Navitoclax联合柔红霉素促进红白血病细胞系K562、HEL和TF-1的凋亡

目的:研究促凋亡药物Navitoclax(NTX)联合化疗药物柔红霉素(Daunorubicin,DNR)对红白血病细胞凋亡的影响。方法:取对数生长期的K562、HEL和TF-1细胞,给予NTX、DNR以及2药联合,CCK-8检测细胞生长,Annexin V-DAPI双染流式细胞术检测细胞的凋亡,real-time RT-PCR检测凋亡相关基因BAX,BAK,BCL-2、BCL-xl、BIM的表达,对比分析NTX、DNR与2药联合对K562、HEL和TF-1细胞凋亡的影响。结果:NTX联合DNR能明显抑制K562、HEL和TF-1细胞的生长;凋亡检测结果显示,联合用药组K562、HEL和TF-1细胞凋亡率明显高于NTX、DNR单用药组(P 0.05);凋亡相关基因检测结果显示,K562细胞前凋亡蛋白基因BAK、BAX的表达水平在联合用药组明显高于2个单药组,抗凋亡蛋白基因BCL-2、BCL-xl的表达水平明显低于2个单药组(P 0.05);HEL细胞联合用药24 h BAK的表达水平高于DNR单药组(P 0.05);TF-1细胞联合用药24 h BCL-2的表达低于2个单用药组,48 h BAK的表达联合用药组最高,BCL-2、BCL-xl的表达水平在联合用药组低于NTX单药组(P 0.05)。结论:NTX联合DNR能明显促进红白血病细胞系K562、HEL和TF-1细胞凋亡,诱导凋亡相关基因的表达。本研究期待为红白血病的临床治疗提供新方案。     

超声造影剂联合超声介导耐药基因反义寡脱氧核苷酸转染肝癌细胞逆转多药耐药效应的研究

目的 探讨超声造影剂联合超声介导mdr1、mrp基因反义寡脱氧核苷酸(ASODN)转染QGY耐药肝癌细胞对多药耐药(MDR)的逆转.方法 分别将mdr1、mrp-ASODN+超声造影剂+超声辐照转染QGY/CDDP肝癌细胞,检测转染后细胞贴壁率、药物敏感性、耐药基因mRNA表达和相应耐药蛋白表达变化.结果 mdr1-ASODN转染后,细胞贴壁率和耐药基因mRNA表达变化大(P＜0.05),细胞药物敏感性和耐药蛋白P-gp、MRP表达变化小(P＞0.05).实验组(2组)作用更大(P＜0.05).mrp ASODN转染后,细胞贴壁率、药物敏感性、耐药基因的mRNA表达和耐药蛋白P-gp、MRP表达均变化明显(P＜0.05),实验组(2组)作用更大(P＜0.05).结论 mdr1、mrp-ASODN+超声造影剂+超声辐照能够低毒部分逆转肝癌细胞MDR,是潜在肿瘤基因治疗方法.     

CYP1B1及MDR1在两种人胃癌细胞中的差异表达

目的:比较细胞色素P4501B1(C YP1B1)及多药耐药基因(MDR1)在人胃癌细胞SGC7901和SGC7901/VCR细胞中的差异表达。方法:采用实时荧光定量PCR法检测C YP1B1及MDR1在二种人胃癌细胞中的表达情况。结果:CYP1B1及MDR1在SGC7901/VCR细胞中的表达量(0.726±0.074及0.545±0.068)明显高于SGC7901细胞(0.391±0.045及0.321±0.084,P0.05),且两者在SGC7901/VCR细胞中的表达呈明显正相关(r=0.7859,P=0.0120)。结论:CYP1B1及MDR1可能共同参与了胃癌细胞对长春新碱(vincristine,VCR)的耐药。     

