Janus激酶2/信号转导和转录激活子3信号通路在心肌细胞缺氧损伤中的作用

目的探讨Janus激酶2/信号转导和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在心肌细胞缺氧损伤中的作用。方法体外培养的新生大鼠心肌细胞,构建缺氧模型,按随机数字表法分为正常对照组、缺氧组、JAK2抑制剂AG490处理组和STAT3抑制剂Statti c处理组。采用细胞计数试剂盒CCK-8检测心肌细胞活力,采用比色法检测细胞上清液中的乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,并采用缺口末端标记法(TUNEL)检测各组细胞的凋亡率。采用蛋白质印迹(Western blot)检测JAK2及STAT3蛋白表达及磷酸化情况。结果与正常对照组相比,缺氧组心肌细胞成活率明显降低,为对照组的30.14%±6.23%(P<0.01),细胞上清液中LDH、MDA含量升高明显,分别为(50.11±2.58)U/L和(19.55±1.81)mol/L(均为P<0.01),SOD活力则显著降低,为(10.21±0.57)U/ml(P<0.01),缺氧组凋亡率明显升高,为24.24%±4.37%(P<0.01),JAK2、STAT3磷酸化水平上调。AG490及Stattic预处理后,JAK2及STAT3磷酸化水平降低,心肌细胞成活率明显升高(P<0.01),LDH、MDA含量显著低于缺氧组(均为P<0.01),SOD活力则高于缺氧组(P<0.01)。结论 JAK2/STAT3信号通路参与了缺氧所致心肌细胞损伤,抑制JAK/STAT通路有助于减轻缺氧所致心肌损伤。     

抑制JAK/STAT信号通路对缺血再灌注大鼠心肌的影响

目的探讨抑制JAK/STAT信号通路对缺血再灌注大鼠心肌的影响。方法以穿线法结扎左冠状动脉制备心肌缺血再灌注模型。健康Wistar大鼠24只随机分为4组,假手术组(C)、缺血再灌注组(I/R)、AG490组(I/R+AG490)、RMP组(I/R+RMP),每组6只。以Western印迹法检测大鼠心肌JAK2、STAT1、STAT3的表达。以原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞的凋亡。结果缺血再灌注后p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3的表达明显增加,且p-STAT1的表达较p-STAT3多,凋亡心肌细胞数增多,应用抑制剂AG490后p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3的表达减少,凋亡的心肌细胞数也明显减少,应用雷帕霉素后p-JAK2、p-STAT1的表达无改变,p-STAT3的表达减少,凋亡细胞数较再灌注组略有增多,但无统计学意义。结论 JAK/STAT信号通路参与了心肌缺血再灌注损伤,应用AG490可减轻心肌细胞损伤,减少心肌细胞凋亡。     

瑞舒伐他汀激活JAK—STAT信号传导通路抑制大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的：探讨瑞舒伐他汀（RSV）预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及相关信号传导通路机制。方法：采用结扎冠状动脉法制备大鼠心肌缺血再灌注模型。80只雄性Wistar大鼠随机分为4组,分别为假手术组（Sham）、缺血再灌注组（I／R）、RSV组、RSV＋JAK激酶抑制剂（AG490）组。尾静脉内注射RSV和AG490。TuNEL检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学观察凋亡相关因子Bax及Bcl-2表达,westernblot检测JAK2、磷酸化JAK2（P—JAK2）及STAT3蛋白表达。结果：在缺血再灌注前给予外周血管内RSV治疗后,心肌组织凋亡水平（AI）及Bax表达水平显著低于I／R组,Bcl-2、P-JAK2及STAT3水平显著高于I／R组;而同时给予RSV及AG490预处理后,心肌AI及Bax表达水平较RSV组回升,Bcl-2、P—JAK2及STAT3水平较RSV组降低。结论：在缺血再灌注前,从外周血管给予RSV,可显著降低缺血再灌注所诱导的心肌细胞凋亡,其保护机制可能与JAK—STAT信号传导通路有关。     

雷公藤多苷通过JAK2/STAT3信号通路减轻溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜细胞凋亡及炎症的实验研究

