共查询到18条相似文献,搜索用时 78 毫秒
1.
目的:运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默结肠癌细胞株LoVo中Livin基因的表达,研究Livin对LoVo细胞增殖和凋亡等生物学特性的影响.方法:构建针对Livin基因的干扰质粒pSilencer4.1-L1和pSilencer4.1-L2,转染LoVo细胞,通过RT-PCR、Wes... 相似文献
2.
目的:探讨HLA-E基因表达对人乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移等生物学行为的影响,分析靶向HLA-E基因的小分子RNA干扰(siRNA)技术应用于乳腺癌治疗的可行性。方法:设计并合成靶向HLA-E基因的特异性siRNA序列,转染至人乳腺癌细胞MDA-MB-231,同时设立空白对照组、阴性对照组及脂质体组。实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot法分别检测各组乳腺癌细胞HLA-E mRNA及蛋白的表达;CCK-8法和流式细胞术检测各组乳腺癌细胞增殖率和凋亡率;Transwell实验检测各组乳腺癌细胞侵袭和迁移能力。结果:乳腺癌细胞转染HLA-E siRNA后,HLA-E mRNA及蛋白表达水平明显降低。与阴性对照组相比,HLA-E siRNA转染组乳腺癌细胞增殖率降低(P<0.01);凋亡率增加(P<0.01);侵袭迁移能力降低(P<0.01)。结论:靶向人乳腺癌细胞HLA-E基因的siRNA能有效抑制其基因表达,进而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低乳腺癌细胞侵袭和迁移能力。 相似文献
3.
目的 研究小干扰RNA片段(shRNA)对三氧化二砷(ATO)耐药的白血病细胞株K562/AS2细胞的TopoⅡα、TopoⅡβ基因表达及其功能的影响。方法 设计并合成针对TopoⅡα和TopoⅡβ基因序列的shRNA各3对,在脂质体的介导下转染K562/AS2细胞;用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)分析TopoⅡα、TopoⅡβ mRNA的表达水平;流式细胞术检测TopoⅡα、TopoⅡβ蛋白表达。结果 针对TopoⅡα- shRNA、TopoⅡβ的shRNA作用于K562/AS2细胞24 h后,TopoⅡα mRNA水平和蛋白水平最大下调为(78.22±0.01)%、(31.17±1.27)%(P<0.05),TopoⅡβmRNA水平和蛋白水平最大下调为(57.36±0.01)%、(23.98±1.22)%(P<0.05)。结论 转染24 h后针对TopoⅡ的shRNA可抑制对ATO耐药的白血病细胞株K562/AS2 细胞TopoⅡ基因的表达。 相似文献
4.
端粒酶RNA反义寡核苷酸对白血病细胞K562增殖的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:探讨人类端粒酶RNA的反义寡核苷酸对K562细胞增殖的影响。方法:采用MTT和试验和平板集落形成实验观察反义寡核苷酸作用后K562细胞的生长情况,采用流式细胞仪分析细胞周期的改变,采用电镜观察细胞超微结构的改变,用PCR-ELISA分析细胞端粒酶活性的改变。结果:端粒酶RNA的反义寡核苷酸作用K562细胞后,细胞超微结构和细胞周期发生明显改变。端粒酶活生到明显抑制,细胞增殖受到明显抑制。结论:靶向于端粒酶RNA的反义寡核苷酸抑制白血病细胞K562的增殖。 相似文献
5.
RNAi对白血病细胞mdr-1基因和多药耐药表型的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)对慢性粒细胞白血病急变细胞系K562/AO2细胞mdr1基因的抑制和耐药表型的逆转作用。方法:选择合成封闭mdr-1基因的小干扰序列(si-MDR1),以1个碱基突变的si-MDR1-mut为对照序列,在脂质体介导下转染至K562/AO2细胞系。RT-PCR和Western blot检测mdr1 mRNA及P-gp蛋白水平,流式细胞术分析细胞内柔红霉素(daunorubicin,DNR)积累量,并以四甲基唑蓝快速比色法(MTT)反映K562/AO2对阿霉素、长春新碱、足叶乙甙药物敏感性的变化。结果:实验证实该序列能高效封闭K562/AO2细胞内mdr-1基因表达,增加细胞内化疗药物DNR积累量,增强K562/AO2细胞对阿霉素、长春新碱、足叶乙甙的敏感性。结论:RNAi可以通过抑制mdr1基因表达,逆转K562/AO2细胞耐药表型。 相似文献
7.
