SNHG1在胆管癌组织及细胞中的表达及意义

目的:探讨长链非编码RNA核仁小分子RNA宿主基因1(small nucleolar RNA host gene 1,SNHG1)在胆管癌组织和细胞中的表达及临床意义.方法:RT-PCR检测64例胆管癌组织及其配对的癌旁组织、胆管癌细胞(RBE和QBC939)和正常肝内胆管上皮细胞(HIBE)中SNHG1的相对表达水平...     

内质网应激时重组腺病毒Ad-PERK siRNA对人软骨肉瘤SW1353细胞增殖和凋亡的影响

目的 :探讨靶向蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase,PERK]基因的小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)重组腺病毒在内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)时对人软骨肉瘤SW1353细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建靶向PERK基因的si RNA重组腺病毒Ad-PERK si RNA,并将其感染SW1353细胞后,RT-PCR和蛋白质印迹法检测SW1353细胞中PERK m RNA和蛋白的表达。应用衣霉素(tunicamycin,TM)建立ERS模型;在ERS状态下,MTT法检测Ad-PERK si RNA感染后SW1353细胞的增殖情况,FCM法检测感染后SW1353细胞的细胞周期和细胞凋亡率,透射电子显微镜下观察感染后SW1353细胞超微结构的变化,蛋白质印迹法检测感染后SW1353细胞中cleaved caspase 3、caspase 12、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)和磷酸化c-Jun氨基端激酶(phospho-c-Jun-N-terminal kinase,p-JNK)蛋白的表达。结果 :成功构建获得重组腺病毒AdPERK si RNA。Ad-PERK si RNA感染后,SW1353细胞中PERK m RNA和蛋白的表达水平下调(P<0.05)。在ERS状态下,Ad-PERK si RNA可促进SW1353细胞的增殖(P<0.05),Ad-PERK si RNA感染组S期细胞所占比例高于感染空载体腺病毒Ad-RFP的阴性对照组和未感染的空白对照组(P<0.05),Ad-PERK si RNA感染组SW1353细胞的凋亡率低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),透射电子显微镜下观察发现阴性对照组和空白对照组SW1353细胞存在明显的凋亡,Ad-PERK si RNA感染组SW1353细胞中cleaved caspase 3、caspase 12、CHOP和p-JNK蛋白的表达水平均明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论 :重组腺病毒Ad-PERK si RNA可以促进ERS状态下SW1353细胞的增殖,并抑制其凋亡。     

胃癌RN A结合蛋白相关预后模型的建立和验证

目的:探讨RNA结合蛋白构建的胃癌预后模型并验证其准确性.方法:从癌症基因组图谱(CancerGenome Atlas,TCGA)数据库中下载胃癌的RNA测序数据,并测定正常组织和肿瘤组织中不同表达的RNA结合蛋白(RNA binding protein,RBPs).并系统地研究及分析这些RBPs的表达和预后价值.结果...     

环状RNA-ITGA1促进三阴性乳腺癌进展和转移

目的:探讨环状RNA(circular RNA,circRNA)-整合素α1(integrin alpha 1,ITGA1)(circ-ITGA1)对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞系进展转移功能的影响.方法:利用高通量测序技术筛选亲本MDA-MB-231细胞和高...     

人肺癌组织总RNA转染树突状细胞诱导特异性抗肿瘤免疫的研究

目的:探讨以人肺癌组织总RNA体外转染树突状细胞(dendritic cells,DCs)诱导细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymptocyte,CTL)发挥特异性抗肿瘤免疫的作用.方法:10例肿瘤组织经免疫组化测定为CEA、MUC1双阳性.一步法提取肿瘤组织总RNA和10例正常肺组织RNA.采集患者外周血单个核细胞体外诱导未成熟DCs,电穿孔法转染肿瘤和肺组织RNA,刺激DCs成熟后,部分行流式细胞仪检测,部分用于体外诱导CTL.以原代培养的肿瘤细胞和肺上皮细胞作为靶细胞,定量乳酸脱氢酶法测定杀伤率.结果:体外培养的DCs形态典型,高表达CD86、CD80、CD40、HLA-DR和CD83.转染肿瘤组织RNA DCs的CEA和MUC1表达量为(20.53±3.64)%和(65.39±9.33)%,明显高于转染肺组织RNA的DCs[(0.78±0.39)%和(18.32±4.24)%],P＜0.01.肿瘤组织RNA转染DCs诱导的CTL可产生针对肿瘤细胞的特异性杀伤;且用自身肿瘤组织RNA转染DCs诱导的CTL对自身肿瘤细胞杀伤活性最大.结论: 以人肺癌总RNA体外转染DCs诱导CTL可以产生特异性抗肿瘤免疫,此方法构建肺癌疫苗是可行的.     

