重组人红细胞生成素对大鼠心肌梗死的治疗作用

目的　观察重组人红细胞生成素 (rHu EPO)治疗心肌梗死大鼠心功能和心肌细胞凋亡情况 ,探讨其机制。方法　 3 2只SD大鼠分空白组 (Sham )、心肌梗死组 (MI)和治疗组 (MI EPO) ,结扎左冠前降支制备心肌梗死的模型 ,治疗组每天腹腔注射 5 0 0 0IU /kg体重rHu EPO共 7d ,14d后所有大鼠检测血流动力学指标 ,心脏切片原位末端标记 (TUNEL)检测凋亡 ,免疫组织化学检测bcl 2、bax表达。结果　心肌梗死组凋亡指数 (AI)为 1.65 % ,bcl 2及bax蛋白阳性表达指数 (PEI)分别为 0 .96%和 1.3 4% ,均明显高于空白组 (P <0 .0 5 ) ;治疗组心功能保存较好 ,AI与bax蛋白PEI分别为 0 .84%和 0 .68% ,均下降 (P <0 .0 5 ) ,而bcl 2蛋白PEI增高 (P <0 .0 5 )为 1.43 %。结论　rHu EPO可抑制心肌细胞凋亡 ,保存心功能。可能是通过下调bax表达和上调bcl 表达实现的。     

阻塞性黄疸大鼠肝组织细胞凋亡及相关基因bcl-2、bax的表达

目的　探讨阻塞性黄疸肝损害的调控机制。方法　用末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记(TUNEL)技术和免疫组织化学方法检测 4 0只阻塞性黄疸大鼠肝脏组织细胞凋亡状态及凋亡相关基因bcl 2和bax蛋白的表达。结果　胆总管结扎后 ,随结扎时间的延长细胞凋亡增加 ,结扎 14d后细胞凋亡达高峰 ,凋亡指数 (AI)达 5 8.2 3± 1.5 8,各组AI差异有显著性 (P <0 .0 5 )。在阻塞性黄疸过程中 ,bcl 2蛋白表达越强 ,bax蛋白表达越弱 ,AI亦越少。结论　bcl 2和bax蛋白均参与了阻塞性黄疸肝组织中细胞凋亡的调节。     

骨关节炎软骨细胞凋亡调控基因的研究

目的　比较分析正常人及老年性骨关节炎患者软骨细胞bax和bcl 2的表达及细胞凋亡状况。　方法　取 9例骨关节炎患者的关节软骨做实验标本 ,以 6例无骨关节炎病史的意外死亡者关节软骨作为正常对照 ;采用逆转录 /聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测bax和bcl 2mRNA表达 ,免疫组化检测bax和bcl 2蛋白 ;应用TUNEL方法进行凋亡细胞原位检测。　结果　骨关节炎患者和正常对照软骨细胞都能表达bax和bcl 2mRNA ;骨关节炎关节软骨细胞baxmRNA表达量较正常对照显著增高 (P <0 0 1) ,bcl 2mRNA表达量也高于正常对照组 (P <0 0 5 ) ,两组间bax/bcl 2表达量的比值差异无显著性意义 (P >0 0 5 ) ;免疫组化可检测到相应表达水平的蛋白 ;骨关节炎软骨细胞凋亡 (4%～ 14% )多于正常对照 (0～ 2 % )。　结论　软骨细胞凋亡受bax和bcl 2共同调节 ;bax和bcl 2的共同调节结果可能是OA患者软骨细胞凋亡增加 ,但凋亡率不高、病理过程进展缓慢的一个重要的原因     