目的研究雷公藤多苷(TG)通过Janus激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活子3(STAT3)信号通路对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜细胞凋亡及炎症的调节作用。方法将SD大鼠分为对照组、UC组、TG组、AG490组,UC组、TG组、AG490组采用三硝基苯磺酸/乙醇灌肠的方式建立UC模型,TG组给予TG灌胃干预,AG490组给予JAK2/STAT3抑制剂AG490干预。检测肠黏膜细胞凋亡率、凋亡基因及JAK2/STAT3表达、炎症细胞因子含量。结果 UC大鼠肠黏膜细胞凋亡率、Caspase-9、Caspase-3、p-JAK2、p-STAT3的表达水平及TNF-α、IL-1β、IL-6的含量均明显高于对照组,Bcl-2、Bcl-xL的表达水平明显低于对照组(P 0. 05); TG组大鼠肠黏膜细胞凋亡率、Caspase-9、Caspase-3、p-JAK2、p-STAT3的表达水平及TNF-α、IL-1β、IL-6的含量均明显低于UC组,Bcl-2、Bcl-xL的表达水平明显高于UC组(P 0. 05)。AG490组大鼠肠黏膜细胞凋亡率、Caspase-9及Caspase-3的表达水平、TNF-α、IL-1β、IL-6的含量均明显低于UC组,Bcl-2、Bcl-xL的表达水平明显高于UC组(P 0. 05)。结论 TG能够通过JAK2/STAT3信号通路减轻UC大鼠肠黏膜细胞的凋亡及炎症。     

龙血竭总黄酮对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞的保护作用研究

目的探讨龙血竭总黄酮对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞的保护作用。方法将40只SD大鼠随机分为5组,空白对照组(Control组)、假手术组(Sham组)、心肌缺血再灌注损伤组(MIRI组)、假手术+SDF组(SDF组)、MIRI+SDF组(MIRISDF组),每组8只。采用结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注2 h的方法建立大鼠MIRI模型,于术前1周开始灌药。采用比色法测定血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,采用TTC染色评估心肌坏死面积,用TUNEL法检测心肌细胞凋亡率。结果与Control、Sham和SDF组比较,MIRI组、MIRISDF组的CK、LDH、CK-MB的水平均明显升高(P0.05)。与MIRI组比较,MIRISDF组的CK、LDH、CK-MB的水平明显下降(P0.05)。MIRISDF组心肌梗死面积和心肌细胞的凋亡率明显小于MIRI组(P0.05)。结论龙血竭总黄酮对MIRI大鼠心肌细胞具有较好的保护作用。     

AG490、雷帕霉素对克雷伯杆菌肺炎老龄大鼠多器官损伤组织JAK/STAT信号通路的影响

目的探讨JAK/STAT信号通路在克雷伯杆菌肺炎多器官损伤老龄大鼠中的意义。方法老龄大鼠分为对照组、模型组、AG490组、雷帕霉素组,制备克雷伯杆菌肺炎老龄大鼠多器官功能损伤模型。测定大鼠血清激酸激酶(CK)、CK-MB、PaO2、PaCO2。光镜和透射电镜观察肺、心、小肠病理变化,采用免疫组化的方法观察肺、心肌、小肠组织JAK2、STAT1、STAT3及STAT5的表达。结果与模型组比较,AG490组、雷帕霉素组CK、CK-MB含量减少,PaO2上升,PaCO2下降,JAK2和STAT1、3、5表达减弱,病理损伤较模型组减轻。结论 JAK/STAT信号通路参与了克雷伯杆菌肺炎多器官损伤病理过程。AG490、雷帕霉素对多器官损伤保护作用可能与阻抑JAK2、STAT1、STAT3、STAT5的表达有关。     

