亲和层析一步纯化IgM类单克隆抗体

本文介绍采用兔抗鼠IgM血清制备的亲和层析柱从小鼠腹水中一步提纯单克隆抗体IgM的方法。提纯的IgM应用琼脂糖电泳检测,为一个区带;应用还原条件下的SDS—PAGE检测,分离为分子量～80K的重链和～25K的轻链两条区带,几未见其他杂带;应用免疫印染法鉴别,进一步确证为IgM,不含常见的杂质IgG。实验过程还发现提纯的IgM不够稳定,在贮存过程有降解现象。另外应用同一亲和柱从吸附IgG后的小鼠血清中提取多克隆抗体IgM的效果也是良好的,经用还原条件下的SDS-PAGE检测,同样也只分离为轻、重链两条区带,未见混有其他杂蛋白。     

酶标记兔抗鼠免疫球蛋白的制备与应用

用小鼠血清提取的IgG和IgM混合物,免疫家兔获得血清,再经盐析提纯,酶标记,制成酶标记免抗鼠混合免疫球蛋白(酶标记兔抗鼠IgG-M)。该酶结合物应用效价为1∶8,000-1∶10,000,检测小鼠Ig-G-M的敏感度为0.0625ug/ml。在制备抗甲肝病毒单克隆抗体的大量应用中表明,这种酶标记兔抗鼠Ig-G-M可以检测出分泌IgG和IgM的杂交瘤非特异反应少,结果可靠,并大大减少了杂交瘤初筛的工作量。     

小鼠血清免疫球蛋白G、M和单克隆抗体的分离提纯

结合几种生化技术从C_(57)BL/6J小鼠分离得纯度好的IgG和IgM。由单克隆抗体经亲和层析柱和A蛋白—琼脂糖也分离得产量高、纯度好的小鼠IgG_1和IgM。用分离的IgG免疫得兔抗小鼠IgG血清可用为淋巴细胞杂交瘤技术中的试剂。     

提纯血清和腹水中IgG的一种简单非层析技术

几年前，Chanutin与Curnirh报道：在酸性条件下，短链脂肪酸如正辛酸可沉淀血浆中不同蛋白。根据这一理论，Stelnbuch与Audran研究了用正辛酸提纯哺乳动物血清中IgG的方法，而Russo等报道了这一方法在提纯小鼠腹水中McAb的应用。     

抗兔μ链和抗兔γ链血清的制备及初步应用

用常规生化方法提取正常兔血清中的IgM,用吸附法制备抗兔μ链血清。免疫电泳证明所制备的抗兔μ链血清与兔全血清仅有一条沉淀线,与兔IgG、IgA没有交叉反应。与抗兔μ链结合的兔血清成份有抗体活性,对2-巯基乙醇敏感;分子排阻层析证明,分子量与入骨髓瘤IgM相同。同时制备了抗兔Υ链血清。应用这二种血清检测经福氏2a志贺氏免疫兔的血清抗体证明它们分别对IgM、IgG有特异性,可用于观察免疫后特异IgM、lgG抗体产生的动态规律。     

安泰吉(北京)生物技术有限公司

<正>大鼠、小鼠抗体亚型快速检测卡媲美ELISA灵敏度,用于检测杂交瘤培养上清和纯化抗体的重链亚类和轻链亚型。小鼠亚型检测卡可鉴定IgG1、IgG2a、IgG2b、Kappa、Lambda和IgM。大鼠亚型检测卡可鉴定IgG1、IgG2a、lgG2b、IgG2c、Kappa、Lambda、IgA和IgM。     

抗人IgMμ链单克隆抗体的一步纯化法

本文应用快速蛋白液相色谱法(FPLC)直接从小鼠腹水中一步纯化抗人IgMμ链单克隆抗体(McAb),其纯度经全自动快速平放电泳检定为单一区带,优于DEAE—纤维素法。在具备FPLC仪器的情况下,本法分变率高,分离速度快,具有实用价值。     

恶性疟原虫保护性单克隆抗体的分离和纯化

为制备亲和吸附剂,提取恶性疟原虫保护性抗原,我们用ProteinA亲和吸附柱,自小鼠腹水中提取抗恶性疟原虫保护性单克隆抗体。腹水上柱后,用0.1M PBS洗涤杂蛋白,用0.1M醋酸洗脱吸附的McAb。洗脱液经透折。浓缩后,用SDS—PAGE鉴定纯度,免疫荧光及双扩散试验检测其活性。 四个杂交瘤株(9_4D_1,9_4C_3,9_2D_4,9_3A_3)的腹水共60.3ml,过柱后收获McAb153.9mg,平均每毫升腹水可得2.25mg McAb,SDS—PAGE电泳图谱上显示二条区带,     

致病性与非致病性钩端螺旋体蛋白电泳及单克隆抗体识别抗原的比较

作者用SDS—PAGE和Western blot分析了三株钩端螺旋体的全细胞蛋白电泳图谱及McAb识别的抗原分子。三株钩体在10％SDS—PAGE中均被分出40多条清晰的区带,其中致病性的问号钩端螺旋体赖型017株,秋季型606株蛋白电泳图谱的平均相似性为90％,与非     

