血清γ球蛋白种间交叉反应抗原的单克隆抗体的制备

作者用人γ球蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0细胞系融合,并以猪γ球蛋白作ELISA进行筛选,获得两株抗γ球蛋白种间交叉反应抗原的McAb杂交瘤细胞系(1B_(11)和2A_4)。用有限稀释法对1B_(11)和2A_4进行了克隆化。阳性率达到100％。特异性试验结果表明:1B_(11)能识别人IgG、猪γ球蛋白和兔γ球蛋白;2A_4所识别的抗原存在于人Ig和猪γ球蛋白上,但未测出对兔γ球蛋白结合活性。     

血清γ球蛋白种间交叉反应抗原的单克隆抗体的制备

用人γ球蛋白免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,获得两株抗γ球蛋白种间交叉反应抗原的单抗杂交瘤细胞系(1B_(11)和2A_4)。鉴定表明,1B_(11)能识别人IgG、猪γ球蛋白和兔γ球蛋白;2A_4所识别的抗原存在于人IsG和猪γ球蛋白上,但未测出对兔γ球蛋白的结合活性。     

淋球菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及临床初步应用（简报）

用淋病球菌菌体抗原免疫的BALB／c小鼠脾细胞，与骨髓瘤细胞SP2／0融合，获得4A5，4C2，5C0．6B6四个持续分泌抗淋病球菌菌体抗原单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。其产生的抗体与同抗原经酶联免疫吸附试验(ELISA)，测知培养上清抗体滴度为1：16—1：128，接种同系小鼠腹腔诱生的腹水，     

抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

用提此的猪流行性腹泻病毒抗原免疫BALB／c小鼠，脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合，用酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法筛选，以有限稀释法克隆化，阳性率选100％，建立了1D8，5D7，4B1，2B3，1A4五株杂交瘸细胞系。用ELISA检测培养上清及诱生的腹水的效价。培养上清效价为1D8 1：1280^x，5D7 1：640^x，4B1 1：320^x 2B8 1：320^x，1A4 1：640^x，腹水效价寿1D8 10^-7，5D7 10^-7、4B1 10^-7，2B8 10^-5，1A4 10^-4。用免疫双扩散试验结果，五株单抗中有一株属IgG类。四株属IgG类。将单抗提此后用ELISA央心间接法及间接免疫荧光试验(IFA)对6神冠状病毒进行了特异性鉴定，除猪流行腹泻病毒外，不与其它冠状病毒发生交叉反应。取效价高而稳定的1D8，5D7，4B1细胞系单克隆抗体做IFA及直接EISA试验初步证明该McAb具有敏感性高，特异性强的优点，可作为猪流行性腹泻病毒检测的一种新试剂。     

兔抗人细胞色素P450 4A11合成肽抗体的制备与鉴定

目的：制备兔抗人细胞色素P450 4A11（CYP4A11）抗体，并对其特性进行初步鉴定。方法：利用生物信息学方法分析CYP4A11蛋白的序列，根据亲水性结构、柔韧区、抗原指数及表面概率结构等指标选择多肽序列、合成CYP4A11多肽，与载体蛋白钥孔戚血蓝素（KLH）偶联，免疫大耳白兔制备抗CYP4A11抗体。辛酸一硫酸铵法纯化抗体，对纯化的抗体进行ELISA、Western blot、免疫组化等鉴定。结果：获得抗CYP4A11合成肽的抗体。该抗体效价为1：32000。可与CYP4A11合成肽及天然CYP4A11出现特异性反应，该抗体识别的相应抗原的相对分子质量（Mr）为53000，可识别正常肝脏的CYP4A11。结论：合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性，可用于制备相应的抗体。制备的兔抗CYP4A11合成肽抗体可应用于ELISA、Westernblot、免疫组化等实验。     

人肺癌相关单克隆抗体的制备及其抗原的纯化

目的：研制抗人肺癌细胞（A549）单克隆抗体，并对其所识别的抗原进行免疫亲和层析纯化。方法：以人肺癌细胞系A549免疫BALB／c小鼠，常规融合，以间接ELISA筛选，免疫组化研究单克隆抗体的特性，通过免疫亲和层析纯化所识别相关的抗原。结果：成功获得了一株能够稳定分泌抗人肺癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株289，并提取了其识别的相关抗原。结论：2139单克隆抗体及其所识别抗原有可能进一步用于肺癌的实验室诊断。     