抑制JAK/STAT信号通路对心力衰竭大鼠心功能的 影响抑制JAK/STAT信号通路对心力衰竭大鼠心功能的 影响

目的：通过使用AG490抑制JAK/STAT信号通路探讨抑制该通路对心力衰竭大鼠血流动力学及BNP的影响。方法：实验大鼠随机分为3组，对照组(n=15)；心力衰竭组(n=15)，缩窄腹主动脉直径至0.45mm；AG490药物干预组(n=15)，腹主动脉缩窄术后每周经腹腔注射AG490。术后观察大鼠生存情况，分别在4周和8周后应用超声心动图检测IVSd 、LVPWd 、LVEDd、LVEDs和LVEF，并于第8周测量BNP的变化。结果：4周时心衰组大鼠IVSd、LVPWd、LVEDs、LVEDd、LVEF与对照组和AG490干预组均有差异(P<0.05)，IVSd、LVEDd、LVEF干预组和对照组差异无统计意义(P>0.05)。8周时3组大鼠各项超声检测指标均有明显差异(P<0.05)，心衰组变化更明显(P<0.05)。心衰组大鼠血清BNP明显高于其余两组(P<0.01)，AG490干预组BNP高于对照 组，低于心衰组，差异具有统计学意义 (P<0.05)。结论： JAK/STAT信号通路参与慢性心力衰竭进程，干预JAK/STAT信号通路可减轻腹主动脉缩窄大鼠心力衰竭的严重程度。     

miR-140-3p通过靶向趋化因子受体4和抑制JAK2/STAT3通路减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤

目的]探讨miR-140-3p对缺氧复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其机制。[方法]构建体外心肌细胞H/R模型,使用miR-140-3p mimics、趋化因子受体4(CXCR4)过表达质粒转染H9c2细胞。噻唑蓝法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;反转录聚合酶链反应和Western blot检测细胞中miR-140-3p、CXCR4、Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路的激活以及凋亡相关蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与CXCR4的靶向关系。相应试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性和炎症因子、活性氧(ROS)的水平。[结果]体外H/R可抑制miR-140-3p的表达,上调CXCR4表达和JAK2/STAT3通路的磷酸化,诱导H9c2细胞凋亡而抑制H9c2细胞增殖,促进炎症因子和ROS的释放并上调LDH的活性。miR-140-3p可以通过靶向CXCR4 3′UTR抑制CXCR4表达,从而抑制JAK2/STAT3通路的磷酸化激活,抑制炎症因子和ROS的释放,下调LDH的活性,促进H9c2细胞增殖而抑制其凋亡。[结论]miR-140-3p可能通过靶向抑制CXCR4而抑制JAK2/STAT3通路,从而减轻缺血再灌注诱导的心肌细胞损伤。     

碱性成纤维细胞生长因子对心脏缺血再灌注损伤的治疗作用

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在心脏缺血再灌注损伤(MIRI)中发挥的作用及机制。方法将30只SD大鼠随机分为正常对照组(Control)、MIRI组、MIRI后bFGF治疗(MIRI+bFGF)组。通过结扎大鼠冠状动脉左前降支构建MIRI动物模型,随后使用小动物超声影像系统检测心功能状况,包括左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(FS)和每搏输出量(SV);全自动生化检测仪分析心肌酶谱,包括肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH);TTC溶液染色法检测心肌梗死面积;TUNEL细胞凋亡检测分析心肌细胞的凋亡情况;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清炎性因子的含量,包括白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α。结果与MIRI组比较,bFGF治疗可缓解因MIRI引起的心功能降低、心肌酶谱增高、心肌梗死面积增大、心肌细胞凋亡率增高和血清炎性因子上升。结论 bFGF可通过降低心肌细胞的凋亡率和拮抗炎性因子的表达而在MIRI中发挥保护作用。     

替米沙坦通过JAK/STAT通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨JAK-STAT通路的主要成员STAT1和STAT3在心肌缺血再灌注(I/R)损伤过程中激活的功能作用及AT1受体拮抗剂替米沙坦抗心肌I/R损伤的受体后机制。方法采用Langendorff离体心肌I/R模型,65只雄性Wistar大鼠分为5组,每组13只:正常对照组、I/R组、AG490组、替米沙坦预处理组、替米沙坦后处理组。动态监测LVDP和dp/dtmax;免疫印迹法检测p-STAT1,p-STAT3的蛋白表达;TTC染色计算心肌梗死面积;TUNNEL法检测心肌细胞凋亡指数(AI),RT-PCR法检测Bcl-2、Bax的mRNA表达。结果与I/R组比,JAK阻断剂AG490、替米沙坦预处理及后处理均能缩小心肌梗死面积(P<0.01),降低心肌细胞AI(P<0.01),改善心功能,使LVDP和dp/dtmax均明显升高(P<0.01),而使p-STAT1和p-STAT3的蛋白表达明显减少(P<0.01和P<0.05),以p-STAT1表达降低更为明显,p-STAT1与p-STAT3比值下调,Bax mRNA表达显著减少(P<0.01),而Bcl-2 mRNA表达增多(P<0.05)。结论替米沙坦具有抗心肌I/R损伤作用,其机制与阻断JAK-STAT通路,下调促凋亡基因Bax,上调抑制凋亡基因Bcl-2有关。     

