重组ANGPT2及抗体对白血病荷瘤小鼠ANGPT1/2表达的影响

目的 应用重组的ANGPT2及ANGPT2单克隆抗体注射急性髓系白血病荷瘤小鼠,了解荷瘤小鼠肿瘤组织中ANGPT1/2表达的变化.方法 应用HL-60细胞构建急性髓系白血病模型,同时给予小鼠注射重组的ANGPT2和Anti-ANGPT2,应用Western blot检测急性髓系白血病小鼠肿瘤组织中的ANGPT1/2蛋白的表达.结果 应用重组的ANGPT2,对照组与实验组中的ANGPT1和ANGPT2蛋白的表达差异无统计学意义;应用An-ti-ANGPT2,对照组与实验组中的ANGPT2蛋白的表达差异无统计学意义,ANGPT1蛋白的表达明显低于对照组.结论 进行ANGPT2单克隆抗体实验时,需要阻断VEGF以达到理想的结果。     

ANGPT2/TIE2信号通路与急性髓细胞白血病关系的研究进展

促血管生成素(ANGPT)是近年来发现的唯一含有受体激动剂和受体抑制剂的血管生长因子家族。ANGPT/Ⅰ型酪氨酸激酶受体(TIE)系统包括两种Ⅰ型酪氨酸激酶受体TIE1和TIE2及4种配体ANGPT1、ANGPT2、ANGPT3、ANGPT4,TIE2是4种配体的共同受体,其中ANGPT2/TIE2在急性髓细胞白血病(AML)的发病机制中发挥着重要作用,ANGPT2参与白血病患者骨髓新生血管的生成以及白血病细胞的增生、侵袭和转移,与AML的预后呈负相关。通过对ANGPT2/TIE2信号转导通路与AML关系的研究,可以阐明信号通路在AML中的发生机制,从而为靶向ANGPT2治疗提供依据。     

PTEN?VEGF?FLT1基因在髓系白血病中的表达及其相关性研究

目的:探讨肿瘤抑制基因PTEN及血管内皮生长因子(VEGF)及其受体FLT1(VEGFR1)在白血病中的表达及其相关性。方法:应用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测50例初治急性髓系白血病(AML),10例缓解期AML,10例慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)、10例CML急变期(CML-BC)患者和10例正常人骨髓单个核细胞(MMNCs)中PTEN、VEGF、FLT1 mRNA的表达。结果:初治AML患者PTEN mRNA表达水平明显低于缓解组AML和正常对照组,CML-BC患者PTEN mRNA表达水平低于CML-CP患者,在AML初治白血病中PTEN mRNA与VEGF和FLT1 mRNA表达负相关,PTEN低表达、VEGF和FLT1高表达与AML缓解率及髓外浸润相关。结论:髓系白血病患者中低表达PTEN基因,高表达VEGF及FLT1基因,并与白血病预后不良及髓外浸润密切相关,三者相互作用共同参与了白血病的发病。     

肾积水后缺氧诱导因子-1、血管内皮生长因子、微小RNA-210的动态表达

目的：观察小鼠肾积水后缺氧诱导因子‐1（HIF‐1）、血管内皮生长因子（VEGF）、微小RNA（miRNA）‐210在不同时间点的表达变化并探讨其调控机制。方法采用丝线结扎单侧输尿管的方法制备急性完全性单侧肾积水模型（UUO模型），分为假手术对照组和单侧肾积水组，于单侧肾积水后2、5、9、14 d分别颈椎脱臼处死。采用实时荧光定量 PCR检测肾积水后患肾各时间点HIF‐1 mRNA 、VEGF mRNA及miRNA‐210的表达变化，采用Western blot方法检测肾积水后各时间点HIF‐1蛋白的表达变化。结果 HIF‐1 mRNA表达水平在肾积水后表达量逐渐上调（P＜0．05）。VEGF mRNA及miRNA‐210表达水平在肾积水后2 d升高并达到高峰，于UUO后5、9、14 d表达量逐渐下调（P＜0．05）。HIF‐1蛋白表达量逐渐上调。结论肾积水后HIF‐1 mRNA及蛋白表达逐步上调，VEGF mRNA及miRNA‐210表达一过性上调，可能与肾积水后肾皮质被压迫机体对缺氧、缺血产生适应性反应有关。     

