miR-339-3P靶向IP6K2基因调控前列腺癌EMT发生的功能研究

目的 探讨mi R-339-3P靶向六磷酸肌醇激酶2(IP6K2)对前列腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间充质转化(Epithelial Mesenchymal Transition EMT)的作用及其机制。方法 应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测前列腺癌组织和癌旁组织中mi R-339-3P和IP6K2的表达水平。利用细胞转染技术向人前列腺癌细胞PC-3分别转染mi R-339-3P-mimics、mi R-339-3P inhibitors、si-IP6K2(抑制表达)和PcDNA-3.1(+)-IP6K2(过表达),CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期情况,细胞划痕检测细胞迁移能力,Western blot检测靶基因IP6K2和EMT相关因子的蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证mi R-339-3P和IP6K2的靶向结合关系。结果qRT-PCR的结果显示,前列腺癌组织中mi R-339-3P表达水平低于癌旁组织,IP6K2表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。mi R-339-3P-mimics抑制IP6K2表...     

miR-520a-5p通过调控有氧糖酵解诱导前列腺癌细胞多西他赛耐药

目的：探索mi R-520a-5p对前列腺癌增殖能力和多西他赛耐药性的影响及其作用机制。方法：使用RT-q PCR检测PC-3/DU145前列腺癌细胞及RWPE-1前列腺正常上皮细胞中mi R-520a-5p表达水平;使用免疫印迹检测mi R-520a-5p是否调控糖酵解关键酶己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)和磷酸果糖激酶(phosphofructokinase,PFKM)表达水平;使用CCK-8实验检测mi R-520a-5p对前列腺癌细胞增殖能力和多西他赛耐药性的影响;使用ELISA评估培养上清中葡萄糖消耗水平和乳酸生成水平。依据转染物的不同,将所有细胞分成4组：minic组、minic NC组、inhibitor组、inhibitor NC组。结果：mi R-520a-5p在前列腺癌细胞中表达下调(P<0.001)。与minic NC组比较,minic组可显著降低PC-3和DU145前列腺癌细胞的增殖能力(P<0.001)、多西他赛半抑制浓度(IC₅₀)、葡萄糖消耗水平和乳酸生成水平(P<0.001);与inhibitor N...     

miR-590-5P通过下调靶基因S100A 10表达、抑制Wnt信号通道调控肝癌细胞增殖

目的:研究miR-590-5P对肝癌细胞增殖能力的影响以及参与HCC发生发展的机制。方法:利用QPCR对肝癌细胞株mi R-590-5P的表达谱系进行分析和验证,生物信息技术预测S100A10可作为miR-590-5P的潜在靶基因,并通过实时定量PCR以及Western blot进行验证。通过慢病毒载体在肝癌细胞株HepG2中过表达miR-590-5P,CCK-8法检测转染后细胞增殖,流式细胞技术检测转染后细胞周期变化,Western blot检测转染后细胞Wnt信号相关蛋白表达水平。结果:荧光定量检测结果显示,miR-590-5P在人肝癌细胞中低表达,而S100A10蛋白在肝癌细胞中高表达。S100A10 3’UTR luciferase报告系统验证表明,mi R-590-5P可以通过结合S100A10 3’UTR而抑制报告基因的表达。通过慢病毒系统在HepG2细胞中高表达miR-590-5P,可有效抑制S100A10基因的表达。在肝癌细胞HepG2中过表达mi R-590-5P,可通过调控细胞周期,明显抑制Wnt信号相关蛋白:Wnt5a、cMyc、Cyclin D1的表达水平,促进E-cadherin、Caspase3的表达,加速β-catenin蛋白的磷酸化,而调控细胞增殖。结论:mi R-590-5P在人肝癌细胞中低表达,而S100A10基因在人肝癌细胞中过表达,S100A10为mi R-590-5P的靶基因。mi R-590-5P在肝癌细胞中过表达,可有效抑制S100A10基因的表达,抑制Wnt通路的激活,使肿瘤细胞停滞在G1期,从而参与肝癌细胞增殖进程。     