地西他滨对全反式维甲酸耐药细胞株NB4-R2的增殖抑制及诱导凋亡作用研究

本研究探讨地西他滨(DAC)对全反式维甲酸耐药细胞株NB4-R2的增殖抑制及诱导凋亡作用。应用细胞增殖及毒性检测法(新型四唑单钠盐法)观察0.01-0.5μmol/L DAC作用于NB4-R2细胞24、48及72 h后的细胞增殖活力变化;PI单染及AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术观察不同浓度DAC(0.05-5μmol/L)对NB4-R2处理48 h后的细胞凋亡率;RT-PCR法检测编码P糖蛋白(P-gp)的多药耐药基因1(MDR1)转录水平的变化。结果表明,0.01-0.5μmol/L DAC可抑制NB4-R2细胞增殖,并呈现明显的量-效与时-效关系;作用48及72 h后的IC50分别为0.089和0.064μmol/L;0.05-5μmol/L DAC以浓度依赖的方式诱导NB4-R2细胞凋亡,下调MDR1基因表达。结论:低浓度DAC(<0.5μmol/L)对NB4-R2细胞有增殖抑制作用,较高浓度DAC(1、5μmol/L)可以诱导NB4-R2细胞凋亡,同时使MDR1表达下调。     

硼替佐米与高三尖杉酯碱在K562细胞中的联合作用及机制研究

目的:探讨硼替佐米(bortezomib,BTZ)与高三尖杉酯碱(homoharringonine,HHT)两药联合对K562细胞增殖和凋亡的影响及其联合作用机制与BCL-2、BAX、MCL-1蛋白的关系。方法:通过将K562细胞株按不同处理分为对照、BTZ 20 nmol/L、HHT 40 ng/ml、BTZ 20 nmol/L+HHT 40 ng/ml共4组。采用MTT方法检测各处理组细胞增殖抑制率。采用Annexin V-FITC/PI双染色法流式细胞术检测各处理组细胞早期凋亡率,采用Western blot法测定各处理组中BCL-2、BAX、MCL-1蛋白相对表达量。结果:BTZ+HHT联合组作用于K562细胞24、48和72h后的增殖抑制率(%)高于BTZ及HHT单药组(P0.01)。联合组K562细胞的早期凋亡率(%)高于BTZ及HHT 2个单药组(P0.05)。联合组K562细胞的BCL-2蛋白相对表达量明显低于BTZ及HHT单药组(P0.05)。联合组BAX蛋白相对表达量明显高于BTZ及HHT单药组(P0.05)。M CL-1蛋白相对表达量高低:BTZ组对照组BTZ+HHT联合组HHT组(组间比较P0.05)。结论:BTZ与HHT联合可起协同抑制细胞增殖、诱导凋亡效应,其机制与明显下调BCL-2蛋白、上调BAX蛋白有关。此外,HHT可通过下调MCL-1蛋白表达增加K562细胞对BTZ作用的敏感性。     

青蒿琥酯通过下调Rad51增加宫颈癌细胞HeLa对顺铂的敏感性

目的:研究青蒿琥酯和顺铂(cis-platinum,CDDP)对宫颈癌HeLa细胞的增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞,分别用青蒿琥酯(artesunate,ART)、CDDP以及两药联合处理24和48 h,采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)、流式细胞仪检测青蒿琥酯和CDDP及两者联合应用对He La细胞的生长增殖和细胞凋亡作用。蛋白质印迹法检测每组细胞中重组蛋白A(recombination protein A,Rad51蛋白)表达水平;RT-PCR检测Rad51 mRNA的表达水平。结果:CCK-8及流式细胞仪结果显示与对照组相比,各给药组均可明显抑制HeLa增殖,促进细胞凋亡,差异均有统计学意义(P0.01),联合给药组的抑制作用更加显著(P0.001),且呈时间浓度依赖性。RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示:与对照组相比,Rad51表达下调,联合给药组的上述相应变化更加显著,但两单独给药组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论:ART及CDDP均可抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,促进凋亡。且ART可能通过下调Rad51来增加宫颈癌HeLa细胞对CDDP的敏感性。     

去甲斑蝥素通过NF-κB/IκBα途径增强阿霉素的抗骨髓瘤效应

目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)联合阿霉素(ADR)对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 以U266细胞为研究对象,采用NCTD(10 μmol/L)和ADR(0.25 μmol/L)单独或联合处理细胞,MTT法观察细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测核因子-κB P65( NF-κB P65)、磷酸化NF-κB P65( p-NF-κB P65)、NF-κB抑制因子IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)、survivin、Bcl-2和Bax蛋白水平,免疫组化法测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平.结果 ①NCTD能增强ADR的细胞毒和诱导凋亡作用,二者具有协同作用;②与ADR单药组比较,联合用药组胞核NF-κB P65和胞质p-IκBα的表达量分别由2.08±0.29和0.39±0.07降至0.48±0.08和0.02±0.01,胞质NF-κB P65和IκBα表达无变化;③联合用药组与ADR单药比较,survivin和Bcl-2的表达水平分别由0.31±0.05和0.23±0.05降至0.03±0.02和0.05±0.02,而Bax的表达由0.46±0.06升至0.62±0.08;④ADR组和联合用药组VEGF的阳性率分别为(44.6±4.4)％和(27.0±2.1)％,NCTD增强ADR对VEGF表达的抑制作用.结论 NCTD通过抑制NF-κB/IκBα途径,调节下游信号分子survivin、Bcl-2、Bax和VEGF的表达,增强ADR的抗骨髓瘤效应.     