人血管内皮细胞在白血病小鼠中参与形成微血管的研究

【目的】研究人血管内皮细胞在建立NOD/SCID小鼠白血病微血管中的作用。【方法】NOD/SCID小鼠分3组：A空白对照组,B注射EC组,C建立白血病模型后注射EC组。通过免疫组化对NOD/SCID小鼠骨髓的血管生成及全身肿瘤负荷情况进行评价。【结果】C组骨髓微血管密度明显大于A、B组,白血病新生的微血管分支多紊乱,管腔较不规则,血管形态幼稚。【结论】用人血管内皮细胞成功建立NOD/SCID小鼠白血病微血管生成模型,可用于抗白血病血管生成及相关实验的研究。     

人血管内皮细胞在白血病小鼠中参与形成微血管的研究

 【目的】研究人血管内皮细胞在建立NOD/SCID小鼠白血病微血管中的作用。【方法】NOD/SCID小鼠分3组:A空白对照组,B注射EC组,C建立白血病模型后注射EC组。通过免疫组化对NOD/SCID小鼠骨髓的血管生成及全身肿瘤负荷情况进行评价。【结果】C组骨髓微血管密度明显大于A、B组,白血病新生的微血管分支多紊乱,管腔较不规则,血管形态幼稚。【结论】用人血管内皮细胞成功建立NOD/SCID小鼠白血病微血管生成模型,可用于抗白血病血管生成及相关实验的研究。     

血管内皮生长因子在急性髓系白血病细胞中的表达

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在成人急性髓系白血病（AML）的发生发展中的作用。方法：采用志录PCR（RT－PCR）和酶联免疫吸附（ELISA）的方法研究50 AML病人及16位正常人骨髓细胞及血浆VEGF的表达。结果：部分正常人和大多数AML病人的骨髓细胞及白血病细胞系均表达VEGF。AML病人骨髓细胞VEGF表达阳性率（82％）明显高于正常人（30．76％）及骨髓移植后的AML病人（41．76％）。难治型和非难治型AML病人血浆中VEGF浓度均显著高于正常人AML骨髓移植后病人（P＜0．01）。队正常人与骨髓事AML病人血浆中VEGF浓度比较无统计学差异外（P＞0．05），另与其他两者之间均有显著性差异（P＜0．01）。难治型和非难治型白血病病人骨髓细胞分泌的VEGF分别比正常人高11．0和7．3倍，且两者之间比较有显著性差异（P＜0．01）。结论：VEGF在AML病人中存在异常表达，在AML的发病机制中可能起一定的作用，且可能成为判断AML病人预后指标之一。     

Nanog高表达可能是急性髓系白血病预后较好的生物标志

目的: 研究Nanog基因表达水平与急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者预后的关系。方法: 采用实时荧光PCR检测31例健康骨髓样本、146例初诊AML患者骨髓样本及其中11例经治疗后达到完全缓解的患者随访标本的Nanog mRNA表达水平。采用受试者工作特征曲线（ROC）区分AML患者与对照者。通过生存曲线分析Nanog mRNA表达水平与生存期的关联。结果： AML患者Nanog mRNA的表达显著高于健康组(P=0.01)。在非低危组患者中,Nanog高表达的患者生存时间明显长于Nanog mRNA低表达组(P＝0.031）。11例完全缓解患者的Nanog mRNA的表达量明显高于治疗前（P＝0.002）。多变量分析显示,Nanog低表达在AML患者中是一个独立的危险因素。 结论： 高表达的Nanog基因是急性髓系白血病患者较好预后的生物学标志。     