microRNA-574-3p抑制结肠癌细胞增殖的机制研究

目的观察微小RNA-574-3p(micro RNA-574-3p,mi R-574-3p)对结肠癌细胞增殖的影响,并探讨其潜在的作用机制。方法采用结肠癌细胞HCT116作为实验对象,细胞转染mi R-574-3p mimic和阴性对照分别作为mi R-574-3p mimic组和阴性对照组,同时以正常HCT116细胞作为空白对照组。RT-qPCR检测细胞mi R-574-3p表达; CCK-8法检测细胞增殖活力;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞周期变化; Western blot法检测Cyclin A1、CDK2、PCNA、Cdc25A及P53蛋白表达变化。结果与阴性对照组相比,mi R-574-3p mimic组mi R-574-3p表达明显上调(P0.01),且在36～72 h细胞活力明显降低(P0.01)。与阴性对照组相比,mi R-574-3p mimic组细胞克隆形成率显著降低(P0.01),同时S期细胞比例显著增加(P0.01)。相较于阴性对照组,mi R-574-3p mimic组Cyclin A1、CDK2、PCNA、Cdc25A蛋白表达显著下调(P0.01),P53蛋白表达明显上调(P0.01)。阴性对照组与空白对照组上述各指标均无明显差异。结论 mi R-574-3p可抑制结肠癌HCT116细胞增殖,这可能与下调Cyclin A1、CDK2、PCNA、Cdc25A及上调P53蛋白表达,最终诱导细胞S期阻滞有关。     

TTF-1和PTEN基因在子宫内膜癌早期病变中的表达意义

目的 分析甲状腺转录因子-1 (TTF-1) 和磷酸酶与张力蛋白同源物 (PTEN) 基因在子宫内膜癌早期病变中的表达意义.方法 选择子宫内膜癌41例、增生性子宫内膜38例和正常子宫内膜13例, 采用荧光定量PCR法 (RT-PCR) 检测3种子宫内膜中TTF-1和PTEN mRNA表达量, 分析其与临床病理特征的关系;RT-PCR法检测3种子宫内膜中mi R-135b、mi R-125b和Snail mRNA表达量, 分析其与TTF-1和PTEN mRNA表达量的相关性.结果 子宫内膜癌组织中TTF-1和PTEN mRNA表达量显著低于其他2组, 正常子宫内膜组织中表达量最高, 差异有统计学意义 (P<0.05) .绝经与否、腺癌和鳞癌间TTF-1和PTEN mRNA表达水平比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) ;FIGO分期增加、肌层浸润增加、盆腔淋巴结转移的TTF-1和PTEN mRNA表达水平明显降低, 差异有统计学意义 (P<0.05) .子宫内膜癌中mi R-135b mRNA的表达水平显著高于其他2组, 正常子宫内膜中最低;mi R-125b和Snail mRNA的表达水平显著低于其他2组, 正常子宫内膜中最高;差异有统计学意义 (P<0.05) .TTF-1和PTEN mRNA表达量与mi R-135b mRNA表达量呈负相关, 与mi R-125b和Snail mRNA表达量呈正相关 (P<0.05) .ROC模型得出, TTF-1 mRNA诊断子宫内膜癌的敏感性86.5%, 特异性84.2%, 准确性0.823, 95%CI=0.7620.921, P=0.012;PTEN mRNA诊断子宫内膜癌的敏感性85.3%, 特异性83.6%, 准确性0.842, 95%CI=0.7850.936, P=0.010.结论 TTF-1和PTEN基因可作为子宫内膜癌早期诊断的分子标志物, 与临床特征密切相关, 可能通过调控肿瘤细胞增殖活性影响肿瘤进程.     