脑损伤后大鼠NPAS4与JAK2/STAT3信号通路的关系

目的 探讨神经元PAS结构域蛋白(NPAS)4与Janus激酶(JAK)2/信号传导与转录激活因子(STAT)3通路在大鼠颅脑损伤后的相关联系。方法 将雄性SD大鼠随机分为假手术组、TBI组、TBI+AG490组,建立损伤模型,利用免疫组化染色、Western印迹及实时聚合酶链反应(Real-time PCR)检测JAK2、STAT3、磷酸化(p)-JAK2、p-STAT3及NPAS4蛋白。结果 损伤后NPAS4蛋白可见表达升高,并在12 h时达到最高,并持续至少7 d,与p-JAK2、p-STAT3蛋白时序性表达趋势一致,相邻两时间点比较差异显著(P<0.05);且TBI+AG490组p-JAK2、p-STAT3及NPAS4蛋白表达量较TBI组均显著下降(P<0.05)。结论 NPAS4可在大鼠颅脑损伤后迅速升高并发挥神经保护作用,且其相关作用可能受到JAK2/STAT3通路的调节。     

Janus激酶-信号转导子与转录激活子通路介导粒细胞集落刺激因子影响冠状动脉微栓塞后心肌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠冠状动脉微栓塞(CME)后心肌细胞凋亡的影响以及Janus激酶-信号转导子与转录激活子(JAK/STAT)通路的介导作用.方法 将92只雄性成年SD大鼠,随机分成CME组(24只)、G-CSF组(24只)、JAK2特异性抑制剂(AG490)组(G-CSF+AG490,24只)和假手术组(20只).CME组、G-CSF组及AG490组升主动脉夹闭后自左室腔内注入自体微血栓,造成CME,假手术组注入等量生理盐水.G-CSF组及AG490组术后2 h起给予皮下注射重组人G-CSF(rhG-CSF)100 μg·kg-1·d-1持续5 d,AG490组同时给予AG490溶液腹腔注射5 mg·kg-1·d-1,其他组给予等量生理盐水.术后3 d、1、2及4周处死动物.各组心肌样品中以实时定量聚合酶链式反应法检测Bcl-2、Bax、Fas及FasL的mRNA表达,并计算Bcl-2/Bax比值;以Western blot法检测Caspase-3、裂解多聚二磷酸腺苷-核糖聚合酶(PARP)、总JAK2(t-JAK2)、磷酸化JAK2(p-JAK2)、t-STAT3以及p-STAT3蛋白的表达;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法测定凋亡细胞.结果 (1)与假手术组比较,CME组术后Bcl-2、Bax、Fas及FasL的mRNA表达均升高,Bcl-2/Bax比值降低(0.28±0.04比2.98±0.49),Caspase-3(0.762±0.129比0.133±0.027)及PARP蛋白(0.992±0.146比0.386±0.074)表达增强,心肌细胞凋亡指数升高(P＜0.05或P＜0.01);t-JAK2、p-JAK2、t-STAT3以及p-STAT3蛋白表达差异无统计学意义.(2)与CME组比较,G-CSF组术后p-JAK2与p-STAT3蛋白表达明显增强,Bax、Fas及FasL的mRNA表达明显减弱,Bcl-2的mRNA表达增强,Bcl-2/Bax比值升高(2.07±0.29比0.28±0.04),Caspase-3(0.371±0.041比0.762±0.129)及PARP蛋白(0.548±0.093比0.992±0.146)表达减弱;心肌细胞凋亡指数下降(P＜0.05或P＜0.01);t-JAK2及t-STAT3蛋白表达则差异无统计学意义.(3)经AG490干预后,G-CSF引起的基因与蛋白表达的变化均有不同程度减弱(P＜0.05或P＜0.01).结论 G-CSF通过激活JAK2/STAT3细胞内信号通路减轻CME导致的心肌细胞凋亡.     