补肾安胎冲剂对复发性自然流产小鼠蜕膜血管内皮生长因子及其受体调控作用研究

目的 观察补肾安胎冲剂对复发性自然流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）小鼠胚胎丢失率和蜕膜组织血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及其受体的影响。方法 采用Clark经典RSA小鼠模型,将RSA小鼠随机分为模型组、补肾安胎冲剂低剂量（11.7 g/kg）组、补肾安胎冲剂高剂量（23.4 g/kg）组,黄体酮胶囊（156 mg/kg）组,另取正常妊娠小鼠作为正常组,每组8只。末次给药后,处死小鼠,计算胚胎丢失率;光镜下观察蜕膜组织血管形态学改变;采用免疫组化法检测蜕膜组织VEGF、血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2）、可溶性血管内皮生长因子受体-1（soluble vascular endothelial growth factor receptor 1,sVEGFR-1）的表达;采用RT-PCR法检测小鼠蜕膜组织中VEGF、VEGFR-2及sVEGFR-1 mRNA的表达。结果 补肾安胎冲剂能改善蜕膜组织血管形态学变化,升高蜕膜组织中VEGF和VEGFR-2蛋白含量,降低sVEGFR-1蛋白含量;能显著降低RSA小鼠胚胎丢失率（P<0.05）,升高蜕膜组织中VEGF和VEGFR-2 mRNA表达水平,降低sVEGFR-1 mRNA表达水平（P<0.05）,呈现明显的量效关系。结论 补肾安胎冲剂对RSA小鼠具有一定的保护作用,其机制可能与调控VEGF及其受体,改善蜕膜组织血管重铸有关。     

MicroRNA-145在急性髓系白血病患者中的表达及意义

目的：探讨MicroRNA‐145（miR‐145）在急性髓系白血病患者骨髓细胞中的表达情况,并分析其临床意义。方法收集急性髓系白血病患者骨髓标本70例,其中初治组46例、缓解组24例,非血液肿瘤性疾病14例作为对照组。通过实时荧光定量PCR方法检测miR‐145的相对表达水平。结果 miR‐145在初治急性髓系白血病骨髓中表达水平明显低于缓解组及对照组（P＜0．01）;其中9例经化疗后缓解的急性髓系白血病患者骨髓miR‐145表达水平较治疗前显著升高,差异有统计学意义（P＜0．05）;且miR‐145表达水平与初诊时原始细胞百分数及外周血白细胞数均无相关性（P＝0．456、0．394）。结论 miR‐145在急性髓系白血病患者表达下调,提示miR‐145的表达与白血病的发生、发展存在显著的关系。     

白血病MICM分型的临床和实验研究

从形态学、免疫学、细胞遗传学及分子生物学特性（MICM）探讨白血病与临床疗效的关系,用骨髓细胞形态及组织化学染色分析作FAB分型诊断;流式细胞术（FCM）单克隆抗体直接免疫标记技术检测白血病细胞分化抗原,短期培养法与直接法G显带染色体组型分析。双色荧光原位杂交技术检测bcr/abl融合基因,结果：共检测出异常抗原表达急性白血病7例,47例FAB分型的急性髓细胞性白血病（AML）中5例伴有淋系相关抗原表达。15例FAB分型的急性淋巴细胞性白血病（ALL）中2例伴有髓系相关抗原表达,2例ALL呈T,B相关抗原混合表达。急性白血病中检出46,XY,t(8;21）等染色体畸变和bcr/abl融合基因,20例慢性髓细胞性白血病（CML）中Ph染色体阳性16例,7例伴有复杂染色体核型变异,5例检出bcr/abl融合基因,Ph染色体阴性的CML中,1例检测出bcr/abl融合基因,3例为夏杂染色体核型变异。伴有异常抗原表达的急性白血病化疗一疗程完全缓解（CR）率和二疗程总CR率均低于呈单系相关抗原表达的急性白血病（P＜0.05）,伴复杂核型变异的CML急变时间短于Ph阳性的CML（P＜0.05）,结论：白血病的MICM分型与临床疗效密切相关。     