微小RNA-152靶向DcR3对HepG2细胞相关信号通路的作用

目的研究微小RNA-152(mi R-152)与其潜在靶基因Dc R3在肝癌组织中表达的关系及mi R-152在肝癌细胞系Hep G2中对Dc R3及相关信号通路的影响。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)检测89例肝癌组织中的mi R-152表达水平,并使用免疫组织化学检测其Dc R3蛋白表达水平,对比二者相关性;使用生物信息学软件对二者潜在靶向关系进行预测;将mi R-152抑制剂及模拟物转染至肝癌细胞系Hep G2中,使用蛋白印迹法测Dc R3蛋白及相关基因Wnt-1,DNMT-1,ERK1/2及AKT表达情况。结果肝癌组织中,mi R-152与Dc R3蛋白表达水平呈负相关(r=-0.347,P=0.002);软件预测发现mi R-152与Dc R3 3′-UTR序列呈互补关系;使用mi R-152模拟物后,Dc R3蛋白水平明显下降,同时Wnt-1,DNMT-1,p-ERK1/2及p-AKT表达也明显下降。结论在肝癌中,Dc R3可能为mi R-152的靶基因,mi R-152可通过靶向Dc R3而影响相应的增殖及凋亡通路。     

miR-29b的作用靶点及其对Huh7细胞增殖及凋亡的干预作用

目的探讨mi R-29b(micro RNA-29b)的作用靶点及其对肝肿瘤细胞系Huh7细胞增殖及凋亡的干预作用。方法荧光定量PCR检测正常肝细胞系LO2及肝癌细胞系Huh7的mi R-29b和Mcl-1表达水平。通过生物信息学分析预测Mcl-1基因是否受micro RNA调控。将mi R-29b模拟物通过Lipofectamine 2000顺时转染Huh7细胞,检测mi R-29b对Mcl-1表达水平的影响。MTT法检测mi R-29b模拟物转染对Huh7细胞增殖的影响。Annexin V/PI染色法检测mi R-29b对Huh7细胞凋亡的影响。结果肝肿瘤细胞相比于正常肝细胞高表达Mcl-1(3.42±0.15比1.00±0.04,P0.05)低表达mi R-29b(0.43±0.04比1.00±0.06,P0.05),在肝癌细胞中转染mi R-29b可使Mcl-1的表达水平下降(0.37±0.03比1.03±0.07,P0.05),转染mi R-29b可抑制Huh7细胞的增殖(0.85±0.11比1.68±0.17,P0.05)并诱导其发生凋亡[(28.4±2.10)%比(3.6±0.06)%,P0.05]。结论 Mi R-29b下调Huh7细胞Mcl-1蛋白的表达并诱导其发生凋亡。     

MicroRNA-19a/b与胃癌增殖、凋亡及临床病理特征的关系

目的 探讨microRNA-19a/b(miR-19 a/b)对人胃癌细胞的增殖和凋亡的影响及可能机制,并研究miR-19a/b的表达量与胃癌临床病理特征的关系.方法 建立稳定过表达miR-19a/b的SGC7901细胞系,以MTT比色法及平板克隆形成实验检测转染miR-19a/b后细胞增殖变化、Annexin V-FITC/PI双柒法检测细胞凋亡变化,Western blot检测ERK、p-ERK、AKT、p-AKT及PTEN的蛋白表达变化,实时定量PCR方法检测分析miR-19a/b与胃癌组织分化程度、TNM分期及淋巴结转移的关系.结果 在SGC7901细胞中过表达miR-19a/b后产生以下效应:细胞增殖能力增加,MTT实验显示转染miR-19a及miR-19b后检测72 h的细胞增殖能力与对照组相比分别增加2.2倍和1.6倍,平板克隆实验显示转柒miR-19a及miR-19b后细胞的克隆形成能力与对照组相比分别增加3.6倍和3.0倍;细胞凋亡减少,转染miR-19a及miR-19b后细胞的凋亡能力与对照组相比分别降低53％和33％,与对照组相比,p-AKT、p-ERK蛋白表达水平增加,PTEN蛋白表达水平降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).在58例胃癌组织标本检测中,miR-19a/b的miRNA表这水平与年龄、性别、分化程度无关(P＞0.05),而与TMN分期、淋巴结转移成负相关(P＜0.05).结论 miR-19a/b可促进胃癌细胞增殖、抑制细胞凋亡,且与胃癌的TMN分期、淋巴结转移呈负相关.     

