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环孢菌素D衍生物PSC 833逆转K562/A02细胞多药耐药的研究 总被引:11,自引:0,他引:11
目的 证实PSC833逆转剂的高效性,探讨PSC833逆转肿瘤细胞多药耐药的机制。方法 以人红白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02(耐阿霉素)为实验研究对象,采用MTT法检测细胞毒性;直接免疫荧光测定法检测P糖蛋白(P-gp)表达水平;RT-PCR法检测mdr1 mRNA水平,以流式细胞术测定两种细胞系内柔红霉素(DNR)的潴留来的反映P-gp的外排功能。结果 与K562细胞系相比,K562/A02耐药细胞系mdr1 mRNA及P-gp高表达,DNR潴留减少。1μmol/L的PSC833对K562/A02铁mdr1 mRNA及P-gp表达水平无明显影响(P>0.05),PSC833对K562/A02细胞的DNR细胞毒性有剂量依赖性增敏作用,其增敏作用至少是环孢菌素A(CsA)、维拉帕米(Ver)的3倍。PSC833能增加K562/A02耐药细胞系的DNR潴留。1μmol/L的PSC833能使K562/A02细胞内DNR潴留量恢复至K562细胞的100.9%,而10μmol/L CsA只恢复至K562细胞的86.9%,PSC833对K562细胞系的DNR细胞毒性及DNR潴留均无明显影响(P>0.05)。结论 PSC833较CsA、Ver逆转活性至少高3-10倍,其逆转K562/A02多药耐药的机制可能是通过抑制P-gp功能,而非直接下调mdr1 mRNA及P-gp水平。 相似文献
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目的研究姜黄素(curcumin,Cur)及红霉素(erythromycin,EM)对多药耐药(MDR)细胞株K562/A02的影响及作用机制。方法MTF法测定Cur、EM作用后K562/A02细胞对阿霉素(ADM)敏感性的变化。流式细胞仪测定细胞内柔红霉素的平均荧光强度(DNR MFI)。免疫组化法检测细胞膜上P—gP的表达。RT—PCR法检测细胞mdr1 mRNA水平:结果Cur、EM均可减低ADM对K562/A02细胞的IC50值,两药合用时逆转倍数可达11.3倍。K562/A02细胞内DNR MFI明显低于K562细胞(P〈0.01),Cur、EM均可明显增加K562/A02细胞内DNR MFI(P〈0.05),以两药合用时作用最为明显,Cur2.5μg/ml处理组细胞内DNR MFI略高于EM120μg/ml处理组,但差异无统计学意义(P〉0.05)。免疫组化检测结果显示K562/A02细胞P—gP表达明显高于K562细胞(P〈0.01),各组药物分别处理后,K562/A02细胞膜P—gP表达减低(P〈0.01),但仍高于K562细胞(P〈0.01);各药物组处理5d细胞膜P—gP表达均低于3d组(P〈0.01),Cur与EM合用时细胞膜P—gP表达降低最为明湿,低于其它处理组(P〈0.01)。RT—PCR结果显示K562/A02细胞mdr1 mRNA水平明显高于K562细胞(P〈0.01),各组药物处理后,K562/A02细胞mdr1 mRNA水平均减低(P〈0.01),5d组低于3d组,但仍高于K562细胞(P〈0.01);Cur与EM合用时K562/A02细胞mdr1 mRNA水平降低最为显著,Cur 2.5μg/ml处理5dK562/A02细胞mdr1 mRNA水平低于EM120μg/ml处理5d组(P〈0.01)。结论Cur、EM均可部分逆转K562/A02细胞的MDR,降低其P—gP的表达和功能,逆转作用有时间依赖性;两药联合应用时逆转作用明湿增强,Cur2.5μg/ml逆转作用略强于EM120μg/ml。 相似文献
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汉防己甲素联合柔红霉素对K562/A02细胞株P21蛋白和P糖蛋白表达的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究旨在探讨汉防己甲素(TET)对人慢性髓系白血病(CML)急性红白血病细胞株K562/A02多药耐药的逆转作用,及其逆转耐药与细胞周期依赖性激酶抑制因子(p21)、P糖蛋白(P—gp)及其基因的关系,为TET的临床应用提供新的理论基础。K562/A02细胞实验分组为:①单用柔红霉素(DNR)对照组;②DNR+TET0.5mg/L组;⑧DNR+TET1.0mg/L组;④DNR+TET2.0m8//L组。采用Western blot法检测实验各组K562/A02细胞P21的表达。采用流式细胞仪(FCM)检测实验各组细胞P—gp的表达,采用半定量PCR(RT—PCR)测定细胞MDR1基因mRNA表达水平。结果表明:K562/A02细胞中P21蛋白的表达随着TET浓度的增加而增强,P—gp蛋白的表达随着TET浓度的增加而减低。K562细胞中mdr1基因几乎无表达,K562/A02细胞中mdrl基因高表达,随着TET浓度的增加K562/A02细胞mdrl基因表达不断降低。结论:TET对K562/A02耐药具有逆转作用且呈浓度依赖性,其逆转耐药可能与其上调P21蛋白的表达、下调mdrl及P—gp的表达有关, 相似文献
