白细胞介素7受体α干预小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病的初步研究

 【摘要】　目的　建立小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病（aGVHD）模型,探讨外源性白细胞介素7（IL-7）受体α（IL-7Rα）干预小鼠aGVHD的疗效及可能机制。方法　以BALB／C（H-2d）雌性小鼠为受鼠,将受鼠分为单纯照射组、照射移植组、IL-7Rα干预组3组,每组10只,均接受9 Gy 60Co进行全身照射,取C57BL／6（H-2b）供鼠骨髓细胞1×107个和脾细胞2×107个经尾静脉输注给受鼠,观察受鼠的体征、造血功能恢复及生存时间的变化,并进行病理学、嵌合体及细胞因子水平的检测。结果　单纯照射组小鼠照射后逐渐死亡;照射移植组和IL-7Rα干预组小鼠移植后出现了典型的aGVHD症状,IL-7Rα干预组体征较照射移植组轻,生存时间较长,IL-7Rα干预组外周血白细胞计数+14、+21、+28天造血功能恢复情况与照射移植组比较[（4.53±0.21）×109／L、（3.63±0.06）×109／L、（4.31±0.04）×109／L与（1.81±0.05）×109／L、（1.32±0.04）×109／L、（1.76±0.04）×109／L],差异有统计学意义（t值分别为0.237、0.108、0.359,均P＜0.05）;肝、脾、皮肤组织的病理学结果显示,IL-7Rα干预组较照射移植组轻;嵌合体植入成功;移植后+7天血浆IL-7水平显著增高,随时间变化IL-7Rα干预组+14、 +21天 IL-7浓度与照射移植组比较[（194.32±1.02）、（131.63±1.54）pg／ml 与（330.24±8.08）、（184.09±2.05）pg／ml],差异有统计学意义（t值分别为1.590、1.285,均P＜0.05）。结论　建立了稳定的aGVHD小鼠模型;在aGVHD发生早期血浆IL-7水平显著增高;外源性IL-7Rα可降低血浆IL-7水平,从而减轻异基因骨髓移植后aGVHD的发生。     

不同淋巴细胞输注对非清髓小鼠异基因骨髓干细胞移植的影响

目的:建立小鼠非清髓异基因骨髓干细胞移植模型,探讨不同的供者淋巴细胞输注(donor lympho-cytes infusion DLI)对移植效果的影响及其机制。方法:受者鼠为Balb/c小鼠,供者鼠为C57b l/6小鼠,依据不同DLI将受者鼠随机分为A、B、C、D和E 5组,每组5只。5组均给予预处理,A组预处理后于移植d1给予供者小鼠全脾细胞1.0×107个;B组分别于移植后d1、7、14给予供者小鼠全脾细胞0.3×107个;C组于移植后d1、7给予去除CD8 细胞供者鼠脾细胞0.5×107个;D组于移植后d1、7给予供者鼠全脾细胞0.5×107个,E组为对照组,只作预处理,不作干细胞移植及DLI处理。观察各组嵌合状态、造血恢复情况、移植物抗宿主反应(graft versus host d isease GVHD)。结果:未移植组嵌合率为22.33%,为非特异性粘着,移植组小鼠嵌合率均在80%以上,与未移植组相比差别显著;除C组一只小鼠死亡外其余均存活,并于移植后20天自行恢复造血功能,但C组白细胞计数小于2.0×109/L持续到d16,恢复明显比其余组慢,GVHD评分A、B组间无明显统计学差异(P=0.173),C、D组间相比有统计学差异(P=0.033)。结论:建立非清髓小鼠异基因骨髓干细胞移植模型条件适宜,且去除CD8 细胞的DLI移植后GVHD比未去除组要严重,移植效果相对较差。     

