外周听觉活性改变诱导在体听皮层突触NMDA受体表达变化

目的 观察听觉剥夺和耳蜗电刺激对听皮质突触N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-as-partate receptor，NMDAR)表达的影响。方法 经两次不连续梯度超速离心，从初级听皮质提取高度纯化的突触体后，采用Western blotting对耳毒性聋组、听力正常组及电耳蜗内刺激0.5～2h的各实验组听皮质突触体NMDAR三个亚型的表达进行比较。结果 证实了听觉剥夺的成年或发育期大鼠耳蜗电刺激仅仅1.5小时可以诱导突触体NR2A蛋白的显著增加，但NR1和NR2B蛋白量的改变并不显著。结论 在体大鼠的听皮质存在活性依赖的突触的NR2A蛋白的表达。     

小鼠前庭神经核内N-甲基-D-天冬氨酸受体定位和发育

目的探讨N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D- aspartate,NMDA)受体亚基NMDAR1和NMDAR2A/B在小鼠前庭神经核的细胞学定位和生后发育特征。方法免疫组织化学染色方法检测谷氨酸受体在小鼠前庭神经核的细胞学定位和生后发育特征。结果NMDAR1和NMDAR2A/B免疫反应产物丰富的分布在前庭神经上核、外侧核及部分下核、内侧核,主要定位于神经元胞体、树突和轴突样纤维终末上。生后早期的NMDAR1和NMDAR2A/B表达具有明显的动态变化,生后7天(P7)的表达微弱,随后逐渐上调,至P21达高峰,然后维持此水平。结论NMDAR1和NMDAR2A/B是构成前庭神经元功能性NMDA受体的重要亚基,NMDA受体可能参与小鼠出生后神经元成熟调控过程。     

N-甲基-D-天冬氨酸受体在听觉神经系统的分布及生理学特性

N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体是离子型谷氨酸受体,是中枢神经系统中主要兴奋性受体.NMDA受体在听觉神经系统不同层面广泛分布,研究听觉神经系统NMDA受体的分布及生理学特性,对于进一步了解听觉神经系统的生理和病理机制等具有重要意义,本文就此内容进行综述.     

N-甲基-D-天冬氨酸受体与水杨酸耳毒性

N-甲基-D-天冬氨酸受体属于离子型谷氨酸盐受体,是一种具有多种调控位点并对Ca2+高度通透的双重门控通道,它可以通过不同亚基的选择性表达改变自身的结构和功能,影响突触的可塑性.水杨酸类药物是临床常用的解热、镇痛及抗风湿药物.国内外大量的研究证明水杨酸具有耳毒性,表现为可逆性的感音神经性聋和耳鸣,但其具体的机制目前尚不明确.近年来研究认为,耳鸣与听觉中枢的可塑性有关.     

N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1亚单位参与兴奋性神经毒的机制及防治

离子型谷氨酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR）是中枢神经系统中主要的兴奋性氨基酸受体。NR1是NMDA受体的基本亚基,构成Ca2+通道的主要成分。NR1在兴奋性神经毒过程中起关键作用。本文对近期有关NR1亚单位参与兴奋性神经毒的机制及防治的研究进展做一综述。     

c-fos及NR2A在耳鸣大鼠听皮层中的表达

目的通过检测神经元功能可塑性标记物快反应基因c-fos和N-甲基-D-天门冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR）亚型NR2A在耳鸣大鼠听皮层中的表达探讨听皮层的可塑性变化及其在耳鸣产生中所起的作用.方法将30只白色Wistar大鼠随机分为3组,耳鸣模型组（12只）、生理盐水组（12只）和空白对照组（6只）.注射水杨酸钠造模并用行为学方法证实动物感受到耳鸣后,利用免疫组化技术检测动物听皮层中c-fos和NR2A的表达,并用数字图像分析系统进行分析.结果12只注射水杨酸钠的耳鸣模型组大鼠全部造模成功.c-fos基因的表达产物FOS蛋白主要存在于皮层神经元的胞核,其阳性细胞的数量及所占面积的百分比在耳鸣组显著高于对照组（P值均＜0.01）;NR2A受体主要表达在锥形细胞的胞膜上,其阳性细胞的数量、染色强度和面积百分比均显著强于对照组（P值均＜0.01）.结论耳鸣大鼠听皮层中c-fos和NR2A的表达明显增多,一方面表明神经递质及受体可能参与了耳鸣的发生;另一方面提示耳鸣大鼠听皮层中发生了功能可塑性改变,这种改变可能在耳鸣的发生发展中起重要作用.     

