清除细胞培养物中支原体的一个改良方法

支原体污染是人和动物细胞系体外培养中常见的问题,污染细胞系与未污染细胞系的形态学,酶细胞化学和免疫细胞化学分析等表型均无差异。支原体在细胞融合中却能严重地减少杂交细胞的产生,因而急需建立一个可靠的去除支原体的方法以排除它们对融合率的破坏     

两步PCR法检测细胞培养物中支原体污染的初步结果

本文报道用两步ＰＣＲ法快速检测细胞培养物中污染的支原体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）。两套引物选自１６ＳｒＲＮＡ和２３ＳｒＲＮＡ保守区域，外部引物ＰＦ１，ＰＲ１扩增的ＤＮＡ片段在３６０～５００ｂｐ之间，内部引物ＰＦ２，ＰＲ２扩增的ＤＮＡ片段在１４０～２２０ｂｐ之间。试验表明，两步ＰＣＲ法能检出污染细胞培养物七种常见的支原体。１７份待检细胞培养物，两步ＰＣＲ法检测，９份（５２．９％）为阳性，直接培养法检测，５份（２９．４％）为阳性。采用快速热循仪，使ＰＣＲ反应时间大大缩短，３０次循环仅需２０分钟。反应液的用量也仅１０μｌ，提高了检测效率，节省了材料，降低了试验用费。本文就两步ＰＣＲ的灵敏度等特性也作了初步测试。     

细胞培养中支原体污染的去除

在运用细胞培养手段的生物学研究和生物工程产品中，支原体污染仍是一个颇为棘手的问题。１１株人的细胞ＳＰＣ－Ａ１、Ｋ５６２、ＨＵＴ－１０２、ＢＴ－３２５、６Ｔ－ＣＥＭ、ＮＫＭ－４５、ＣＮＥ、ＨＬ－６０、ＱＧＹ－７７０１、ＱＺＧ、人羊膜细胞；３株小鼠细胞Ｐ３８８－１、ＹＡＣ－１、Ｐ８１５；１株绒猴细胞Ｂ９５－８；和一株杂交瘤ＱＫＴ３等，已污染了支原体的细胞经ＭＣ－２１０ １μｇ／ｍｌ处理７天，支原体污染     

成纤维细胞清除的时机与方法选择

成纤维细胞清除的时机与方法选择马世兴，陈志龙（成都军区昆明总医院中心实验科，昆明６５００３２）细胞培养在单克隆抗体、恶性肿瘤、组织细胞移植、基因分子生物学等的研究中，都是必不可少的基本技术。实验室研究中通常采用上皮样细胞作为实验选材，但在进行上皮样细...     

荧光核染色法检查细胞培养物中污染的支原体

本文报道了用荧光染料HOECHST 33258核染色,检查细胞培养物中支原体污染的方法,并将荧光法与电镜及常规培养法进行了比较。荧光法与电镜法的结果基本一致,但荧光法简便、快速、结果可靠、又经济,适用于常规实验室检查细胞培养物中支原体污染用。     

松果体的细胞培养研究

本文就松果体细胞体外培养的研究进展、培养细胞的形态学特征、功能表达与调控等方面的研究作一综述     

培养细胞污染支原体的PCR检测方法的建立及应用

在生物制剂的生产和研发领域,细胞培养扮演着极其重要的角色：用原代细胞或传代细胞制造疫苗;杂交瘤细胞制造单克隆抗体;基因工程或细胞生物学的研究等。然而支原体污染常常成为细胞培养的不速之客,严重影响着细胞及生物制剂的质量。污染细胞最常见的支原体包括：     

改良孕中、晚期羊水细胞培养制备染色体方法的探讨

目的改良孕中晚期羊水细胞培养制备染色体技术。方法收集45例孕24-32w具有产前诊断指征的的孕妇羊水,根据羊水细胞生长特点,在培养过程中调整换液时间及培养方式收获细胞。结果45例孕中晚期羊水细胞培养全部成功。结论该方法细胞岛多,染色体有效分裂相多,培养成功率高,可满足临床产前诊断的要求。     

细胞培养中细菌类微生物污染的快速检测

目的 检测细胞培养中细菌类(包括支原体)微生物的污染情况。方法 用细胞培养中常见的培养物人为污染He-La细胞，设计细菌类微生物16S rRNA基因序列通用引物，PCR扩增16SrRNA基因序列片断，建立PCR检测培养细胞污染的方法，并用该方法检测本室保存的细胞株的污染情况。结果 人为污染绿脓杆菌、大肠杆菌、白色葡萄球菌和支原体M.fernentans的Hela细胞的培养上清中均扩增出大小的片段，与目的片段相符。本室所收藏的15个细胞株有3株的培养上清中扩增出大小的片段。结论 本实验建立了：16SrRNA基因序列通用引物PCR法，可用于快速检测培养细胞中细菌类微生物的污染。     

大鼠脊髓星形胶质细胞培养方法的改良

目的:改进大鼠脊髓星形胶质细胞的体外培养方法,为研究脊髓星形胶质细胞的生物学作用及脊髓相关疾病提供实验模型.方法:新生1～2d的SD乳鼠,无菌操作下游离整段脊柱,将脊髓从椎管中冲出,机械吹打制成单细胞悬液,差速黏附处理以去除成纤维细胞成分.利用GFAP免疫荧光显色对培养细胞进行鉴定.结果:经原代和传代培养,获得的星形胶质细胞纯化率高达99%以上.结论:采用本实验室改进的方法,操作简便快捷,培养的大鼠脊髓星形胶质细胞生长良好,纯度高,为后续实验对脊髓星形胶质细胞的生物学作用研究奠定实验基础.     