抑癌PTEN基因联合p53基因转染对前列腺癌PC-3m细胞凋亡的影响

目的研究抑癌PTEN基因联合p53基因转染对前列腺癌PC-3m细胞凋亡的影响。方法构建表达载体：空质粒pEGFP—N1、pEGFP—N1-PTEN质粒、pEGFP—N1-p53质粒及pEGFP—N1-PTEN—p53质粒,体外分别转染到前列腺癌Pc-3m细胞中,观察它们转染后的荧光表达情况;采用RT—PCR法检测目的基因表达;Westernblotting法检测目的PTEN蛋白和P53蛋白的表达;用MTT法观察细胞增殖抑制情况并绘制生长抑制曲线;AnnexinV—FITC／PI双染流式细胞术检测PTEN基因和p53基因对前列腺癌PC-3m细胞凋亡的影响。结果荧光显微镜下观察到PTEN、p53及两个基因同时在PC-3m细胞系中成功表达;RT—PCR检测结果显示,与PTEN基因单转染组、p53基因单转染组和空载体转染组相比联合转染组mRNA在PC-3m细胞系中表达明显增加俨〈0．05）;Westernblotting法检测同样发现,联合转染组PTEN蛋白及P53蛋白表达明显高于PTEN基因单转染组、p53基因单转染组和空载体转染组俨〈0．05）;联合转染组细胞凋亡率明显高于空载体转染组、PTEN基因单转染组和p53基因单转染组（P〈0．05）。结论PTEN基因与p53基因联合转染能诱导前列腺癌PC-3m细胞凋亡．这种联合转染可能对前列腺癌的基因治疗具有潜在的应用价值。     

冠心病患者外周血单核细胞中miR-125a-5p、miR-193b的表达

目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease, CHD)患者外周血单核细胞中mi R-125a-5p、mi R-193b的表达水平。方法收集研究对象共102例,分为四组,其中对照组25例(A组),稳定型心绞痛组22例(B组),不稳定型心绞痛组26例(C组),急性心肌梗死组29例(D组)。抽取静脉血,进行单核细胞分离、提取总RNA,实时荧光定量(RT-q PCR),检测外周血单核细胞中mi R-125a-5p、mi R-193b表达水平。结果与A组比较,B组、C组、D组mi R-125a-5p、mi R-193b表达水平显著降低(P <0.01);与B组比较,C组、D组mi R-125a-5p、mi R-193b表达水平显著上调(P <0.01);而C组和D组之间mi R-125a-5p、mi R-193b表达水平差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 mi R-125a-5p、mi R-193b可能参与动脉粥样硬化的发生和进展,可能为动脉粥样硬化治疗的新靶点。     

丙烯酰胺对SH-SY5Y神经细胞凋亡和 miR-21表达的影响

目的:探讨丙烯酰胺(AA)对人SH-SY5Y神经细胞凋亡和miR-21表达的影响?方法:不同浓度丙烯酰胺作用于人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞24 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定丙烯酰胺对SH-SY5Y细胞活力的影响,Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡,real-time PCR检测miR-21表达水平,Western blot检测PTEN?p-AKT?AKT?Bcl-2?Bax?caspase 9 和caspase 3蛋白表达?结果:丙烯酰胺剂量依赖性地降低SH-SY5Y细胞活性,Hoechst 33258染色显示明显细胞凋亡形态变化;丙烯酰胺显著降低SH-SY5Y细胞miR-21的表达,同时升高PTEN?Bax?caspase 9?caspase 3水平并降低p-AKT和Bcl-2表达?结论:丙烯酰胺可通过线粒体途径诱导SH-SY5Y神经细胞凋亡,其机制可能与丙烯酰胺引起miR-21表达下调有关?     