多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗免疫Balb/c小鼠引起的免疫应答

目的：观察多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗免疫Balb／c小鼠引起的体液和细胞免疫应答。方法：在成功构建多房棘球绦虫elp基因原核表达载体(pQ-ELP)的基础上，以亲和层析法纯化重组蛋白，SDS-PAGE鉴定，Bradford法进行定量。用ELP重组蛋白(A组)及ELP重组蛋白加弗氏佐剂(B组)免疫Balb／c小鼠(10只／组)，以生理盐水(NS组)作对照。ELISA方法检测免疫后不同时间产生的特异性IgG1，IgG2a和IgG2b水平。双抗体夹心ELISA试剂盒检测免疫鼠脾脏单个核细胞(PMNC)在受到特异抗原刺激后，产生IL-4、IL-12和IFN-γ的能力，^3H-TdR掺入法检测脾淋巴细胞的增殖能力。结果：本研究成功获得高纯度重组蛋白ELP。首次免疫后2周，A、B组小鼠均产生了大量的特异IgGl抗体，B组还产生了少量的特异IgG2b抗体。除B组小鼠脾PMNC产生了微量IFN-γ外，A组、NS组IFN-γ及各组IL-4和IL-12均未检出。A、B组小鼠脾淋巴细胞增殖能力增高，其淋巴细胞CPM值分别为NS组的2．8和10．8倍，受到多房棘球绦虫抗原或刀豆素刺激时，A、B组淋巴细胞增殖更明显。结论：多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗可引起很强的体液免疫应答和微弱的细胞免疫应答，如与弗氏佐剂联合应用引起的细胞免疫应答会进一步提高。     

免疫学

猪FasL基因在猪软骨细胞上的表达和鉴定；重组蓖麻毒紊A链的融合表达、纯化及活性研究；凋亡抑制蛋白survivin在活化T细胞中的表达及其意义；人CD59基因的突变和表达及其活性研究；预先形成的重链二硫键有助于HLA-A2-抗原肽复合物体外折叠；人源噬菌体抗体库的构建及抗人NH-LBP抗体的筛选与鉴定；抗禽流感病毒轻链抗体库的构建；CTL识别的HLA-A2限制性人卵巢癌相关抗原OVA66表位的鉴定；含多抗原表位的嵌合SARS-CoV基因疫苗的构建和免疫原性研究；TM-TNF-α介导的反向信号协同增强sTNF-α，对U937细胞的激活作用；NK92细胞的胞吐效应与SNAP-23蛋白转位相关；CXCL16抗体可阻断BCG和LPS诱导的小鼠免疫性肝损伤；GM-CSF对抗原化抗体基因免疫TH细胞应答的调节作用；趋化性细胞因子受体在Tc1和Tc2亚群的差异表达；在单个细胞水平上分析抗原特异性Th1／Th2细胞因子产生的关联性；人OX40-Fc分子的构建、真核表达及活性研究；人免疫缺陷病毒Ⅱ型核心蛋白DNA疫苗的实验免疫研究；PD-L1 mAb的制备、鉴定及其特性的研究；噬菌体呈现的多聚多肽3A8诱导Jurkat细胞的凋亡效应；T细胞受体Dβ-Jβ sjTRECs连接区多样性；α-Dystroglycan在胸腺T细胞的表达及其对胸腺发育的作用；Bcl-2家族蛋白参与调节CD3ε和5-氟尿嘧啶介导的T淋巴细胞凋亡；人白细胞介素21在真核细胞中表达及其体外促T细胞增殖作用；小干扰RNA特异性抑制淋巴细胞共刺激分子CD28基因表达的研究；猪-猕猴延迟性异种移植排斥反应的发生机制；天花粉蛋白在不同小鼠品系中区分性下调树突状细胞IL-12分泌和CD80表达；复合HA-2氨基多肽可增强chitosan-DNA疫苗的免疫保护效果；CD4^＋CD25^＋调节性T细胞抑制小鼠自身免疫性甲状腺炎的发生；人β2-微球蛋白在pET-22b（＋）表达载体中的克隆、表达与纯化；B7-1／B7-H1相对比例变化对Hsp70-肽复合物抗肿瘤免疫效应的影响。     