目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2-ME)对白血病K562细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 实验分为3组,对照组:培养基中不含2-ME;实验组:分别用1、2、4、8、16μmol/L的2-ME处理K562细胞36 h后观察各项指标的变化;阴性对照组:培养液中以无RNase蒸馏水代替K562细胞。应用原位细胞凋亡法(TUNEL)、流式细胞术(FCM)、半定量RT-PCR及黄嘌呤氧化酶法分别检测K562细胞凋亡率、Caspase-3、性连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)及其基因表达、超氧化物歧化酶(SOD)与活性氧(ROS)水平。结果 不同浓度的2-ME与K562细胞作用36 h后,2-ME在一定的浓度范围内以剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡;2-ME通过上调促凋亡因子Caspase-3和(或)下调抗凋亡因子XIAP的表达,降低SOD及增加ROS水平等途径促进K562细胞凋亡,这可能是2-ME诱导K562细胞凋亡的机制之一。结论 2-ME能够以剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡,显示了其在慢性粒细胞白血病(CML)治疗中的潜在价值。 相似文献
8.
目的:通过体外实验观察β-arrestin2的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人乳腺癌Bcap37细胞凋亡的影响。方法:针对β-arrestin2基因设计siRNA序列,克隆到空载体PGPU6/GFP/Neo,转化DH5α菌株,提取质粒,进行测序分析。在脂质体lipofectamineTM2000的介导下转染Bcap37细胞,同时转染空白对照组及阴性对照组。转染后用定量Western blot 检测Bcap37细胞β-arrestin2蛋白的表达情况,流式细胞仪检测Bcap37细胞的凋亡情况。结果:我们的研究表明,β-arrestin2的siRNA能有效下调β-arrestin2的表达,与对照组相比,β-arrestin2干扰组β-arrestin2的表达明显下降(P<0.05);β-arrestin2干扰组Bcap37细胞凋亡率显著高于对照组。结论:β-arrestin2干扰组能有效降低β-arrestin2的表达,有效促进Bcap37细胞凋亡;β-arrestin2可能成为乳腺癌基因治疗的一个新靶点。 相似文献
9.
目的:研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,为其作为肝癌基因治疗的新分子靶点提供实验依据,并对RNAi实验方法的优化进行探讨.方法:构建2个针对STAT5A基因不同位点的RNA干扰(RNAi)真核表达载体,为减少脱靶效应和细胞毒性,采用两载体共转染的方法转染人肝癌细胞HepG2,分别采用半定量RT-PCR、蛋白质印迹法检测转染前后细胞中STAT5A mRNA和蛋白表达的变化;采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:酶切及测序结果显示,STAT5A基因两位点的shRNA表达载体均构建成功;两载体共转染HepG2细胞48 h后,与对照组相比,RT-PCR结果显示实验组细胞中STAT5A mRNA的抑制率约为66%,P<0.05;蛋白质印迹法检测结果显示,STAT5A蛋白的抑制率约为58%,P<0.05;同时MTT法显示实验组较对照组在转染后24~96 h内细胞生长速度减慢、增殖抑制明显(P<0.05),流式细胞仪检测实验组细胞凋亡率为(34.68±0.78)%,明显高于阴性对照组(5.12±1.09)%和空白组(4.75±1.65)%,P<0.05.结论:成功构建了针对STAT5A基因的RNA干扰真核表达载体,两载体共转染可有效抑制STAT5A基因的表达,并能抑制细胞生长、诱导细胞凋亡. 相似文献
10.