lncRNA TTN-AS1靶向抑制miR-1271的表达对肺癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制

目的：探讨lncRNA TTN-AS1调控miR-1271表达对肺癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制。方法：在人肺癌A549细胞中转染TTN-AS1 siRNA或miR-1271 mimics,采用qRT-PCR检测TTN-AS1和miR-1271的表达,CCK-8实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测PI3K、p-AKT、PCNA、E-cadherin和cleaved caspase 3表达。共转染miR-1271 inhibitors和TTN-AS1siRNA,观察抑制miR-1271对抑制TTN-AS1诱导的A549细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。双荧光素酶报告基因实验检测TTN-AS1和miR-1271及miR-1271和PDK1的靶向作用关系,Western blot分析过表达或抑制TTN-AS1/miR-1271对PDK1表达的影响。结果：抑制TTN-AS1及过表达miR-1271均可明显抑制A549细胞增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡,下调PI3K、p-AKT和PCNA表达,上调E-cadherin和cleaved caspase 3表达（P ＜0.05）。抑制miR-1271可逆转抑制TTN-AS1对A549细胞增殖和侵袭能力的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用。TTNAS1和PDK1与miR-1271均存在靶向调控关系。结论：lncRNA TTN-AS1可通过靶向调节miR-1271/PDK1并抑制PI3K/AKT信号通路降低A549细胞增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡。     

MicroRNA-20b在卵巢癌细胞中的表达及对增殖和凋亡的影响

探讨microRNA-20b（miR-20b）在卵巢癌细胞系中的表达及对增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定miR-20b 在卵巢癌细胞系A431、SKOV3 及正常卵巢上皮细胞系Hose 中的相对表达量,将SKOV3 细胞系分成未转染对照、阴性对照及miR-20b 模拟物组,用Lipofectamine2000 分别不转染、转染miR-20b scramble 和miR-20b mimics,CCK8 实验测定3 组细胞增殖能力,流式细胞术测定3 组细胞凋亡,Western blot测定张力蛋白同源在10 号染色体有缺失的磷酸酶（PTEN）、裂解型聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）的相对表达量。结果qRT-PCR示A431、SKOV3细胞系miR-20b 相对表达量较Hose 细胞系低;miR-20b 模拟物组在0、24、48、72 及96 h的OD45 nm 值低于未转染对照组和阴性对照组;miR-20b 模拟物组凋亡率高于阴性对照组和未转染对照组;miR-20b 模拟物组PTEN 相对表达量低于阴性对照组,裂解型PARP蛋白相对表达量高于阴性对照组。结论miR-20b 抑制卵巢癌细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与下调PTEN 和上调PARP 蛋白表达有关。     

miR-127对皮肤鳞状细胞癌细胞生物学行为调控作用研究

目的探讨miR-127对皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)细胞的生物学行为调控作用。方法收集皮肤鳞癌组织、癌旁正常组织标本,采用实时定量PCR检测miR-127在2组标本中的表达水平。调控鳞癌细胞株A431中miR-127表达水平,检测鳞癌细胞增殖、侵袭能力的变化。通过生物信息学预测网站及分子生物学方法验证miR-127的作用靶点。结果miR-127在皮肤鳞癌组织中表达明显高于癌旁组织(P < 0.01)。相较于HaCaT细胞,miR-127表达水平在A431细胞以及HSC-5细胞中显著升高,差异有统计学意义(P < 0.05)。上调miR-127表达后,A431细胞的增殖及侵袭能力显著增强;下调miR-127的表达后,A431细胞的增殖及侵袭能力受到抑制(P < 0.05)。通过双荧光素酶报告基因实验发现miR-127可以与PTEN直接结合,调控miR-127后PTEN在蛋白水平的表达发生改变(P < 0.05)。结论miR-127参与调控鳞癌细胞的生物学行为,miR-127可能作为治疗皮肤鳞癌的一个潜在的靶点。     