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本研究比较大蒜素、红霉素单用及两药联用逆转K562/A02细胞多药耐药的效果并探讨相关机制,为临床采用低剂量药物联合逆转多药耐药提供实验依据。采用MTT法比较非细胞毒剂量大蒜素、红霉素单用及两药联用对K562/A02细胞多药耐药的逆转效果差异及毒性叠加情况,RT-PCR检测K562/A02细胞mdr1基因表达情况,免疫组织化学法检测P-gp表达情况,流式细胞仪检测细胞内阿霉素平均荧光强度。结果表明:大蒜素1、4、8 mg/L对K562/A02细胞的逆转倍数分别为1.80、2.26、2.82,呈浓度依赖性。红霉素60 mg/L的逆转倍数为2.20,大蒜素与红霉素联用的逆转倍数为4.94,无毒性叠加作用。大蒜素与红霉素单独作用均可下调耐药株mdr1、P-gp的表达,增加胞内阿霉素浓度,而两药联合作用时上述作用明显增强。结论非细胞毒剂量的大蒜素和红霉素联合应用逆转K562/A02细胞多药耐药效果明显强于单用,且无毒性叠加作用。联合用药在下调mdr1/P-gp表达、增加细胞内化疗药物浓度方面具有协同作用。 相似文献
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本研究旨在探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase,GCS)抑制剂D,L-threo-1-phenyl-2-decanoylamino-3-morpholino-1-propanol(PDMP)hydrochloride对K562/A02细胞株柔红霉素(daunorubicin,DNR)耐药的逆转作用及其逆转机制。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度PDMP对K562细胞和K562/A02细胞的增殖抑制效应及其对K562/A02细胞DNR耐药逆转作用;用流式细胞术检测PDMP对K562/A02细胞内DNR浓度及细胞凋亡率的影响;半定量RT-PCR和Western blot方法检测K562及K562/A02细胞mdr1、GCS基因的表达以及PDMP对K562/A02细胞两种基因表达的影响。结果表明:DNR对K562和K562/A02细胞的IC50分别为0.23±0.02和7.15±0.24μg/ml,当PDMP≤20μmol/L时,对K562及K562/A02细胞株无明显生长抑制作用;20μmol/L和10μmol/L PDMP均能增加K562/A02细胞对DNR的敏感性,其耐药逆转倍数分别为2.59和1.69;两种浓度PDMP作用于耐药株48小时后能增加细胞内DNR浓度(p0.05)和细胞凋亡率(p0.01)。20μmol/L PDMP处理K562/A02细胞48小时后可在mRNA和蛋白水平下调GCS和mdr1基因的表达(p0.01)。结论:PDMP可以增强K562/A02细胞对DNR的敏感性,其机制可能与增加细胞内药物浓度及细胞凋亡率、下调GCS和mdr1基因表达有关。 相似文献
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Chen BA Shan XY Chen J Wang F Ding JH Gao C Zhao G Wang XM Xu WL Gao F Xia GH Schmitt M 《中华血液学杂志》2010,31(6):385-388
目的 探讨尼洛替尼、5-溴汉防己甲素(BrTet)及其联合应用对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用及其机制.方法 尼洛替尼、BrTet单独或联合作用于K562/A02细胞,应用MTY法检测细胞增殖抑制率、流式细胞术检测细胞凋亡率、RT-PCR检测mdr1 mRNA的表达及Western blot分析P糖蛋白(P-gp)的表达的情况.结果 5 nmol/L尼洛替尼和0.5μmol/L BrTet单独使用48 h后,柔红霉素(DNR)对K562/A02细胞的IC50分别为4.52 mg/L和5.41 mg/L,联合使用后,DNR对K562/A02细胞的IC50降为2.98 mg/L.