隔声后听觉重塑模型中听皮质突触NR2A表达的变化

目的：观察隔声后听觉重塑模型中听皮质突触N甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体亚基NR2A表达的变化。方法：采用清洁级SD大鼠45只,分成隔声组、隔声后听觉重塑组及对照组各15只,Optiprep沉降梯度超速离心从初级听皮质提取高度纯化的突触体后,采用Western blotting蛋白质印迹检测技术对生后隔声14d组、28d组、42d组、隔声7d后再给予纯音暴露的各实验组听皮质突触体NR2A表达进行比较。结果：隔声使生后14d组和28d组动物听皮层NR2A表达水平明显下降（P〈0．05）,隔声7d后再给予纯音暴露则又使NR2A表达水平明显提高（P〈0．05）,呈现双向调节趋势。隔声和纯音暴露对生后42d组成熟大鼠听皮层NR2A表达不再产生明显调节作用（P〉0．05）。结论：在大鼠生后发育关键期,听觉经验可改变听皮层NMDA受体NR2A蛋白表达水平。研究结果为研究感觉功能发育可塑性的机制提供了重要的实验资料。     

听觉剥夺及耳蜗内电刺激幼鼠听皮层和下丘核CREB 和 NMDAR1蛋白表达变化

目的：观察耳聋幼鼠及其耳聋后单耳植入电极电刺激后幼鼠听皮层和下丘核环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（cyclic AMP response element － binding protein ,CREB）和N －甲基－D－天冬氨酸受体－1（N －methyl－D－aspartic acid receptor one ,NMDAR1）表达水平的变化。方法将66只12天龄SD幼鼠随机分为2大组,分别为耳聋造模后4周组（33只）及耳聋造模后6周组（33只）。将耳聋造模后4周组再分为对照1组、耳聋造模后4周组（4周组）及耳聋造模后3周耳蜗内电刺激组1（刺激时间为1周,简称“电刺激1组”）,每组11只大鼠;将耳聋造模后6周组再分为对照2组、耳聋造模后6周组（6周组）及耳聋造模后5周耳蜗内电刺激组2（刺激时间为1周,简称“电刺激2组”）,每组11只大鼠;对照1、2组均正常饲养。除对照1、2组外,在其余4组幼鼠颈背部、两侧下腹部皮下注射庆大霉素（总量为350 mg／kg ）,半小时后于相同部位注射呋塞米（总量为200 mg／kg ）,两周后行ABR检测,于耳聋造模成功后第3、5周分别对电刺激1、2组的幼鼠植入电极,在耳蜗内进行电刺激,每天3小时,持续7天。于耳聋造模后4、6周分别处死4、6周组大鼠取听皮层和下丘组织,通过免疫组织化学方法,观察CREB和NMDAR1表达水平的变化。结果耳聋造模成功后幼鼠ABR阈值均大于93 dB SPL ,4周组听皮层、下丘CREB和NMDAR1的表达较对照1组增加,电刺激1组CREB和NMDAR1的表达较4周组增加。6周组听皮层和下丘CREB和NMDAR1的表达较对照2组下降,电刺激2组CREB和NMDAR1的表达较6周组增加。结论听觉剥夺可导致幼鼠听皮层和下丘CREB和NMDAR1早期表达增加而晚期表达下降。耳蜗植入电极电刺激可导致幼鼠听皮层和下丘CREB和NMDAR1的表达增加,反映这两个部位神经元的可塑性变化。     