miR-382-5p过表达介导PTEN的表达下调对人脑胶质瘤U251细胞恶性生物学行为的影响

  目的  探究miR-382-5p过表达对人脑胶质瘤U251细胞恶性生物学行为的影响。  方法  将miR-382-5p mimic转染入U251细胞,逆转录-聚合酶链反应检测miR-382-5p、磷酸酶-张力蛋白同源物（PTEN） mRNA水平;生物信息学预测miR-382-5p与PTEN存在碱基结合位点,构建PTEN pcDNA载体过表达,荧光素酶报告实验检测miR-382-5p与PTEN靶向关系,将细胞随机分为4组:Control组、mimics组、pc-PTEN组和mimics+pc-PTEN组进行后续实验,逆转录-聚合酶链反应检测各组细胞PTEN水平;克隆形成法检测细胞增殖;逆转录-聚合酶链反应检测Ki67、 Survivin、 c-Myc mRNA水平;Transwell检测细胞侵袭能力;蛋白免疫印迹检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。  结果  miR-382-5p和PTEN存在直接靶向作用关系,与Control组相比较,mimics组miR-382-5p mRNA水平升高（P<0.05）,PTEN mRNA水平降低（P<0.05）,细胞克隆形成率降低（P<0.05）,Ki67、Survivin mRNA水平降低（P<0.05）,c-Myc mRNA水平升高（P<0.05）,细胞侵袭数降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平升高（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin蛋白水平降低（P<0.05）。pc-PTEN组miR-382-5p mRNA水平降低（P<0.05）,PTEN mRNA水平升高（P<0.05）,细胞克隆形成率升高（P<0.05）,Ki67、Survivin mRNA水平升高（P<0.05）,c-Myc mRNA水平降低（P<0.05）,细胞侵袭数升高（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平降低（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin蛋白水平升高（P<0.05）;与pc-PTEN组相比较,mimics+pc-PTEN组miR-382-5p mRNA水平升高（P<0.05）,PTEN mRNA水平降低（P<0.05）,细胞克隆形成率降低（P<0.05）,Ki67、Survivin mRNA水平降低（P<0.05）,c-Myc mRNA水平升高（P<0.05）,细胞侵袭数降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平升高（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin蛋白水平降低（P<0.05）。  结论  miR-382-5p过表达介导PTEN的表达下调可抑制胶质瘤U251细胞增殖、侵袭、生长和上皮细胞-间充质转化。     

miR-221在H_2O_2诱导的大鼠心肌细胞损伤中的作用及机制研究

目的探讨miR-221在过氧化氢(H_2O_2)诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)损伤中的作用及机制研究。方法 MTT法检测不同浓度H_2O_2对H9c2细胞的损伤作用,RT-PCR法检测miR-221表达量。通过Lipofectamine2000将miR-221 inhibitor及阴性对照转入H9c2心肌细胞,并将实验分为4组,正常对照组,模型对照组(H_2O_2组),阴性对照组(H_2O_2+阴性对照组),抑制组(H_2O_2+miR-221 inhibitor组)。MTT法检测细胞活力,吖啶橙染色检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax,Bcl-2,10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因蛋白(PTEN)及p-蛋白激酶(AKT)表达。结果 0、25、50、100、200、400μmol/L H_2O_2对H9c2细胞活力的抑制作用逐渐加强,其中200μmol/L H_2O_2对细胞活力抑制程度适中,因此作为后续诱导剂量。与正常对照组比较,模型对照组及阴性对照组中miR-221表达量显著上调(P0.01),H9c2细胞活力降低(P0.01),细胞凋亡率显著提高(P0.01),Bax及PTEN表达量上调(P0.01),Bcl-2及p-AKT表达量下调(P0.01)。与模型对照组及阴性对照组比较,抑制组中miR-221表达量显著下调(P0.01),H9c2细胞活力提高(P0.01),细胞凋亡率显著降低(P0.01),Bax及PTEN表达量下调(P0.01),Bcl-2及p-AKT表达量上调(P0.01)。结论 miR-221低表达能显著抑制H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤,与调控PTEN/AKT信号通路有关。     

