肝细胞癌中p16基因及其甲基化的检测与意义

目的　研究P16、P16甲基化在肝细胞癌 (Hepatocellularcarcinoma ,HCC)与癌旁组织中的表达特点 ,探讨其与HCC生物学行为的关系。方法　分别以免疫组化及PCR技术检测 3 3例人肝细胞癌及其癌旁组织中p16基因表达及其甲基化的水平 ,并结合临床资料进行分析。结果　肝癌的p16基因表达率 (63 64 % )明显低于癌旁组织 (10 0 % ) (P <0 0 5 ) ;p16基因阳性表达率在无转移的肝癌中为 85 7% ,有转移组为 2 5 0 % ;高、中和低分化的肝癌分别为 5 2 4% ,2 8 6%和 19 1%。p16基因阳性表达在肝癌患者高分化与中和低分化比较有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,转移与非转移组比较有非常显著性差异 (P <0 0 1)。 3 3例HCC组织中 11例发生p16甲基化 ,均伴肿瘤转移 ,其中高、中和低分化肿瘤各占 2、4、5例 ;相应癌旁组织中未发现p16基因甲基化。结论　p16基因异常表达及其甲基化在肝细胞癌的发生、发展过程中起重要作用。     

卵巢癌组织中p16基因甲基化的研究

目的 探讨抑癌基因p16基因5’端CpG岛甲基化在卵巢癌癌变过程中的作用。方法 应用甲基化特异性PCR(MSP)分别检测17例卵巢癌样本中p16基因启动子区域(M1／U1)以及启动子和第—个外显子5’端部分(M2／U2)的甲基化状态。结果 在我们检测的17例卵巢癌样本中，有3例M1阳性，阳性率为17．65％(3／17)，这些病例恶性度较低。无1例M2阳性。结论 抑癌基因p16基因5’端CpG岛甲基化参与卵巢癌特别是恶性度低的卵巢癌的癌变过程，它可能与其它抑癌基因协同作用。     

癌组织中p16基因甲基化分析

目的探讨抑癌基因p16在胃癌组织中是否存在甲基化异常及其与胃癌发生发展的关系.方法对20例胃癌组织及相应正常胃粘膜组织应用甲基敏感酶(HpaII)和甲基非敏感酶(MspI)酶切,结合PCR扩增技术,对p16基因外显子1、外显子2的二核苷酸胞嘧啶特定序列5'-CCGG-3'位点甲基化进行检测.结果20例胃癌组织中,p16基因外显子1、2异常甲基化分别为5例(25%)和9例(45%),正常组织未发现甲基化异常;14例高甲基化标本中,中分化胃癌4例,低分化7例,高分化1例;有2例存在外显子1、2同时甲基化异常,二者均为低分化胃癌,进展期胃癌(Ⅲa、Ⅳ期各1例)中1例呈现泳动易位;外显子2甲基化异常多发生于晚期肿瘤患者(P<0.05).结论p16基因甲基化异常可能会造成基因功能丧失,从而失去对细胞增殖的负性调控作用,导致胃癌发生与进展;外显子2高甲基化与临床进展有关,可能为晚期事件.     

脑胶质瘤中p16蛋白的表达及临床意义

目的:研究抑癌基因 p16 蛋白在脑胶质瘤发生、分化过程中的作用及其与预后的关系。方法:本院1999年6月至2002年6月接受手术及术后立体定向放射治疗68例脑胶质瘤患者,应用免疫组化的方法检测其病理标本中的p16蛋白,分析p16蛋白的缺失与病理分级、患者预后之间的关系。结果:全组共有37例(54.4%)标本p16蛋白表达阴性,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤的 p16 蛋白表达阴性率分别为14.3%、33.3%、66.7%、75.0%,Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤的p16蛋白的阴性率明显高于Ⅰ、Ⅱ级(P<0.01)。p16蛋白表达阴性患者的复发率明显高于p16蛋白表达阳性者(P<0.01),分别为 54.5%和 19.4%。结论:p16蛋白的缺失与脑胶质瘤的恶性程度有关,恶性程度越高,p16 蛋白的缺失率越高;p16蛋白的缺失与预后相关,其缺失率越高,患者复发率越高。     

p16基因启动子CpG区甲基化与人脑胶质瘤临床病理特征的关系

目的　研究 p16基因启动子CpG区甲基化的改变与脑胶质瘤发生及其临床病理特征的关系。 方法　采用甲基化特异PCR技术 (MSP法 )研究脑胶质瘤组织p16基因甲基化 ,并分析其与临床病理特征的关系。结果　 5 6例脑胶质瘤组织中有 10例 (17.9% )呈 p16CpG区甲基化阳性。胶质瘤的 p16CpG区甲基化与性别、年龄无关 ,而与肿瘤级别、浸润与否有关。有浸润的脑胶质瘤 p16CpG区甲基化明显高于暂无浸润者。p16CpG区甲基化也多发生于Ⅲ级、Ⅳ级 (即肿瘤恶性程度高 )的病例。结论　p16基因启动子区甲基化可作为脑胶质瘤的预后影响因子之一     