结肠腺癌预后相关竞争性内源性RN A网络的构建及免疫治疗反应分析

目的:利用生物信息学工具在结肠腺癌中(COAD)构建预后相关竞争内源性RNA(ceRNA)网络并进行综合分析.方法:从肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中下载COAD的RNA测序(RNA-seq)数据和miRNA测序(miRNA-seq)数据及相应的患者临床信息,筛选差异表达的mRNAs(DEmRNAs)、lncRNAs...     

Linc00355在结肠癌中表达上调并促进肿瘤细胞增殖和侵袭

目的:探讨长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA) Linc00355在结肠癌组织中的表达水平,以及沉默Linc00355表达对结肠癌HCT116细胞增殖及迁移和侵袭能力的影响.方法:通过对肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达综合(Gen...     

抑制VEGF表达的锤头状核酶系统

目的:建立和评估抑制血管内皮生长因子(VEGF)表达的锤头状核酶(hammerhead ribozyme)技术系统.方法:对VEGF121基因RNA序列进行二级结构分析,选择靶点;设计并构建针对VEGF的分泌肽RNA的可表达锤头状核酶(14)载体系统和VEGF-荧光色素酶融合基因报告质粒;通过试管内切割实验等方法评估核酶对于试管内转录得到的VEGF RNA切割特异性和效率;通过瞬时共转染实验和稳定转染实验评估核酶在细胞内对于VEGF RNA的切割效率.结果:设计和构建了对VEGF RNA二级结构水平上的暴露区( 8, 36和 71位点:核酶1,3和4)和非暴露区( 17位点:核酶2)4个锤头状核酶(14)的两套质粒;试管内切割检测表明,针对 8, 36和 71位点的核酶(1,3和4)可以有效地在试管内对VEGFRNA进行特异性切割,使其水平分别降至对照的61.7%,27.6%和44.8%(荧光色素酶活性)或66.3%,27.0%和30.0%(蛋白质水平);将核酶表达质粒与VEGF-LUC模板质粒瞬时共转染人SMMC-7721肝癌细胞,核酶1,3和4 VEGF-LUC水平分别降低到对照的81.4%,56.6%和69.1%;稳定表达针对VEGF的核酶1,3或4的SMMC-7721细胞株中,内源性VEGF RNA的水平降至对照水平的5%以下.对照未转染的、转染空载体的和转染了核酶2( 17)的SMMC-7721细胞.结论:分别针对VEGF 8, 36和 71位点锤头状核酶可有效地抑制VEGF的RNA水平.     

Hsa-miR-98-5p/DKK3信号轴对乳腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的:乳腺癌威胁着全世界女性的健康.虽然已发现大量微小RNA(microRNA,miRNA)在乳腺癌中异常表达,但仍需要构建一个完整的miRNA-信使RNA(messenger RNA,mRNA)网络.方法:利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载乳腺癌相关数据集,...     