miR-17-5p在大鼠垂体泌乳素腺瘤MMQ细胞耐药中的作用

目的：探讨microRNA-17-5p（miR-17-5p）在大鼠垂体泌乳素腺瘤MMQ细胞耐药中的作用及相关机制。方法：利用miR-17-5p类似物及拮抗物分别过表达和抑制大鼠垂体泌乳素腺瘤MMQ细胞中miR-17-5p的表达,并采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法进行检测。利用CCK-8法检测miR-17-5p表达调控前后细胞增殖以及对卡麦角林（CAB）治疗反应的变化。通过生物信息学方法预测miR-17-5p的靶点基因,然后采用荧光素酶报告检测法进行验证,继而用qRT-PCR及Western blot法检测miR-17-5p对靶基因表达的影响。慢病毒细胞转染过表达MMQ细胞中的PTEN基因,用Western blot检测PTEN的表达水平,并采用CCK-8法检测PTEN过表达对MMQ细胞耐药性的影响。结果：miR-17-5p过表达可促进MMQ细胞的增殖,而miR-17-5p敲减则能抑制MMQ细胞的增殖。miR-17-5p敲减能上调MMQ细胞对CAB治疗的敏感性,相反,miR-17-5p过表达则显著降低MMQ细胞对CAB治疗的敏感性。生物信息学方法预测PTEN为miR-17-5p潜在作用靶点,荧光素酶报告检测法进一步验证了两者的相互作用关系,同时miR-17-5p过表达的MMQ细胞中PTEN mRNA及蛋白表达量显著下降,而miR-17-5p敲减的MMQ细胞中PTEN mRNA及蛋白表达量显著上升。PTEN表达上调能部分逆转miR-17-5p过表达引起的MMQ细胞对CAB治疗敏感性降低。结论：miR-17-5p可通过下调PTEN的表达促进MMQ细胞增殖并降低其对CAB治疗的反应。     

PRL-3调节PI3K信号通路在促进结肠癌细胞增殖侵袭中的作用

【目的】 研究肝再生磷酸酶-3 (PRL-3)的过表达与PI3K信号通路的调节及其与结肠癌细胞增殖侵袭的关系?【方法】 构建稳定转染PRL-3基因和空白对照质粒的结肠癌细胞株LoVo- PRL-3和LoVo-VC,用qRT-PCR和Western blot的方法对miR-21及其靶蛋白PTEN的表达进行检测,在稳转细胞株中转染miR-21或对其进行敲除,用CCK-8?Tanswell实验对细胞的增殖侵袭能力的变化进行研究?【结果】 LoVo- PRL-3细胞的增殖侵袭能力要强于对照组LoVo-VC细胞?在结肠癌细胞株LoVo-PRL-3中miR-21的表达上调而PTEN的表达被下调,在LoVo-VC细胞中过表达miR-21促进了细胞的增殖侵袭并降低PTEN的表达,而在LoVo- PRL-3细胞中敲除miR-21抑制了细胞的增殖侵袭并能部分恢复PTEN的表达?【结论】 PRL-3通过上调miR-21抑制PTEN的表达,调节了PI3K信号通路,从而促进了结肠癌细胞的增殖侵袭?     