白藜芦醇逆转急性髓系白血病细胞HL-60/ADR耐药的凋亡机制

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)逆转急性髄系白血病细胞HL-60/ADR耐药的凋亡机制。方法:将HL-60/ADR细胞分为对照组(Control)、阿霉素(ADR)处理组、Res处理组和ADR+Res联合处理组4组。应用CCK-8法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞内阿霉素(ADR)自发荧光强度和细胞凋亡率;RT-PCR法检测耐药基因MRP1、抗凋亡基因BCL-2和促凋亡基因BAX mRNA表达水平,Western blot法测定MRP1、BCL-2和BAX蛋白表达水平。结果:25、50、100和200μmol/L Res作用于HL-60/ADR细胞48 h后,细胞的最大抑制率分别为44%、61%、76%和81%,呈浓度依赖性(r=0.876,P0.05);与ADR组的半数抑制浓度(IC50)(8.534±1.111μmol/L)相比,ADR+Res组HL-60/ADR细胞的IC50(1.591±0.373μmol/L)明显减少(P0.05)。ADR联合Res后HL-60/ADR耐药细胞内ADR自发荧光强度明显增加(P0.05);Res组和ADR+Res组细胞凋亡率均显著增加(P0.05)。Res组和ADR+Res组的MRP1 mRNA、BCL-2 mRNA表达水平显著下降(P0.05),BAX mRNA表达水平明显上升(P0.05)。Res组和ADR+Res组M RP1、BCL-2蛋白表达水平显著下降(P0.05),BAX蛋白明显上升(P0.05)。结论:白藜芦醇具有逆转HL-60/ADR细胞耐药的作用,可能是通过促进HL-60/ADR细胞凋亡、抑制耐药蛋白M RP1而发挥作用,其促凋亡机制与抑制BCL-2和增强BAX表达有关。     

盐霉素增强长春新碱诱导急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡研究

目的:本文旨在研究长春新碱(vincristine,VCR)与盐霉素(salinomycin,Sal)联合作用对急性T淋巴细胞白血病jurkat细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方法:CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测各实验组细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、caspase-3和caspase-8表达水平。结果:VCR、Sal单独及联合处理Jurkat细胞株均显示出明显的增殖抑制作用,两药联合使用的增殖抑制作用更显著(P0.05),具有协同作用。联合用药组BCL-2蛋白水平较VCR和Sal单独处理组明显减少,而caspase-3和caspase-8水平明显增高;VCR和Sal联合用药组细胞凋亡率较VCR和Sal单独处理组明显提高(P0.05)。结论:长春新碱联合盐霉素作用于Jurkat细胞具有协同抑制增殖及诱导凋亡的作用。     

CIK逆转K562/ADR细胞多药耐药作用及其机制探讨

目的 研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)体外逆转阿霉素(ADR)耐药细胞株K562/ADR细胞多药耐药(MDR)的作用,并探讨其机制.方法 健康人外周血单个核细胞经细胞因子体外诱导获得CIK,检测其表型和培养上清液细胞因子含量.实验组为CIK作用于K562/ADR细胞48 h后加入ADR;对照1组为CIK作用于K562/ADR细胞48 h,对照2组为ADR作用K562/ADR细胞48 h.采用MTT法检测各组细胞杀伤活性,用流式细胞术检测细胞膜P-糖蛋白(P-gp)含量、细胞内ADR浓度等.结果 实验组对K562/ADR细胞杀伤活性高于对照1组(P＜0.05);且随效靶比增大,杀伤活性增大(P＜0.05);随所加入的ADR浓度增大,杀伤活性无明显变化(P＞0.05).实验组和对照1组的P-gp含量均下降(P＞0.05).实验组细胞内ADR浓度高于仅经ADR作用的对照组2组(P＜0.05),但细胞内ADR浓度与加入的ADR浓度无明显关系(P＞0.05).结论 通过CIK与ADR对K562/ADR细胞的先后作用,降低了其细胞内P-gp的表达,提高了K562/ADR细胞内ADR浓度,增强了ADR对耐药细胞的杀伤活性.为应用生物活性细胞逆转MDR提供理论依据.