背景与目的:Apollon基因在白血病等多种肿瘤内高表达。本试验通过构建高效干扰Apollon基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,探讨RNA干扰技术能否逆转人髓系白血病K562细胞多药耐药。方法:构建靶向Apollon基因真核表达载体pGPHI-GFP-Neo-Apollon,应用LipofectamineTM2000转染K562细胞,G418稳定筛选。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、细胞免疫荧光法分别检测重组载体稳定转染K562细胞后Apollon mRNA及蛋白的表达情况;四甲基偶氮唑盐(MTT)、流式细胞术检测细胞转染前后对长春新碱(leurocristine,VCR)、足叶乙苷(etoposide,VP16)的敏感性及凋亡率的变化。结果:成功构建了pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体并在K562细胞内稳定表达的细胞克隆,经G418筛选后,重组载体能有效沉默Apollon的表达,Apollon mRNA及蛋白表达水平明显下降。MTT结果显示,基因干扰组细胞对VCR、VP16的敏感性明显增强,其半数抑制浓度(half-inhibitory,IC50)值分别为(0.144±0.018)mg/L、(17.336±3.571)mg/L,明显低于细胞对照组(P<0.05)。流式细胞术检测结果表明,基因干扰组细胞联合化疗药物后细胞凋亡率显著升高(P<0.05),而转染阴性对照组细胞凋亡率与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体能显著增强VCR和VP16对白血病K562细胞的诱导凋亡作用,提高K562细胞对化疗药物的敏感性,提示RNA干扰Apollon基因表达能一定程度逆转白血病细胞的多药耐药。 相似文献
11.
目的:探讨组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase2,HDAC2)在食管鳞癌组织中的表达,并研究其表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响,以及分析其相关的分子机制。方法:采用免疫组织化学法检测食管鳞癌组织中HDAC2蛋白的表达。将特异性针对HDAC2基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和对照siRNA分别转染食管鳞癌EC9706细胞,实验分3组:未处理组、对照siRNA组和HDAC2siRNA组。蛋白质印迹法检测各组EC9706细胞中HDAC2蛋白的表达。CCK-8计数法检测转染前后细胞的增殖情况。FCM法检测细胞周期和细胞凋亡的变化。蛋白质印迹法检测与细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达变化。结果:HDAC2蛋白在食管鳞癌组织中表达的阳性率为79.71%,显著高于癌旁不典型增生组织的51.11%和正常食管黏膜组织的23.19%,3者之间差异具有统计学意义(χ2=44.121,P=0.000);此外,HDAC2蛋白表达与患者的年龄和性别无关(P均>0.05),但是与组织学分级、浸润深度、TNM分期和淋巴结转移均显著相关(P均<0.05)。HDAC2siRNA能有效下调食管鳞癌EC9706细胞中HDAC2蛋白的表达,明显抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖,促使细胞周期静止在G0/G1期,并诱导细胞凋亡。蛋白质印迹法检测结果显示,HDAC2表达下调能明显提高p21和凋亡相关蛋白bax的表达量,同时降低细胞周期蛋白cyclin D1和bcl-2的表达量。结论:HDAC2可能在食管鳞癌的发生、发展中具有重要作用,其表达下调介导的食管鳞癌细胞增殖抑制、细胞周期静止以及细胞凋亡可能与p21、bax的表达升高和cyclin D1、bcl-2表达降低密切相关。 相似文献
12.