心肌营养素-1诱导心肌细胞肥大及辛伐他汀的干预作用

目的观察细胞因子心肌营养素1(CT-1)诱导大鼠心肌细胞的肥大效应,探讨辛伐他汀(Sim)对这一过程的干预作用及其信号转导机制。方法以培养的新生Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌细胞为实验模型,分为对照组,CT-1诱导组,CT-1 Sim组,CT-1 Sim 甲羟戊酸(MVA)组,CT-1 AG490(JAK2拮抗剂)组。应用图像分析系统测定心肌细胞表面积,3H-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白合成速率,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心钠素(ANP)mRNA表达,RT-PCR检测细胞因子信号通路JAK/STAT的mRNA表达水平。结果(1)与对照组相比,CT-1组心肌细胞表面积,3H-亮氨酸掺入率,ANPmRNA表达水平均明显增高(P<0.01),JAK2拮抗剂AG490可显著的抑制CT-1的作用(P<0.01)。(2)与CT-1组相比,辛伐他汀共培养后心肌细胞表面积,3H-亮氨酸掺入率,ANPmRNA表达水平明显减小(P<0.01),外源性甲羟戊酸可显著的抑制辛伐他汀的作用(P<0.01);(3)CT-1可使心肌细胞JAK-STAT的mRNA表达水平显著增强,辛伐他汀显著抑制CT-1诱导心肌细胞JAK-STATmR-NA表达水平增高(P<0.01),而MVA和AG490可部分阻断辛伐他汀的效应(P<0.01)。结论心肌营养素1能够诱导心肌细胞肥大,辛伐他汀可抑制其这一过程并可能与细胞因子信号通路JAK-STAT活化有关。     

心肌营养素-1诱导心肌细胞肥大及辛伐他汀的干预作用

目的 观察细胞因子心肌营养素-1(CT-1)诱导大鼠心肌细胞的肥大效应,探讨辛伐他汀(Sim)对这一过程的干预作用及其信号转导机制.方法 以培养的新生Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌细胞为实验模型,分为对照组,CT-1诱导组,CT-1 Sim组,CT-1 Sim 甲羟戊酸(MVA)组,CT-1 AG490(JAK2拮抗剂)组.应用图像分析系统测定心肌细胞表面积,3H-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白合成速率,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心钠素(ANP)mRNA表达,RT-PCR检测细胞因子信号通路JAK/STAT的mRNA表达水平.结果 (1)与对照组相比,CT-1组心肌细胞表面积,3H-亮氨酸掺入率,ANP mRNA表达水平均明显增高(P＜0.01),JAK2拮抗剂AG490可显著的抑制CT-1的作用(P＜0.01).(2)与CT-1组相比,辛伐他汀共培养后心肌细胞表面积,3H-亮氨酸掺入率,ANP mRNA表达水平明显减小(P＜0.01),外源性甲羟戊酸可显著的抑制辛伐他汀的作用(P＜0.01);(3)CT-1可使心肌细胞JAK-STAT的mRNA表达水平显著增强,辛伐他汀显著抑制CT-1诱导心肌细胞JAK-STAT mRNA表达水平增高(P＜0.01),而MVA和AG490可部分阻断辛伐他汀的效应(P＜0.01).结论 心肌营养素-1能够诱导心肌细胞肥大,辛伐他汀可抑制其这一过程并可能与细胞因子信号通路JAK-STAT活化有关.     