缺氧诱导因子-1α与着丝粒蛋白W在人胶质瘤组织及细胞中表达的相关性

目的 :探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)与着丝粒蛋白W(centromere protein W,CENP-W)在人胶质瘤中表达的相关性。方法 :采用免疫组织化学法分别检测高级别胶质瘤、低级别胶质瘤及瘤旁正常脑组织中HIF-1α和CENP-W的表达水平,并统计学分析蛋白表达水平与胶质瘤临床病理特征的关系,以及两蛋白表达之间的相关性。用氯化钴抑制胶质瘤U251细胞中HIF-1α的分解,然后分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测CENP-W蛋白及m RNA表达的变化。应用特异性小干扰RNA(small interference RNA,si RNA)技术下调U251细胞的HIF-1α表达后,采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测CENP-W蛋白及m RNA表达的变化。应用特异性si RNA下调U251细胞中CENP-W表达后,采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测HIF-1α蛋白及m RNA表达的变化。结果:胶质瘤组织中HIF-1α和CENP-W的表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05),并且与胶质瘤的病理级别明显相关(P<0.05);两蛋白表达水平之间也呈正相关性(r=0.709,P<0.05)。氯化钴作用U251细胞后,HIF-1a和CENP-W蛋白及m RNA的表达水平均明显升高(P<0.01)。si RNA干扰HIF-1α表达后,CENP-W蛋白及m RNA表达水平均明显降低(P<0.01);而si RNA干扰CENP-W表达后,HIF-1α蛋白及m RNA表达水平无明显变化(P>0.05)。结论:HIF-1α和CENP-W表达均与胶质瘤的病理级别呈正相关性。HIF-1α可以调节CENP-W的表达。     

lncRNA MAFG-AS1通过调控miR-11181-3p/GLG1轴促进胃癌AGS细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解

目的：探讨lncRNA MAFG-AS1/miR-11181-3p/GLG1分子轴对胃癌（gastric cancer,GC）细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解的影响及其可能的机制。方法：选取 MAFG-AS1 相对高表达的 GC 细胞系 AGS 作为研究对象,采用 qPCR 法检测其 MAFGAS1、miR-11181-3p、GLG1的RNA表达水平,Transwell实验、糖酵解分析等检测细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解的变化,利用生物信息学分析及双荧光素酶报告基因验证MAFG-AS1、miR-11181-3p、GLG1之间的相互作用关系。结果：敲减MAFG-AS1显著上调miR-11181-3p及下调GLG1的表达（均P<0.01）,并可显著抑制GC细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解（均P<0.01）;荧光素酶报告基因证实MAFG-AS1竞争性吸附miR-11181-3p（P<0.01）;抑制miR-11181-3p或过表达GLG1可部分逆转敲减MAFG-AS1对GC细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解的抑制作用（均P<0.05或P<0.01）。结论：MAFG-AS1通过miR-11181-3p/GLG1分子轴增强GC迁移、侵袭和有氧糖酵解,可能是GC诊疗的潜在分子靶点。     

IncRNA MAFG-AS1及miR-143-3p对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的 探讨lncRNA MAFG-AS1和miR-143-3p对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的作用机制。方法 MAFG-AS1和miR-143-3p表达载体转染至宫颈癌细胞Hela后,采用qRT-PCR检测宫颈癌组织及相应癌旁正常组织,宫颈癌细胞Hela和正常宫颈细胞株Ect1/E6E7中miR-143-3p和MAFG-AS1 mRNA的表达水平;Western blot检测增殖相关蛋白Bcl-2、Cyclin D1及凋亡相关蛋白Bax、cleaved-Caspase-3、p21、p27的表达;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因突变检测lncRNA MAFG-AS1与miR-143-3p的相互作用。结果 与癌旁正常组织相比,宫颈癌组织中MAFG-AS1 mRNA表达升高（0.905±0.115 vs 2.835±0.164,t=43.091,P<0.001）,miR-143-3p表达降低（0.944±0.075 vs 0.382±0.071,t=24.336,P<0.001）;相较于正常宫颈细胞株Ect1/E6E7,宫颈癌细胞Hela中MAFG-AS1 mRNA的表达显著升高（P<0.001）,miR-143-3p表达显著降低（P<0.001）。下调MAFG-AS1和过表达miR-143-3p均可抑制Hela细胞增殖活性,促进细胞凋亡;抑制Bcl-2和Cyclin D1蛋白表达,促进Bax、Caspase-3、p21、p27蛋白表达。MAFG-AS1可靶向调控miR-143-3p表达,且抑制miR-143-3p表达可逆转下调MAFG-AS1表达对Hela细胞抑制细胞增殖、促进细胞凋亡作用。结论 lncRNA MAFG-AS1可抑制宫颈癌细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向调控miR-143-3p有关。     

