单纯疱疹病毒单克隆抗体的靶抗原鉴定及其编码基因的定位

用放射免疫沉淀的方法，鉴定单纯疱疹病毒（HSV）型共同性单克隆抗体（McAb)1D10的靶抗原是一分子量为60000道尔顿的糖蛋白，另6株McAb：1A12、Mad-2、2D11、CM－D、2A8、1C4的靶抗原的分子量在105000－130000道尔顿之间，用McAb与HSV－1／HSV－2型间重组组株作物理图谱的方法，定位出这些McAb靶抗原的编码基因，从而鉴定出McAb1D10的靶抗原是gD,1A12、2D11、2A8、1C4、Mad-2、CM－D3的靶抗原是gC，其中Mad-2、CM－D3分别为HSV－1和HSV－2型特异性，所以其靶抗原分别是gC-1和gC-2。     

放射免疫沉淀试验鉴定单纯疱疹病毒糖蛋白C

用放射免疫沉淀试验和单纯疱疹病毒1型、2型(HSV—1/HSV-2)型间重组株作物理谱图的方法.鉴定出抗HSV的单克隆抗体(McAb) 1A12、Mad-2、2D11、CM-D3、2A8和1C_4的靶抗原是一组分子量在105～130Ka之间的糖蛋白,其编码基因定位于长单一序列(UL)上,在0.536～0.682遗传单位之间,与gC的编码基因部分重叠。故认为这些McAbs的靶抗原为gC,其中,Mad-2和CM-D3分别为HSV-1和HSV-2型特异性,其靶抗原分别为gC-1和gC-2。ELISA阻断试验结果表明,4株型共同性McAbs 1A12、2D11、2A8和1C4.抗gC上4个独立的抗原位点。     

单纯疱疹病毒单克隆抗体靶抗原的鉴定及其编码基因的定位

用放射免疫沉淀的方法.鉴定单纯疤疹病毒(HSV)型共同性单克隆抗体(McAb)1D10的靶抗原是一分子量约为60000道尔顿的糖蛋白,另6株McAbs 1A12、Mad-2、2D11,CM—D3、2A8及1C4的靶抗原的分子量在105000～130000之间。用McAbs与HSV-1/HSV-2型间重组株作物理图谱的方法.定位出这些McAbs靶抗原的基因。McAb 1D10的靶抗原的编码基因定位于短单一序列(Us)上,在0.912～0.976遗传单位之间,这一区域与gD编码基因重叠,故认为是gD。另6     

单纯疱疹病毒糖蛋白C的鉴定

业已发现的单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白有6种即gB、gC、gD、gE,gG和gH。糖蛋白C(gC)既可诱生中和抗体,也能诱导细胞免疫,gC-1还起到补体C3b受体的作用。本文采用放射免疫沉淀试验和用HSV-1/HSV-2型间重组株作物理图谱等方法,鉴定出6株单克隆抗体(McAb)的靶抗原为gC。 6株抗HSV的MeAbs 1A12、1C4     

单纯疱疹病毒糖蛋白单克隆抗体对致死性腹腔感染BALB/c幼鼠的被动保护作用

用单纯疤疹病毒(HSV)Ⅰ型SM44株和Ⅱ型SaV株分别腹腔感染BALB/c小鼠,于感染前后不同时间经腹腔注射HSV单克隆抗体(McAb)观察6株McAbs对致死性腹腔感染小鼠的被动保护作用。结果4株McAbs(2C5、1A12、Mad-2、1D10)对HSV-Ⅰ感染的小鼠有保护作用,5株McAbs(2C5、1A12、2A8、1D10、CH-A9)对HSV-Ⅱ感染的小鼠有保护作用。体内保护作用与体外的中和活性相关;并分析了McAbs在中和试验中有无补体参与条件下的保护能力。还证实了HSV糖蛋白在急性感染病程中其型特异性和型共同性抗原决定簇在体内的表达。     