成骨细胞培养方法的改良

成骨细胞体外培养,对于在离体条件下,进行成骨细胞 的实验研究有广泛的实用价值。但由于骨组织结构的特殊 性,其细胞培养的难度大,成活率低。我们在实验过程中,参 照有关文献资料,对其培养方法作反复调整改良,取得较理 想的效果。改进后的方法操作简便,实用,细胞纯度高,易存 活。是一种较好的培养方法。 1　材料与方法 取手术切除的股骨组织,超净工作台内,无菌操作,沿近 股骨头端骨松质切割,获得0.5cm×0.5cm大小骨片。生理 盐水冲洗4～5次,1%庆大霉素浸泡30min,Hank s液反复冲 洗,将骨片移入无菌培养皿,缓慢加入0.25%胶原酶液 37℃…     

杂交瘤细胞培养中支原体的检测与清除

在细胞培养中,支原体污染是常见令人困扰的问题。支原体是一种极小的微生物,直径仅为0.2～2微米,寄生于细胞生长液中,常附着于细胞膜表面,分泌丰富的腺苷磷酸化酶(adenosine phosphoylase)。此酶能将无毒的6-甲基嘌呤脱氧腺苷(6—     

IST支原体培养与PCR解脲支原体检测方法的比较

目的：比较分析ＰＣＲ解脲支原体检测法与ＩＳＴ支原体培养法的结果及两种方法的优缺点。方法：同时采集８８例临床上诊断为非淋菌性尿道炎（ＮＧＵ）、阴道炎患者分泌物标本两份,分别用ＩＳＴ支原体培养法和ＰＣＲ解脲支原体（Ｕｕ）检测法进行对照实验和分析。结果：ＩＳＴ支原体培养法Ｕｕ阳性２５例（２８．９４％）,人型支原体（Ｍｈ）１例（１．１４％）,Ｕｕ＋Ｍｈ５例（５．６８％）。ＰＣＲ检测Ｕｕ阳性３０例（３４．０４％）,其中男性５例ＰＣＲ检测Ｕｕ为阳性,而ＩＳＴ支原体培养法为阴性;女性３例ＰＣＲ检测Ｕｕ阴性,培养法为阳性。两种方法的Ｕｕ阳性率经统计学ｘ２检验（Ｐ＞０．０５）无显著性差别。结论：ＩＳＴ支原体培养法与ＰＣＲ检测Ｕｕ法均能适用于临床Ｕｕ的检测。ＩＳＴ支原体培养法操作简便,不需要特殊仪器;能进行支原体的种类鉴别;有参考病理阈值并可同时做药敏实验,特别适合基层医院的支原体检测工作。     

人早孕绒毛细胞滋养层细胞培养方法的改良

目的 探索一种简便高纯度的早孕滋养细胞的体外培养方法。方法 采用完整早孕绒毛通过胰蛋白酶联合胶原酶消化法分离,Percoll梯度分离法提纯体外培养,应用光镜HE染色和免疫细胞化学法检测细胞纯度。 结果 CK-7表达阳性细胞数可以达到90%以上。结论 完整绒毛消化和Percoll纯化联合可在短期内获得高纯度、高产量的滋养细胞以供后期试验,方法更加简便。     

785例羊水细胞培养及染色体制备方法改良的探讨

目的探索一种简便、快速、稳定的羊水细胞培养和染色体制备的方法。方法2003年1月至2007年12月对785例16-30孕周有产前诊断指征的孕妇,抽取羊水,采取T型细胞瓶培养法T型,7-9d后用细胞刮刀分散细胞集落传代,换液培养1-2天,加入秋水仙素3h后,收获羊水细胞制片,G显带分析。结果785例羊水培养成功778例,成功率99%。平均每例分裂相〉100个,培养时间8-13d,平均9.5d。结论该方法染色体分裂相多,细胞破坏小,染色体形态及分散性好,成功率高,出报告时间短等优点,对异常胎儿能及早终止妊娠,有实用推广价值。     

解脲支原体实验方法的探讨

本文选择了180例门诊泌尿生殖系感染患者,同时用PCR和培养法检测角脲支原体。其阳性率分别为31.1%,20.0%。培养法阳性率下降可能与临床用药有关,表明检测解脲支原体,PCR方法更占有优势,如为首诊病人,PCR结合培养更能提高解脲支原体感染的检测水平。