表达结核特异性 Vγ9 Vδ2 TCR 双链单体的果蝇 S2恒定细胞系的构建和鉴定

目的：转染及筛选鉴定能够稳定表达和分泌V γ9Vδ2 T细胞受体（ TCR）双链单体的果蝇S2恒定细胞系。方法利用氯化钙转染法将TCR γ9-FB-pMT／V5-His B质粒、TCR δ2-JB-pMT／V5-His A质粒、pMT／Bip-BirA质粒和pCoHygro潮霉素质粒转染进S2细胞中,用潮霉素B筛选恒定细胞系后表达生物素化的结核特异性Vγ9Vδ2 TCR双链单体,并加以鉴定。结果斑点印迹试验、SDS-PAGE和Western blot表明细胞培养上清中有V γ9Vδ2 TCR单体,且已被成功生物素化。结论成功筛选出能稳定分泌表达Vγ9 V δ2 TCR的果蝇S2恒定细胞系,为研究γδ T细胞的免疫识别提供实验资料。     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体的抗独特型抗体的制备与初步鉴定

本文用HFRS病毒McAbs免疫家兔,制备了抗Id抗体(Ab_2),用小鼠γ球蛋白-Sepharose4B免疫亲和层析柱纯化了Ab_2,并以ELISA试验对其特异性作了鉴定。结果表明,所制备的Ab_2具有良好的Id特异性,并能与所用的小鼠抗HFRS病毒单抗、兔抗HFRS病毒抗体和HFRS病人血清结合。同时提示,这种Ab_2可能具有替代抗原的免疫潜能。     

T-bet重组腺病毒对哮喘小鼠Thl/Th2免疫平衡的调节

目的探讨静脉应用T-bet重组腺病毒（AdT-bet）对哮喘模型小鼠过敏性气道炎症及Th1／Th2免疫失衡的影响。方法36只C57BL/6小鼠随机分为AdT-bet治疗组（A组）、模型对照组（B组）、正常组（C组）。以卵蛋白（OVA）、氢氧化铝免疫建立哮喘模型，A组激发前尾静脉注射100μL的AdT-bet（1×10^8 PFU/μL），各组激发后肺泡灌洗分析细胞组份，分离肺淋巴细胞测定细胞因子分泌水平，以流式细胞仪检测CD3^＋、CD4^＋ T细胞比例及表达IFNγ和IL-4的比例，比较各组肺组织学改变。结果静脉应用AdT-bet组与对照组相比：①可明显抑制抗原激发后气道内嗜酸性粒细胞的浸润（P〈0．01）；②明显抑制肺淋巴细胞产生IL-4、IL-5，增加了IFNγ的产生；③肺脏淋巴细胞CD4^＋ IFNγ百分比及IFNγ^＋/IL-4^＋明显升高（P〈0．01），而CD4^＋ IL-4^＋百分比则明显下降；④明显抑制哮喘鼠气道内及肺泡内的过敏性炎症反应。结论激发前静脉用AdT-bet对哮喘小鼠过敏性气道炎症有明显的防治作用，其机制可能与表达的T-bet上调Th1／Th2比值，从而调整了免疫平衡有关。     

小鼠抗登革病毒2型单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备小鼠抗登革病毒2型(TR1751株)的单克隆抗体(Monoclonal antibody mAb)，并对其性质进行鉴定。方法免疫原为病毒感染的Blabfc乳鼠脑组织，匀浆后离心，去除细胞成分。免疫Blab／c小鼠，将小鼠脾细胞和SP2／0细胞融合后，通过ELISA、间接免疫荧光染色、噬斑减少中和实验(Plaque reduction neutralization test，PRNT)及Western blot进行筛选和鉴定。结果筛选到I1、I9和B152 3株杂交瘤细胞系，其分泌的mAb均为识别登革病毒E蛋白的中和抗体。结论获得了3株分泌小鼠抗登革病毒2型mAb的杂交瘤细胞系，利用所制备的抗体，为进一步研究登革病毒致病机理和开发疫苗提供了免疫学工具。     