山仙颗粒对Lewis肺癌瘤株转染中TNF-α和uPA的影响

目的研究山仙颗粒对Lewis肺癌瘤株转染的C57BL／6小鼠体内肿瘤坏死因子α（TNF—α）和尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）的影响及意义。方法40只小鼠适应性喂养1周后，随机取出10只作为空白对照组（A组）；其余的30只小鼠每只右腋皮下接种瘤细胞悬液0.2ml，再随机分成3组，每组10只，分别设为荷瘤对照组（B组）；金龙胶囊组（C组）；山仙颗粒组（D组）；4组动物分笼喂养，于接种24h后开始给药，A、B组每只小鼠每天用生理盐水0.2ml灌胃；C组用金龙胶囊悬液0.2ml灌胃；D组用山仙颗粒混悬液0．2ml灌胃，共灌胃21天。21天后脱颈椎处死小鼠，检测TNF—α与uPA水平。结果C、D组出瘤时间、移植瘤重、肺内转移灶个数、去瘤去肺后体重、血清TNF—α与血浆uPA水平与B组小鼠比较均有显著性差异（P〈0.05），C与D组肺转移灶个数比较有显著性差异（P〈0.01），其他均无显著性差异（P〉0．05）。结论山仙颗粒能使血清TNF—α水平升高和血浆uPA水平下降，从而显著抑制C57BL／6小鼠Lewis肺癌的生长和自发性肺转移。     

bcl-2、IL-6、IL-6R反义寡脱氧核苷酸对小细胞肺癌细胞作用的比较

目的: 探讨一种新型抗ATPase F1α抗体,人血管抑制和肿瘤转移相关蛋白（human angiostatin interacting and tumor metastasis involving protein,HAITMIP）抗体MAb3D5AB1（简称GX）对A549肺腺癌小鼠移植瘤的抑制作用。 方法：在C57BL/6小鼠右前腋窝接种A549肺腺癌细胞,制备小鼠荷瘤模型,32只荷瘤小鼠随机分为对照组（无任何处理）及A、B、C治疗组（分别腹腔注射125、250、500 ng/ml GX）。观察各组移植瘤小鼠肿瘤体积、生长延迟时间（tumor growth delay, TGD）及小鼠生存期。免疫组织化学法检测瘤组织内微血管密度。TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果：成功建立了荷A549肺癌小鼠模型,治疗组小鼠移植瘤的体积明显减小（P<0.05）、TGD随GX剂量增加而显著延长（P<0.01）、瘤组织内微血管密度明显减少（P<0.05）,TUNEL法检测发现各治疗组瘤细胞凋亡率均显著高于对照组（均P<0.01）。结论：GX可以抑制肿瘤新生血管生成,促进肿瘤细胞调亡,使A549肺腺癌小鼠移植瘤生长减慢,并延长小鼠生存期。     

解毒消瘕饮和扶正抑瘤方对肝癌移植瘤小鼠外周血中VEGF的影响

目的：探讨解毒消瘕饮和扶正抑瘤方对小鼠肝癌移植瘤血管生成的抑制作用。方法：40只ICR小鼠随机分为A组、B组、C组及D组,造模给药后20d采瘤、取血,计算抑瘤率及测定外周血中VEGF表达。结果：B组瘤重明显小于A组（P〈0．05）,抑瘤率为19％;A组和B组VEGF表达量均高于C、D两组,四组比较差异具有显著性（P〈0．01）：进一步两两比较表明,B组与A、C、D组之间差异显著（P〈0．01）;A与C、D组之间差异显著（P〈0．01）。结论：解毒消瘢饮和扶正抑瘤方影响小鼠肝癌移植瘤的VEGF表达。     

^125I放射性粒子对人食管癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用研究

目的：观察^125I粒子植入对人食管癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法：采用雄性BALB／C裸小鼠建立人食管癌Eca-109细胞株的裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤鼠随机分为5组（每组5只）：对照组（A组）、假手术组（B组）、低剂量组（C组,植入7．4×10^6Bq粒子1枚）、中剂量组（D组,植入14．8×10^6Bq粒子1枚）和高剂量组（E组,植入29．6×10^6Bq粒子1枚）。第30天检测各组移植瘤体积,并观察各组移植瘤组织病理学变化。结果：C、D、E组瘤体积与A组比较显著缩小,差异均有统计学意义（P〈0．05）,D、E组瘤体积与C组瘤体积相比均有统计学意义（均P〈0．05）,但D、E组之间瘤体积相比差异无统计学意义（P〉0．05）。B组和A组瘤体积相比差异无统计学意义（P〉0．05）,C、D、E植入后30d肿瘤体积抑瘤率分别为71．5％、90．8％、92．1％。结论：^125I粒子对人食管癌裸鼠移植瘤具有一定的抑制和杀伤作用。     