Abstract：

Objective To investigate the effects and mechanism of cytokine-induced killer(CIK) cells in reversing multidrug resistance(MDR) and increasing intracellular concentration of adriamycin(ADR)in the K562/ADR cells. Methods Peripheral mononuclear cells (MNCs) were isolated from healthy donors and cultured with combined cytokines to generate CIK. The changes of cell phenotype and cytokines secretion of CIK were determined. K562/ADR cells were divided into three groups: ADR in combination CIK (group Ⅰ ), CIK alone (group Ⅱ ) and ADR alone (groupⅢ) . The viability and proliferation of K562/ADR cells were assayed by MTT assay, the intracellular concentration of ADR and the expression of P-glycoproteins (P-gp) in K562/ADR cells by FCM. Results The cytotoxicity of ADR in group Ⅰ was higher than that in group Ⅱ ( P ＜0.05 ). The cytotoxicity was increased with the E/T ratio increasing( P ＜0.05 ) but had no relation with the concentration of ADR in group Ⅰ (P＞0.05). The expression of P-gp was declined in group Ⅰ and group Ⅱ (P ＞0.05 ). The intracellular concentration of ADR in group Ⅰ was higher than that in group Ⅱ ( P ＜ 0.05 ), and had no relation with the ADR concentration ( P ＞ 0.05 ). Conclusion Pre-treatment with CIK can increase the cytotoxicity and the intracellular concentration of ADR and decrease the expression of P-gp in K562/ADR cells in the ADR and CIK combination group. Acute leukemia patients would be most likely to benefit from the combination of chemotherapy and CIK therapy.     

抗P-糖蛋白单克隆抗体JSB-1和三氟拉嗪协同逆转人肾癌MDR的实验研究

目的 为证明钙调蛋白的抑制剂三氟拉嗪和抗P—糖蛋白单克隆抗体(JSB-l)能协同逆转人肾癌的天然多药耐药(MDR)性。方法 我们对经过病理证实36例肾透明细胞癌采用RT-PCR方法检测mdr—l表达水平，高表达的为耐药组，无或低表达的为敏感组，给予阿霉素与三氟拉嗪和JSB-l处理，并采用MTT法评价细胞毒作用，流式细胞仪检测细胞内ADR浓度聚集。结果 三氟拉嗪(TFP)和JSB-l对肿瘤细胞无明显的细胞毒作用；但具有逆转肾癌对ADR的耐药，并且在耐药(P—gp过表达MDR)的肾癌细胞中，效果更明显(P＜0．01)。结论 三氟拉嗪和JSB-l可作为肾癌化疗的辅助用药，联合应用效果更佳，它的低毒副作用使其具有应用价值和可行性。     

硼替佐米联合三氧化二砷诱导NB4细胞凋亡及相关机制的研究

本研究旨在探索硼替佐米(bortezomib)联合三氧化二砷(As2O3)诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株的凋亡及相关调控机制。用流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡;Hoechst染色法观察凋亡细胞形态;Western blot检测caspase-3,caspase-9的活化以及NOXA蛋白的表达;以小干扰RNA(siRNA)技术特异性"沉默"NOXA基因;用脂质体Lipofectamine2000转染pEGFP-Noxa质粒和空载体pEGFP。结果表明,bortezomib(10 nmol/L)联合As2O3(0.5μmol/L)诱导NB4细胞凋亡率较单药As2O3(0.5μmol/L)诱导时增加,相应的caspase-3,-9的活化明显加强。单药As2O3诱导的NB4细胞中Noxa蛋白水平未发生改变,bortezomib和As2O3联合诱导的NB4中NOXA蛋白水平上调。特异性"沉默"NOXA基因后bortezomib和As2O3联合诱导的NB4细胞中caspase-3的活化程度降低,细胞凋亡率也明显下降。通过转染质粒高表达NOXA蛋白,单药As2O3诱导的NB4细胞中caspase-3的活化程度增加。结论:bortezomib可以增加NB4细胞对As2O3诱导凋亡的敏感性,这可能和促凋亡蛋白NOXA的表达上调有关。     