细胞凋亡与增殖在先天性胆总管囊肿发病中的作用

目的　研究不同类型 (囊状、梭状型 )先天性胆总管囊肿壁细胞凋亡与增殖的关系 ,了解细胞凋亡 /增殖在胆总管囊肿中的作用。方法　以胆总管囊状扩张组 32例、梭状扩张组 35例及胆总管结石致胆管扩张组 (对照组 ) 2 5例为研究对象。术中取部分胆总管壁送检 ,观察胆总管壁损伤情况。用免疫组织化学法检测细胞凋亡的相关指标bcl 2、bax及细胞增殖指标PCNA的表达 ;用TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果　囊状扩张组胆总管壁粘膜上皮细胞破坏严重 ,梭状扩张组镜下所见与囊状扩张组相似 ,但程度较轻。对照组胆总管粘膜上皮细胞破坏最轻 ,其凋亡细胞呈散在分布 ,上皮细胞和成纤维细胞凋亡阳性率较低 ,分别为 (2 .74± 1 .0 0 ) %和 (2 .95± 0 .87) % ;bcl 2、bax表达率较低 ,水平相似 (P>0 .0 5) ;PCNA表达率较高 ,分别为 (3 .74± 1 .0 0 ) %和 (3 .71± 1 .77) %。囊状扩张组与梭状扩张组囊壁残留上皮中的bcl 2和PCNA表达率低 ,分别为 (0 .99± 0 .51 ) %和 (0 .90± 0 .38) % ;bax呈高表达 ,bcl 2呈低表达 ,凋亡细胞阳性率较高 ,分别为 (1 3 .94± 4 .77) %和 (7.51± 3 .46) % ;成纤维细胞中的PCNA表达率较高 ,分别为 (9.91± 2 .91 ) %和(9.70± 3 .1 8) % ,bax呈低表达 ,bcl 2呈高表达 ,凋亡细胞阳性率较低     

苦参碱对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及相关调控蛋白表达的影响

目的　研究苦参碱 (matrine,Mat)对增生性瘢痕成纤维细胞 (fibroblast,FB)凋亡及相关调控蛋白表达的影响。方法　于 2 4只新西兰白兔耳部腹侧面制作增生性瘢痕模型。所有动物随机分为Mat组和对照组 (每组 12只 ) ,分别采用Mat(5 0 g/L)和等渗盐水于各组兔耳瘢痕处行局部封闭注射 ,1次 / 4d。用药 2、4、6、8、12周后 ,采用DNA切口末端标记技术 (TUNEL)检测各组增生性瘢痕FB的凋亡细胞数量 ,利用免疫组织化学方法检测凋亡相关调控蛋白 p5 3、bcl 2、bax的表达。 结果与对照组比较 ,用药 2、4、6、8、12周后 ,Mat组FB凋亡数量均明显增加 (P <0 .0 5 ) ,bax表达明显增强 ,p5 3、bcl 2表达明显减弱 ,瘢痕逐渐趋于平复。　结论　Mat可促进兔耳增生性瘢痕FB的凋亡 ,使凋亡相关调控蛋白bax表达上调 ,p5 3、bcl 2表达下调     

凋亡抑制蛋白bcl-2/bax基因活性水平在乳腺癌发展中的调节作用

我们利用具有表达突变型 p5 3乳腺癌伴有肺转移模型 ,通过α 干扰素诱导凋亡 ,观察细胞内bcl 2和bax的蛋白水平变化 ,探讨 p5 3诱导的细胞凋亡中凋亡抑制蛋白bcl 2 /bax基因所起的作用。一、材料与方法1.材料 :健康雌性津白小鼠 2只 ,8周龄 ,体重 18～ 2 0g ,天津市肿瘤研究所动物室提供。可移植性小鼠乳腺癌(BCML TA2 99)模型 ,由天津肿瘤所实验肿瘤室建立并传代。bcl 2、bax、p5 3免疫组织化学碱性磷酸酶 (SABC)试剂盒(即用型 )及 3 ,3’ 二氨基联苯胺 (DAB)显色剂、磷酸盐缓冲液 (PBS)均购自天津灏祥生物制品科技有限责任公司。α…     

bcl-2 mRNA、baX mRNA表达在三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡中的意义

目的 分析三氧化二砷(As2O3)诱导肝癌细胞凋亡中凋亡相关基因bcl—2 mRNA、bax mRNA表达的意义。方法 采用电镜、流式细胞仪、电泳及半定量RT—PCR方法检测不同剂量三氧化二砷诱导人肝癌细胞株bel—7402后凋亡的出现及bcl-2mRNA、bax mRNA的表达。结果 0．5にmol/L As2O3处理肝癌细胞未见凋亡，8μmol/L As2O3诱导肝癌细胞出现明显凋亡。对照组和药物组未检测到bcl-2 mRNA的表达，随浓度增加，bax mRNA的表达上调。结论 As2O3通过诱导凋亡抑制肝癌细胞株bel-7402的增殖，凋亡诱导基因bax mRNA的表达上调与此过程有关。bcl—2mR—NA表达与此过程无关。     

