微丝对牵张应变诱导的人牙周膜成纤维细胞中环氧合酶-2表达的影响

目的 探讨微丝的聚合在人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）正畸力信号传导中的作用。方法 将培养的hPDLFs接种于膜式细胞牵张应变施加装置上,随机分为对照组、单纯加力组、加力+细胞松弛素组。对照组牵张应变量为0;单纯加力组和加力+细胞松弛素组设定细胞静态牵张应变量为18%,加载时间分别为8 h、16 h和24 h。加力+细胞松弛素组在施加牵张应变量前加入5 μg/mL的细胞松弛素B来破坏微丝的聚集作用。用免疫组织化学法检测细胞中环氧合酶-2（COX-2）的表达,测定灰度值并进行统计学处理。结果 单纯加力组在18%牵张应变量作用下,COX-2表达随着加载时间的增加而增强;加力+细胞松弛素组在18%牵张应变量作用下,COX-2的表达明显降低,且各加载时间组间表达无差别。结论 微丝的聚合介导了hPDLFs中正畸力信号传导,破坏微丝的聚合作用将阻碍力学信号的传导,从而降低COX-2的表达。     

人牙周膜成纤维细胞的培养及牵张应变诱导凋亡研究

目的:探讨人牙周膜成纤维细胞的分离、培养及在牵张应变作用下发生早期凋亡的情况。方法:刮取健康人前磨牙牙周膜,进行牙周膜成纤维细胞的分离、培养及生长曲线描绘。经3～4代传代培养后,对细胞加载1%～20%的牵张应变,加载时间分别为30min,1h、6h、12h然后通过流式细胞仪检测Annexin V-FITC(异硫氰酸荧光素)及激光扫描共聚焦显微镜进行细胞的早期凋亡鉴定。结果:人牙周膜成纤维细胞传代到12代以后,细胞逐渐呈衰老生状,胞体变大,细胞生长缓慢。人牙周膜成纤维细胞的凋亡率在30min组低于对照组,但两者间无统计学差异。在6h内,人牙周膜成纤维细胞的凋亡情况随加载时间和加载应力的增加而增加(P<0.05)。在12h时所有组的细胞凋亡均减少。结论:人牙周膜成纤维细胞的使用最好在12代以内,尤其是3～4代细胞的活力、增殖能力较好。牵张应变可以诱导细胞发生早期凋亡。     

口腔组织病理学

人外周血单个核细胞对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响，丹参对槟榔碱诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用，Runx2／cbfa1在人牙胚发育过程中的表达，SV40在人成牙本质细胞永生化中作用的初步研究，静态牵张应变对人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响……     

模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响

目的：观察模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞环氧化酶-2(COX-2)基因表达的影响。方法：原代培养人牙周膜成纤维细胞，应用可控压力细胞加载装置模拟咬合压力，分别施加30、60、90kPa的间歇性压力，每次15min，每天3次，在3、5d后提取细胞总RNA，定量后点于尼龙膜上，同时利用引物扩增COX-2基因的一段特异性片段作为cDNA探针，将探针同位素标记后与膜杂交，以观察COX-2在mRNA水平表达的变化。结果：加载模拟咬合压力的人牙周膜成纤维细胞COX-2表达水平明显高于对照组，而且在一定范围内表达水平与加压力值成剂量依赖关系；各加压组加压3d与5d之间细胞COX-2mRNA表达无明显差异。结论：加载模拟咬合压力条件下培养的人牙周膜成纤维细胞COX-2基因表达增高。     

Bcl-2和Bax在牵张应变诱导HPDLCs凋亡中的表达研究

目的：研究牵张应变诱导人牙周膜细胞（HPDLCs）凋亡过程中细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达变化情况。方法：体外培养HPDLCs,利用动态机械应变细胞加载装置对HPDLCs加载20%动态牵张应变24h,通过real-time PCR检测Bcl-2和Bax在mRNA水平上的表达差异。结果：HPDLCs加载后,呈现栅栏状相互平行排列趋势,排列方向垂直于牵张力方向。Bcl-2和Bax基因表达显著增加,Bcl-2/Bax比值显著下降,有明显统计学意义（P〈0.05）。结论：牵张应变诱导人牙周膜细胞凋亡过程中,Bcl-2家族起到了重要作用。     