双侧耳蜗毁损后大鼠听皮层突触素表达的变化

目的观察双侧耳蜗毁损后大鼠听皮层(auditory cortex,AC)突触素表达水平的变化。方法30只SD大鼠随机均分为6组:双侧耳蜗毁损后3、7、14、21、30天组及假手术对照组,每组各5只。双侧耳蜗毁损后不同时间行听皮层突触素二步法免疫组化染色,观察突触素表达的变化。结果双侧耳蜗毁损后3天突触素表达增高,毁损后7天突触素表达较毁损后3天有所下降,毁损后14、21天突触素表达持续上升,21天时上升到最高峰,毁损后30天突触素表达开始下降,除毁损后7天组外,其余各组与假手术对照组差异均有统计学意义。各组左右耳表达差异均无统计学意义。结论大鼠双侧耳蜗去传入损伤后,突触素表达的动态变化反映了听皮层内神经元突触的重塑情况。     

耳鸣大鼠NMDA受体亚型1、2A、2B的表达研究

目的研究耳鸣大鼠听皮层NMDA（N-甲基-D-天冬氨酸,N-methyl-D-aspartate）受体亚型1、2A、2B（NR1、NR2A、NR2B）的表达变化,从而推测其在耳鸣的发生中可能的作用机制。方法按照随机化原则将动物分成3组,每组9只：A组为耳鸣模型组、B组为生理盐水组、C组为空白对照组。A组通过腹腔注射水杨酸钠并用食物抑制法进行验证。造模成功后运用核酸荧光染料SYBR Green实时荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应）方法检测NMDA受体三种亚型的表达情况。结果NR1在A组的表达显著低于C组（P〈0.05）,NR2A在A组的表达则显著高于C组（P〈0.05）,而A、C两组之间NR2B的表达差异比较无统计学意义（P〉0.05）。NMDA受体三种亚型B、C两组之间表达差异比较均无统计学意义（P〉0.05）。A组NR2A、NR2B与NR1表达量的比值较C组均增大。结论耳鸣大鼠听皮层NMDA受体调节亚基的调控作用增大,突触局部受体蛋白质合成改变,听皮层发生了与NMDA受体相关的可塑性变化,这可能是耳鸣产生的机制之一。     

钾-氯协同转运蛋白2在耳蜗发育中的表达

目的探讨钾-氯协同转运蛋白2（potassium-chloride cotransporter-2,KCC2）在耳蜗发育中表达的变化特征及可能的生理学意义。方法取出生后0、3、7、14、21、28、35、60天同窝16只SD大鼠耳蜗组织,每次4只,免疫组化SABC法观察KCC2在不同发育阶段的表达,图像分析系统对螺旋神经节细胞（spiral ganglion neurons,SGNs）阳性表达产物进行差异性灰度分析。结果KCC2在各发育阶段都有表达,以SGNs最明显,毛细胞、支持细胞、外侧壁上也有弱阳性表达。在SGNs的表达结果如下：0、3、7天3个组间无明显差异（P〉0.05）;14、21、28天3组间表达逐渐下降（P〈0.05）;28天后各组间无明显差异（P〉0.05）。结论①KCC2在耳蜗各发育阶段均有表达;②不同发育阶段,KCC2在SGNs中的表达具有差异,可能对螺旋神经节的正常发育有重要意义;③KCC2在SGNs以外的弱阳性表达,表明其对维持内、外淋巴液中离子平衡具有一定的作用。     