单用DNR、尼洛替尼和BrTet均不能增加K562/A02细胞凋亡率(P>0.05),DNR联合尼洛替尼和BrTet后细胞凋亡率明显增高.单用5 nmol/L尼洛替尼和0.5μmol/L BrTet 48 h后,K562/A02细胞mdr1 mRNA灰度值为0.48±0.04、0.64±0.01,两者合用K562/A02细胞mdr1 mRNA灰度值下降为0.35±0.04.单用5 nmol/L尼洛替尼作用48 h,P-gp的表达水平为0.61±0.05;单用0.5μmoL/L BrTet作用48 h,P-gp的表达水平为0.52 ±0.02;两者合用K562/A02细胞P-gp的表达水平降为0.44±0.03.结论 单独应用尼洛替尼和BrTet均可部分逆转K562/A02细胞的耐药,机制可能与降低mdr1 mRNA和P-gp的表达及增加K562/A02细胞凋亡有关,并且两药联用具有明显的协同作用. 相似文献
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目的研究孕激素拮抗剂米非司酮对白血病多药耐药细胞K562/A02的逆转作用及其机制。方法MTT法检测米非司酮作用72h后K562/A02细胞增殖及其对阿霉素杀伤敏感性的变化;流式细胞术检测米非司酮作用前后K562/A02细胞表面P糖蛋白的表达和细胞内柔红霉素的浓度;免疫组化法观察米非司酮作用前后K562/A02细胞凋亡相关蛋白bcl-2、Bax、caspase-3的表达;RT—PCR检测米非司酮作用后对K562/A02细胞内葡萄糖神经酰胺合成酶(GcS)mRNA表达的影响。结果2.5、5.0和10.0μmol/L米非司酮不抑制K562/A02细胞的增殖,但上述浓度的米非司酮作用后K562/A02细胞对阿霉素的敏感性较前分别增强了1.68、4.17和10.71倍。K562/A02细胞表面P糖蛋白的表达为(49.03±5.32)%,10μmol/L米非司酮作用72h后降低到(28.60±2.13)%(P〈0.01);K562/A02细胞内柔红霉素的浓度为(61.07±8.61)%,而10μmol/L米非司酮作用后升高到(92.72±3.48)%(P〈0.01)。经10μmol/L米非司酮作用后,bcl-2蛋白表达由(56±9)%降低到(37±6)%(P〈0.05);Bax蛋白由(40±5)%升高到(87±10)%(P〈0.01);caspase-3蛋白则由(36±7)%升高到(89±6)%(P〈0.01)。RT—PCR结果显示K562/A02细胞GcS mRNA的表达较K562细胞明显升高,10μmol/L米非司酮能明显降低K562/A02细胞内GcS mRNA的表达。结论米非司酮可逆转白血病K562/A02细胞的多药耐药,且具有剂量依赖性。10μmol/L米非司酮能明显逆转白血病K562/A02细胞的多药耐药,其机制与降低P糖蛋白的水平,调节凋亡相关蛋白bcl-2、Bax、caspase-3的表达,降低GcS mRNA有关。 相似文献
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汉防己甲素对K562/A02细胞株SORCIN基因表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究旨在探讨汉防己甲素(Tet)在逆转K562/A02细胞耐药与耐药相关的可溶性钙结合蛋白(SORCIN)基因表达之间的关系,为Tet的临床应用提供新的理论基础。通过MTT法筛选出所需浓度Tet,与K562/A02细胞株孵育培养48小时后,通过MTT检测Tet对柔红霉素(DNR)细胞毒性的影响,用RT-PCR方法检测SORCIN基因表达的变化,用Western blot方法检测sorcin表达蛋白的变化。结果表明:在所选浓度范围内,Tet可以增强DNR对K562/A02的细胞毒作用,(Tet浓度为0,0.5,1.0,2.0mg/L时DNR和Tet的IC50分别为11.3±0.17,5.15±0.10,3.91±0.06,2.52±0.04mg/L,p〈0.01);K562/A02细胞中SORCIN基因高表达,且随着Tet浓度的增加SORCIN的表达先增强后减弱(Tet浓度为0.5mg/L时增强,1.0和2.0mg/L时减弱,p〈0.05);K652细胞中sorcin蛋白低表达,K562/A02细胞中sorcin蛋白高表达,且随着Tet浓度的增加先增强后减弱(Tet浓度为0.5mg/L时增强、1.0和2.0mg/L时减弱,p〈0.05)。结论:MTT检测显示Tet对K562/A02耐药逆转呈浓度依赖性,Tet可能通过调整SORCIN基因及蛋白的表达参与逆转K562/A02的耐药性,但并不与其耐药逆转作用完全相关。 相似文献