压力作用时间对人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1的影响

目的:探讨压力作用不同时间对人牙周膜成纤维细胞表达TGF-β1的影响.方法:本实验采用细胞加载装置,对人牙周膜成纤维细胞施加1.0MPa的压力,分别持续1Omin、30min、50min、通过酶联免疫吸附实验,分别检测细胞受力后6h、12h、18h、24h时TGF-β1的含量.结果:加载1Omin组在细胞受力后的各个时段TGF-β1含量与对照组相比无显著性差异(P>0.05).加载30min组(0.51±0.06)和加载50min组(0.46±0.06)TGF-β1含量在细胞受力后的第12h同对照组(0.78±0.08)相比明显降低(P<0.05).结论:在一定加载时间内,人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1量随着压力作用时间的延长而有所降低.     

牵张应变诱导人牙周膜细胞晚期凋亡的实验研究

目的研究机械牵张应变对人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,HPDLCs）晚期凋亡的影响。方法体外培养HPDLCs,利用动态机械应变细胞加载装置对HPDLCs加载1%、10%和20%的动态牵张应变6、12、24和48 h,通过流式细胞仪和激光扫描共聚焦显微镜对经过TUNEL染色的细胞进行晚期凋亡检测。采用SPSS 11.0软件包对数据进行统计学分析。结果HPDLCs加载后,呈现栅栏状相互平行排列趋势,排列方向垂直于牵张力方向。各应变组细胞的晚期凋亡率在加载24 h时达到该应变组的峰值,且具有一定时间和应变依赖性。结论通过动态机械应变细胞加载装置对人牙周膜细胞的牵张加载,发现牵张应变可以诱导细胞发生晚期凋亡,具有时间和应变值依赖性,24 h时晚期凋亡率达到峰值。     

牵张应变作用下人牙周膜细胞内磷脂酶C-γ1水平的变化

目的:观察机械牵张应变作用下,人牙周膜细胞(HPDLCs)内磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)水平的变化。方法:通过原代和传代培养,获得性状稳定的人牙周膜细胞,使用动态机械应变细胞加载仪对细胞进行1%、10%和20%动态牵张应变加载。加载不同时间,通过流式细胞仪对细胞进行PLC-γ1水平检测。采用SPSS13.0软件包对数据进行方差分析。结果:在加载牵张应变初期,细胞内的PLC-γ1水平维持较低水平;随着牵张应变加载时间的延长,牙周膜细胞内的PLC-γ1水平逐渐升高。50min时,PLC-γ1水平达到各应变组的最高值(P<0.01)。随着加载时间的继续延长,60min时,各应变组的PLC-γ1水平都显著下降(P<0.01)。结论:牵张应变可引起细胞内PLC-γ1水平的变化。     

牵张应变作用下人牙周膜细胞内磷脂酶C-γ1水平变化的实验研究

目的 观察人牙周膜细胞（HPDLCs）内磷脂酶C-γ1（PLC-γ1）水平在机械牵张应变作用下的变化.方法 通过原代和传代培养,获得性状稳定的人牙周膜细胞,使用动态机械应变细胞加载仪对细胞进行1％、10％和20％动态牵张应变加载.并于加载后10 min、20 min、30 min、40 min、50 min和60 min,通过流式细胞仪和激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内PLC-γ1水平的变化.应用SPSS13.0软件包对数据进行统计分析.结果 流式细胞仪检测发现：加载初期,细胞内的PLC-γ1水平维持在较低水平,随着牵张应变加载时间的延长,牙周膜细胞内PLC-Y 1水平逐渐升高.50 min时PLC-Y 1水平达到了各个应变组的最高值（P＜0.01）,60 min时各应变组的PLC-γ1水平都有所下降（P.＜0.01）.激光扫描共聚焦显微镜检测发现：各组都有PLC-γ1的表达,其中50 min加载组表达相对较强.结论 机械牵张应变可以引起人牙周膜细胞内PLC-γ1表达量发生改变.     