抗HSV-1淋巴细胞杂交瘤的建立及应用单克隆抗体对HSV分型

应用HSV-1 SM44株感染的BHK-21细胞及提取的感染细胞膜蛋白抗原免疫BALB/c小鼠。以免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,经ELISA筛选仅与HSV-1反应的阳性克隆及克隆化,建立了一株产生抗HSV-1型特异性McAb的杂交瘤细胞系(Mad-2)。经ELISA,IF及抗原吸收试验证明,该细胞系的培养上清及制备的小鼠腹水均与HSV-1呈特异性反应,但不与HSV-2反应。ELISA测定McAb Mad-2的腹水效为10~(-7),Ig亚类鉴定为IgG-1。应用Mad-2和抗HSV型共同性McAb 1A12及抗HSV-2型特异性McAbCH-A9,对43株临床HSV分离株做了ELISA及IF分型。结果表明,28株口唇、眼部感染分离株和1株宫颈炎分离株均与1A12和Mad-2反应,不与CH-A9反应,为HSV-1。余14株宫颈炎分离株均与1A12和CH-A9反应,而不与Mad-2反应,为HSV-2。ELISA和IF分型的结果完全一致。本研究提示作者应用的一套抗HSV McAb有可能作为HSV型别鉴定的标准试剂。     

单纯疱疹病毒2型30kD糖蛋白的鉴定及其编码基因的定位

用放射免疫沉淀试验和单纯疱疹病毒1型与2型(HSV-1／HSV-2)型间重组株作物理图谱的方法，鉴定出单克隆抗体(McAb)CH-A9靶抗原是一分子量约为30kD的糖蛋白，存在于HSV-2感染的BHK细胞膜上，其编码基因定位于长单一序列(UL)上，在0.490～0．564遗传单位之间，与已报道的HSV-2蛋白编码基因元重叠，因此g30kD可能是一种新的HSV-2糖蛋白。     

单克隆抗体治疗家兔实验性单纯疱疹性角膜炎

单纯疱疹性角膜炎(HSK)是感染性角膜炎中最主要的致盲性眼病,多由单纯疱疾病毒Ⅰ型(HSV-1)引起,常用疱疹净、无环鸟苷等抗代谢药物作局部治疗,但疗效不够显著,并有细胞毒性等副作用。本文选用抗HSV糖蛋白gC单克隆抗体(McAb)2C5、2A8、1A12、Mad-2和抗gD McAb1D10的腹水,纯化后制成滴眼剂。取灰色家兔21只42眼,用HSV-1感染造成实验性HSK。治疗1组和治疗2组各为12只眼,     

抗牛型结核杆菌单克隆抗体的制备、鉴定及其纯化抗原的研究

用牛结核杆菌超声抗原及纯蛋白衍生物(PPD)免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选和克隆化得到9株稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,应用抗原蛋白酶消化试验、抗原过碘酸氧化试验、加成试验及免疫印迹分析等,表明9株McAbs所识别抗原决定簇均对蛋白酶敏感,其中2株的抗原决定簇既存在于蛋白质中,又存在于脂类中。9株McAbs所识别的抗原分子量均为30kDa。4株均作用于同一抗原决定簇,其它McAb各作用于另外互不相同的抗原决定簇。免疫电镜观察,McAb 1A3所作用的蛋白质抗原主要分布在细胞内,少量分布于细菌胞壁。9株McAbs除1株外均显示出很强的特异性,其中4株仅与牛型结核茵反应阳性。利用McAb 1A3通过亲和层析柱纯化牛型结核杆菌PPD后,得到亲和层析纯抗原Ag 1A3,它仅与牛型结核杆菌免疫血清反应阳性,与其它分枝杆菌免疫血清反应阴性;对牛型结核杆菌致敏的豚鼠皮肤反应阳性,而与人型及BCG致敏豚鼠皮肤反应阴性。     

戊型肝炎病毒Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ、Ⅳ基因型B细胞抗原表位的异同

目的：制备戊型肝炎病毒(HEV)缅甸株和墨西哥株ORF2重组蛋白(p166Bur和p166Mex)的单克隆抗体(McAbs)，用于分析HEV不同基因型B细胞抗原表位的特点。方法：将免疫BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，获得分泌抗-p166Bur和抗-p166Mex McAbs的杂交瘤细胞株，然后采用ELISA和免疫印迹法测定McAbs与不同基因型HEV ORF2编码蛋白p166的免疫反应性。结果：获得4株杂交瘤细胞株，即分泌抗-p166Bur McAbs的2G2、2B1以及分泌抗-p166Mex McAbs的D8G10和E5E12，其中2B1分泌的McAb仅能与第Ⅰ、Ⅱ基因型编码的重组蛋白结合，而其余3株分泌的McAbs既能与Ⅰ、Ⅱ基因型HEV的p166重组蛋白发生反应，也能与Ⅲ、Ⅳ基因型的p166蛋白反应。结论：HEV第Ⅰ、Ⅱ基因型与Ⅲ、Ⅳ基因型ORF2编码蛋白既有共同又有不同的B细胞抗原表位。     