强脉冲噪声暴露后大鼠听皮层蛋白质差异表达的研究

目的 运用蛋白质组学技术检测强脉冲噪声暴露后不同时间点大鼠听皮层蛋白质表达谱的差异.方法 健康成年SD大鼠分为三组:正常对照组、急性脉冲噪声暴露组及噪声暴露后恢复组.脉冲噪声平均压力峰值(声压级)为156 dB,脉宽为0.25 ms,暴露50次.听性脑干反应(ABR)评价大鼠听功能;运用二维凝胶电泳+质谱分析法对各组大鼠听皮层蛋白质表达谱进行检测,比较其差异,并对表达变化较大的蛋白进行质谱鉴定.结果 与对照组相比,急性暴露组及恢复组在ABR各频率(2、4、8、16、32 kHz)阈值均明显提高(P值均＜0.05);噪声暴露即刻,ABR各频率听阈均有40 ～60 dB的上升;暴露后第7天,各频率ABR阈值有所恢复,第14天时趋于稳定.噪声暴露前后听皮层组织中的差异蛋白有64个,选取变化倍数大的50个点进行酶切质谱鉴定.其中有14个点不可信,剩余36个点所代表的27种蛋白被鉴定出来.所鉴定的差异蛋白主要包括:细胞骨架相关蛋白,线粒体及能量代谢相关蛋白,与突触重塑、神经递质释放及神经元兴奋性相关的蛋白等.结论 强脉冲噪声暴露可引起大鼠听皮层中多种蛋白质表达的变化,这些差异蛋白可能参与强噪声听力损伤的修复过程,以及听觉中枢的可塑性变化及功能重组.     

内质网应激反应对豚鼠脑缺血再灌注后听皮质区损伤的作用

目的　观察豚鼠脑缺血再灌注后需肌醇酶1(inositol requiring enzyme 1,IRE1）、X盒结合蛋白1(Xbox binding protein 1,XBP-1）在其听皮层的反应以及血 液中C反应蛋白（C reactive protein,CRP）和免疫球蛋白(immunoglobulin M,IgM）的变化,探讨内质网应激及血液免疫反应在脑缺血再灌注后听皮层神经元凋亡中的作用。方法　选取健康豚鼠20只,随机分为5组,每组各4只,分别为正常对照组、缺血15 min组、缺血再灌注6 h组、缺血再灌注24 h组及缺血再灌注7 d组。后四组在相同条件下采用夹闭双侧颈总动脉的方法来建立脑缺血再灌注损伤模型,对照组不予手术。缺血15 min组术后马上行听性脑干反应(ABR)测试,其余实验组待再灌注至对应的时间点后行ABR测试。心脏采血酶标记免疫吸附 (enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）检测血液CRP和IgM的浓度。断头取脑用免疫组织化学的方法测定IRE1、XBP-1表达。结果　ABR测试对照组为（10.0±2.47）dB SPL,缺血15 min组为（15±1.56）dB SPL,缺血再灌注6 h组为（30±2.03）dB SPL,缺血再灌注24 h组为（30±1.67）dB SPL,缺血再灌注7 d组为（15±1.14）dB SPL。缺血再灌注6 h组与24 h组行t 检验,无显著统计学差异,其余各组行方差分析,均有统计学差异（F =170.631,P <0.01）。ELISA法检测CRP对照组为（1198.96±50.81）μmol/ml,缺血15 min组为（1270.70± 34.76）μmol/ml,缺血再灌注6 h组为（1467.80±73.67）μmol/ml,缺血再灌注24 h组为（1352.83±175.71）μmol/ml,缺血再灌注7 d组为（1252.56±41.32）μmol/ml。各实验组行方差分析均有统计学差异（F =6.564,P <0.01）。IgM对照组为（987.32±39.13）μmol/ml,缺血15 min组为（1064.90±39.78）μmol/ml,缺血再灌注6 h组为（1118.03±57.75）μmol/ml,缺血再灌注24 h组为（1122.43±55.40）μmol/ml,缺血再灌注7 d组为（1010.70±55.95）μmol/ml。缺血再灌注6 h与24 h组行t检验无显著差异,其余各组行方差分析均有统计学差异（F =7.413,P <0.01）。HE染色显示各实验组凋亡细胞数 目不等,对照组为2.6±1.13,缺血15 min组为14.1±2.71,缺血再灌注6 h组为24.9±2.20,缺血再灌注24 h组为19.3±1.46,缺血再灌注7 d组为9.4±1.17。各实验组行方差分析均有显著差异（F =109.666,P <0.01）。免疫组化结果显示各组IRE1、XBP-1均有显色。 IRE1阳性颗粒数对照组为9.4±1.56,缺血15 min组为25.6±1.58,缺血再灌注6 h组为60.3±1.57,缺血再灌注24 h组为42.2±2.13,缺血再灌注7 d组为18.3±1.59;各实验组行方差分析均有显著差异（F =709.750,P <0.01）;XBP-1阳性颗粒数对照组为10.6±1.24,缺血15 min组为24.2±1.52,缺血再灌注6 h组为61.4±1.7,缺血再灌注24 h组为41.1±2.38,缺血再灌注7 d组为18.9±1.59;各实验组行方差分析均有显著差异（F =682.737,P <0.01）;IRE1与细胞凋亡率成正相关（r =0.947,P =0.000）;XBP-1与细胞凋亡率成正相关 （r =0.933,P =0.000）;CRP与IRE1成正相关（r =0.747,P =0.000）;CRP与细胞凋亡率成正相关（r = 0.755,P =0.000）;IgM与IRE1成正相关（r=0.695,P =0.000）;IgM与细胞凋亡率成正相关（r =0.765,P =0.000）。结论　在脑缺血再灌注损伤中,听皮层组织IRE1α、XBP1蛋白高表达,提示内质网应激参与了脑缺血再灌注损伤神经元细胞凋亡的发生发展,IRE1α和XBP1介导的信号转导通路是内质网应激导致脑缺血再灌注损伤神经元细胞凋亡的机制之一,脑缺血导致的听觉受损又有可能引起血液免疫学改变,内质网应激反应激发并加强了免疫炎性反应。     