脂多糖对人牙周膜细胞COX-2蛋白表达的影响

目的：观察脂多糖对人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响,探讨牙周病发生发展过程中脂多糖（LPS）与COX-2的关系。方法：使用不同浓度LPS刺激体外培养人牙周膜成纤维细胞,免疫组织化学法检测细胞COX-2蛋白表达,灰度分析并进行统计学处理。结果：LPS组COX-2蛋白表达明显高于对照组,并且LPS浓度越高,COX-2表达越强。结论：LPS能够诱导人牙周膜成纤维细胞COX-2表达上调,随着LPS刺激浓度增高,COX-2表达逐渐增强,这一机制很可能在牙周炎发生发展过程中扮演重要角色。     

牵张力作用下培养的人牙周膜成纤维细胞生成NO的实验研究

目的：观察在机械牵张力作用下牙周膜成纤维细胞NO的生成情况以及iNOS的表达情况。方法：用自行研制的细胞加载系统，对培养至第4代的人牙周膜成纤维细胞施以频率为每分钟6个周期（5s拉伸，5s松弛）、拉伸率为12％的牵张力，分别于加载后3，10，20，40，60min取上清液进行NO含量检测；以及于加载24，48，96h后固定细胞，进行iNOS免疫组化反应。结果：NO含量在所研究时间范围内逐渐增加；iNOS免疫组化结果显示iNOS的染色强度随着作用时间延长而增强。结论：牙周膜成纤维细胞在机械牵张力作用下合成NO增多，它可能通过合成和释放NO这一途径，在应力作用下的牙周组织改建过程中起作用。     

机械拉伸对人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原及蛋白合成的影响

目的：研究拉伸应变对人牙周膜成纤维细胞I型胶原及蛋白合成的影响。方法：应用酶联免疫吸附实验及考马斯亮蓝微板法对拉伸应变下的细胞合成代谢变化进行观察,应变范围为1－8％,结果：在0．5－8％拉伸应变范围内,人牙周膜成纤维细胞I型胶原合成无明显变化,但1－8％拉伸应变作用下细胞蛋白合成减少,其中2％拉伸应变影响最明显。结论：拉伸应变可改变人牙周膜成纤维细胞细胞外基质成分。     

乙二胺四乙酸和透明质酸对牙周膜成纤维细胞活力和细胞因子表达的影响

目的： 研究乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA）和透明质酸（hyaluronic acid,HA）对牙周膜成纤维细胞（periodontal ligament fibroblasts,PDLFs）活力和细胞因子表达的影响。方法： 选取因正畸拔除的智牙12颗,制备成5 mm×4 mm大小根片,按照处理方式不同分为EDTA组、HA组、EDTA+HA组和未处理组。将其置于孔板中并在根片上接种PDLFs,于接种24、48 h后,采用MTT法检测各组细胞增殖活力,显微镜下观察PDLFs的黏附情况。利用ELLISA法和Western 免疫印迹法测定PDLFs产生的炎性细胞因子IL-6、IL-8、IL-1β和TNF-α水平,采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计分析。结果： 接种24、48 h后,与未处理组相比,各处理组均能促进PDLFs增殖和黏附,且联合处理促细胞增殖和黏附效果优于单一处理,差异均具有统计学意义（P<0.05）;EDTA组和HA组促细胞增殖和黏附效果随接种时间的延长而增加,但组间相比无显著差异（P>0.05）。ELLISA法和Western免疫印迹检测结果显示,各处理组较未处理组均能抑制炎性因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达,促进IL-8表达,且EDTA+HA组的作用效果更明显,差异有统计学意义（P<0.05）。结论： EDTA+HA能显著促进牙周膜成纤维细胞生长和抑制炎性细胞因子表达,可能与其增强成纤维细胞黏附力、提高其生存能力有关。     

周期性张应力对牙周膜细胞内基质金属蛋白酶-8和13表达的影响

目的：观察周期性张应力作用下牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,HPDLC）中基质金属蛋白酶（MMPs）的表达变化。方法：通过建立体外应力加载系统,对培养在弹性膜六孔板的HPDLC施加0.1Hz,硅胶膜形变率分别为6%、12%、18%的周期性张应力,分别在加载2、6、12h后利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western Blot技术检测HPDLC的MMP-8,MMP-13的表达变化。结果：HPDLC在加载周期性牵张力后,细胞生长方向顺应力方向而发生改变,MMP-8和MMP-13的表达明显增加。结论：周期性循环张力可诱导HPDLC中MMP-8、MMP-13表达增强,为MMP-8、MMP-13可能参与正畸力下牙周组织的改建提供了依据。     