用重组SAG1抗原检测弓形虫抗体

目的探讨重组SAG1抗原对弓形虫IgG和IgM抗体的检测效果。方法用rSAG1作抗原建立免疫印迹方法（rSAG1-WB）,与玻片虫体过氧化物酶免疫染色试验（TSHE）平行检测不同来源血清。结果15例病原学检查阳性小鼠血清和5例免疫兔血清的IgG抗体均为阳性,30例正常小鼠血清和10例正常兔血清均未出现阳性反应。rSAG1-WB检测可疑弓形虫病患者血清阳性率为60．3％（38／63）,献血员血清阳性率为6％（3／50）,与TSHE检测结果（65．1％和4％）均无统计学差异（P〉0．05）。1例IgM强阳性血清和13例IgM弱阳性血清在Western—blot检测中分别出现相应的强阳性与弱阳性反应,50例献血员血清均未出现IgM阳性反应,结果与TSHE一致。结论rSAG1-WB检测弓形虫IgG和IgM抗体均具有高度的敏感性和特异性．与TSHE的符合率高。     

免疫透射比浊法测定尿轻链

免疫球蛋白（Ig）是血清中重要的蛋白质,尿液中也有微量存在。免疫球蛋白由二条重链和二条轻链组成,重链有γ、α、μ、δ、ε五种,分别对应于IgG、IgA、IgM、IgD、IgE,轻链有二种,每个免疫球蛋白分子或含kappa轻链,     

免疫球蛋白轻链基因的结构、功能和表达

免疫球蛋白或抗体是哺乳动物血清中的重要蛋白质。最有代表性的免疫球蛋白分子是小鼠的IgG,它是由四条多肽链组成,其中两条相同长度的短链称为轻链(tightchain),另外两条相同的长链为重链(heavy chain)。通过链间和链内的双硫键使其相互连接。IgG是各种免疫球蛋白分子的基本结构,各种不同的免疫球蛋白或者是IgG的寡聚体或者为其多聚体。免疫球蛋白的轻链多肽和重链多肽的氨基末端部分为     

恙虫病东方体Sxh951株56kD蛋白的表达及其在ELISA中的应用

目的　构建含OrientiatsutsugamushiSxh95 1株 (Ot.Sxh95 1)相对分子质量 (Mr)为 5 6×10 3外膜蛋白基因 (sxh5 6 )的重组质粒pQE30 5 6 ,表达Mr5 6× 10 3蛋白并观察其在ELISA中的应用。方法　IPTG诱导sxh5 6重组质粒 ;观察SDS PAGE和免疫印迹结果 ;经Ni NTA亲和层析纯化后的重组蛋白分别与Ot.Gilliam、Ot.Karp、Ot.Kato感染鼠血清进行ELISA和免疫印迹检测。结果　SDS PAGE和免疫印迹检测显示有一Mr 约为 5 6× 10 3的特异蛋白带 ;ELISA和免疫印迹结果显示该重组蛋白只与Ot.Gilliam感染鼠血清呈阳性反应 ;重组蛋白用作ELISA包被抗原检测小鼠血清抗体IgG ,特异性为 10 0 % ,敏感性 96 .6 7% ;检测人血清抗体IgG的敏感性为 88.0 8% ,特异性 96 .36 %。结论　表达的重组Sxh5 6蛋白具有良好的免疫反应性 ;其作为ELISA包被抗原 ,具有良好的特异性和敏感性。     

应用辛酸法提取血清和腹水中的免疫球蛋白

<正> 1960年Chanutin首先报告在酸性条件下,利用短链脂肪酸(如辛酸)分步沉淀分离血浆蛋白。1969年Steinbuch等用该法提取哺乳动物血清中IgG,此后Russo等(1983)用此法从小鼠腹水中分离单克隆抗体。1987年McKinney等对用辛酸提取哺乳动物血清中IgG的因素作了探讨。我们参考McKinney的方法略加修改,分离人、兔和小鼠血清中的Ig及小鼠腹水中单克隆抗体,并与其他三种提取Ig的方法作比较。现报告如下。     

Fab’酶标法用于高灵敏ELISA的研究Ⅰ.抗人肝癌铁蛋白Fab’的制备与鉴定

用硫酸钠-DEAE纤维素层析法从兔抗人肝癌铁蛋白的血清中提纯相应的IgG,回收率为68％。当IgG浓度为8mg/ml时,免疫效价为1:64。再用胃蛋白酶将IgG消化成F(ab′)_2,回收率为65％,分子量为92,000,效价较IgG略有降低。F(ab′)_2用10mM巯基乙醇在pH6.0、37℃的条件下反应1.5小时而被还原成Fab′,回收率达74％,分子量为46,000。Fab′分子中的巯基数为0.95～1.28,平均1.14和理论值1.0接近,符合酶标的要求。若延长还原时间将导致巯基数/分子增加,提示轻-重链间的二硫链亦被还原而可能导致抗体活力的丧失。     