Janus激酶/信号转导子与转录激活子阻断剂AG490对类风湿关节炎大鼠滑膜组织Caspase-3表达的影响

目的 探讨Janus激酶信号转导子与转录激活子(JAK/STAT)信号通路阻断剂AG490对类风湿关节炎(RA)大鼠滑膜组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠50只,除对照组6只外,其余均建立胶原诱导的关节炎(CIA)模型,关节炎指数＞2分的大鼠再随机分为CIA模型组,JAK/STAT阻断剂低、中、高剂量组,每组6只.在关节炎开始后,阻断剂组分别予以AG490 1、5、10 mg,kg-1·1d-1腹腔注射,对照组及模型组予以0.9％氯化钠注射液1ml/d腹腔注射.观察应用AG490前后大鼠足趾容积、关节组织病理学评分及滑膜组织Caspase-3表达情况.应用单因素方差分析对结果进行统计.结果 CIA模型组足趾容积及病理评分明显高于对照组,同时在对照组未见可探测到水平的Caspase-3阳性表达条带,而模型组其表达水平略有升高;经过应用不同剂量AG490后,大鼠关节肿胀较模型组明显改善,组织病理评分AG490中、高剂量组(分另为2.7±0.8,1.8±0.9)较模型组(4.3±1.2)明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.01),而Caspase-3表达AG490低、中、高剂量组(分别为1.90±0.15,3.13±0.33,3.56±0.34)较模型组(1.48±0.18)明显增高,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 JAK/STAT信号通路阻断剂AG490可上调Caspase-3的表达,明显改善RA的病理过程.     

AG490对胃癌细胞株SGC-7901细胞周期、凋亡和STAT3表达的影响

背景：JAK2酪氨酸激酶特异性抑制剂AG490可抑制胃癌细胞生长,但目前对其作用机制还知之甚少。目的：探讨AG490对胃癌细胞株SGC-7901细胞周期、凋亡和STAT3 mRNA表达的影响。方法：以不同浓度AG490处理胃癌细胞株SGC-7901,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,RT-PCR法检测STAT3 mRNA表达。结果：胃癌细胞株SGC-7901经AG490作用48 h后,100μmol/L组的S期、G2/M期细胞比例显著增加（P〈0.01）,1μmol/L组和10μmol/L组仅G2/M期细胞比例显著下降（P〈0.05）。AG490作用48h后,各浓度组的细胞凋亡率均显著增加（P〈0.01）。AG490作用24 h和48 h后,各浓度组的STAT3 mRNA表达均无明显变化（P〉0.05）。结论：AG490可影响胃癌细胞株SGC-7901的细胞周期并诱导细胞凋亡,但不影响STAT3 mRNA的表达。     

缓激肽后处理缺血再灌注损伤大鼠心肌磷酸化STAT3、梗死面积及细胞凋亡指数观察

目的观察缓激肽后处理缺血再灌注损伤大鼠心肌磷酸化STAT3、梗死面积、细胞凋亡指数变化。方法将72只健康雄性Wistar大鼠随机分为4组各18只,假手术组只穿线,不结扎;缺血再灌注(I-R)组缺血30 min,再灌注120 min。缓激肽后处理(BK)组缺血30 min,再灌注120 min,并于再灌注前予缓激肽(200μg/kg)。BK+AG490组缺血30 min,再灌注120 min,再灌注前予缓激肽(200μg/kg),并于再灌注前5 min静注AG490(3 mg/kg)。再灌注10 min时各组取6只大鼠处死,制作心肌标本,Western blotting法检测心肌磷酸化STAT3(p-STAT3)。再灌注120 min时将剩余大鼠处死,制作心肌标本,TTC染色法检测心肌梗死面积,TUNEL法计算心肌细胞凋亡指数。结果 I-R组、BK组、BK+AG490组心肌p-STAT3相对表达量分别为0.28±0.04、0.56±0.08、0.27±0.05,心肌梗死面积分别为38.0%±3.0%、17.3%±2.8%、37.7%±3.8%,心肌细胞凋亡指数分别为72.0%±3.7%、40.7%±3.7%、71.7%±5.9%,BK组与I-R组、BK+AG490组比较,P均<0.01。结论缓激肽后处理的缺血再灌注损伤大鼠心肌磷酸化STAT3水平升高,心肌细胞凋亡指数降低,心肌梗死面积减少。     