不同基因型戊型肝炎病毒的抗原表位分析

目的 研究不同基因型戊型肝炎病毒(HEV)的抗原表位特点。方法 以HEV基因工程重组蛋白p166Bur、p166Mex为免疫原，制备单克隆抗体(McAbs)。采用间接ELISA法及免疫印迹法(Western blot)，检测所制备的McAbs与7种不同基因型和亚型p166(p166Bur、p166Pak、p166Mor、p166Mex、p166Us、p166Nz和p166Chn)的交叉反应性。结果 获得4株稳定分泌基因型相关MeAb的杂交瘤细胞株，即1B5、1D10,1G10和D4A3。经检测，1B5、1D10,1G10分泌的McAbs只与p166Bur及p166Mor特异结合，D4A3分泌的McAb只与p166Mex特异结合。结论 不同基因型HEV存在不同的抗原表位。     

单纯疱疹病毒1型约105000道尔顿糖蛋白的鉴定及其编码基因的定位

用放射免疫沉淀试验和用单纯疱疹病毒1型与2型(HSV-1/HSV—2)型间重组林作物理图谱的方法,鉴定出单克隆抗体(McAb)1A12目标抗原是一分子量约为105,000道尔顿的糖蛋白,存在于HSV—1感染的BHK细胞提取物中,其编码基因定位于长单一序列(UL)上,在0.640-0.682遗传单位之间。由于该糖蛋白的编码基因与gC编码基因部分重叠,因此该糖蛋白可能是gC的另一种形式。     

单克隆抗体分析西安地区单纯疱疹病毒的抗原性

应用15种抗HSV型共同性和2种分别抗HSV-1和HSV-2型特异性McAb,分析了自西安地区分离出的43株HSV临床株的抗原性。间接免疫荧光试验的结果表明,从宫颈炎病人中分离出的15株HSV除1株为HSV-1外,14株为HSV-2。从口唇、眼部感染分离出的28株HSV均为HSV-1。用15种型共同性McAb对HSV的抗原性分析表明,6种McAb对所有临床株均呈阳性反应,另外9株McAb仅与部分HSV毒株呈阳性反应。43株HSV分离株中22株(51.2％)可与所有型共同性McAb反应,21株(48.8％)仅与部分McAb反应。比较HSV-1和HSV-2分离株与型共同性McAb反应的结果发现,HSV-2毒株的抗原性改变仅发生于3个抗原位点上,而HSV-1毒株的抗原性改变可发生于9个抗原位点上。同时对3株HSV参考株的抗原性分析表明,HSV-2参考株333仅与7种型共同性McAb反应且不与抗HSV-2型特异性McAb反应。研究结果表明,由同一地区分离出的HSV在抗原性上有明显差异,对造成这种抗原性差异的原因有待进一步研究。     

单纯疱疹病毒2型30kD糖蛋白的鉴定及其编码基因的定位

用放射免疫沉淀试验和单纯疱疹病毒1型与2型(HSV-1/HSV-2)型间重组株作物理图谱的方法,鉴定出单克隆抗体(McAb)CH-A9靶抗原是一分子量约为30kD的糖蛋白,存在于HSV-2感染的BHK细胞膜上,其编码基因定位于长单一序列(UL)上,在0.490～0.564遗传单位之间,与已报道的HSV-2蛋白编码基因无重叠,因此g30kD可能是一种新的HSV-2糖蛋白。     

恶性疟原虫红内期保护性抗原的分析

本文用7株单克隆抗体(McAb),疟疾流行区感染病人免疫血清和BALB/c小鼠免疫血清对用~(35)S—蛋氨酸和~(125)Ⅰ—表面标记的恶性疟原虫无性红内期保护性抗原进行了分析。实验结果表明,抑制性McAbs和不同来源的多价免疫血清巳鉴定出10余种功能性靶抗原。两种不同来源的多价免疫血清不但能识别由这7株McAbs所识别的靶抗原而且还能识别140和100KDa以及某些较小分子量的多肽。同时还用抗原竞争试验证实了免疫沉淀靶抗原的特异性。     