目的 探讨辛伐他汀(SV)联合阿糖胞苷(Ara-C)对K562 细胞增殖与凋亡的影响。方法 不同浓度SV和Ara-C单用或者联合处理K562细胞,对照组为K562细胞。药物作用24、48、72 h后收集细胞,分别观察各组细胞形态,采用MTT法检测不同组别细胞的生长抑制率,采用流式细胞术检测细胞早期凋亡率、细胞坏死比例。结果 SV联合Ara-C组与单药组相比细胞形态明显有核固缩现象,且可见凋亡小体形成,并且随着处理时间的增加,抑制率也增大。其中15 μmol/L SV联合20 μmol/L Ara-C的细胞抑制作用最为显著,72 h细胞抑制率为(72±1)%,明显高于15 μmol/L SV组的(45±2)%和20 μmol/L Ara-C组的(44±0)%(P<0.01),表现为协同抑制作用(24、48 h金氏Q值为1.24和1.19)。流式细胞术检测发现20、15和 10 μmol/L SV组K562细胞早期凋亡率AnnexinV明显高于对照K562细胞(P<0.01),而且随着时间延长和剂量的增大早期凋亡率也增加(P<0.05)。20和15 μmol/L SV组早期凋亡率均高于10 μmol/L SV组,而前两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。晚期凋亡细胞率(PI)各组中差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 SV 体外抑制K562细胞增殖及诱导细胞凋亡,SV 与Ara-C具有协同作用,增加了K562细胞对化疗药物的敏感性。15 μmol/L 可能为SV体外最佳作用浓度。 相似文献
13.
背景与目的:BCR-ABL融合基因是慢性粒细胞白血病发病的分子病理基础,也是诊断慢性粒细胞白血病、观察疗效、评估预后等的有效指标。miRNA-196b在急性粒细胞白血病中低表达并对疾病的发展起主要作用。在慢性粒细胞白血病中miRNA-196b的靶基因为BCR-ABL,miRNA-196b过表达抑制BCR-ABL融合基因的表达。生存素(survivin)是BCR-ABL的一个下游基因,已在多种肿瘤中发现survivin与环氧化酶-2(Cox-2)协同调节细胞的增殖凋亡。本研究旨在探讨miRNA-196b过表达对K562细胞增殖、凋亡及survivin、Cox-2 mRNA表达的影响。方法:实验分为K562-196b组、空载K562-pLV组与K562组,采用CCK-8法检测细胞增殖;采用AnnexinⅤ-PE检测细胞凋亡;采用实时荧光定量PCR法检测Cox-2、survivin mRNA的表达情况。结果:miRNA-196b过表达可以明显抑制K562细胞增殖;K562-196b组细胞凋亡率显著高于K562组(P<0.05);miRNA-196b组中survivin基因显著低表达(P<0.05),Cox-2基因中无明显变化(P>0.05)。结论:miRNA-196b对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡有显著作用;miRNA-196b过表达可下调survivin基因的表达,为miRNA-196b作为慢性粒细胞性白血病的治疗靶点提供了依据。 相似文献
14.
目的利用已构建成功的、在人胰腺癌细胞株CFPAC-1中稳定抑制细胞分裂周期25同源体B(CDC2582)的重组慢病毒,建立CDC2582表达降低的细胞株,以研究该基因的作用.方法将产生CDC2582小干扰RNA(siRNA)分子的、携带绿色荧光蛋白的重组慢病毒感染CFPAC-1细胞后,用流式细胞仪筛选稳定表达的细胞株.应用RT-PCR和Western blot分别对细胞中CDC2582的mRNA和蛋白表达水平进行分析.应用MTT法、流式细胞仪、平板克隆形成和Transwell小室法分别检测其对细胞增殖、周期、细胞克隆形成能力和迁移侵袭能力的影响.结果 CDC2582 siRNA显著下调CFPAC-1细胞中CDC2582的表达,所构建的重组慢病毒导入的siRNA有较高的沉默效率,CFPAC-1细胞的增殖能力、克隆形成能力以及迁移侵袭能力显著增强,细胞周期无明显改变.结论 CDC2582基因可显著影响胰腺癌CFPAC-1细胞的增殖、克隆形成和迁移能力,为利用CDC2582所介导的信号通路进行肿瘤基因治疗提供了实验依据. 相似文献
15.