白血病患者骨髓中VEGF、bFGF、slOAM．1及CD105表达与髓血屏障调节机制关系研究

目的：探讨白血病患者骨髓中血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、可溶性细胞间粘附分子一l（siCAM一1）及CDl05表达与髓血屏障调节机制的关系。方法：采用ELISA检测63例白血病患者骨髓中VEGF、bFOF、siCAM一1表达,采用原位杂交法,用CDl05标记骨髓活化的血管内皮细胞。结果：急性髓系白血病患者VEGF、bFGF、sicAM一1、CDl05表达高于对照组,急性淋巴细胞白血病患者中B—ALL的VEGF、bFGF、siCAM—l、CDl05表达高于对照组,T～ALI。的bFGF、CDl05表达高于对照组,差异均具有统计学意义（P〈0．05）;VEGF、siCAM一1表达与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;慢性粒细胞白血病患者VEGF、bFGF、siCAM-1、CDl05表达高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0．05）;慢性淋巴细胞白血病患者sicAM—l表达高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0．05）,VEGF、bFGF、CDl05表达与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：骨髓VEGF、bFGF、siCAM一1及CDl05表达在不同类型白血病中水平不同,并影响白血病患者髓血屏障的正常调节机制。     

GALNT12 对急性髓系白血病细胞生长影响的研究

目的 探索GALNT12的表达对急性髓系白血病细胞生长的影响。方法 通过对数据库中急性髓系白血病(AML)病人相关数据进行分析,明确GALNT12 mRNA的表达水平与AML病人的生存率之间的关系。构建GALNT12shRNA慢病毒载体并包装GALNT12shRNA慢病毒,以此为工具构建GALNT12沉默的白血病THP-1细胞系。采用杂乱序列(shScramble)的慢病毒感染的THP-1细胞系做对照,进而观察GALNT12沉默的白血病THP-1细胞和shScramble的慢病毒感染白血病THP-1细胞生长的差异。采用流式细胞分选术收集GFP阳性细胞并用于观察GALNT12对 AML细胞生长的影响。结果 对三个数据库中AML病人的数据进行统计分析结果显示,GALNT12的表达与AML患者的生存周期呈显著的负相关;且GALNT12在急性髓系白血病THP-1细胞系中高表达。本研究成功构建了GALNT12沉默的白血病THP-1细胞系。 研究发现,GALNT12 shRNA1干扰的THP-1细胞与shScramble相比,生长速度明显减慢。结论 本研究证实GALNT12的表达能够促进急性髓系白血病细胞的生长,有利于急性髓系白血病的发生发展,也为寻找治疗急性髓系白血病的有效分子靶点增添了新的内容。     

P-gp在急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

目的探讨P-糖蛋白（P-gp）在急性淋巴细胞白血病的表达，评估P-gp与急性淋巴细胞白血病预后的关系。方法用流式细胞仪，采用直接免疫荧光法，检测40例急性淋巴细胞白血病患者抗P-gp单克隆抗体UIC2及CD3、CD5、CD7、CD10、CD19、CD13、CD14、CD33、CD34的表达，被检患者外周血或骨髓中幼稚细胞数≥50％，并设非耐药细胞系K562为阴性对照。结果40例ALL患者中16例P-gp表达阳性，P-gp阳性表达率为40％。髓系抗原表达阳性者P-gp阳性率为33．3％，髓系抗原表达阴性者P-gp阳性率为45．5％，P〉0．05。4例急性T淋巴细胞白血病CD7表达阳性，且P-gp表达皆阳性。P-gp阳性组16例患者中10例治疗有效，P-gp阴性组24例中20例治疗有效，P-gp表达阳性者中3例6个月内复发。结论急性淋巴细胞白血病P-gp阳性表达率为40％；P-gp表达与髓系抗原表达无相关性，与CD7表达有关；P-gp表达阳性与急性淋巴细胞白血病化疗效果有相关性，P-gp表达阳性者易早期复发。     