5-氟尿嘧啶诱导直肠癌HR8348细胞凋亡作用的研究

目的　探讨 5 氟尿嘧啶 (5 fluorouracil ,5 FU )体外诱导直肠癌HR83 48细胞凋亡的作用及细胞凋亡与bcl 2、bcl xl、bax及 p5 3表达的关系。 方法　经 5 FU处理HR83 48细胞 2 4h后 ,用甲基绿 派若宁染色法和TUNEL法检测细胞凋亡情况 ,并用SP免疫组织化学法检测HR83 48细胞中bcl 2、bcl xl、bax和 p5 3的表达。 结果　HR83 48细胞经 5 FU作用 2 4h后 ,细胞凋亡指数 (AI)明显高于对照组 ,差异有显著性意义 (P<0 .0 1)。 5 FU作用不同时相bcl 2的表达评分结果与对照组比较差异均无显著性意义 ;不同时相bcl xl的表达评分结果与对照组比较稍降低 ;而bax的表达评分结果随时间延长明显增加 ,2 4h、3 6h的表达评分结果明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,而 p5 3在 5 FU组和对照组各时相均未见表达。结论　 5 FU具有诱导HR83 48细胞凋亡的作用 ;5 FU可能通过上调bax的表达并改变bax/bcl xl的比值而诱导HR83 48细胞凋亡。     

凋亡相关基因bcl-2和bax在大鼠自体移植静脉中的动态表达及意义

目的　探讨移植静脉中细胞凋亡及相关基因表达的动态变化及意义。方法　建立 10 0只Wistar大鼠自体颈静脉移植于肾下腹主动脉模型。采用原位DNA片断末端标记 (TUNEL)和免疫组织化学法 ,检测移植静脉血管平滑肌细胞 (VSMCs)凋亡及相关基因bcl 2和bax的表达。结果　术后 1～ 8周 ,移植静脉凋亡的VSMCs多于对照静脉 (P<0 .0 1) ;术后 2周为凋亡高峰 ,其凋亡细胞达 ( 2 8.5± 16 .6 ) % ,4～ 8周逐渐下降至 ( 8.1± 2 .8) % ;与对照静脉〔( 0 .5± 0 .2 ) %〕相比差异有显著性意义 (P<0 .0 1)。术后 1～ 2周 ,bcl 2表达增多〔( 2 2 .1± 5 .4 ) %〕 ,与对照组〔( 4 .3± 2 .1) %〕及 4～ 8周组间比较差异有显著性意义 (P<0 .0 1) ;移植后 1～ 6周 ,bax表达显著高于对照组〔( 5 .5± 2 .3) %〕及术后 8周组〔( 8.2± 2 .9) %〕 ,P<0 .0 1。结论　bcl 2与bax基因与移植静脉VSMCs的凋亡密切相关 ;VSMCs凋亡是移植静脉重塑和狭窄的重要因素     

bcl-2和bad蛋白表达与乳腺癌的相关性研究

目的探讨bcl 2、bad基因在乳腺癌前病变及其在癌组织中的表达 ,以及与ER、PR及淋巴结转移间的关系。方法采用免疫组织化学染色SABC法 ,观察 19例乳腺单纯性增生 ,2 0例乳腺非典型增生 ,4 8例乳腺癌组织中bcl 2、bad蛋白的表达 ,并同时检测 4 8例乳腺癌组织中ER、PR的表达。结果bcl 2在正常组和乳腺单纯性增生组 10 0 %表达 ,非典型增生组 ,乳腺癌组的表达率分别为 85 0 %和 5 8 33% ,二组之间比较差异有显著性 ( χ2 =3 37,P <0 0 5 )。bad蛋白在各组中的表达率较bcl 2表达有下降趋势 ,分别为 87 5 % ,84 2 % ,5 5 % ,4 7 91%。bcl 2、bad在各组中表达阳性率差异有显著性 ( χ2 =2 3 0 5 ,P <0 0 0 1,χ2 =11 2 9,P <0 0 1)。结论bcl 2、bad基因在乳腺癌的恶性转化中起重要作用 ;同时其表达与雌激素的调节有密切关系 ;bcl 2蛋白表达与乳腺癌淋巴结转移有关     