circ_0023642 通过调控miR-508-3p/ERBB4 分子轴促进胃癌GMC-803细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的：探讨circ_0023642 通过调控miR-508-3p/ERBB4 分子轴对胃癌GMC-803 细胞增殖和转移的影响及其作用机制。方法：选取2015 年5 月至2018 年3 月南通市第二人民医院手术切除的31 例胃癌患者癌组织及配对的癌旁组织标本和胃癌细胞系,使用qPCR检测胃癌组织、癌旁组织和细胞系中circ_0023642 和miR-508-3p 的表达情况;WB实验检测MGC-803 细胞中ERBB4、E-cadherin、N-cadherin 和Vimentin 的表达;CCK-8 和Transwell 实验检测调控circ_0023642 和miR-508-3p 的表达对MGC-803 细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因验证miR-508-3p 是否能够结合circ_0023642 和ERBB4 的3'' UTR。结果：circ_0023642 在胃癌组织和细胞系中的表达水平分别显著高于癌旁组织和正常胃黏膜细胞（P<0.05 或P<0.01）,且在MGC-803 细胞中表达水平最高。敲降circ_0023642 后MGC-803 细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）受到明显抑制（均P<0.05 或P<0.01）;circ_0023642 与ERBB4 均可以靶向结合miR-508-3p 的作用位点,并进一步实验证实circ_0023642 通过海绵吸附miR-508-3p 促进MGC-803 细胞增殖、迁移、侵袭和EMT（P<0.05 或P<0.01）。结论：circ_0023642 通过与ERBB4 竞争性结合miR-508-3p 的作用位点,进而促进胃癌MGC-803 细胞增殖和转移,其可作为胃癌临床诊断的标志物。     

LINC00511靶向miR-497-5p调控胃癌细胞增殖、迁移和侵袭及机制研究

目的:探讨LINC00511对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:将pcDNA、pcDNA-LINC00511、si-NC、si-LINC00511、miR-NC、miR-497-5p分别转染至MGC-803细胞中,分别记为pcDNA组、pcDNA-LINC00511组、si-NC组、si-LINC00511组、miR-NC组、miR-497-5p组;将si-LINC00511质粒分别与anti-miR-NC、anti-miR-497-5p共转染至MGC-803细胞中,分别记为si-LINC00511+anti-miR-NC组、si-LINC00511+anti-miR-497-5p组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-497-5p和LINC00511表达水平;蛋白质印迹（Western Blot）法检测细胞周期素D1（cyclin D1,CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9,MMP9）蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测LINC00511和miR-497-5p的靶向关系。结果:与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞MGC-803、MKN-45、AGS中miR-497-5p表达水平显著降低,LINC00511表达水平显著升高。LINC00511靶向调控miR-497-5p的表达。抑制LINC00511表达和miR-497-5p过表达可降低细胞活性和迁移、侵袭数量,降低CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平,提高p21蛋白表达水平。干扰miR-497-5p表达逆转了抑制LINC00511表达对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:抑制LINC00511表达可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与miR-497-5p表达有关,将为胃癌的治疗提供新思路和新靶点。     

miR-325-3p靶向CLDN1基因调控胃癌上皮间质转化和侵袭转移

目的 探讨miR-325-3p靶向CLDN1基因对胃癌上皮间质转化和侵袭转移的影响。方法 选取人胃黏膜上皮细胞株GES-1以及人胃癌细胞株HGC27、SGC-7901、MKN-45和MGC-803,并检测细胞中miR-325-3p和CLDN1的表达。双荧光素酶报告实验验证miR-325-3p和CLDN1的靶向关系,干预胃癌细胞中miR-325-3p和CLDN1的表达,qRT-PCR和Western blot检测细胞中N-cadherin、Vimentin和MMP2的表达,CCK-8检测细胞增殖活力,Transwell和流式细胞仪分别检测细胞侵袭和凋亡能力。结果 相对于GES-1细胞,MGC-803细胞中miR-325-3p表达降低而CLDN1表达增高（均P<0.05）,双荧光素酶报告实验证实CLDN1为miR-325-3p的靶基因。过表达miR-325-3p能够抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和上皮间质转化,促进胃癌细胞凋亡,抑制miR-325-3p则能够促进胃癌细胞的增殖、侵袭和上皮间质转化,抑制胃癌细胞凋亡（均P<0.05）。而过表达CLDN1则能够逆转miR-325-3p过表达对胃癌细胞生物学行为的影响。结论 miR-325-3p能够靶向抑制CLDN1进而抑制胃癌细胞的侵袭转移和上皮间质转化,促进胃癌细胞凋亡,miR-325-3p有望成为治疗胃癌的新靶点。     