PD-1抑制剂对心肌炎症微环境及放射性损伤影响的实验研究北大核心CSCD

目的从免疫微环境的角度初探PD-1抑制剂对小鼠心肌损伤的影响及其潜在机制。方法建立小鼠放射性心肌损伤(RIMI)模型, 将20只C57BL/6小鼠随机分为4个组, 每组5只。A组为对照组;B组为PD-1抑制剂组;C组为单纯照射组, 心脏单次照射15 Gy;D组为照射+PD-1抑制剂组。照射后1个月麻醉处死小鼠, HE和Masson染色观察心肌组织形态学改变和评估心肌纤维化;流式细胞术检测心肌CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8淋巴细胞亚群及细胞因子(IL-4、IL-6、IL-17A、TNF-α、TGF-β1、INF-γ)水平;TUNEL检测心肌细胞凋亡率。结果照射后1个月, B组未见明显的心肌纤维化表现, C组和D组可见胶原纤维分布于心肌细胞间质。A、B、C、D组心肌胶原容积分数(CVF)分别为(1.97±0.36)%、(2.83±1.03)%、(5.39±0.77)%、(7.72±1.43)%, A组与B组间的CVF相似(P=0.314), 其余各组间均不同(均P<0.05)。与A组比较, B、C、D组的CD3+T淋巴细胞的绝对值和百分比均增高(均P<0.01), D组高于B组和C组(均P<0.01);A、C、B、D组的CD3+CD4+T淋巴细胞的绝对值和百分比相近(均P>0.05);D组的CD3+CD8+T淋巴细胞的绝对值和百分比都高于A、B、C组(P<0.001)。D组的IL-6、IL-17A、TGF-β1水平均高于A、B、C组(均P<0.001)。A、B、C、D组的凋亡指数逐渐增加, 各组间比较差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论 PD-1抑制剂可通过促进心肌免疫炎症反应加重RIMI。     

槲皮素联合顺铂对肺腺癌小鼠移植瘤Bcl-2和Bax表达的调控及意义

目的：观察槲皮素联合顺铂对肺腺癌LA795细胞的T739小鼠移植瘤的抑制作用，检测移植瘤中Bcl-2和Bax的表达水平及肿瘤细胞凋亡指数，探讨其作用机制。方法：将32只接种了LA795肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成对照组（A组）、顺铂组（B组）、槲皮素组（C组）、槲皮素＋顺铂组（D组）。用药16d后，观察肿瘤生长情况，接种后24d活杀各组小鼠，移植瘤标本称瘤体质量和测量体积，免疫组织化学和图像分析系统定量检测肿瘤组织的Bcl-2和Bax表达，原位凋亡TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果：B、C、D各用药组肿瘤的生长受到明显抑制，瘤体质量明显低于A组，其抑瘤率分别为38．57％、26．03％和51．58％，联合用药组抗瘤作用进一步增强。Bcl-2表达在A组高于B、C、D组，Bax表达在A组明显低于B、C、D组，各用药组与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；肿瘤细胞的凋亡指数在各用药组都比对照组明显提高，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：槲皮素联合顺铂可明显抑制肺腺癌细胞在小鼠体内的生长，其作用机制可能是通过调控肿瘤中Bcl-2和Bax的表达，从而抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。     

不同胆道引流方式对高位恶性胆道梗阻疗效的影响

 目的 探讨不同胆道引流方式对高位恶性胆道梗阻（malignant high biliary obstruction, MHBO）疗效的影响,为临床治疗方式的选择提供参考。方法 随访MHBO患者164例,其中行胆道完全外引流18例（A组）、胆道单支架植入并对侧外引流48例（B组）、胆道优势侧引流34例（C组）、胆道双支架植入64例（D组）,观察术后近、远期疗效。结果 4组患者术前ALT、AST、TBIL、DBIL与术后第3、7、14天比较,差异均有统计学意义（均P<0.05）;4组患者术后第7天的组间比较,A、B、D三组下降程度高于C组,差异均有统计学意义（均P<0.05）;4组患者术后第14天的组间比较,D组下降程度明显高于A、B、C三组,B组高于A、C两组,A组高于C组,差异均有统计学意义（均P<0.05）。4组患者术后第21天TBIL均值与术前比较,D组下降程度明显高于A、B、C三组,B组高于A、C两组,A组高于C组,差异均有统计学意义（均P<0.05）。4组患者术后生存期比较,D组中位生存期为（355.00±22.21）天,远高于A、B、C三组,差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论 胆道双支架植入实现了胆汁的充分内引流,对迅速消除黄疸具有明显的优越性,明显的提高了患者的生存质量及延长了生存期。     