孤啡肽联合阿霉素逆转K562/ADM细胞多药耐药及其分子机制研究

本实验室已研究证实,在细胞水平孤啡肽(OFQ)单独用药可逆转K562/ADM细胞多药耐药。本研究目的是探索OFQ联合阿霉素(ADM)逆转K562/ADM细胞多药耐药的分子机制及其与MDR1 mRNA/P-gp表达的相关性。MTT法检测OFQ和ADM单药及两者联合后对K562/ADM细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测MDR1 mRNA表达水平,Western blot检测P-gp的相对表达量。结果显示,OFQ(0.1μmol/L)联合ADM(15 mg/L)后细胞增殖抑制率增加,与ADM组比较,48 h数据具有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡率显著提高(P<0.01);OFQ联合ADM作用于细胞后MDR1 mRNA/P-gp表达水平明显低于ADM单独用药组(P<0.01),且MDR1 mRNA(r=0.91)及P-gp(r=0.98)表达水平在48 h内呈时间依赖性。结论:OFQ联合ADM可时间依赖性的逆转K562/ADM细胞多药耐药性,48 h为最佳逆转时间,逆转机制与下调MDR1 mRNA和P-gp的表达量相关。     

K562/MDR细胞与树突细胞融合诱导P170蛋白特异的细胞毒性T淋巴细胞应答

目的通过细胞融合方法将P170抗原负载树突细胞(DC),探讨能否有效诱导P170蛋白特异的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答。方法通过贴壁黏附获得外周血单核细胞,用GM-CSF+ IL-4诱导培养DC,并以TNF-α促进DC成熟,于第7天收获DC,然后分3组:①DC与耐药细胞系K562/MDR细胞融合以负载P170抗原;②DC与K562／MDR细胞共培养;③单独DC培养。通过流式细胞术(FCM)检测PE-P170／FITC-HLA-ABC抗体双标细胞来评估融合率。将3组细胞分别与T细胞共同孵育5 d,通过MTT法比较各组T细胞对P170+靶细胞K562／MDR及HL-60／VCR的杀伤活性。结果采用PEG-DMSO诱导的DC与K562／MDR细胞的融合效率为(22．39±2．55)％,融合细胞同时表达DC表型和P170分子,HLA-ABC和P170双阳性表达率为(26．90±3．63)％,明显高于共培养组的(4．52±1．77)％,融合细胞能激活T淋巴细胞,显示出对P170+靶细胞产生抗原特异细胞毒作用,效靶比为25:1时,对K562／MDR细胞的杀伤率为(65．75±4．65)％,明显高于共培养组[(22．15±2．40)％]。结论K562／MDR与DC融合能够诱导P170蛋白特异的CTL应答,可用于多药耐药白血病的免疫治疗。     

茶多酚联合顺铂对人卵巢癌细胞SKOV3生长的影响及机制

目的观察茶多酚(TP)、顺铂(DDP)及二者联合对人卵巢癌细胞SKOV3增殖及凋亡的影响,初步探讨二者联合对SKOV3细胞生长影响的机制。方法人卵巢癌细胞SKOV3经低毒剂量TP、DDP单独或联合作用后,MTT法检测细胞增殖情况,DAPI核染色法荧光显微镜观察细胞凋亡形态变化,AnnexinV-FITC双染流式细胞术分析细胞凋亡,Westernblot方法检测细胞中Akt及p-Akt的表达。结果低毒剂量TP单药组、DDP单药组与联合用药组对细胞的增殖抑制率分别为(11.47±2.07)%、(32.26±4.85)%、(52.62±3.23)%,联合用药组的细胞增殖抑制率明显高于DDP单药组,差异有统计学意义(P=0.000);荧光显微镜下可见低毒剂量TP单药组的细胞核形态及染色与阴性对照组无明显差异,联合用药组细胞核比DDP单药组着色更重,核浓缩、核碎裂现象更加明显,呈现典型的细胞凋亡征象;低毒剂量的TP对细胞的凋亡无明显影响,联合用药组的凋亡率明显高于DDP单药组,差异有统计学意义(P=0.000);各用药组细胞中总的Akt蛋白表达无明显变化,p-Akt蛋白表达降低,其中联合用药组细胞中p-Akt蛋白表达降低最明显,与对照组及单药组比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 TP与DDP联合后可显著增强DDP的抑制细胞增殖、促细胞凋亡效应,可能是通过抑制Akt蛋白的磷酸化来实现的。     