SARS患者特异性SARS-CoV抗体变化的观察

目的　研究SARS患者特异性SARS CoV抗体IgG、IgM动态变化规律 ,探讨机体感染SARS CoV后免疫应答的可能模式及流行病学意义 ,为科学的防治SARS提供理论依据。方法　ELISA测定北京地区最早感染SARS CoV的 3条传播链的SARS患者 4 7例 ,12 4份血清中SARS CoV特异性抗体IgG、IgM。其中 ,山西链 9人 ,13份血清 ;香港链 31人 ,84份血清 ;北京链 7人 ,2 7份血清。结果　 3条传播链SARS患者IgM阳性率 73% ,IgG阳性率 86 %。IgM最早于发病第 6天出现 ,阳性率高峰在病程 2～ 3周 ;持续时间短 ,1月后 6 0 %患者IgM逐渐阴转。IgG最早也可在发病第 6天出现 ,阳性率高峰在病程 3～ 4周 ,3月后IgG抗体阳性率减少。机体感染SARS CoV后 ,抗体出现有 3种模式。结论　机体感染SARS CoV后 ,近 90 %患者可出现特异性IgG ,病程 3～ 4周阳性率最高 ;特异性IgM抗体在病程2～ 3周阳性率最高 ,但多数只持续 2 0～ 30d。特异性IgG抗体表现 3种免疫应答模式。     

抗白念珠菌天然抗体的检测与分析

目的检测正常机体内是否存在抗白念珠菌天然抗体。方法取饲养于无菌条件下的C57BL/6小鼠和SCID小鼠外周血,ELISA和流式细胞术检测血清中抗白念珠菌IgM和IgG抗体的水平。结果ELISA结果显示,与SCID小鼠相比,C57BL/6小鼠血清中存在一定滴度的抗白念珠菌IgM,但没有抗白念珠菌IgG;经白念珠菌预先吸附后,正常血清IgM与白念珠菌的结合明显减弱。流式细胞术分析显示,C57BL/6小鼠血清与白念珠菌的反应明显增强。结论正常机体内天然存在与白念珠菌结合的以IgM型为主的天然抗体。     

抗艰难梭菌A毒素单克隆抗体的制备及特性分析

目的 :制备抗艰难梭菌A毒素的单克隆抗体 (mAb)并鉴定其特性。方法 :用纯化的艰难梭菌A毒素免疫BALB/c小鼠 ,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2 / 0融合 ,采用间接ELISA筛选杂交瘤细胞。用ELISA检测mAb腹水的效价、相对亲和力和进行表位分析 ;用Westernblot检测mAb的特异性。结果 :得到 6株杂交瘤细胞株 ,5C10株细胞分泌的mAb为IgG2a ,4B5和 8A1株细胞分泌的mAb为IgG1,其他 3株细胞mAb (2H7、3E9和 6G8)均分泌IgM。中和试验表明 ,所有的mAb均无中和活性。腹水mAb的效价均在 10 -4以上 ,其中mAb 2H7、6G8、5C10、4B5和 8A1具有共同的表位 ,而mAb 3E9识别的位点与其他 5株不同。mAb 8A1和 4B5的相对亲和力>10 5,其他 4株mAb的相对亲和力 >10 4。在非变性条件下 ,PAGE后Westernblot的结果显示 ,6株mAb均可与相对分子质量 (Mr)为 5 5× 10 4的A毒素产生反应 ;而在变性条件下 ,还原与非还原SDS PAGE后Westernblot均显示 ,6株mAb均可与Mr 为 5× 10 4～ 2 4× 10 4的A毒素产生反应。结论 :6株杂交瘤细胞株均能分泌抗艰难梭菌A毒素的特异性mAb ,为艰难梭菌A毒素的研究提供了有利的工具     

灭活SARS冠状病毒疫苗对小鼠脏器影响的实验研究

目的:探讨灭活SARS冠状病毒疫苗对小鼠是否有损伤作用。方法:用灭活SARS冠状病毒分别免疫BALB/c和C57BL/6小鼠;ELISA法检测小鼠血清中抗SARS冠状病毒抗体水平;免疫8周后取小鼠各脏器,观察其病理形态学改变。结果:免疫8 d后,小鼠血清中就可检测到特异的IgM、IgG抗体;组织切片染色观察,可见少数小鼠肺及肝组织出现轻度损伤,其他脏器未见病变。结论:SARS冠状病毒灭活疫苗可诱导小鼠产生特异性抗体,同时没有造成严重的器官损伤。这将为SARS疫苗进入临床研究打下基础。     

微量蛋白质的电泳提纯法

我实验室以聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)为主要方法,通过对微克水平的小鼠血清清蛋白,小鼠血红蛋白,卵清蛋白,与脱氧核糖核酸酶的分离纯化,建立了一种装置简单、操作方便的微量蛋白质的电泳提纯法。该法的提纯率达86％以上,回收率达70％以上。