小鼠淋巴细胞杂交瘤腹水与实体瘤中单克隆抗体效价的比较

目前,制备杂交瘤腹水仍然是生产单克隆抗体的主要途径。在制备腹水过程中,由于杂交瘤性质的不同,或注射细胞数量过多,往往腹腔在形成腹水同时生长实体瘤,有时甚至只有实体瘤生长而无或很少量的腹水产生。有的学者曾报道过实体瘤可作为大量生产单克隆抗体的方法之一。我们在制备杂交瘤腹水过程中,应用间接免疫荧光染色和荧光激活细胞分类仪(FACS)分析,对OKT_3、OKT_9、OKT_(11)和HB28(抗β_2微球蛋白)杂交瘤在同一     

小鼠杂交瘤腹水、实体瘤及血清中单抗滴度观察

<正> 单克隆抗体(McAb)的生产常规都是将杂交瘤细胞注入同系小鼠腹腔诱发其产生腹水而获得。但在制备腹水的过程中,常可见到小鼠腹腔生长成大量实体瘤而影响腹水的产生。为了能及时获得所需的McAb,我们在制备抗B型葡萄球菌肠毒素(SEB)McAb腹水的过程中,比较了实体瘤与相应鼠腹水和血清中所含特异性McAb的滴度。     

用BALB／c与ICR杂交子一代小鼠及新产仔母鼠生产单克隆抗体的观察

用分泌犬细小病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞，腹腔注射雄性ＢＡＬＢ／ｃ与雌性ＩＣＲ杂交子一代小鼠和ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备单克隆抗体。结果表明，该Ｆ１代杂交鼠腹水产量较ＢＡＬＢ／ｃ鼠高，但抗体效价不及ＢＡＬＢ／ｃ鼠。从每只小鼠生产的腹水总效价看，两种鼠所产抗体的效价相近。实验发现，用新产仔母鼠作为荷瘤鼠，其腹水产量和抗体效价均明显高于普通雌鼠。同时发现小鼠预处理后１７ｄ注射杂交瘤细胞，并控制细胞数在１．５×１０５较为理想，可避免过早形成实体瘤。     

从小鼠腹腔实体瘤中浸取单克隆抗体

<正> 用杂交瘤细胞接种BALB/c小鼠腹腔,一般经10～14天产生腹水,从腹水中可获得高滴度的单克隆抗体。腹水抽取后,常发现腹腔中有较大实体瘤残留,此瘤通常弃之不用。我们发现用生理盐水浸取实体瘤中尚可获得较高滴度的单克隆抗体。现简解于下:取洁净瘤块置平皿中,加入5ml生理盐水,用注射器吸取平皿中生理盐水,刺入瘤块反复冲洗,     

一种快速大量生产小鼠单克隆抗体腹水的方法

应用降植烷或不完全福氏佐剂诱导BALB/c小鼠产生腹水的方法已广为采用。但缺点是所得腹水量较少,收获时间较长,有时可诱发实体瘤等。为此,我们参照Kints等(J Immunol Meth,1989;119:241)以降植烷(P)和不完全佐剂(IFA)的混合物(PIFA)与杂交瘤细胞系同时注射大鼠制备腹水的方法,用PIFA+B4(抗SEB单克隆抗体杂交瘤细胞系)制备了BALB/c小鼠的腹水。并与以降植烷、IFA和PIFA的常规制备法作了比较。 实验方法是将实验小鼠分为降植烷、     