槐耳清膏联合常用化疗药物对人急性淋巴细胞白血病细胞Nalm-6和Sup-B15的影响

目的 :探讨槐耳清膏联合临床常用化疗药物长春新碱(VCR)、柔红霉素(DNR)及左旋门冬氨酸酶(L-Asp)对急性淋巴细胞白血病细胞株Nalm-6和Sup-B15的抗增殖和促凋亡作用。方法 :以Nalm-6和Sup-B15细胞为研究模型,采用CCK-8法检测不同浓度槐耳清膏和3种化疗药物(长春新碱,柔红霉素,左旋门冬氨酸酶)单独及联合处理Nalm-6和Sup-B15细胞48 h后的增殖抑制作用,确定药物的半数抑制浓度(IC50),金氏公式判断2药物的联合作用效果;采用流式细胞术和Western blot检测槐耳清膏与化疗药物单独及联合作用对Nalm-6和Sup-B15细胞凋亡率和凋亡相关蛋白BAX, BCL-2, cleaved Caspase-3的影响。结果:槐耳清膏、长春新碱、柔红霉素、左旋门冬氨酸酶均能抑制Nalm-6和Sup-B15细胞的增殖,槐耳清膏联合化疗药物处理组比相应的单药处理组抑制率更高(P0.05), q值在0.85-1.15之间或大于1.15, 2药物具有相加或协同作用。流式细胞术检测结果显示,联合组的凋亡率高于相应单药组的凋亡率(P0.05)。Western blot结果显示,长春新碱和槐耳清膏均能上调Nalm-6和Sup-B15细胞蛋白BAX和cleaved Caspase-3的表达(P0.05),同时下调蛋白BCL-2表达(P0.05), 2者联合作用更明显;柔红霉素单独作用于Nalm-6和Sup-B15细胞时, BCL-2蛋白下调(P0.05),而cleaved Caspase-3蛋白上调(P0.05),但蛋白BAX无明显改变,当与槐耳清膏联合后,蛋白BCL-2和cleaved Caspase-3变化更明显,蛋白BAX与槐耳清膏单药处理组无明显差异。而左旋门冬氨酸酶对3种凋亡蛋白无明显影响, 2者联合与单用槐耳清膏无显著差异。结论 :槐耳清膏与常用化疗药物长春新碱、柔红霉素、左旋门冬氨酸酶联合对急性淋巴细胞白血病细胞株Nalm-6和Sup-B15具有协同或相加作用。     

恩度联合TP方案对食管癌细胞抑制作用的实验研究

目的:探讨重组人血管内皮抑素(恩度)联合紫杉醇+顺铂(TP)对食管癌细胞的抑制是否具有协同作用.方法:复苏Eca-109食管癌细胞株,传代培养,建立Eca-109食管癌细胞裸鼠移植瘤模型.3d测量1次肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线;测量瘤体的终末体积、重量,计算肿瘤抑瘤率;应用流式细胞仪测定肿瘤细胞凋亡率;应用免疫组化测定促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.结果:恩度联合TP组能明显抑制食管癌移植瘤的生长,肿瘤体积、重量小于其他组,差异有统计学意义(P＜0.05);恩度联合TP组食管癌细胞凋亡率高于其他组,差异有统计学意义(P＜0.05);恩度联合TP组抗凋亡蛋白Bcl-2表达低于其他组,差异有统计学意义(P＜ 0.05);恩度联合TP组Bax表达量高于其他组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:恩度联合TP方案能明显抑制食管癌细胞及移植瘤的生长,优于单独应用TP组.     