快速老化痴呆小鼠听功能及耳蜗螺旋神经节细胞MeCP2增龄性变化

目的探讨快速老化痴呆小鼠听觉功能、耳蜗螺旋神经节细胞（spiral ganglion cell,SGC）甲基化CpG结合蛋白2（methyl-CpG-binding protein 2,MeCP2）表达的增龄性变化。方法检测5、7月龄快速老化小鼠亚系8（senescence accelerated dementia mouse/prone,SAMP8）和同龄抗快速老化小鼠亚系1（senescenceaccelerated mouse/resistance 1,SAMR 1）8 kHz短纯音听觉脑干反应阈值以及SGC的MeCP2免疫组化染色等方面的增龄性变化。结果①第5、7月龄SAMP8小鼠双耳听觉脑干反应阈值较同龄SAMR1小鼠明显提高（5月龄左侧t=5.84,P〈0.05,右侧t=3.31,P〈0.05;7月龄左侧t=5.11,P〈0.05,右侧t=5.11,P〈0.05）;②MeCP2蛋白在不同月龄快速老化小鼠耳蜗组织中均有表达,第5、7月龄SAMP8小鼠SGC中的MeCP2蛋白较同龄SAMR1小鼠明显降低（5月龄t=2.80,P〈0.05;7月龄t=4.64,P〈0.05）。结论 SGC中MeCP2蛋白的表达水平随着快速老化小鼠听觉功能增龄性减退而降低,说明MeCP2蛋白可能与听觉形成有关。     