小鼠形成腹水性肿瘤和产生单克隆抗体的影响因素

杂文瘤细胞注入小鼠腹腔内诱发腹水性肿瘤,并产生含有高滴度单克隆抗体的腹水。为确定形成腹水和产生单克隆抗体的最佳条件,研究了影响分泌免疫球蛋白肿瘤生长的几个因素。用SP2/0骨髓瘤。胞和免疫小鼠脾细胞融合产生杂交瘤细胞,作者证明:(1)诱发腹水性肿瘤需要的最佳杂交瘤细胞数在6—32×15~5细胞之间;(2)每只小鼠最多用0.5ml降植烷致敏;(3)用降植烷致敏后14天才可注射杂交瘤细胞;(4)用雄性小鼠形成腹水和产生单克隆抗体明显优于雌性鼠;(5)小鼠年龄应在43～78天之间。在上述条件下最多在6天过程中,平均每鼠产生7～10ml腹水,其中含有高滴度的抗体。这些动物在注射肿瘤细胞后通常活存11～16天,在第5和第9天之间开始产生腹水。     

经福氏不完全佐剂诱发的小鼠单克隆抗体腹水产量增加

制备单克隆抗体的传统方法是在小鼠腹腔内种植分泌抗体的杂交瘤细胞后诱发小鼠产生单克隆抗体腹水。为了提高小鼠腹水的产量,本文作者探讨了用福氏不完全佐剂(FIA)诱导小鼠及小鼠性别对小鼠腹水产生和单克隆抗体产量的影响。在BALB/c小鼠腹腔内注射0.1ml降植烷或FIA间隔7d后再接种10~6杂交瘤细胞V2.6E4。小鼠腹部呈高度     

人源性TPO单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用人源性ＴＰＯ（ｈｕＴＰＯ）皮下免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／０实体瘤细胞融合，建立了２株稳定分泌抗ＴＰＯ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为１９Ｄ１２和４９Ａ５，并对其进行了初步鉴定，采用简易正辛酸法从腹水中纯化单克隆抗体。结果：细胞融合率为８２％，杂交瘤细胞染色体数目正常，分泌的抗体为ＩｇＧ，腹水抗体效价为０．６￣１．２×１０＾－３，与ＥＰＯ、ＧＭ－ＣＳＦ无交叉反应，连续培养生物性状     

杂交瘤细胞的复苏及分泌单克隆抗体稳定性的观察

单克隆抗体(McAb)杂交瘤技术已在医学生物学各个领域中得到广泛应用。为了解杂交瘤细胞冻存一般时间复苏后产生McAb的稳定性,我们复苏了30株杂交瘤细胞,并用其中一部分细胞株制备McAb腹水。本文就杂交瘤细胞复苏后的生长情况及细胞冻存后分泌McAb的稳定性等进行了探讨。     

BALB/c小鼠腹水中杂交瘤细胞的再利用(摘要)

<正> 在利用杂交瘤技术制备单克隆抗体过程中,小鼠腹水经离心后,我们发现沉淀中的细胞约有50～80％为活性较好的杂交瘤细胞。为了重新利用这些细胞,我们将小鼠腹水中的产AFP单抗杂交瘤细胞,以淋巴细胞分离液(比重1.088)分离,可得活性     

抗精脒单克隆抗体的制备及其特性鉴定

本文用鼠×鼠细胞杂交瘤技术首次建立了抗多胺（精脒）单克隆抗体的杂交瘤细胞系。以此杂交瘤经体外组织培养扩大，并注入同系小鼠腹腔，产生的腹水中抗体滴度达１：１０６。单抗的类别是ＩｇＧ１。单价抗体是由分子量５２ｋＤ和２７ｋＤ组成的复合体。这个单克隆抗体可用于癌症的快速诊断和预后随访。     

妊娠相关血浆蛋白-A单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的制备娠相关血浆蛋白-A（PAPP-A）单克隆抗体（McAb）。方法利用PAPP-A抗原免疫Balb／c小鼠，应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞（SP2／0）融合，间接ELISA方法对细胞培养上清检测、筛选，建立分泌PAPP—A单克隆抗体的杂交瘤细胞株，扩人培养后，Balb／c小鼠腹腔注射杂交瘤细胞株，产生腹水后，对腹水进行收集、纯化、签定．结果筛选出稳定分泌PAPP—AMcAb的杂交瘤细胞株，Western—blot分析证实McAb与PAPP—A有较高的特异性及敏感性。结论本实验成功制备了抗PAPP—A特异性的McAb，可用于PAPP—A免疫检测方法的建立。     