甲基化特异性PCR检测胃癌p16基因甲基化及其临床意义

目的初步探讨甲基化特异性聚合酶链反应（MSPCR）在胃癌临床诊断中的应用价值。方法选取47例胃癌患者的癌组织及配对的癌旁组织，11例远离肿瘤的正常胃黏膜组织。标本经一般处理，PCR扩增后，产物经电泳EB染色，紫外灯下观察。结果47例胃癌组织标本中，22例（46．2％）在p16基因的启动子区域呈现异常甲基化；47例癌旁组织标本中，28例（58．6％）也检测出甲基化存在；11例正常胃黏膜组织标本中均未检测出p16基因甲基化存在。结论MSPCR技术对胃癌患者组织标本中的异常甲基化检测具有高度特异性，是一项具有潜力的胃癌早期诊断新技术。     

胃癌组织中p16基因甲基化分析

目的：探讨抑癌基因p16在胃癌组织中是否存在甲基化异常及其与胃癌发生发展的关系。方法：对20例胃癌组织及相应正常胃粘膜组织应用于甲基敏感酶（HpaⅡ）和甲基非敏感酶（MspⅠ）酶切,结合PCR扩增技术,对p16基因外显子1、外显子2的二核苷酸胞嘧啶特定序列5‘-CCGG-3‘位点甲基化进行检测。结果：20例胃癌组织中,p16基因外显子1、2异常甲基化分别为5例（25％）和9例（45％）,正常组织未发现甲基化异常;14例高甲基化标本中,中分化胃癌4例,低分化7例,高分化1例,有2例存在外显子1、2同时甲基化异常,二者均为低分化胃癌,进展期胃癌（Ⅲa,Ⅳ期各1例）中1例呈现泳动易位;外显子2甲基化异常多发生于晚期肿瘤患者（P＜0．05）。结论：p16基因甲基化异常可能会造成基因功能丧失,从而失去了对细胞增殖的负性调控作用,导致胃癌发生与进展;外显子2高甲基化与临床进展有关,可能为晚期事件。     

肝癌病人癌组织与血浆p16及APC基因甲基化检测及意义

目的检测肝细胞性肝癌(HCC)病人癌组织及血浆中多肿瘤抑制因子p16和结肠腺瘤样息肉基因(APC)的基因启动子区异常甲基化状态,并探讨其临床意义。方法应用实时荧光PCR技术,检测86例HCC病人癌组织、癌旁正常组织及血浆标本中p16、APC基因启动子区异常甲基化状态,以24例正常肝组织作为对照。结果 24例正常肝组织未检出p16和APC基因的异常甲基化。癌组织p16基因甲基化率明显高于癌旁正常组织和对应的血浆标本(χ2=67.48、6.72,P<0.05)。癌组织中APC基因甲基化率明显高于癌旁正常组织和对应的血浆标本(χ2=18.03、29.16,P<0.05)。肝癌组织及对应血浆标本p16、APC基因甲基化的一致率分别为65.4%、43.3%。HBsAg阳性组肝癌组织及其对应血浆标本p16基因甲基化率显著高于HBsAg阴性组,差异有统计学意义(χ2=5.60、5.67,P<0.05)。结论 p16、APC基因启动子区异常甲基化导致的基因沉默可能与HCC的发生和发展密切相关。     

检测血浆中p16及CDO1基因甲基化在胶质瘤诊断中的价值

采用甲基化特异PCR(MSP)法分别检测49例胶质瘤患者组织及其对应的术前血浆,10例颅脑外伤患者挫伤的脑组织及其对应的术前血浆和16例健康体检者血浆中p16及半胱氨酸双加氧酶1(CDO1)基因的甲基化状态,以探讨血浆中检测p16及CDO1基因甲基化在胶质瘤临床诊断中的价值.胶质瘤组织中p16及CDO1基因甲基化率分别为53.1%(26/49)、42.9%(21/49),对应的血浆甲基化率为39.0%(19/49)、34.7%(17/49).在肿瘤组织和血浆中p16及CDO1至少一个[p16和(或)CDO1]基因甲基化的频率为75.5%(37/49)和67.3%(33/49).血浆中p16及CDO1基因(甲基化)联合检测胶质瘤的灵敏度为67.3%,较单基因检测的灵敏度明显提高.单因素分析显示术前患者血浆中p16和(或)CDO1基因的甲基化与年龄、性别、肿瘤分级无关.对一些肿瘤特异基因的甲基化状态进行联合检测可提高胶质瘤在血清学诊断水平上的灵敏度,为胶质瘤的筛查及早期诊断提供新的临床诊断思路.     