大鼠海马CA3区突触素与慢性间歇性缺氧

目的通过建立慢性间歇性缺氧大鼠模型,研究慢性间歇性缺氧对大鼠学习记忆功能的影响,探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea—hypopnea syndrome,OSAHS）影响患者学习记忆功能的可能机制,为临床治疗提供理论依据。方法选取24只SD健康成年雄性大鼠,随机分为空白组（unhandled control group,UC）,慢性间歇性缺氧组（chronici ntermittent hypoxiagroup,CIH）和去除缺氧组（removal of hypoxia group,RH）,UC组正常饲养,CIH组每日间歇缺氧8小时,连续4周,建立慢性间歇性缺氧模型,RH组前4周同CIH组,后4周正常饲养,所有大鼠在实验结束后进行Morris水迷宫测试,检测其学习和记忆能力,并利用免疫组化及图像分析测定大鼠海马CA3区P38表达。结果①Morris水迷宫学习成绩（定位航行实验）：从第1天开始,CIH组的逃避潜伏期明显长于UC组和RH组（P〈0．01或P〈0．05）,RH组的逃避潜伏期明显长于UC组（P〈0．05）：②Morris水迷宫记忆成绩：CIH组的穿越平台次数较UC组显著减少（P〈0．01）,RH组的穿越平台次数较CIH组明显增多（P〈0．05）,但较UC组仍明显减少（P〈0．05）;各组在跨越目标象限时间占整个游泳的时间百分率的比较：CIH组较UC组显著减少（P〈0．01）,而RH组较CIH组明显增多（P〈0．05）,较UC组仍显著减少（P〈0．05）：③各组海马CA3区P38表达水平的比较：CIH组和RH组P38阳性产物OD值均低于对照组（P〈O．01）,RH组高于CIH组（P〈0．01）。结论①慢性间歇性缺氧可引起大鼠学习记忆功能下降,去除缺氧因素后大鼠学习记忆功能有所提高：②慢性间歇性缺氧可导致大鼠海马CA3区P38表达减少,去除缺氧因素后P38表达有所提高;③大鼠学习记忆功能下降可能与海马CA3区突触数量减少和结构变化有关;④慢性间歇性缺氧可能导致OSAHS患者空?     

新霉素损伤SD大鼠耳蜗小胶质样细胞定量研究

目的 探索新生SD大鼠耳蜗新霉素损伤后新发现小胶质样细胞的数量特征.方法 采用半薄切片-光镜结合超薄切片-透射电镜序贯研究方法和Sato染色法观察小胶质样细胞,并通过计数方法研究其时间、空间和损伤计量分布.结果 量化研究发现小胶质样细胞分布规律:时间分布——早至给药过程中第11天已出现,停药后7d、14d达高峰,90 ...     

三种病毒载体经蜗窗膜导入大鼠耳蜗的靶向分布比较

目的比较3种病毒载体经蜗窗膜注入大鼠耳蜗鼓阶介导报告基因在内耳的转染分布,甄选螺旋神经节细胞及其神经纤维基因靶向转移载体。方法分别将带有绿色荧光蛋白基因的慢病毒、5型-腺病毒、2型-腺相关病毒载体经大鼠耳蜗蜗窗膜缓慢注入鼓阶外淋巴,荧光显微镜观察病毒载体导入后3、7、14天绿色荧光蛋白基因在内耳表达部位及荧光强度。结果经蜗窗膜注入3种病毒载体能有效转染内耳多种类型细胞,相对其他两种病毒载体,5型-腺病毒载体高效转染螺旋神经节及其神经纤维,持续稳定表达2周以上。结论不同病毒载体经蜗窗膜导入后,在耳蜗内的表达分布存在明显差异,5型-腺病毒高效转染耳蜗神经,可作为未来听神经病变分子治疗的载体工具选用。     

Interfield differences in intensity and frequency representation of evoked potentials in rat auditory cortex

Existing studies have demonstrated interfield differences in functional organizations and neuronal responsive properties at a single neuron level in the auditory cortex, suggesting complicated encoding of sound frequency and intensity. The objective of present work is, by characterizing cortical auditory evoked potentials (AEPs), to bridge neural characteristics between a single neuron and field levels and to identify the interfield differences in the auditory cortex specifically in terms of spatial representation, which will be useful in guiding future unit studies. The AEP mapping found that each of auditory fields, which could be identified by a different tonotopic representation, showed interfield differences in an intensity-dependent spatial change, amplitude, latency, and amplitude-SPL (sound pressure level) function. These results also showed that many aspects of cortical representation were based on the cochlear properties, yet some were inconsistent. The intensity-dependent shift of activation in AI paralleled the tonotopic axis, which was similar to the place code in cochlea, while the shift in AAF and VAF did not parallel. Nevertheless, the amplitude-SPL function suggested that an underlying mechanism of all these shifts can be a compressive nonlinearity to CF tone, which is possibly formed in the cochlea and still preserved in the cortex. These results suggest that each field modifies the representation to handle a different aspect of sound information, which can be better analyzed than the cochlear representation.