抗前列腺特异性膜抗原膜外区多肽单克隆抗体的研制及初步应用

目的建立前列腺特异性膜抗原（PSMA）膜外区多肽杂交瘤细胞株，并对其分泌的PSMA单克隆抗体进行初步鉴定，为PSMA的功能研究和人源化抗体的制备奠定基础，以求进一步用于前列腺癌的诊断和治疗。方法使用人工合成多肽免疫BABL／c小鼠，采用PEG融合技术建立杂交瘤细胞株，制备单克隆抗体。通过免疫荧光法、酶联免疫吸附法及斑点金标法确定单克隆抗体的交叉反应性、亲和力及免疫球蛋白的类型和亚类。结果获得两株可稳定分泌PSMA单克隆抗体的杂交瘤细胞，4F4为IsG1类，1F1为IgC3类。两株单抗均能识别LNCap细胞表达的PSMA蛋白，与不表达PSMA的PC-3、SP2／0等细胞无交叉反应。杂交瘤细胞株1F1培养上清效价为1：40。腹水效价为1：6400；而杂交瘤细胞株4F4培养上清效价为1：80。腹水效价为1：8000。结论成功地制备出两株抗PSMA单克隆抗体，均具有良好的特异性和亲和力，为进一步建立免疫分析方法。进行PSMA相关研究奠定了基础。     

杂交瘤细胞(10株)染色体形态、数目与抗体分泌的关系

目的:探讨杂交瘤细胞染色体形态、数目与抗体分泌能力及稳定性的关系。方法:对我室融合成功的10株杂交瘤细胞,采用秋水仙素法制备染色体,分别计数100个完整的中期分裂相细胞,并观察其形态。制备腹水和收集细胞培养上清液,间接ELISA法检测抗体效价。结果:经染色体计数与分析,10株杂交瘤细胞中,7株瘤株细胞间染色体形态一致,分散好,既有端着丝点染色体,也见中间着丝点染色体,染色体数目的标准差小于5.0,腹水和细胞培养上清抗体效价高,分泌稳定性好;3株染色体数差异大、标准差大的瘤株中,2株抗体效价低,分泌不稳定。结论:杂交瘤细胞染色体形态、数目与其分泌单克隆抗体的能力和稳定性有关,进行染色体分析有利于了解瘤株特性,可作为筛选高效、稳定瘤株的参考依据。     

人瘦素单克隆抗体的制备及初步应用

以亲和纯化的人重组瘦素作为免疫原，用经典的杂交瘤技术制备出抗人瘦素单克隆抗体。放免法（Ｌｉｎｃｏ ＲＩＡ ｋｉｔ）筛选阳性孔，进行三次克隆化培养。体内诱生法收集杂交瘤细胞腹水。经不同稀释度２Ｅ４单克隆腹水抗体与＾１２５Ｉ－瘦素高度结合呈量效关系。以辣根过氧化物酶标记瘦素单克隆抗体、荧光免疫组化技术，在原位检测人脂肪组织细胞内瘦素。结果显示，正常人脂肪组织细胞内含有大量棕褐色沉淀。表明人体内瘦素和共     

杂交瘤的制备

二次杂交瘤(hybrid-bybridoma)是由两种细胞融合而成的瘤细胞,可分泌双功能单克隆抗体(bsMcAb)。制备二次杂交瘤的方法主要有两种,一种是杂交瘤细胞与特异抗原免疫的脾细胞融合,另一种是可分泌单克隆抗体的两种杂交瘤细胞融合。本文就目前为止所采用的各种制备二次杂交瘤的方法做一综合性介绍。     