JAK2/STAT3信号通路在阿托伐他汀抗大鼠血管平滑肌细胞增殖凋亡中的作用研究

目的探讨阿托伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)非调脂作用机制与转录信号传导子和激活子3(Stat3)信号传导通路的关系,明确其细胞内信号传导机制。方法分别将阿托伐他汀、酪氨酸激酶抑制剂AG490及二者联合作用于大鼠VSMCs,应用MTT法检测细胞增殖状态;流式细胞仪观察药物对细胞凋亡的影响,进一步用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测药物作用前后 Stat3通路相关蛋白JAK2、STAT3、Cyclin D1、Bcl-2的表达及磷酸化活性。结果阿托伐他汀及AG490 都呈浓度依赖性方式抑制大鼠VSMCs增殖水平,促进其凋亡,二者联合应用则具协同作用。阿托伐他汀及AG490处理VSMCs后p-JAK2、p-Stat3、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平随作用时间延长而下降 (P<0．05),并且联合组蛋白表达水平较单独处理组相比有显著性差异(P<0．01)。结论阿托伐他汀对大鼠VSMCs非调脂作用机制与癌基因Star3信号通路高度相关,与酪氨酸激酶抑制剂AG490联合应用则具协同作用,可能通过作用于JAK2／Stat3下游靶基因Cyclin D1、Bcl-2影响其增殖及凋亡。     

大蒜素促进人子宫内膜癌细胞株(RL-952)细胞凋亡的机制

目的探讨大蒜素诱导人子宫内膜癌细胞株(RL-952)细胞凋亡的相关机制。方法人子宫内膜癌细胞株RL-952经大蒜素或Janus激酶/信号传导及转录液活因子(JAK/STAT3)通路抑制剂AG490共培养后,MTT比色法检测药物对TL-952肿瘤细胞的抑制率;采用Real-time PCR和酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞中JAK/STAT3信号转导通路相关蛋白或mRNA及细胞凋亡蛋白的表达情况。结果大蒜素能够剂量和时间依从性地抑制人子宫内膜癌细胞株RL-952的增殖;且大蒜素和AG490孵育人子宫内膜癌RL-952细胞株后细胞内JAK/STAT3转导通路相关蛋白JAK和STAT3的表达明显减弱,同时促细胞凋亡蛋白Bax、P53的表达明显增高、抑制凋亡蛋白Bcl2表达明显降低,且与对照组细胞差异显著(P0.01)。结论大蒜素能够有效抑制肿瘤细胞增殖的作用,且其可能的机制是通过抑制JAK/STAT3信号转导通路实现。     

乳大鼠心肌细胞糖氧剥夺-营养恢复模型模拟在体缺血/再灌注损伤的可行性研究

目的乳大鼠心肌细胞糖氧剥夺-营养恢复(OGD-NR)模型是最常用的模拟心肌缺血-再灌注损伤(myocardial ischemiareperfusion injury,MIRI)的离体建模方法之一。但是,至今尚无研究对该模型的可行性进行评估。该实验旨在评价乳大鼠心肌细胞OGD-NR离体心肌细胞模型模拟在体MIRI的可行性。方法将乳大鼠心肌细胞随机分成对照(C)组、模拟缺血(SI)组和模拟缺血再灌注(SIR)组。实验结束时检测细胞形态学、乳酸脱氢酶(LDH)释放情况、三磷酸腺苷(ATP)水平、活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(MMP)水平以及炎症因子水平,以评价各组细胞损伤的表型和特点。结果与C组相比,SI组的心肌细胞形态学出现损伤、LDH释放显著增加(P0.05)、ATP明显降低(P0.05)、ROS生成增加(P0.05)、MMP水平降低(P0.05)。与SI组相比,SIR组的心肌细胞形态学并未进一步恶化,LDH释放明显降低(P0.05)、ATP水平明显增高(P0.05)。与SI组相比,相应的SIR组未发生大量ROS生成、MMP坍塌以及过度的炎症反应。结论乳大鼠心肌细胞OGD-NR不能成功模拟在体MIRI的特征,即对发生SI损伤的心肌细胞实施SIR处理后,形态学上未出现进一步的损伤、LDH释放明显降低、ATP明显增高、无大量ROS生成、无MMP坍塌且没有过度炎症反应发生。