Survivin基因在胆管癌组织中的表达及其与bcl-2和bax相关性

目的 探讨Survivin基因在胆管癌组织中的表达以及与bel-2和bax基因表达的相关性.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Survivin mRNA在64例胆管癌,22例癌旁组织及10例正常胆管组织中的表达,免疫组织化学方法测定胆管癌组织中bcl-2和bax蛋白的表达.结果 胆管癌组织中Survivin基因阳性表达率65.6%(42/64),显著高于其在癌旁组织(9.1%,P<0.01)和正常胆管(0%,P<0.01)中的表达;Survivin基因表达与胆管癌的性别、年龄、部位、分化程度、临床分期及淋巴结转移无明显相关(P>0.05).bcl-2和bax在胆管癌组织中的表达率分别为56.3%(36/64)N45.3%(29/64),Survivin基因表达与bcl-2表达正相关(r=0.404,P<0.01),与bax表达负相关(r=-0.373,P<0.01).结论 Survivin基因在胆管癌的发生、发展过程中可能起重要作用;Survivin有可能成为胆管癌基因治疗的新靶点;在胆管癌的发展中,Survivin与bel-2和bax分别起协同和拮抗作用.     

低温保存不同时间大鼠带瓣管道活性与bax、bcl-2基因表达的关系

目的 观察低温保存不同时间大鼠带瓣血管活性及bax和bcl-2基因的表达,探讨基因检测是否能成为带瓣血管活性指标.方法 Wistar大鼠80只,体质量250～350 g,分为新鲜组A组,-196 ℃液氮冻存3、6、9个月为B、C、D 3组.检测细胞结构、糖代谢及bax、bcl-2基因的变化.结果 大鼠带瓣血管的各组葡萄糖代谢率测定,A组(4.365±0.784)与B(4.383±0.548)、C组(4.446±0.608)、D组(4.090±0.657)差异无统计学意义(P＞0.05);bax基因的表达分别为20%、45%、60%和85%,差异有统计学意义(P＜0.05);bcl-2基因表达分别25%、30%、20%和35%,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 经冻存后的大鼠带瓣血管活性良好,提示bax基因可作为检测带瓣血管活性的指标,bcl-2的表达或高表达可能是细胞能耐受冻存打击的原因之一.

Abstract：

Objective To study the expression of bax and bcl-2 genes and activity of valved conduit in rats by cryopreservation for different lengths, and to probe whether genetic detection will become one of the indexes of valved conduit activity. Methods Eighty Wistar rats were divided into four groups: 20cases of fresh blood vessels ( group A ), 20 cases of frozen vessels for 3 months ( group B ), 20 for 6months ( group C), and 20 for 9 months ( group D). The changes in cellular structure, gluoce metabolism and the expression of bax and bcl-2 proteins were observed. Results The glucose metabolism rate of the rate valved conduit in groups A, B, C and D was 4. 365 ± 0. 784, 4. 383 ± 0. 548, 4. 446 ± 0. 608, and 4. 090 ± 0. 657 respectively, with the difference being not significant ( P ＞ 0. 05 ). The positive expression rate of bax protein in groups A, B, C and D was 20%, 45%, 60% and 85% respectively (P＜0. 05).The positive expression rate of bcl-2 in groups A, B, C and D was 25%, 30%, 20% and 35% respectively ( P ＞ 0. 05 ). Conclusion The frozen rat valved vascular showed good activity. bax gene can be regarded as one of the indicators for detecting valved vessel activity. The expression or over-expression of bcl-2gene may be one of the reasons why the cells can tolerate the frozen preservation.     