miR-875-5p通过靶向USF2抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-875-5p对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:采用qPCR法检测胃癌细胞BGC-823、HGC-27、MGC-803、SGC-7901、AGS、MKN-45和胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-875-5p的表达水平。利用脂质体转染技术,分别将miR-875-5p模拟物/抑制剂(mimic/inhibitor)及其阴性对照质粒(miR-NC/Anti-miR-NC)转染至AGS细胞/MKN-45细胞,构建过表达/抑制miR-875-5p的细胞模型,空白对照组(Control组)不转染。通过CCK-8、克隆形成、Transwell等实验分别检测miR-875-5p表达变化对细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-875-5p与上游刺激因子2(USF2)的靶向关系,WB实验验证miR-875-5p对USF2的调控作用并检测USF2蛋白的表达。构建MKN-45细胞裸鼠移植瘤模型,验证miR-875-5p过表达对MKN-45细胞成瘤能力的影响。结果:miR-875-5p在6种胃癌细胞中表达水平显著低于胃黏膜上皮细胞GES-1(均P<0.01)。与Control组和miR-NC组相比,miR-875-5p mimic组AGS细胞的增殖、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数,以及USF2蛋白的表达均显著降低(P<0.05或P<0.01);miR-875-5p inhibitor组MKN-45细胞的增殖、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数,以及USF2蛋白的表达均显著提高(P<0.05或P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证明,miR-875-5p能够直接靶向USF2基因。体内成瘤实验结果表明,过表达miR-875-5p显著抑制MKN-45细胞移植瘤的生长(均P<0.01)。结论:miR-875-5p通过靶向USF2抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

微小RNA-148a-3p靶向调控MAP3K9表达及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-148a-3p（miR-148a-3p）对丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶9（MAP3K9）的靶向调控作用及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 向对数生长期胃癌细胞株MGC-803转染miR-148a-3p模拟物（mimics组）和阴性对照（NC组），以未转染的MGC-803细胞为对照组；采用实时定量PCR（QPCR）检测各组miR-148a-3p水平以评价转染效率，MTT法检测各组细胞增殖能力，流式细胞术检测各组细胞凋亡情况，分别采用QPCR和Western blotting检测Bcl-2、Bax、caspase-3及MAP3K9 mRNA和蛋白水平，同时采用双荧光素酶报告实验验证miR-148a-3p与MAP3K9的靶向作用关系。结果 QPCR结果显示，对照组、NC组和mimics组的miR-148a-3p水平分别为1.021±0.123、1.087±0.196和2.854±0.368，与对照组和NC组比较，mimics组的miR-148a-3p水平升高（P＜0.05）。mimics组MGC-803细胞的增殖活力较其余两组减弱（P＜0.05）。mimics组MGC-803细胞凋亡率为（15.2±1.6）％，高于对照组的（3.5±0.9％）％和NC组的（4.5±1.1）％，差异具有统计学意义（P＜0.05）。与对照组和NC组比较，mimics组的MAP3K9和Bcl-2的mRNA和蛋白水平均下调，而Bax和caspase-3的mRNA和蛋白水平均上调（P＜0.05）；双荧光素酶报告实验证实MAP3K9是miR-148a-3p的直接作用靶点。结论 MiR-148a-3p可抑制胃癌细胞MGC-803的增殖并诱导其凋亡，可能通过靶向MAP3K9来发挥抑癌作用，调控miR-148a-3p／MAP3K9轴在胃癌防治中有一定应用前景。     