目的:探讨Bcl-2短发夹样RNA (short hairpin,shRNA)对甲氨蝶呤(methotrexate , MTX)诱导的人Burkit淋巴瘤Raji细胞凋亡的增强作用.方法:采用脂质体介导的转染方法将构建有Bcl-2 shRNA的质粒转染Raji细胞,然后加入MTX,采用RT-PCR法检测作用48 h时细胞 Bcl-2 mRNA表达水平,免疫荧光法检测细胞中Bcl-2蛋白表达水平,MTT法检测经处理24、48和72 h后细胞的增殖活性,Giemsa染色及FCM法检测细胞凋亡.结果:将Bcl-2 shRNA质粒转入Raji细胞后,Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),转染Bcl-2 shRNA联用MTX可明显诱导细胞凋亡,细胞增殖活性显著降低,分别与MTX组、阴性shRNA联用MTX组、Bcl-2 shRNA组及空质粒+MTX组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:Bcl-2 shRNA可增强MTX对Raji细胞增殖的抑制作用,增加对细胞凋亡的诱导作用. 相似文献
16.
目的:探讨水通道蛋白1(aquaporin-1,AQP1)过表达对人慢性髓细胞白血病(chronic myeloidleukemia,CML) K562细胞红系分化和增殖的影响.方法:以人脑cDNA文库为模板,通过PCR扩增出AQP1基因的编码序列,构建pBABE-puro-AQP1真核表达载体;感染K562细胞,筛选建立稳定过表达AQP1基因的K562细胞株(命名为K562-AQP1);实时荧光定量PCR法、细胞免疫荧光染色法及蛋白质印迹法分别检测AQP1转录和蛋白表达水平.通过MTT法检测细胞生长增殖、实时荧光定量PCR法检测γ珠蛋白表达和分光光度法检测血红蛋白含量,研究AQP1过表达对K562细胞红系分化和增殖的影响.结果:与空载体对照组相比,pBABE-puro-AQP1转染入K562细胞后AQP1 mRNA和蛋白表达水平皆有显著升高(P<0.01),K562-AQP1细胞中红系分化指标γ珠蛋白和血红蛋白表达水平明显增加,同时细胞生长速度明显降低(P<0.05).结论:AQP1过表达可以显著促进K562细胞向红系分化,同时抑制细胞增殖.推测AQP1可能成为临床诱导分化治疗CML的基因靶点之一. 相似文献
17.
目的 探讨辛伐他汀作用K562细胞后的Ras-细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路分子水平的变化,以说明辛伐他汀通过引起Ras-ERK信号通路分子水平的变化参与K562细胞细胞增殖和细胞凋亡的调节.方法 体外用辛伐他汀处理慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,用流式细胞术检测辛伐他汀作用后的细胞周期和凋亡率的变化,用逆转录聚合酶链反应检测Ras-ERK信号通路分子在转录水平的变化.结果 辛伐他汀能抑制K562细胞的增殖,使K562细胞停滞在G_0-G_1期,明显诱导K562细胞凋亡,Ras-ERK信号通路的大多数分子在转录水平出现差异表达.结论 辛伐他汀可能通过作用于参与细胞增殖和凋亡的Ras-ERK信号通路抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡. 相似文献
18.
目的研究咔唑生物碱HY1对人慢性骨髓性红白血病K562细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其作用机制。方法通过SRB法检测HY1对K562细胞体外增殖的影响;通过PI荧光染色法、罗丹明123染色法、AnnexinⅤPI染色法等流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳法,观察HY1处理K562细胞后凋亡相关指标的变化;通过Westernblot检测凋亡相关蛋白的变化。结果HY1对K562细胞体外增殖的半数抑制浓度(IC50)为(29.05±0.90)μmol/L。随着HY1药物浓度的增加和作用时间的延长,SubG1期细胞明显增加,线粒体膜电位迅速下降,发生凋亡的细胞比例也显著增加,而且经琼脂糖凝胶电泳检测到了典型的DNALadder。Westernblot结果显示,细胞色素c(Cytc)表达明显增加;caspase9酶原被剪切,且活化程度呈时间依赖性;caspase3酶原及其作用底物PARP也发生了剪切;caspase8表达无明显变化。结论HY1能够以剂量时间依赖方式,通过线粒体激活途径,诱导K562细胞发生凋亡,并由此发挥其抗肿瘤活性。 相似文献