山茶花提取物抑制胶质瘤细胞SW1088增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 探究山茶花提取物通过调控miR-526b-3p的表达抑制磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路抑制胶质瘤细胞SW1088增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法 收集对数期SW1088细胞,用浓度为30、60、120 mg/L的山茶花提取物处理细胞,分别记为低剂量组、中剂量组、高剂量组,以正常培养SW1088细胞作为对照组;按照脂质体法将miR-NC、miR-526b-3p转染至SW1088细胞中分别记为miR-NC组、miR-526b-3p组;将anti-miR-NC、anti-miR-526b-3p转染至SW1088细胞中,并加入高剂量山茶花提取物分别记为anti-miR-NC+高剂量组、anti-miR-526b-3p+高剂量组。MTT、Transwell分别检测细胞增殖活性和细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞周期素D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、磷酸化的PI3K（p-PI3K）、磷酸化的AKT（p-AKT）蛋白表达水平;qRT-PCR检测miR-526b-3p相对表达量。结果 山茶花提取物或过表达miR-526b-3p可降低胶质瘤细胞SW1088增殖活性,同时降低细胞迁移数量、侵袭数量,以及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平,增加miR-526b-3p相对表达量。此外,高剂量组可降低SW1088细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白水平。抑制miR-526b-3p可减弱山茶花提取物对胶质瘤细胞SW1088增殖、迁移和侵袭以及PI3K/AKT信号通路的影响。结论 山茶花提取物可能通过调控miR-526b-3p/PI3K/AKT信号通路抑制胶质瘤细胞SW1088增殖、迁移和侵袭     

miR-17-5p及PTEN在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及其意义

目的研究弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中微小RNA（miR）-17-5p及磷酸酶张力蛋白同系物（PTEN）表达及其临床意义。方法应用荧光实时定量PCR检测82例DLBCL肿瘤组织及30例淋巴结反应性增生组织（对照组）中miR-17-5p及PTEN的表达,统计学分析组间表达差异及两者与临床病理特征之间的关系。根据miR-17-5p序列合成miR-17-5p抑制剂和抑制剂对照,并转染至DLBCL细胞系中,MTT细胞增殖实验及Transwell小室实验观察对肿瘤细胞增殖和侵袭能力的影响。采用Kaplan-Meier生存分析观察不同miR-17-5p及PTEN的表达水平与病人预后之间的差异。结果肿瘤组织中miR-17-5p的相对表达量高于正常组织（P < 0.01）;肿瘤组织中PTEN的相对表达量低于正常组织（P < 0.01）。Pearson线性相关分析结果表明,肿瘤组织中miR-17-5p与PTEN的表达呈负相关（r=-0.612,P < 0.01）。病人肿瘤原发部位为节内、乳酸脱氢酶（LDH）≤ 245 U/L、临床分期为Ⅰ~Ⅱ期miR-17-5p表达高于节外、LDH>245 U/L、Ⅲ~Ⅳ期,PTEN表达低于节外、LDH>245 U/L、Ⅲ~Ⅳ期,差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）。与转染抑制剂对照相比,转染miR-17-5p抑制剂的SU-DHL-8细胞miR-17-5p表达较低,而PTEN表达较高（P < 0.01）。与转染抑制剂对照相比,转染miR-17-5p抑制剂的SU-DHL-8细胞在第96小时增殖能力均明显下降（P < 0.05）;Transwell小室实验中,与转染抑制剂对照组细胞穿膜细胞数比较,转染miR-17-5p抑制剂组明显减少（P < 0.05）。高miR-17-5p组病人3年总生存率低于低miR-17-5p组病人（P < 0.05）,低PTEN表达组病人病人3年总生存率低于高PTEN表达组病人（P < 0.05）。结论DLBCL肿瘤组织中miR-17-5p表达升高,而PTEN表达降低,两者共同参与DLBCL的发生发展过程,有可能成为新的DLBCL诊断和治疗的肿瘤标志物。