SHP-1与c-kit基因在慢性髓系白血病中表达水平的研究

目的探讨造血细胞磷酸酶（SHP-1）基因、c-kit基因在慢性髓系白血病患者中的表达及其与白血病转化和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测SHP-1 mRNA、c-kit mRNA分别在慢性髓系白血病慢性期、急变期及正常对照组中的表达。结果慢性期和急变期SHP-1 mRNA的表达均低于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,慢性期和急变期比较差异无统计学意义（P〉0.05）。慢性期和急变期c-kit mRNA的表达均高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,急变期c-kit mRNA的表达均高于慢性期,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 SHP-1基因与c-kit基因可作为判断慢性髓系白血病患者转归及预后的指标。     

PTK787在SCID小鼠-人AML模型中的抗骨髓血管生成作用研究

目的 观察酪氨酸激酶抑制剂PTK787在SCID小鼠-人急性髓系白血病模型中对血血管内皮生长因子受体-2mRNA (VEGFR-2mRNA)、外周血CD33阳性表达率以及骨髓微血管密度的影响,探讨PTK787抗急性髓系白血病的作用机制.方法 (1) 采用RT-PCR法分析30例不同组别之间SCID小鼠VEGFR-2mRNA水平的差异.(2) 利用流式细胞仪检测外周血CD33表达.(3) 采用SP免疫组化法,用兔抗人vWF (von Wille-brand factor)多克隆抗体标记骨髓内皮细胞,比较不同组别小鼠之间的骨髓微血管密度(MVD)的差异.结果 (1) 患病组SCID小鼠外周血VEGFR-2mRNA灰度扫描比为(0.3257±0.0709),高于正常组(0.0826±0.0315) (P<0.05),治疗组为(0.1411±0.0404),与正常组比较(P<0.05).(2) 外周血白细胞CD33的阳性率,治疗组(9.41±1.35%)及患病组(15.08±2.90%)与正常组(0.81±0.11%)比较,P值均<0.01,差异有统计学意义;治疗组与患病组比较,P<0.05,差异有统计学意义.(3) 患病组SCID小鼠中骨髓微血管数为(20.4±3.2)个/HP,显著高于正常组(14.2±2.1)个/HP(P<0.001),治疗组为(15.6±2.4)个/HP,与正常组相似(P>0.05).结论 PTK787在体内可以有效的抑制血管生成,一定程度具有抗白血病细胞增生的作用.     

血管内皮生长因子在急性髓系白血病细胞中的表达

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在成人急性髓系白血病(AML)的发生发展中的作用。方法采用逆转录PCR(RT-PCR)和酶联免疫吸附(ELISA)的方法研究50位AML病人及16位正常人骨髓细胞及血浆VEGF的表达。结果部分正常人和大多数AML病人的骨髓细胞及白血病细胞系均表达VEGF。AML病人骨髓细胞VEGF表达阳性率(82%)明显高于正常人(30.76%)及骨髓移植后的AML病人(41.76%)。难治型和非难治型AML病人血浆中VEGF浓度均显著高于正常人和AML骨髓移植后病人(P<0.01)。除正常人与骨髓移植后AML病人血浆中VEGF浓度比较无统计学差异外(P>0.05),另与其他两者之间均有显著性差异(P<0.01)。难治型和非难治型白血病病人骨髓细胞分泌的VEGF分别比正常人高11.0和7.3倍,且两者之间比较有显著性差异(P<0.01)。结论VEGF在AML病人中存在异常表达,在AML的发病机制中可能起一定的作用,且可能成为判断AML病人预后指标之一。