Cellular apoptosis, proliferation and bcl-2 Bax expression in colorectal carcinoma and their association with tumor prognosis

OBJECTIVE: To investigate the relationship between cellular apoptosis, proliferation and bcl-2/bax expression in the tissue of colorectal carcinoma and biological behavior of the tumor. METHOD: The apoptotic cells index (AI) in situ were identified by the terminal deoxynucleotidyl transfer-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) and immunohistologic staining for Ki-67 proliferation index (KI), bcl-2/bax protein expression was performed on archival material from 77 adenocarcinomas. RESULT: The mean AI and KI were 5.3/45.4 in early stage cancer, 5.6/48.7 in non-metastatic cancer, 6.6/55.3 in advanced cancer and 8.9/60.1 in cancer with distant metastasis respectively. There was a positive relationship between the AI and KI in each specimen. bcl-2 and bax was expressed as 54.5%, 74% in carcinoma and highly differentiated carcinoma. In the univariate analysis, significantly longer survival time was observed in the subgroup of bcl-2 positive carcinoma with low AI. In the multivariate analysis, tumor stage, tumor type, KI, and bcl-2 expression were independent risk factors for prognosis. CONCLUSION: The data indicate that abnormally exchanged AI/KI, bcl-2/bax expression appears to be an event associated with tumor progression and apoptosis might also reflect the proliferative activity of human colorectal carcinoma.     

3，4-二羟基苯甲酸乙酯预处理对白蛋白诱导低氧培养肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨脯胺酰羟化酶抑制剂3,4-二羟基苯甲酸乙酯（EDHB）对白蛋白诱导的低氧条件下培养的肾小管上皮细胞（NRK-52E）凋亡的影响。 方法 NRK-52E细胞在以下各组孵育24 h：常氧（5％CO2+空气）组,低氧（1％O2+5％CO2+94％N2）组,常氧+白蛋白（30 g/L）组及低氧+白蛋白（30 g/L）组,观察各组NRK-52E细胞的凋亡情况。然后NRK-52E细胞在以下各组孵育24 h：常氧组、低氧组,低氧+白蛋白（30 g/L）组,低氧+EDHB（500 μmol/L）组,EDHB预处理组（培养细胞中先加入EDHB 500 μmol/L,0.5 h后再加入BSA 30 g/L,低氧培养）,观察EDHB对白蛋白诱导低氧培养NRK-52E凋亡的影响。流式细胞技术检测细胞凋亡;RT-PCR检测凋亡相关蛋白bcl-2、bax 及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达;Western印迹检测VEGF蛋白表达。 结果 NRK-52E细胞凋亡率在常氧组与低氧组差异无统计学意义 （P > 0.05）,但低氧+白蛋白组细胞凋亡率显著高于常氧+白蛋白组（37.36%±4.95%比25.59%±3.32%,P < 0.05）。低氧+白蛋白组bax mRNA表达显著高于常氧+白蛋白组（P < 0.05）,而bcl-2 mRNA的表达则显著低于常氧+白蛋白组（P < 0.05）。EDHB预处理可显著抑制低氧+白蛋白组细胞凋亡率的增高（P < 0.05）、bax mRNA表达的增高（P < 0.05）以及bcl-2 mRNA表达的降低（P < 0.05）。低氧组NRK-52E细胞VEGF mRNA和蛋白表达显著高于常氧组（P < 0.05）,而低氧+白蛋白组则显著低于低氧组（P < 0.05）。EDHB预处理可显著抑制低氧+白蛋白组细胞VEGF mRNA和蛋白表达的降低（P < 0.05）。 结论 白蛋白和低氧联合刺激可显著增加NRK-52E细胞凋亡,EDHB预处理可改善该病变,可能与其提高VEGF的表达有关。     

急性胰腺炎大鼠肾上腺损伤中bax与bcl-2表达的研究

目的 观察急性胰腺炎(AP)大鼠肾上腺损伤时细胞凋亡及调控基因bcl-2和bax蛋白的表达及作用.方法 采用牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射法建立AP模型.术后3、6、12 h检测血皮质酮水平,观察肾上腺病理,TUNEL检测细胞凋亡,免疫组织化学检测bcl-2和bax蛋白表达.结果 与SO组比较,AP3 h组血清皮质酮显著增高,随后逐渐降低(P＜0.05).随病程延长,肾上腺细胞凋亡指数增高,bax蛋白表达增强,bax/bcl-2比值亦逐渐升高(P值均＜0.05),并与凋亡指数(AI)呈正相关(r =0.759,P＜0.05).结论 bax和bcl-2可能参与了AP肾上腺损伤的发病过程.通过激活bcl-2和抑制bax的蛋白表达,减少细胞凋亡发生从而保护肾上腺结构和功能,可能为今后AP及相关肾上腺损伤的药物及基因治疗提供依据和新思路.     