机械牵张作用对牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的 :观察机械牵张作用对牙周膜成纤维细胞 (PDLFs)增殖能力的影响。方法 :用自行研制的细胞加载系统对PDLFs施以频率为 6次 /min(每次为 5s牵拉、5s松弛 ) ,幅度 12 %的牵张力 ,于加载 2 4、48、96h后 ,通过细胞计数、流式细胞仪检测观察PDLFs增殖能力的改变情况。结果 :在不同的时间点 ,加力组及对照组的细胞数均不断增加 ,在 48h及 96h时加力组结果明显高于对照组。流式细胞仪结果显示在不同时间点加力组处于DNA合成期的细胞数明显高于对照组。结论 :在对培养的人PDLFs施加频率为 6次 /min、幅度 12 %的牵张力时 ,对细胞的增殖起一定的促进作用     

牙周膜成纤维细胞-富血小板胶的合成及其成骨活性表达的研究

目的：体外合成牙周膜成纤维细胞-富血小板胶（Periodontal ligament fibroblasts-Platelet—Rich Plasma gel，PDLFs／PRP—gel）并探讨其在临床应用中最佳植入时间。方法：体外合成PDLFs／PRP—gel；并测定其碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）含量；免疫组化法检测基质中骨涎蛋白（Bone sialoprotein，BSP）、骨桥蛋白（Osteopontin，OPN）含量；Von Kossa染色法观察沉积钙盐。结果：PDLFs／PRP—gel基质内第6d时ALP含量明显增高，第8-10d达到峰值，11d后迅速下降，与对照组比较差异有统计学意义。基质内骨桥蛋白在15—16d时表达明显，与其他时间的实验组比较有统计学差异；骨涎蛋白在4～6d和15～18d时表达明显，与其他时间的实验组比较有统计学差异。PRP—gel缓释液培养的人牙周膜成纤维细胞约在第15d时出现钙化结节。结论：临床牙周组织再生术中宜选用在体外培养8—15d的PDLFs／PRP—gel进行植入。     

静态机械拉伸应变对人牙周膜成纤维细胞前列腺素E2分泌量的影响

目的：研究静态机械拉伸应变对体外培养的人牙周膜成纤维细胞前列腺素E2(PGE2)分泌量的影响。方法：实验的拉伸应变量设为0％、8％、12％、16％、20％5种，加力时间为24、48、72h3种，总共分为15组，每组设3个样本。加力完毕后，用RIA ELISA法分析每个样本培养基中PGE2的含量并进行统计分析。结果：在0％力值组，PGE2的每天分泌量与加力时间无关；在8％、12％、16％力值组，PGE2的每天分泌量随着加力时间和力值的增加而递增，但每天递增量随着加力时间的增加而减少；在20％力值组，PGE2的每天分泌量与加力时间成反比；在各个时间组，PGE2的每天分泌量均在16％力值处达到最高值。结论：在细胞的生理应变承受范围(0％、8％、12％、16％)内，静态机械拉伸应变促进人牙周膜成纤维细胞PGE2的分泌，但刺激效应随着加力时间的增加而减少；当拉伸应变量超过了细胞的生理应变承受范围(20％)．则PGE2的分泌量会随着加力时间的增加而减少。     

A regulatory role of Piezo1 in apoptosis of periodontal tissue and periodontal ligament fibroblasts during orthodontic tooth movement

Investigation on the effect of Piezo1 on periodontal tissue and periodontal ligament fibroblasts (PDLFs) under mechanical stress and the underlying mechanism. The orthodontic tooth movement rat model was established via an orthodontic spiral tension spring. PDLFs were cultured and subjected to 2.0 g/cm² static compressive loading. Blocked the Piezo1 via Piezo1 inhibitor, GsMTx4. TUNEL staining and flow cytometry determined the apoptosis rate of periodontal tissue and PDLFs in rats. Expression of Piezo1, p-p38 and ERK1/2 was analysed by immunofluorescence assay and western blotting. Piezo1 inhibitor GsMTx4 relieved the increased expression of Piezo1, ERK1/2 and p-p38, and alleviated apoptosis in periodontal tissue and PDLFs under compressive loading. Piezo1 inhibition can alleviate force-induced apoptosis and damage in rats' periodontal tissue and PDLFs, and regulate the p38/ERK1/2 signalling pathway.