA含量;各四生汤组淋巴细胞凋亡率明显低于模型组（P〈0.01）;Bcl-2蛋白表达增强,Bax蛋白表达减弱。结论四生汤能提高体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞活性,抑制60Co辐射诱导的淋巴细胞凋亡,其作用机制与四生汤提高抗氧化酶SOD活性,抑制脂质过氧化水平及调节凋亡因子Bcl-2与Bax之间的平衡有关。     

中药对情绪应激小鼠胸腺细胞凋亡的影响

目的：探讨条件反射箱应激不同时间对小鼠胸腺细胞的破坏及凋亡的影响，通过加味逍遥丸加以干预，揭示中药对应激所致免疫功能变化的调节作用。方法：利用条件反射箱诱发的应激模型．观察应激3、5、7天以及加味逍遥丸干预后胸腺功能的变化状况。结果：应激3、5、7天组小鼠胸腺重量、胸腺指数、糖皮质激素水平、TFAR19蛋白平均荧光度、Annexin-V单阳性细胞及Annexin—V和PI双阳性细胞与对照组相比达显著性（P〈0．05）。结论：争件反射箱应激是一种急性负性情绪应激，应激的性质较平缓。应激通过神经内分泌免疫网络而影响胸腺功能，加味逍遥丸可调节应激反应而对胸腺的损伤起保护作用。     

苯通过激活线粒体凋亡通路对小鼠骨髓细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：建立小鼠吸入气态苯染毒模型,探讨苯对骨髓细胞凋亡的诱导作用和机制,为苯骨髓毒作用机制的研究提供实验依据。方法：将24只雄性小鼠随机分为对照组和低、中、高剂量苯染毒组(染毒剂量分别为400、800和1 600 mg?m-3),每组6只。各剂量苯染毒组小鼠进行静式染毒,每天2 h,连续染毒15 d后将各组小鼠全部处死,HE染色后光镜下观察各组小鼠骨髓细胞的病理学改变,流式细胞仪测定各组小鼠骨髓细胞凋亡率及线粒体膜电位,免疫组织化学法测定各组小鼠线粒体凋亡途径中相关基因蛋白的表达。结果：低、中和高剂量苯染毒组小鼠骨髓边缘及中央处细胞数明显减少,高剂量苯染毒组小鼠骨髓还伴有大量的血窦扩张。中和高剂量苯染毒组细胞凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(Ρ<0.01),且高剂量苯染毒组与低和中剂量苯染毒组比较差异也有统计学意义(Ρ<0.05)。低、中和高剂量苯染毒组小鼠骨髓细胞线粒体膜电位随着染毒剂量的增加明显降低,中和高剂量苯染毒组与对照组比较差异有统计学意义(Ρ<0.05或P<0.01)。不同剂量苯染毒组Bax、CytC及中、高剂量苯染毒组Caspases-9、Caspases-3阳性细胞数随染毒剂量的增加显著升高,与对照组比较差异均有统计学意义(Ρ<0.05);而各剂量苯染毒组Bcl-2阳性细胞数则明显低于对照组(Ρ<0.05),且中和高剂量苯染毒组与低剂量苯染毒组比较差异也有统计学意义(Ρ<0.05)。结论：一定剂量的苯可以诱导小鼠骨髓细胞发生凋亡,促进线粒体凋亡相关基因蛋白的表达。通过线粒体凋亡通路诱导的细胞凋亡可能是苯骨髓毒性的重要机制之一。     

细胞凋亡机制研究进展

细胞凋亡机制的研究已经成为当代免疫学研究的一个热点,更为疾病的免疫诊断与免疫治疗提供了新的思路。本文简述了细胞凋亡机制中基因调控、相关蛋白及细胞凋亡生理和病理机制,通过对细胞凋亡的研究,为预防、治疗、诊断某些疾病提供新的理论依据及相应对策。     

低剂量X线辐射诱导胸腺细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的剂量率效应

目的 :观察 X线低剂量辐射诱导胸腺细胞凋亡和细胞周期进程适应性反应的剂量率效应。方法 :用 X射线照射昆明种雄性小鼠 ,其诱导剂量 ( D1 )及其后攻击剂量 ( D2 )分别是 75 m Gy和1 .5 Gy,D1 剂量率为 6.2 5、1 2 .5、2 5、5 0、1 0 0和 2 0 0 m Gy· min-1 ,D2 剂量率为 2 87m Gy· min-1 ,D1 和 D2 间隔 6h。通过流式细胞仪检测胸腺细胞凋亡和细胞周期进程的变化。结果 :当 D1 剂量率为 6.2 5、1 2 .5和 2 5 m Gy,D1 + D2 组胸腺细胞凋亡百分数明显低于 D2 组 ( P<0 .0 5或 P<0 .0 1 ) ,G0 / G1 和 G2 + M期细胞百分数也不同程度地低于 D2 组 ,而 S期细胞百分数明显高于 D2 组( P<0 .0 5或 P<0 .0 1 )。结论 :低剂量 X线全身照射条件下 ,剂量率在 6.2 5～ 2 5 m Gy· min-1 ,可诱导小鼠胸腺细胞凋亡和细胞周期进程的适应性反应     