多囊卵巢综合征中卵巢初级小卵泡bcl-2、bax的表达

目的 :探讨凋亡调节蛋白 bcl-2及 bax在多囊卵巢综合征 ( PCOS)患者的卵泡选择、发育的作用。方法 :1 8例 PCOS患者及 1 3名正常人 2 40个小卵泡按直径分为 4个组 ,采用免疫组织化学方法及 Konton Ibas灰度值的定量测定 ,用 SPSS软件统计 ,定量分析凋亡调节蛋白 bcl-2及 bax在 PCOS各级初级小卵泡中的表达。结果 :PCOS组各级窦前卵泡组间 bax蛋白表达有显著差异 ,随着卵泡直径的增加 bax表达明显增多 ,但直径 >1 2 0 μm的卵泡 bax表达减少 ,bcl-2 / bax灰度比值显著变小。 bcl-2蛋白表达相对稳定 :PCOS组直径在 60～ 1 2 0μm的卵泡 bcl-2表达显著高于正常对照组 ( P<0 .0 5 )。结论 :正常人及 PCOS卵巢组织各级窦前卵泡和窦卵泡均表达 bcl-2及 bax,随着卵泡的增大 ,bcl-2的表达增加 ,当卵泡直径 >1 2 0 μm时 ,细胞凋亡减弱 ,卵泡的增长加速。PCOS患者卵巢中各级窦前卵泡和窦卵泡凋亡蛋白 bcl-2及 bax的表达是正常的。     

紫杉醇联合大蒜素对胃癌细胞的增殖抑制及促凋亡作用

目的：探讨紫杉醇联合大蒜素对胃癌细胞MGC-803的增殖抑制和促凋亡作用及其分子机制。方法：分别及联合应用两药后以MTT法测定MGC-803细胞的增殖，用流式细胞仪检测细胞凋亡，用RT-PCR法观察基因bax和bcl-2 mRNA的表达，用Western blot观察其蛋白表达。 结果：15～60μg/mL大蒜素和4～32μg /mL紫杉醇单用24h对MGC-803细胞均有明显抑制作用，呈剂量依赖性。低剂量大蒜素（9μg /mL）联合紫杉醇（1～16μg/mL）比单用紫杉醇作用更强（P<0.05）。15μg/mL大蒜素,12μg /mL紫杉醇和两药联用24h凋亡率分别为10.7%，30.4%和84.7%（P<0.01 ）。单用大蒜素和紫杉醇对胃癌细胞bax和bcl-2表达无明显影响，两药联用bax基因mRNA和蛋白表达增加，而bcl-2mRNA和蛋白的表达减少。结论：大蒜素可增强紫杉醇对胃癌细胞的增殖抑制作用，两药联用可减少紫杉醇的剂量;其机制可能是通过增强MGC-803细胞的凋亡，后者与bax和bcl-2基因表达有关。     

TSEG-2基因真核表达载体的构建及其在细胞内的表达

目的 构建睾丸特异表达基因2(TSEG-2)的真核表达载体,探讨TSEG-2在细胞中的表达及其生物学功能.方法 以小鼠睾丸组织cDNA为模版,设计携带HindⅢ和BamH Ⅰ酶切位点的引物序列,聚合酶链反应(PCR)扩增基因片段,克隆至携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达载体pEGFP-N1;在阳离子聚合物聚乙烯亚胺(PEI)的介导下,重组质粒转染体外培养的精母细胞株GC-2spd 48 h后,荧光显微镜下观察TSEG-2基因在细胞内的表达定位,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长活性,AO/EB荧光染色法、Hoechst 33258荧光染色法、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,实时定量PCR测定Fas、bcl-2、bax表达水平.结果 成功构建了TSEG-2与EGFP的融合表达载体pEGFP-TSEG2,转染GC-2spd细胞后可见胞质内绿色荧光蛋白表达.转染pEGFP-TSEG2 48 h后,GC-2spd细胞生长抑制39.2%(P＜0.05),出现细胞凋亡形态学改变,凋亡率为28.3%(P＜0.05);GC-2spd细胞中Fas和bcl-2的表达分别下调17.9%、64.8%(P＜0.05),而bax的表达上调25.1%(P＜0.05).结论 成功构建TSEG-2基因的真核表达载体,能在精母细胞株中表达并促进细胞凋亡.     