人参皂苷Rg3与顺铂对荷卵巢癌裸鼠免疫功能及肿瘤相关蛋白的影响

[目的]观察人参皂苷Rg3联合顺铂对荷高转移人卵巢癌细胞系HO．8910PM转移瘤裸鼠白细胞介素．2（IL-2）、干扰素-γ（INF-γ）及nm23、血管内皮生长因子（VEGF）及增殖细胞核抗原（PCNA）的影响。[方法]移植瘤裸鼠随机分成6组腹腔给药：荷瘤空白对照组fA组）;不同Rg3浓度药物组：2．5mg／kg（B组）、5mg／kg（C组）和lOmg／kg（D组）;Rg3和顺铂联用组（E组）以及顺铂阳性对照组（F组）。分别测定各组裸鼠转移瘤体积变化、IL-2、INF-γ、nm23、VEGF及PCNA的变化情况。[结果]与A组比较,E组（P〈0．05）和F组（P〈0．01）小鼠血清中IL-2、INF-γ含量均能显著降低;B（P〈0．05）、C、D和E（P〈0．01）组小鼠移植瘤组织nm23的表达均增强。Rg3给药后,小鼠移植瘤组织VEGF、PCNA表达均呈下降趋势。[结论]人参皂苷Rg3和顺铂联用具有协同抗肿瘤及减毒的作用。Rg3可能通过增强mm23的表达．使VEGF及PCNA表达呈下降趋势等多途径产生抗肿瘤作用。     

Allo-HSCT患者血浆IL-17和IL-23与aGVHD相关性分析

目的：异基因造血干细胞移植（Allo—HscT）患者移植前后血浆中IL-17、IL-23浓度与急性移植物抗宿主病（acute graft versus host disease,aGVHD）相关性分析。方法：采用双夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测患者血清中IL-17和IL-23浓度,采用逆转录聚合酶链反应法（ReahimePCR）检测IL-17mRNA和IL-2mRNA相对表达量。结果：1）移植后aGVHD阴性组和aGVHD阳性组患者在性别、年龄、疾病类型、组织类型和预处理方案差异均无统计学意义,P〉0．05。2）各组血浆中IL-17与IL-23浓度检测结果,aGVHD阳性组IL-17的浓度为（330．0±11．5）ρg／mL,显著高于对照组的（109．6±7．6）ρg／mL和aGVHD阴性组的（243．1±16．4）ρg／mL,P值均〈0．00l;aGVHD阳性组IL-23的浓度为（250．6±14．3）ρg／mL,显著高于对照组的（101．5±9．6）ρg／mL和aGVHD阴性组的（111．0±16．3）ρg／mL,P值均〈0．001。3）aGVHD阳性组血浆中IL-17与IL23浓度检测结果,aGVHD发生当天血浆中IL-17的浓度为（330．0±11．5）Dg／mL,IL-23的浓度为（250．6±14．3）9g／mL,显著高于aGVHD发生前2周和aGVHD发生后1、2和3周IL-17和IL-23的浓度,P值均〈0．05。IL-17、IL-23的浓度在aGVHD发生当天达到高峰,随着症状的控制,逐渐下降。4）aGVHD阳性患者IL-17mRNA的相对表达量为,3．232±1．137,显著高于对照组的1．432±0．954和aGVHD阴性组的1．672±0．896,P值均〈0．001;aGVHD阳性患者IL-23mRNA的相对表达量为2．142±1．194,显著高于对照组的1．242±0．752和aGVHD阴性组的1．496±0．653,P值均〈0．001。结论：A110HSCT后血浆中IL-17、IL-23与aGVHD的发生呈正相关,动态检测allo—HSCT后IL—17和IL-23浓度的变化,可能为临床上预测或诊断aGVHD的发生提供预警或依据。     