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本研究探讨汉防己甲素(Tet)、雌激素受体抑制剂托瑞米芬(Tor)及其联合应用对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用。采用噻唑蓝法(MTT)测定阿霉素(ADR)的半数抑制量,RT-PCR法检测MDR1基因mRNA表达水平,FCM检测P-gp的表达和细胞内ADR浓度。结果表明:ADR对K562/A02和K562细胞的IC50分别为57.43和1.16mg/L,Tet(1μmol/L)和Tor(2.5μmol/L)单用及两药联用处理K562/A02细胞时,ADR的IC50值分别为14.12,20.74和9.14mg/L。Tet及Tor单独作用后耐药株MDR1 mRNA下调微弱,联合用药下调效果明显。Tet及Tor均可降低P-gp蛋白的表达,且具有协同作用。Tet及Tor作用后细胞内ADR浓度增加,两药联合作用时效果增强。结论:Tet及Tor均可逆转K562/A02细胞多药耐药,联合作用时效果增强。 相似文献
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本研究旨在探讨联合应用尼洛替尼(nilotinib)和汉防己甲素(tetrandrine,Tet)逆转K562/A02细胞耐药与诱导凋亡的相关性及其机制。应用MTT法检测细胞敏感性,计算尼洛替尼和Tet干预后的柔红霉素(DNR)的半数抑制浓度(IC50),用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,RT-PCR检测bax、survivin mRNA的表达及Western blot分析BAX、SURVIVIN蛋白的表达情况。结果表明:5 nmol/L尼洛替尼或1.0μml/L Tet单独作用48小时后,DNR对K562/A02细胞的IC50分别为(5.71±0.72)mg/L和(6.52±0.43)mg/L,两药联合应用时DNR对K562/A02细胞的IC50降为(3.12±0.13)mg/L。单用尼洛替尼或Tet均能增加经DNR作用的K562/A02细胞的凋亡率,两药联合作用时凋亡率增高更明显。单用5 nmol/L尼洛替尼或1.0μml/L Tet 48小时后可上调bax mRNA及其蛋白的表达,且两药联合作用时上调幅度明显。单用5 nmol/L尼洛替尼或1.0μml/LTet48小时后可下调survivin mR... 相似文献
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白细胞介素2和α干扰素逆转白血病细胞多药耐药的研究 总被引:6,自引:1,他引:6
目的:探讨细胞因子对人白血病细胞系K562/S及其多药耐药细胞系K562/A02的影响。方法:以MTT法测定小剂量细胞因子作用后柔红霉素(DNR)的毒性变化;用荧光法测定细胞内药物浓度;用免疫组化法检测p-膜糖蛋白(p-gp)变化;用RT-PCR法检测多药耐药基因(mdr-1)mRNA。结果:发现DNR对K562/A02及K562/S的半数抑制率(IC50)分别为45.08μg/ml及0.607μg/ml。α干扰素(IFN-α)和白细胞介素2(IL-2)作用24小时可增加DNR对K562/A02的细胞毒作用,与未加药组相比IC50下降为16.39及11.96μg/ml,但不影响K562/S细胞(IC50无明显改变)。且IFN-α、IL-2可提高细胞内DNR浓度,从未加药组的2151ng/mg蛋白到2570及2503ng/mg蛋白。但p-gp及mdr-1mRNA无明显改变。结论:IFN-α、IL-2可增加DNR对K562/A02细胞的毒性作用,增加K562/A02细胞内的药物浓度,但不是通过下调mdr-1mRNA机制而起逆转作用。 相似文献
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细胞内钙与K562/A02细胞多药耐药相关性的研究 总被引:2,自引:1,他引:2
本研究旨在探讨白血病耐药细胞的发生及其逆转机制与细胞内钙离子浓度的关系。用甲基四唑蓝法(MTT)测定柔红霉素 (daunomycin ,DNR)的细胞毒性 ,用Fura 2 /AM方法测定耐药细胞株K5 6 2 /A0 2及其敏感株K5 6 2的静息 [Ca2 ]i水平 ,并观察了柔红霉素及耐药调节剂汉防己甲素 (Tetrandrine,Tet)、屈洛昔芬 (droloxifene,DRL)单独或联合应用后细胞内游离钙离子浓度的变化。结果表明 :1μmol/LTet,5 μmol/LDRL均能增加DNR对耐药细胞系K5 6 2 /A0 2的细胞毒作用 ,IC50 (半数抑制量 )分别为 ( 7.2 8± 2 .0 6 ) μg/ml,( 7.5 8± 3.4 4 ) μg/ml,逆转倍数为 2 .94和 2 .82倍。两药联合作用明显增强 ,IC50 为 ( 1.6 6± 0 .4 1) μg/ml,逆转倍数达 12 .9倍。静息状态下K5 6 2 /A0 2细胞的游离钙离子浓度显著高于K5 6 2细胞。 1μmol/LTet,5 μmol/LDRL单独作用于K5 6 2 /A0 2细胞引起 [Ca2 ]i的明显升高 ,两者联合应用有拮抗作用。结论 :K5 6 2 /A0 2细胞内Ca2 浓度的增高可能是导致其耐药的原因之一 ,但耐药调节剂Tet,DRL对耐药细胞 [Ca2 ]i的影响在其逆转耐药中的作用有待进一步研究 相似文献