单纯疱疹病毒1型糖蛋白D主要抗原表位区的表达、纯化及鉴定

 目的 原核表达单纯疱疹病毒1型(HSV-1) 糖蛋白D(gD)主要抗原表位区,纯化融合表达蛋白并对其进行鉴定。方法 用Lasergene7.0中Protean软件对HSV-1 gD氨基酸序列进行抗原表位预测和分析,筛选出gD主要抗原表位区(gD MED),人工合成该区域cDNA序列,构建原核表达载体pET-GST-gD MED;将重组质粒转化大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3) pLysS,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过GST?Bind 纯化试剂盒对gD MED融合蛋白进行纯化;Western blot对gD MED融合蛋白的免疫活性进行分析。结果 HSV-1 gD在266~394区域富含抗原表位,人工合成了该区域的cDNA序列,并成功构建了原核表达载体pET-GST-gD MED;gD MED融合蛋白主要以可溶形式表达,分子质量约为45 ku,纯度能达95%;Western blot结果显示,gD MED融合蛋白能与感染HSV-1患者的血清发生特异结合。结论 成功表达和纯化了具有良好抗原性的HSV-1 gD MED融合蛋白,为HSV免疫诊断试剂盒和基因工程疫苗的研制奠定了基础。     

抗人肿瘤相关核仁抗原单克隆抗体的建立

本研究以A549细胞系和人肺腺癌组织细胞核仁为抗原,建立了7株McAbs,并用ELISA技术对其反应性进行了初步分析。结果表明:各株McAb均能与人癌细胞核仁起反应,但各自的抗原却不尽相同。MA1、MA2、MA3和MA6株的抗原可能是HMNA类物质;MA4、MAS和ML1株的抗原可能是属于核仁的正常成份,但优势表达于癌细胞中。本组抗体的建立,对于研究肿瘤细胞核仁的分子组成和生物学功能,并进而利用HMNA为临床肿瘤病理服务可能有重要意义。     

流式细胞仪测定单克隆抗体识别福氏2a痢疾杆菌及其突变株表面抗原分子表达的分析

本文报告应用流式细胞仪测定4株单克隆抗体(McAbs)识别的抗原分子在福氏2a痢疾杆菌及其突变株表面表达情况,结果表明4株McAbs所识别的抗原分子在福氏2a痢疾杆菌有毒株表面的表达高于其无毒和突变株;同一菌株中不同抗体表面“0”糖链抗原分子的表达具有明显的不均一性,这进一步说明痢疾杆菌的抗原结构非常复杂。     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗体的研究——Ⅱ、单克隆抗体介导ADCC效应的探讨

本文用HSV-1SM44株感染BHK细胞,经放射性同位素~(51)Cr标记制备靶细胞,以正常小鼠脾细胞为效应细胞,应用5株抗HSV McAb,建立了McAb介导ADCC-~(51)Cr释放试验的测定方法,对McAb介导的ADCC效应测定的有关试验条件做了选择,确定了最适工作条件。ADCC测定结果表明,5株抗HSV McAb介导ADCC的活性不同,McAb 1A12,2A8,1G8无ADCC活性;而1D10和2C5 2株McAb 1:10稀释时的~(51)Cr释放率分别为27.09和25.07％,进一步稀释至10~(-2)或10~(-3)时,这2株McAb仍有ADCC活性。结果提示,不同的HSV抗原决定簇诱导产生的抗体,在介导ADCC免疫保护作用上是有差异的。并为McAb用于临床治疗HSV感染的可能性提供了实验资料。     

抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原单克隆抗体的研制

目的应用杂交瘤技术制备抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的单克隆抗体。方法用脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原免疫雌性Balbc小鼠,取其致敏脾脏淋巴细胞与SP20小鼠骨髓瘤细胞融合。间接ELISA法筛选阳性克隆,制备腹水。检测McAb效价、抗体亚类和杂交瘤细胞核型。结果获得4株阳性杂瘤细胞株,选择一株制备腹水,ELISA效价为1∶2.4×106,中和试验效价1∶1.3×104,蛋白浓度为27.2mgmL。McAb与Ⅱ型Sabin株C抗原(ⅡC)、Ⅰ型Sabin株及Ⅲ型Phizer株D抗原(ⅠD、ⅢD)不发生交叉反应,具有高度特异性。结论成功的制备了针对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的McAb,为进一步研究IPV效力检测奠定了基础。