抗HSPC238单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的制备抗HSPC238的单克隆抗体，为HSPC238的功能研究奠定基础。方法以纯化的重组蛋白HSPC238为抗原，免疫BALB／c小鼠，运用杂交瘤技术制备HSPC238单克隆抗体，并用间接ELISA法和Western—blot法对单克隆抗体的特性进行鉴定。结果成功建立两株稳定分泌抗HSPC238的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为E001和E002。ELISA检测抗HSPC238单克隆抗体的腹水效价为1：12800和1：25600。两株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1。通过Western—blot实验证实，两株单克隆抗体均能特异性结合真核细胞内源性HSPC238蛋白。结论成功制备了两株效价高、特异性好的抗HSPC238单克隆抗体，制备的抗HSPC238单克隆抗体可用于HSPC238蛋白的鉴定，为HSPC238蛋白的生物学功能研究奠定了基础。     

HCA518的蛋白表达、纯化和单克隆抗体的制备

目的:对HCA518蛋白进行表达和纯化,并制备HCA518蛋白的单克隆抗体。方法:采用基因重组技术在原核系统表达HCA518蛋白,金属镍螯合的Ni-NAT亲和层析柱进行蛋白纯化;杂交瘤技术建立分泌HCA518单克隆抗体的杂交瘤细胞株;ELISA方法进行单克隆抗体细胞株的筛选;Westem blot方法鉴定单克隆抗体的特异性;免疫荧光法对HCA518蛋白进行定位。结果:成功表达和纯化了HCA518重组蛋白,其纯度达98％。共筛选出2株分泌HCA518单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备腹水并纯化了HCA518的单克隆抗体,腹水中单克隆抗体的效价分别为1×10-4、5×10-4,属于IgG2b亚型和IgM,该抗体能与重组蛋白和肿瘤细胞核蛋白(P100)发生特异性反应,免疫荧光显示HCA518蛋白主要定位于细胞核中。结论:建立了稳定分泌HCA518单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备的单克隆抗体特异性好,对进一步应用于检测肿瘤组织中HCA518蛋白和判断肿瘤细胞的恶性增生程度预测肿瘤预后具有重要的实用价值。     

人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备特异性人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体单克隆抗体,为建立TRAIL酶联吸附检测方法奠定基础。方法以原核表达系统重组制备的可溶性人sTRAIL作为抗原,利用杂交瘤技术筛选获得抗人TRAIL?mAb杂交瘤细胞株。体内诱生法生产腹水,经间接ELISA方法检测腹水效价,Western?blot鉴定抗体特异性。结果制备获得一株可稳定分泌抗人TRAIL?mAb的杂交瘤细胞株,属IgG2b亚类;腹水效价达1:5×106以上,Western?blot鉴定结果显示可特异性识别人TRAIL,而与TNF-α和Fas-l无明显的交叉反应。结论制备了具有高特异抗原结合特性的TRAIL?mAb。     

红系分化相关基因相互作用蛋白质的分离与鉴定

目的制备红系分化相关基因(erythroid differentiation-associated gene,EDAG)蛋白的单克隆抗体,利用免疫沉淀联合质谱技术对EDAG相互作用蛋白质进行分离与鉴定。方法构建EDAG原核表达载体,通过诱导、表达、纯化获得EDAG融合蛋白,杂交瘤技术建立分泌EDAG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,利用Western印迹筛选阳性杂交瘤细胞,免疫小鼠得腹水,最后用免疫共沉淀与质谱联合鉴定EDAG相互作用蛋白。结果纯化获得EDAG重组蛋白,筛选出4株分泌EDAG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并制备了腹水。该抗体均可用于内源EDAG蛋白的检测,其中两种抗体可用于免疫共沉淀实验,运用质谱技术筛选获得EDAG候选相互作用蛋白。结论利用EDAG单克隆抗体,筛选到EDAG候选相互作用蛋白质13种,涉及细胞增殖及转录等过程,为EDAG的功能研究及其分子机制的阐明提供了新的线索。