p16基因及其与胶质瘤的相关性研究进展

胶质瘤是神经系统最常见的原发性恶性颅内肿瘤,尽管其治疗方法已经由单一的手术治疗发展到手术加放疗和化疗等综合治疗,但患者的预后并没有得到明显的改善[1]。p16基因是近年来发现的一种新型肿瘤抑制基因,它与胶质瘤的发生发展密切相关。肿瘤组织及外周组织检测p16基因可以作为胶质瘤早期预测标记和分型的敏感指标。     

脑胶质瘤p16基因纯合缺失、点突变及表达的研究

目的：从分子水平上探索胶质瘤的发生机理。方法：应用复合PCR法,单链构象多态性（SSCP）分析及免疫组化的标记抗生蛋白连菌素法(LSAB）对脑胶质瘤p16基因的表达进行了检测。结果：27例胶质瘤中发现14例有p16基因不同程度的表达,但未发现纯合缺失点突变。结论：胶质瘤中未发现p16基因第3外显子的纯合缺失和点突变,说明其在胶质瘤的发病中不是主要因素。胶质瘤中存在p16基因的表达缺失,并且其表达的缺失与胶质瘤的恶性程度相关。     

脑胶质瘤抑瘤基因p53、p16缺失、变异与肿瘤恶性程度的相关性

目的：探索肿瘤抑制基因ｐ５３、ｐ１６缺失、变异与肿瘤恶性程度的关系。方法：对３１例脑胶质瘤的原发肿瘤标本行ｐ５３、ｐ１６蛋白检测，用免疫组化ＬＳＡＢ法。结果：星形细胞瘤Ⅰ级１７例中，ｐ１６１０例表达３０％以下，７例不表达，ｐ５３４例表达３０％以下，１３例不表达；星形细胞瘤Ⅱ级９例中，ｐ１６１例表达３０％以下，８例不表达，ｐ５３３例表达３０％以下，１例表达３０％～６０％，５例不表达；星形细胞瘤Ⅲ级２例，ｐ１６均不表达，ｐ５３１例表达３０％以下，１例表达３０％～６０％；星形细胞瘤Ⅳ级３例，ｐ１６均不表达，ｐ５３表达均在３０％～６０％。结论：ｐ５３失活主要见于恶性胶质瘤和恶性发展中的胶质瘤，肿瘤的恶性程度越高，ｐ５３蛋白失活越严重。偏良性的胶质瘤ｐ５３呈轻度阳性表达时，提示肿瘤可能处于早期恶性变过程中。ｐ１６缺失主要见于星形细胞瘤Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级等恶性胶质瘤。     

甲基化特异PCR方法对p16肿瘤抑制基因的研究

目的：研究肺癌、结肠癌组织中p16肿瘤抑制基因甲基化状态及其临床意义。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法,特异扩增分析甲基化和非甲基化两种状态。结果：p16基因在人胚肺组织处于非甲基化状态;在人肺巨细胞癌细胞系（PLA801-D）呈甲基化状态;在检测的肿瘤标本中,60%肺癌组织及70%结肠癌组织出现甲基化状态。结论：p16基因的甲基化状态是肺癌、结肠癌组织中p16基因异常形式之一,有可能成为肿瘤分子诊断的重要标志,MSP方法有临床普及应用前景。     

p16基因对脑胶质瘤细胞顺铂化疗敏感性的影响

目的探索ｐ１６基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及其与脑胶质瘤细胞顺铂化疗敏感性的关系。方法采用脂质转染的方法．将外源野生型ｐ１６基因导入胶质瘤细胞株Ｕ２５１,观察ｐ１６基因长期稳定转染对胶质瘤细胞的作用,并筛选阳性克隆。同时以空载体质粒ＰＣＤＮＡ３为对照。免疫组化、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测ｐ１６基因表达,对转染后细胞生长情况、细胞周期及细胞对顺铂（ｃｉｓ－ｄｉａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏｐｌａｔｉｎｕｍ,ＣＤＤＰ）敏感性的变化进行分析。结果外源ｐ１６基因的高水平表达显著掏了胶质瘤Ｕ２５１细胞的生长,克隆形成率减少,克隆形成率减少,肿瘤细胞发生了Ｇ１期阻滞,同时,细胞对顺铂的敏感性降低,化疗药物诱导的凋亡细胞数减少。结论外源野生型ｐ１６基因可抑制胶质瘤细胞恶性增殖,同时降低Ｕ２５１细胞对顺铂的化疗敏感性。ｐ１６基因转染后对顺铂诱导凋亡作用的抑制可能是其主要机制。     