类风湿关节炎患者病损关节滑膜组织高迁移率族蛋白1表达和凋亡水平与疾病活动性的关系

目的探讨类风湿关节炎(RA)关节滑膜细胞凋亡水平及高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达变化与RA临床疾病活动性指标之间的相关关系。方法采用TUNEL细胞凋亡实验、免疫组织化学染色法分别检测12例RA患者和12例骨关节炎(OA)患者的滑膜组织HMGB1表达水平和细胞凋亡水平,同时采用免疫速率散射比浊法、酶联免疫吸附试验(ELISA)以及红外线障碍法分别检测血清C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸抗体(抗CCP)和红细胞沉降率(ESR)水平。结果 RA组和OA组之间年龄和性别构成差异均无统计学意义(P0.05)。RA组表达CRP、RF、抗CCP和ESR水平均明显高于OA组(P0.01)。RA组病损关节滑膜组织HMGB1水平明显高于OA组(P0.01),而细胞凋亡水平则明显低于OA组(P0.01)。RA患者关节滑膜组织凋亡水平评分与CRP、ESR、抗CCP、RF水平均呈强负相关(r值分别为-0.628、-0.815、-0.783和-0.757,P0.05),而HMGB1表达水平评分与CRP、ESR、抗CCP、RF水平均呈强正相关(r值分别为0.638、0.739、0.698和0.648,P0.05)。结论 RA患者关节滑膜细胞高表达HMGB1,可能通过减少细胞凋亡影响RA疾病的活动性。     

沉默miR-21对子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP的影响

目的:观察沉默miR-21对子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP的影响。方法:以Lipofectamine 2000介导miR-21抑制剂转染Ishikawa/DDP细胞株,同时设置阴性组和耐药组。采用反转录PCR检测miR-21、多药耐药基因MDR1、促凋亡基因Bax和抗凋亡基因Bcl-2的表达。采用蛋白印迹法检测多药耐药蛋白P-gp、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。采用噻唑蓝比色法检测细胞对顺铂的敏感性。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与耐药组和阴性组比较,抑制剂组miR-21,MDR1和Bcl-2mRNA表达显著下调(P0.01),而Bax mRAN表达显著上调(P0.001);抑制剂组P-gp和Bcl-2蛋白表达显著低下调(P0.05),而Bax蛋白表达显著上调(P0.001)。与耐药组和阴性组比较,顺铂对抑制剂组的IC50值显著(P0.001);顺铂对抑制剂组细胞的诱导凋亡率显著增加(P0.001)。结论:沉默miR-21可显著提高Ishikawa/DDP细胞株对顺铂的敏感性,并促进细胞凋亡,其具体机制可能与下调MDR1,P-gp和Bcl-2表达,以及上调Bax表达有关。     

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体在恶性血液病骨髓有核细胞的表达及其抗凋亡作用

为探索胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)在骨髓增生异常综合征(MDS)和急性髓细胞白血病(AML)骨髓有核细胞表面的表达及其与细胞凋亡的关系,收集MDS和AML患者各16例骨髓有核细胞,经离心涂片机制片,用免疫酶标记方法(APAAP)及TdT凋亡检测(TUNEL)法先后在同一标本上检测IGF-IR表达和凋亡信号,并以16名正常人骨髓有核细胞作对照.结果显示①MDS组骨髓细胞IGF-IR表达[(56.8±14.3)%]高于正常对照[(40.4±9.6)%](P＜0.01),AML组骨髓细胞IGF-IR表达[(86.8±13.8)%]高于正常对照(P＜0.01),AML骨髓细胞IGF-IR表达高于MDS骨髓细胞(P＜0.01);②MDS组骨髓细胞凋亡率为[(5.4±3.0)%]高于正常对照[(1.2±0.9)%](P＜0.01),AML组骨髓细胞凋亡率为[(0.3±0.4)%]低于正常对照(P＜0.01),MDS组细胞凋亡率明显高于AML组(P＜0.01);③细胞凋亡主要发生在IGF-IR阴性细胞[(9.0±4.8)%],IGF-IR阳性细胞中凋亡细胞仅占[(1.4±2.4)%](P＜0.01),IGF-IR表达与细胞凋亡呈负相关(r=-0.852;P＜0.01);④MDS骨髓细胞IGF-IR表达阳性率RAEB/RAEB-t/CMML组高于RA/RAS组,分别为(64.1±3.2)%和(53.5±16.2)%,但差异无显著性,细胞凋亡率RAEB/RAEB-t/CMML组低于RA/RAS组,分别为(3.1±2.1)%和(6.4±2.8)%,(P＜0.05);⑤MDS和AML中IGF-IR阳性率与原始细胞百分比存在明显的正相关(r=0.677;P＜0.01).结论MDS和AML造血细胞过度表达IGF-IR.IGF-IR表达增高可能预示造血细胞的恶性增殖倾向并通过某种途径抑制细胞凋亡.如果能证实此点,则抗IGF-IR治疗有希望成为治疗MDS和AML的新方法.