不同预处理方法对移植物抗宿主病影响的实验研究

目的　探讨不同全身放射治疗 (TBI)剂量在异基因移植中对移植物抗宿主病 (GVHD)的发生和严重程度的影响。方法　将受体大鼠随机分为A、B、C、D 4个组 ,移植当天A、B组和C、D组分别接受 2Gy和 6Gy的全身照射 ,随后给A、C 2个组移植供体鼠骨髓细胞 ,B、D组作为对照组回输等量生理盐水。观察生存期、临床GVHD表现和病理改变等。结果　A、B、C、D组生存期分别为 2 4 .6、>5 0 .0、17.8、2 0 .2d ,其中A与B、C与D及A与C组间差异有显著性意义 (t值分别为 18.3、2 .6 0、4 .4 0 ,P值均 <0 .0 5 )。临床GVHD评分A、C组分别为 2 .4、6 .8,两组差异有显著性意义 (t=7.0 0 ,P <0 .0 1)。肝脏及结肠病理检查A、C组间差异有极显著性意义 (P <0 .0 1)。结论　A组大鼠生存期比C组显著延长 ,A组GVHD发生率和严重程度比C组明显降低。     

血清细胞因子水平与急性移植物抗宿主病的关系

目的：探讨异基因造血干细胞移植前后血清细胞因子的变化与急性移植物抗宿主病（acute graft versus host disease，aGVHD）的关系。方法：采用放射免疫的方法测定59例异基因造血干细胞移植患者不同时间点血清细胞因子IL-1、IL-2、IL-4、TNF的浓度，并分析细胞因子与aGVHD的关系。结果：59例患者在干细胞输入后血清细胞因子IL-1、IL-2均升高，14例Ⅱ-ⅣaGVHD患者的IL-1、IL-2浓度明显高于45例0-ⅠaGVHD患者（P值均〈0．01）。Ⅱ-ⅣaGVHD患者的各检测时间IL-4水平无显著性差异，0-ⅠaGVHD患者IL-4水平明显高于Ⅱ-ⅣaGVHD组（P〈0．05）。0-ⅠaGVHD患者血清TNF浓度无显著变化，Ⅱ-ⅣaGVHD组21dTNF水平明显升高，而且高于0-ⅠaGVHD组（P〈0．01）。患者细胞因子水平出现差异的时间（14d-21d）早于aGVHD的出现时间（中位时间28d）。结论：造血干细胞移植后患者血清细胞因子的变化与aGVHD的发生发展有着明显的相关性，监测细胞因子的动态变化对预测aGVHD发生及严重程度有一定的作用。     

PEDF下调 HIF-1α表达抑制缺氧状态下NSCLC细胞增殖、迁移的作用机制

目的:研究色素上皮衍生因子（PEDF）对缺氧状态下非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、迁移和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的影响。方法:体外培养NSCLC细胞A549,氯化钴（CoCl2）100 μmol/L 模拟缺氧环境。实验分为4组:正常对照组（A组）、氯化钴干预组（B组）、氯化钴＋PEDF 50 ng/ml干预组（C 组）及氯化钴＋PEDF 200 ng/ml干预组（D组）。MTT检测各组细胞增殖能力,进行划痕实验,在光镜下观察实验组和对照组细胞的移行情况;进行Transwell小室侵袭实验,计算细胞穿透数;进行ELISA法检测各组细胞培养液上清中HIF-1α、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达水平。结果:细胞增殖能力:B组较A组增加,C组较B组降低,D组较C组降低,各组间差异均具有统计学意义（P<0.05）;细胞迁移能力:B组较A组增加,C组较B组降低,D组较C组降低,各组间差异均具有统计学意义（P<0.05）;细胞穿透数:B组较A组增多,C组较B组减少,D组较C组减少,各组间差异均具有统计学意义（P<0.05）;HIF-1α和VEGF的表达水平:B组较A组升高,C组较B组下降,D组较C组下降,各组间差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论:肺癌A549细胞在缺氧环境较常氧具有更强的增殖力和移行能力;可以分泌HIF-1α,HIF-1α对VEGF的表达有一定的促进作用。PEDF对缺氧状态下A549细胞高表达的VEGF具有一定抑制作用,且该抑制作用可能与PEDF调控HIF-1α有关。     