人特异性T细胞系间接识别猪抗原

SLA (swineleukocyteantigen )特异性CD4+T细胞系和自身APC以及猪PBMC共同孵育时 ,T细胞增殖反应很强 ,而同仅有自身APC或猪PBMC刺激时的T细胞增殖有显著差异。提示抗原特异性CD4+T细胞系以间接途径识别SLA抗原。该识别能被抗人CD4和HLAII类抗体阻断 ,而抗SLAII类抗体阻断作用很弱 ,表明HLAII类分子在间接识别中起重要作用 ,这一结果不同于直接从外周血中分离的未经抗原致敏的T细胞。直接识别猪APC递呈的抗原。有可能异种移植初期以直接识别为主导 ,随着移植物存活时间的延长逐渐转为间接识别     

抗11β-羟类固醇脱氢酶1的单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗人11β-羟类固醇脱氢酶1(homo sapiens hydroxysteroid 11-beta dehydrogenase 1,HSD11B1)的单克隆抗体(mAb)并初步鉴定其特性.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blot、免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀、Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原.结果:通过间接ELISA筛选获得1株可稳定分泌抗人HSD11B1 mAb的杂交瘤细胞系.其分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),Western blot结果显示该mAb可以特异地识别相对分子质量(Mr)为35 000的蛋白;应用mAb CBF245对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAP XR)进行筛选,阳性噬菌斑测序结果显示5个阳性克隆插入序列均为HSD11B1.结论:mAb BAD062特异地识别抗原HSD11B1,该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化和免疫沉淀实验,为HSD11B1的研究提供了有力的工具.     

Wu T_(11)(CD2)-小鼠抗人绵羊红细胞受体杂交瘤细胞系的建立

本文报道用T细胞系JMN1免疫BALB/c小鼠,然后取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系X 63Ag8.653融合。用扁桃腺冰冻切片免疫酶染色法,筛选出一株稳定分泌IgG1亚类的抗绵羊红细胞受体(ER)单扰(McAb)的杂交瘤—WuT11。通过E玫瑰花结形成抑制试验,膜抗原抽提物对WuT11的间接免疫荧光阻断试验,对外周血单个核细胞(PBMC)及其E~ 、E~-层细胞,T、B和非T非B细胞系的反应特征以及FACS的反应曲线等,证明WuT11与OKT11和anti-CCT3相类似,竞争抑制试验证明WuT11与anti-CCT3识别同一表位。用WuT11进行亲和层析,提取的相应抗原经SDS-PAGE,测得分子量为50KDa的糖蛋白,证明WuT11属CD_2,为识别人ER的单抗。     

ERK1/2信号传导途径参与调控NK细胞的杀伤活性

目的：阐明NK细胞系持续活化的信号通路ERK1／2在调节NK细胞增殖和杀伤活性中可能发挥的作用。方法：制备NK-92和YT细胞的全细胞提取物，进行Westrn blot，检测在细胞系中持续活化的信号传导途径，信号通路特异性阻断剂PD098059阻断ERK1／2活化，MTT方法评价ERK1／2在调节NK细胞杀伤和增殖活性中发挥的作用，RT-PCR检测阻断试剂作用前后杀伤相关分子表达水平的变化。结果：2个代表性的NK细胞系(YT，IL-2非依赖；NK-92，IL-2依赖)中存在ERK1／2(p44／42MAPK)、NF-kB和STAT3信号通路的持续磷酸化，去除IL-2和血清较长时间后仍保持活化状态，而其它信号途径(STAT1、STAT6、PI-3K、p38MAPK)则未见活化。特异性阻断剂PD098059 200μmol／L阻断ERK1／2活化后，NK细胞杀伤。K562靶细胞的能力显著降低。但细胞的增殖活性不受影响。RT-PCR证实，PD098059阻断ERK1／2抑制NK细胞毒活性的同时，杀伤相关分子IFNγ、FasL 、pcrforin的表达水平也不同程度地下调。结论：NK细胞系中持续性活化的ERK1／2主要传递与NK细胞细胞毒性相关的信号，并不参与调节细胞的增殖，该途径通过控制杀伤相关分子IFNγ、FasL、perforin的基因表达从而主导NK对靶细胞的杀伤。     