低剂量辐射对白血病小鼠肿瘤细胞凋亡的影响

目的研究低剂量辐射（LDR）后不同时间白血病小鼠血清肿瘤坏死因子（TNF）和骨髓白血病细胞凋亡的变化．为低剂量全身辐射辅助治疗白血病提供实验研究基础方法将体外培养扩增的WEHI-3细胞尾静脉注射接种于BALB／c小鼠体内，诱导移植性粒单白血病发生：60只成功建立的粒单白血病模型小鼠，实验组和对照组各30只．对照组小鼠不予LDR，实验组小鼠同时给予75mGy的LDR。于LDR后1d，2d，3d，5d和10d分别处死6只实验组及6只对照组小鼠，取其血清及骨髓，放射免疫分析法检测TNF，荧光显微镜、电镜观测骨髓白血病细胞的凋亡情况。结果LDR后不同时间小鼠血清TNF水平有不同程度的变化，1d和2d升高最为显著（P〈0．05），LDR后10d血清TNF水平已接近对照组（P〉0．05）。LDR后第2天、第3天骨髓白血病细胞凋亡率最高，第5天和第10天次之（P均〈0．05），骨髓白血病细胞凋亡率的变化略滞后于血清TNF的变化。结论LDR可使白血病小鼠血清TNF水平显著升高、骨髓白血病细胞凋亡率增加，LDR对小鼠粒单白血病的治疗是积极、有效的。     

栀子抑制小鼠S180和肝癌及促进小鼠肝癌细胞凋亡作用

目的 探讨栀子提取物对荷瘤小鼠S180肉瘤和肝癌的抑瘤作用及肿瘤凋亡相关基因蛋白bcl-2表达以及细胞凋亡的作用.方法 分别采用荷瘤小鼠S180肉瘤和肝癌模型,灌胃栀子提取物10g·(kg·d)-1,qd×10d;观察瘤重和肿瘤抑瘤率,以及用酶联免疫分析法检测肝癌小鼠血清肿瘤凋亡相关基因蛋白bcl-2含量及用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡情况.结果 栀子提取物能抑制荷瘤小鼠S180肉瘤和肝癌的增重(P＜0.01),抑瘤率分别为44.8%和61.0%;下调荷瘤小鼠肝癌模型血清肿瘤凋亡相关基因bcl-2表达(P＜0.01),小鼠肝癌细胞凋亡率为52.6%.结论 栀子提取物对荷瘤小鼠S180肉瘤和肝癌有抑制作用,抑瘤作用机制是下调肿瘤凋亡相关基因bcl-2表达,从而诱导小鼠肝癌细胞凋亡.     

计算机辅助诊断系统对小鼠胸腺细胞凋亡超微结构实验研究

目的:利用fPAX~TM计算机辅助诊断系统评估经糖皮质激素诱导小鼠体外胸腺细胞凋亡超微结构图像。方法:先对小鼠腹腔内注射地塞米松诱导细胞凋亡;利用fPAX~TM计算机辅助诊断系统后处理功能,按照实验程序对扫描与透射电镜图像进行数码采集、观察与评估。结果:按照程序对经fPAX~TM计算机辅助诊断系统后处理的电镜图像在线分析,结果显示在图像质量与图像参数实验组与对照组之间存在显著性差异(P<0.05)。结论:经fPAX~TM计算机辅助诊断系统后处理的电镜图像质量高,清晰地显示细胞凋亡细节包括细胞凋亡不同时期的超微结构。     

慢性心理应激小鼠胸腺免疫细胞凋亡损伤的研究

目的 观察慢性束缚应激下小鼠胸腺病理改变及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的活性,探讨应激对小鼠免疫器官的损害作用及途径.方法 动物随机分为空白对照组和应激组.应激组小鼠给予慢性束缚应激,每天1次,每次8 h,持续2周.应激后处死小鼠,制作胸腺HE片、免疫组化Caspase-3片,在显微镜下进行免疫阳性细胞记数并显微拍照.结果 应激后小鼠胸腺组织形态改变重量下降[NC组(0.1000±0.0193)g vs SS组(0.0703±0.0205)g,P＜0.01],胸腺指数下降[NC组(0.0034±0.0003)vs SS组(0.0028±0.0007),P＜0.05],同时应激组胸腺Caspase-3阳性细胞率增加[NC组(15.6±3.91)%vs SS组(55.2±7.12)%,P＜0.01].结论 慢性心理应激能造成胸腺损伤,Caspase-3参与了应激状态下胸腺免疫细胞损伤.     

金葡菌及其L型对小鼠胸腺细胞凋亡的影响

目的:研究金黄色葡萄球菌(金葡菌)及其L型(金葡菌L型)对小鼠胸腺细胞凋亡的影响.方法:用金葡菌、金葡菌L型、肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)分别作用于小鼠胸腺细胞,同时设立正常对照,于作用后2 h、4 h、6 h、8 h、10 h终止培养.Anninix V和PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:SEB作用2 h、金葡菌作用4 h、金葡菌L型作用6 h后各时间段小鼠胸腺细胞的凋亡率与对照组比较均明显增高(P<0.01),随着诱导时间的延长,胸腺细胞的凋亡率逐渐增加(P<0.01);SEB诱导胸腺细胞凋亡率在6 h、8 h和10 h时均明显弱于原菌(P<0.01). 结论:金葡菌L型和原菌以及SEB均能促进胸腺细胞凋亡,除SEB外,产SEB金葡菌株及其L型诱导胸腺细胞凋亡还可能有其他因素参与.