趋化因子MCP-3协同B7诱导小鼠抗宫颈癌的主动免疫效果

目的：探讨趋化因子MCP－3能否增强B7基因诱导小鼠抗宫颈癌主动免疫的效果。方法：实验组：将pCMV/MCP-3以基因药物的方式肌注615小鼠,同时用B7^ U14细胞疫苗在同一部位免疫小鼠,再将野生型U14移植入已免疫的小鼠。对照组A：用B7^ U14细胞疫苗＋生理盐水同时免疫615系小鼠;对照组B：用pCMV/MCP-3＋野生型U14免疫小鼠;其它处理同治疗组。观察3组小鼠的成瘤情况、生存期。用以上3种方案分别处理小鼠,2周后分别取脾T淋巴细胞用MTT法体外检测其对U14的杀伤率。结果：经方差分析比较3组在移植U14后不同时程瘤体平均体积有显著性差异（P＝91．86,P＜0．001）。3组平均生存期分别为100,63,37d,经Kaplan-Meier曲线比较,差异具显著性（P＜0．01）。体外检测经MCP－3和BU^ U14疫苗处理的小鼠,其T淋巴细胞在不同效靶比对U14的杀伤效率均明显高于经MCP－3和U14疫苗处理者（F＝40．62,P＜0．001）。结论：因子MPC－3能增强B7基因修饰的U14细胞疫苗的抗肿瘤效果,其增强作用需疫苗有B7的表达为前提。     

CD80 CD86和CD137L基因联合表达对小鼠肝癌种植模型肿瘤免疫原性的影响

目的探讨CD80、CD86和CD137L基因联合表达对肿瘤免疫原性的影响。方法按接种变异瘤株不同,将BALB／C小鼠随机分成A组（H22．Wt细胞）、B组（H22-neo细胞）、C组（H22-CD80／CD86^＋细胞）、D组（H22．CD137L^＋细胞）、E组（H22-CD80／CD86／CD137L^＋细胞）5组,建立H22．BALB／C小鼠荷肝癌模型,A、B组为对照组。观察小鼠成瘤率、成瘤潜伏期、荷瘤鼠存活率及肿瘤增殖情况。通过复种试验观察转基因对H22变异株免疫原性和机体免疫保护作用的影响。结果E组首次接种成瘤率仅有50．0％,显著低于其余4组（P〈0．01）。首次接种后,C组荷瘤鼠肿瘤生长受到明显抑制,有2只荷瘤鼠肿瘤完全消退。E组肿瘤生长所受抑制较C组更为明显,肿瘤峰值体积显著小于C组,且有3只荷瘤鼠肿瘤完全消退。其余3组荷瘤鼠未见肿瘤完全消退。与A、B、D组相比,C、E组荷瘤鼠生存率显著改善（P〈0．01）,而C、E两组荷瘤鼠生存率差异无统计学意义（P〉0．05）。复种试验表明,C、E组荷瘤鼠再次成瘤率低于对照组,E组与C组差异也有统计学意义（P〈0．01）;第3次接种后,E组成瘤率显著低于C组（P〈0．01）。E组中5只首次接种未成瘤的小鼠,于第21天重复接种H22-Wt细胞,小鼠100％排斥肿瘤,于第56天第3次接种H22／Wt细胞,小鼠仍然100％排斥肿瘤。结论CD80＋CD86和CD137L单独或者联合表达均可显著降低野生型H22细胞株致瘤性,CD80、CD86和CD137L基因联合表达显著改善了野生型H22细胞的免疫原性。     

癸酸能够活化CD8+ T细胞并提高其抗肿瘤免疫反应能力

目的：探究中链脂肪酸癸酸对CD8+ T细胞活化的影响,及其对CD8+ T细胞介导的抗肿瘤免疫反应的作用和机制。方法：建立C57BL/6小鼠黑色素瘤B16F10 皮下荷瘤模型,随机分为癸酸组（10 mg/kg 癸酸灌胃）和对照组（等量溶剂灌胃）,观察癸酸对小鼠肿瘤生长以及生存率的影响,采用流式细胞术检测肿瘤微环境中浸润CD8+ T细胞的活化水平。建立B16F10-OVA和OT-I T细胞共培养体系,采用流式细胞术检测癸酸对CD8+ T细胞的肿瘤细胞杀伤能力的影响。采用α-CD8抗体清除B16F10 荷瘤小鼠体内CD8+ T细胞,观察对小鼠肿瘤体积的影响。小鼠原代CD8+ T细胞经癸酸处理后,采用WB、ELISA及qPCR、流式细胞术检测T细胞受体（TCR）活化、效应细胞因子产生以及增殖和代谢水平。在B16F10荷瘤小鼠模型中,观察α-PD-1抗体联合癸酸给药对小鼠肿瘤生长以及生存率的影响。结果：在小鼠黑色素瘤荷瘤模型中,与对照组相比,癸酸组小鼠移植瘤体积显著降低且生存率显著提高（均P<0.05）,肿瘤浸润CD8+ T细胞IFN-γ和TNF-α的表达水平显著升高（P<0.01）。经癸酸处理的OT-I T细胞对B16F10-OVA细胞的杀伤水平显著升高（P<0.01）。在荷瘤小鼠模型中用α-CD8 抗体清除CD8+ T 细胞后,癸酸对移植瘤的抑制作用显著降低（P<0.000 1）。小鼠原代CD8+ T细胞经癸酸处理后,TCR活化水平显著升高、细胞因子IL-2和IFN-γ的产生增多、线粒体代谢水平显著上调（均P<0.05）。在黑色素瘤荷瘤小鼠模型中,癸酸与α-PD-1抗体联用,能够显著抑制小鼠移植瘤生长并提高其生存率（均P<0.05）。结论：癸酸能够促进CD8+ T细胞活化、增强其抗肿瘤免疫反应能力。     