长链非编码RNA NR2F2-AS1对胃癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:研究lncRNA NR2F2-AS1对胃癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR法检测细胞中 NR2F2-AS1、miR-425-5p的mRNA表达情况;将pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-NR2F2-AS1组（转染pcDNA-NR2F2-AS1）、sh-NR2F2-AS1组(转染sh-NR2F2-AS1)、sh-NC组(转染sh-NC)、anti-miR-NC组（转染anti-miR-NC）、anti-miR-425-5p组（转染anti-miR-425-5p）、pcDNA-NR2F2-AS1+miR-NC组（共转染pcDNA-NR2F2-AS1和miR-NC）、pcDNA-NR2F2-AS1+miR-425-5p组（共转染pcDNA-NR2F2-AS1和miR-425-5p mimics）转染至MGC-803、MKN-45细胞;MTT法检测细胞的增殖;流式细胞术检测细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果:与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞MGC-803、MKN-45中NR2F2-AS1的表达显著降低,miR-425-5p的表达显著升高;过表达NR2F2-AS1、抑制miR-425-5p均可抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡;miR-425-5p可抑制野生型NR2F2-AS1的MGC-803、MKN-45细胞的荧光活性;过表达miR-425-5p可逆转过表达NR2F2-AS1对MGC-803、MKN-45细胞增殖和凋亡的作用。结论:lncRNA NR2F2-AS1可抑制胃癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与靶向miR-425-5p有关,将可为胃癌的治疗提供新靶点。     

雪灵芝水提物对人胃癌MGC-803细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨雪灵芝水溶性提取物(arenaria kansuensis aqueous extract,AKAE)对人胃癌细胞株MGC-803细胞增殖及细胞周期的影响。方法体外培养的MGC-803细胞经不同浓度AKAE处理,采用MTT法检测受试细胞增殖水平;应用流式细胞术检测AKAE处理12 h后各组细胞的细胞周期;Western blot检测不同浓度、不同时间AKAE处理组MGC-803细胞中cyclin D1蛋白表达水平;实时定量 PCR检测各组MGC-803细胞中cyclin D1、p16和p21基因的mRNA相对表达量。结果AKAE对体外培养的MGC-803细胞增殖具有浓度依赖性抑制作用（P<0.05）,IC₅₀为(0.134±0.005)mg/ml;经AKAE处理12 h,0.8 mg/ml组MGC-803细胞的 G₁期细胞比例高于对照组、S期细胞比例低于对照组（P<0.05）;(0.2～0.8) mg/ml浓度的AKAE处理,对MGC-803细胞中cyclin D1的蛋白及mRNA表达具有明显抑制作用（P<0.05）;AKAE促进MGC-803细胞中p16、p21基因mRNA 表达,0.2 mg/ml处理组p16、p21 mRNA相对表达量分别为对照组的3.3倍和18.5倍。结论雪灵芝水提物(AKAE)对MGC-803细胞增殖具有抑制作用,其机制与G₁期阻滞和对G₁期相关因子表达的影响有关。     

TGF-β1上调LSD1表达激活ERK/NF-κB p65通路促进胃癌增殖的实验研究

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)上调赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)表达激活下游细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)/核因子κBp65(NF-κB p65)信号通路促进胃癌细胞增殖的作用机制。方法利用外源性人重组TGF-β1作用于人胃癌细胞系MGC-803、SGC-7901、AGS和正常胃黏膜细胞系GES-1。MTT法检测各组细胞增殖活性。Western blotting法检测LSD1蛋白表达。将MGC-803细胞分为5组:空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+TCP(LDS1抑制剂)组、TGF-β1+SIS3(SMAD3抑制剂)组、TGF-β1+SCH772984(ERK1/2抑制剂)组。Western blotting法检测p-SMAD2、p-SMAD3、p-ERK1/2、p-p65蛋白和核p65蛋白表达。采用免疫荧光染色法检测p65在细胞核中的定位。结果TGF-β1可促进MGC-803、SGC-7901、AGS细胞的增殖活性,且上调LSD1蛋白表达,呈浓度和时间依赖性。与TGF-β1组比较,TGF-β1+TCP组MGC-803细胞LSD1蛋白表达下调,增殖抑制率降低(P<0.05)。与空白对照组比较,TGF-β1组MGC-803细胞LSD1、p-SMAD2、p-SMAD3、p-ERK1/2、p-p65和核蛋白p65蛋白表达量升高(P<0.05)。与TGF-β1组比较,TGF-β1+SIS3组LSD1蛋白表达无差异(P>0.05),TGF-β1+SCH772984组LSD1蛋白表达明显降低(P<0.05),p65蛋白核定位量也减少。结论LSD1在TGF-β1促进胃癌细胞增殖中发挥着重要作用,可能与TGF-β1上调LSD1表达与激活下游ERK/NF-κB p65信号通路,促进p65核转移有关。