骨髓增生异常综合征的染色体异常和p16基因外显子1甲基化研究

目的：研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者染色体异常和p16基因外显子1甲基化情况。方法：采用骨髓细胞即刻低渗法和G显带技术检查15例MDS患者染色体异常情况，应用限制性内切酶酶切法和FOR技术检测MDS患者p16基因外显子1甲基化情况。结果：13例MDS患者4例染色体异常，其中2例为染色体数目异常，2例为染色体结构异常；15例MDS患者中．发现有1例p16基因外显子l发生甲基化。结论：MDS患者有较高比例的染色体异常，染色体异常以单体性为主；p16基因外显子1甲基化可能不参与MDS发病，但有可能参与MDS向急性白血病的转化。     

p16蛋白在脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的 :探讨抑癌基因p16蛋白在脑胶质瘤发生、分化过程中的作用及其与预后的关系经。方法 :采用免疫组化的方法检测 5 4例脑胶质瘤患者病理标本中的p16蛋白 ,分析p16蛋白的缺失与病理分级、患者预后之间的关系。结果 :全组共有 2 9例 (5 3.7% )标本p16蛋白表达阴性 ,Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤的p16蛋白的阴性率明显高于Ⅰ、Ⅱ级 (P <0 .0 5 )。p16蛋白表达阳性患者的复发率明显低于p16蛋白表达阴性者 (P <0 .0 5 ) ,分别为 2 0 .0 %和 5 5 .2 %。结论 :p16蛋白的缺失与脑胶质瘤的恶性程度有关 ,恶性程度越高 ,p16蛋白的缺失率越高 ;p16蛋白的缺失与预后相关 ,其缺失率越高 ,患者复发率越高。     

脑胶质瘤p16基因转染对细胞生长及放射敏感性的影响

目的　探索p16基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及p16基因与肿瘤细胞放射敏感性间的关系。方法　将外源野生型p16基因导入胶质瘤细胞株U251、C6,筛选阳性克隆。同时以空载体质粒pCDNA3为对照,免疫组化检测p16基因表达,用MTT法测定细胞生长曲线及肿瘤杀伤率。结果　转染p16基因的U251、C6细胞有外源p16基因的整合及表达,克隆形成率减少,生长速度明显减慢,对辐射的敏感性增强。结论　导入外源野生型p16基因可抑制胶质瘤细胞恶性增殖,提高胶质瘤细胞对辐射的敏感性。     

脑星形细胞瘤p16基因缺失及5'CpG岛甲基化检测

目的探讨p16基因异常与脑星形细胞瘤发生、发展的关系。方法利用PCR及PCR-based甲基化技术检测了56例不同级别的脑星形细胞瘤组织p16基因缺失及5'CpG岛甲基化状况。结果18例高病理级别的脑星形细胞瘤发生了p16基因缺失,而低病理级别的脑星形细胞瘤无一例发生缺失（P<0.05）;6例脑星形细胞瘤发生了p16基因5'CpG岛甲基化。结论p16基因失活可能参与脑星形细胞瘤的病理发生、恶性进展。p16基因纯合缺失是p16基因失活的主要机制。     

p16甲基化与宫颈疾病的相关性研究

目的探讨p16基因甲基化与宫颈疾病的相关性。方法分别采用甲基化特异性PCR(MethylationspecificPCR,MSP)法和免疫组化法检测宫颈上皮内瘤样病变组织和宫颈癌组织中p16基因甲基化发生率和P16蛋白表达的缺失率。结果正常宫颈中未检测到p16基因甲基化,低度宫颈癌前病变p16基因甲基化率为3.33%。中度及高度宫颈癌前病变p16基因甲基化率分别为20.0%及26.7%。宫颈癌p16基因甲基化率为44.0%。中、高度病变及宫颈癌组与正常宫颈及低度病变甲基化率相比P<0.05,宫颈癌与中、高度病变组甲基化率相比P<0.05。结论 p16基因甲基化与宫颈疾病的发展具有相关性。