一组抗人肺癌单克隆抗体的制备及初步鉴定

本文报告用人肺腺癌细胞株A549细胞为免疫原,用常规细胞融合技术获得了5株抗人肺癌单克隆抗体WLA-1B4、WLA-2D1、WLA-1G7、WLA-1G9和WLA-2C4。前4株均为IgM型,后1株为IgG1型。添加试验表明WLA-2D1和WLA-1G9识别同一抗原决定簇,WLA-2C4,WLA-1B4识别不同的抗原决定簇。ABC法免疫组织化学研究表明,5株单抗与肺癌组织均呈阳性反应,而与正常组织交叉反应较少。     

单纯疱疹病毒单克隆抗体的靶抗原鉴定及其编码基因的定位

用放射免疫沉淀的方法，鉴定单纯疱疹病毒（HSV）型共同性单克隆抗体（McAb)1D10的靶抗原是一分子量为60000道尔顿的糖蛋白，另6株McAb：1A12、Mad-2、2D11、CM－D、2A8、1C4的靶抗原的分子量在105000－130000道尔顿之间，用McAb与HSV－1／HSV－2型间重组组株作物理图谱的方法，定位出这些McAb靶抗原的编码基因，从而鉴定出McAb1D10的靶抗原是gD,1A12、2D11、2A8、1C4、Mad-2、CM－D3的靶抗原是gC，其中Mad-2、CM－D3分别为HSV－1和HSV－2型特异性，所以其靶抗原分别是gC-1和gC-2。     

血小板特异性抗体及HLA抗体引起血小板输注无效的研究

目的分析血小板输注无效（PTR）患者血小板同种抗体,并对其HPA及HLA-Ⅰ类抗原进行基因分型,探讨血小板输注无效与血小板同种抗原／HLA—Ⅰ类抗原相关性。方法应用ELISA方法对17例血小板输注无效患者血清中的血小板抗体进行检测;运用PCR—SSP方法,采用HPA分型试剂盒检测血小板同种抗原7个抗原系统HPA-1、2、3、4、5、6、15,以及HLA分型试剂盒对HLA—A／B抗原进行基因分型。结果6名患者单独表达HLA抗体,4名患者表达血小板特异性糖蛋白抗体,3例HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体共同表达．其中以GPⅡb／Ⅲa为主。对17例患者HPA系统和HLA-Ⅰ类抗原基因分型,发现HPA-3系统中a的基因频率高达0．676,b为0．324;HLA—A＊02、HLA—A＊24、HLA—A＊11和HLA—B＊60、HLA—B＊13、HLA—B＊46多见。结论HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体表达引起血小板输注无效,了解胛R与HPA／HLA—Ⅰ类抗原的相关性对指导临床血小板配合性输注具有重要意义。     

建立猪MHCⅠ类抗原特异性人T细胞系的探讨

目的　建立间接识别中国版纳猪SLAⅠ类P1分子的特异性人T细胞系的方法 ,以进一步研究SLAⅠ类分子的间接识别在猪→人异种细胞性排斥中的作用。方法　以E·coli中表达并纯化的SLAⅠ类分子P1为抗原 ,体外反复刺激健康人PBMC ,3H TdR掺入法筛选特异性增殖的T细胞 ,FACS作表型初步分析。结果　初步测定健康人外周血版纳猪SLAⅠ类P1分子特异性T细胞反应频率约 6 .67× 1 0 - 7,所建 4个T细胞系表型均为TCRαβ+ ,其中 3株以CD4+ 为主 ,1株以CD8+ 为主。结论　利用E .coli表达的纯蛋白抗原可建立间接识别版纳猪SLAⅠ类P1分子的特异性人T细胞系。