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本研究旨在比较酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼(Imatinib)、尼洛替尼(Nilotinib)对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用。用RT-PCR法检测各组mdr-1mRNA、bcr-abl mRNA表达;用Western blot法检测各组P-gp、P210蛋白表达;用流式细胞术检测各组细胞内柔红霉素(DNR)的蓄积。结果表明:0.0625μmol/L伊马替尼、5nmol/L尼洛替尼对K562/A02细胞无明显细胞毒性,伊马替尼和尼洛替尼上述剂量单独作用48小时均下调mdr-1mRNA、bcr-abl mRNA、P-gp、P210蛋白的表达,且尼洛替尼较伊马替尼作用更强。荧光强度检测显示,K562/A02细胞经伊马替尼、尼洛替尼单独处理48小时后,其细胞内DNR浓度分别为K562细胞中的7.85%、12.02%。结论:酪氨酸激酶抑制剂具有很好的逆转细胞耐药作用,且尼洛替尼较伊马替尼逆转作用更强。 相似文献
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siRNA逆转K562/A02细胞多药耐药的研究 总被引:24,自引:3,他引:24
目的 研究小分子干扰RNA片段 (smallinterferingRNAs,siRNA)对白血病多药耐药细胞系K5 6 2 A0 2mdr1基因和P 糖蛋白 (P gp)表达及功能的影响。方法 根据mdr1基因已知序列设计 3条含 2 1个碱基的siRNA(si mdr1 1,si mdr1 2 ,si mdr1 3)及阴性对照 (si neg) ,在脂质体的介导下转染K5 6 2 A0 2细胞 ;用RT PCR分析mdr1mRNA的表达 ;流式细胞术检测P gp表达和细胞内柔红霉素积累量 ;MTT法检测阿霉素对K5 6 2 A0 2细胞的半数抑制浓度 (IC50 )。结果 3条siRNA均能不同程度地逆转K5 6 2 A0 2细胞的多药耐药。第 3条序列能更有效地封闭mdr1基因 ,使mdr1mRNA相对水平下降(5 8.0± 1 5 4 ) % ;P gp表达由处理前的 (76 .0± 1.0 ) %降到处理后的 (19.6± 1.9) % ;对阿霉素药物敏感性的相对逆转效率为 70 .4 % ;同时使K5 6 2 A0 2细胞内柔红霉素积累量增加。结论 siRNA可逆转mdr1基因编码蛋白P gp介导的多药耐药。 相似文献
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本研究的目的是探索汉防己甲素(Tet)与5-溴汉防己甲素(BrTet)逆转耐药的机制是否与调节多药耐药相关蛋白7(MRP7)表达水平有关。采用MTT法检测柔红霉素(DNR)对人白血病敏感细胞株K562与人白血病耐药细胞株K562/A02细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50)及耐药倍数。将细胞分组,加入BrTet、Tet,用实时PCR法检测细胞MRP7 mRNA表达,Western bolt法检测细胞MRP7蛋白和P-糖蛋白(P-gp)的表达,流式细胞术检测细胞内DNR蓄积。结果表明:K562/A02对DNR的耐药倍数为23.65倍。分别加入1μmol/L Tet与2.0μmol/L BrTet后,K562/A02细胞的MRP7 mRNA相对表达水平分别降低至2%和12%,MRP7蛋白表达降低了53.2%与83.7%,P-gp表达分别下调58.47%与52.20%;1.0μmol/L Tet与2.0μmol/L BrTet分别使K562/A02细胞内DNR提高了94.32%与271%。结论:BrTet与Tet均可逆转耐药,其逆转机制除了抑制P-gp的表达之外,还可能与抑制MRP7的表达,增加肿瘤细胞内抗肿瘤药物浓度有关。在相同摩尔浓度下,Tet与BrTet对MRP7表达的下调作用无显著性差异。 相似文献