解毒消癥饮和扶正抑瘤方对肝癌移植瘤小鼠外周血中VEGF的影响

目的: 探讨解毒消癥饮和扶正抑瘤方对小鼠肝癌移植瘤血管生成的抑制作用.方法: 40只ICR小鼠随机分为A组、B组、c组及D组,造模给药后20d采瘤、取血,计算抑瘤率及测定外周血中VEGF表达.结果: B组瘤重明显小于A组(P<0.05),抑瘤率为19%;A组和B组VEGF表达量均高于C、D两组,四组比较差异具有显著性(P<0.01):进一步两两比较表明,B组与A、C、D组之间差异显著(P<0.01);A与C、D组之间差异显著(P<0.01).结论: 解毒消癥饮和扶正抑瘤方影响小鼠肝癌移植瘤的VEGF表达.     

建立乳腺癌骨转移动物模型方法的比较研究

 目的　对四种乳腺癌骨转移动物模型的构建方法进行比较研究。方法　32只4～6周龄雌性裸鼠随机分为A、B、C、D 4组,每组8只,每只裸鼠以5×105个MDA-MB-231细胞按分组分别注射入左第二乳房脂肪垫、尾静脉、左心室和左胫骨骨髓腔。观察A组裸鼠乳腺原位成瘤情况、全组注射致死情况和全组49 d后骨转移发生情况。结果　A组乳腺原位移植瘤形成率为87.5 %（7／8）。仅C组注射致死裸鼠1只。各组骨转移发生率分别为：0（0／8）、12.5 %（1／8）、71.4 %（5／7）、100 %（8／8）。A组和C组、A组和D组、B组和C组、B组和D组之间骨转移发生率差异均有统计学意义。结论　肿瘤细胞经乳腺原位移植和尾静脉注射移植两种方法不适用于建立乳腺癌骨转移模型;肿瘤细胞经左心室注射移植和骨原位移植方法能稳定地获得骨转移,是乳腺癌骨转移动物模型构建的可行方法。     

槲皮素联合川芎嗪对小鼠Lewis 肺癌生长的抑制作用

 目的 探讨槲皮素联合川芎嗪对小鼠Lewis肺癌生长的抑制作用及其机制。方法 复制C57BL小鼠Lewis肺癌模型，将40只接种Lewis肺癌的C57BL小鼠随机分成4组：对照组（A组）、槲皮素组（B组）、川芎嗪组（C组）、槲皮素＋川芎嗪组（D组），每组10只。连续用药20日，观察移植瘤生长情况，于接种后第22天处死各组小鼠，采用免疫组化半定量检测肿瘤组织微血管密度（MVD）、血管内皮生长因子（VEGF）及增殖核抗原（PCNA）的表达水平，用原位凋亡TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数（AI）。结果 （1）B、C、D组肿瘤的生长明显受到抑制，瘤重明显低于A组，其抑瘤率分剐为39．87％、35．45％、54．58％，D组抑瘤率明显高于B、C组，差异有显著性（P〈0．05）。（2）B、C、D组MVD、VEGF及PCNA表达水平明显低于A组（P〈0．05或0．01），尤其是D组表达最低。B、C、D组AI较A组增高（P〈0．05或0．01），D组最高。结论 槲皮素与川芎嗪联合用药可明显抑制Lewis肺癌移植瘤的生长，其作用机制与抑制微血管生成、抑制细胞增殖和促进细胞凋亡有关。