丁酸钠对人胰腺癌细胞ASPC-1生长的影响及其机制的研究

目的 探讨丁酸钠对人胰腺癌ASPC-1细胞生长的影响并探讨其作用机制.方法 使用不同浓度丁酸钠处理ASPC-1细胞.MTT法观察肿瘤细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化;Western印迹法检测细胞内p21、p53、bcl-2、bax蛋白表达的变化,实时定量PCR检测p21和bcl-2的表达.结果 丁酸钠能明显抑制ASPC-1细胞的增殖,其作用具有明显的时间和剂量依赖性.丁酸钠处理24 h后ASPC-1细胞凋亡率明显提高(P＜0.05),S期细胞比例显著降低(P＜0.05),G0/G1期细胞比例显著升高(P＜0.05).p21、bax蛋白表达明显上调(P＜0.05);bcl-2蛋白的表达显著降低(P＜0.05);p53蛋白表达无明显变化(P＞0.05).结论 丁酸钠可以通过诱导胰腺癌细胞的凋亡和周期阻滞而抑制癌细胞生长;其发生机制可能与下调抗凋亡基因bcl-2、上调促凋亡基因bax和肿瘤抑制基因p21的表达有关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of sodium butyrate(NaBT) on proliferation of human pancreatic cancer cell line ASPC-1 and explore the possible mechanism. Methods The methylthiazolyl tetrazolium assay (MTT) method was used to detect cell proliferation and draw a curve. The cell apoptosis and cell cycle were determined with flow cytometry. Western blot was used to study the effect NaBT on the pancreatic cancer cells and explore its mechansim. Real-time PCR was employed to assess the expression levels of p53, p21, bcl-2 and cell cycle regulation gene p21. Results After incubation with different concentrations of NaBT for 24 to 72 h, ASPC-1 cell proliferation was inhibited dramatically. NaBT induced an increase of G0/G1 phase cells and a significant decrease in the ratio of S phase cells. The expression of p21 and bax was up-regulated at protein and mRNA level. The expression of bcl-2 was down-regulated at protein and mRNA level. There was no significant difference in the expression of p53 at protein and mRNA level. Conclusion TSA-induced growth inhibition is associated with a block in the G0/G1 phase and apoptosis, which may occur through down-regulating the expression of apoptosis gene bcl-2 and up-regulating the expression of cell cycle regulation gene p21and pro-apoptotic gene bax.     

Progesterone differentially regulates pro- and anti-apoptotic gene expression in cerebral cortex following traumatic brain injury in rats

Although the administration of progesterone has been shown to be neuroprotective in experimental models of traumatic brain injury (TBI), the mechanisms for this beneficial effect are still poorly understood. The present study examined the effects of progesterone on mRNA and protein levels of the Bcl-2 apoptosis regulatory genes, bax, bad, bcl-2, and bcl-x(L), in cerebral cortex after TBI. Male Sprague-Dawley rats were subjected to either sham surgery or lateral fluid percussion brain injury of moderate severity (2.4-2.6 atm). Within 1 h post-surgery, progesterone (4 mg/kg) or vehicle (corn oil) administration was initiated for 1-7 days postoperatively. Our results indicate that bax and bad mRNA levels and Bax and Bad protein expression in the ipsilateral, injured cerebral cortex were significantly elevated post-TBI, while mRNA levels of bcl-2 and bcl-x(L) or Bcl-2 and Bcl-x(L) protein expression were not changed. Under the sham-treated condition, progesterone significantly increased mRNA levels of the anti-apoptotic gene, bcl-2, but down-regulated pro-apoptotic gene expression (bax and bad) in cerebral cortex. After TBI, progesterone treatment reduced bax and bad mRNA levels in the ipsilateral cerebral cortex of TBI rats, and decreased Bax and Bad protein levels. In addition, bcl-2 and bcl-x(L) mRNA levels, as well as Bcl-2 and Bcl-x(L) protein expression, were increased by progesterone in TBI injured cortex. These data indicate that one of the neuroprotective mechanisms of progesterone may be related to its differential regulation of apoptotic signals.