木犀草素对Aβ25-35诱导神经元损伤的保护作用

目的:研究木犀草素对β淀粉样肽(Aβ25-35)损伤神经元的保护作用及其机制。方法:从BALB/c乳鼠大脑皮层培养原代神经元,实验设计为对照组,模型组(7μmol·L-1Aβ25-35),不同木犀草素给药治疗组(10~90μmol·L-1),孵育12 h,水溶性四氢唑盐(WST-1)法检测细胞存活率,Hoechst 33258/碘化丙啶(PI)双染检测细胞凋亡,Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达,荧光酶标仪检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,ELISA法检测细胞上清中白介素(IL)-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果:模型组细胞存活率为48.5%,与对照组相比显著降低(P0.05)。10,30,60,90μmol·L-1木犀草素给药组细胞存活率分别为60.8%,62.4%,71.7%,73.6%,选取60μmol·L-1木犀草素为后续实验浓度。60μmol·L-1木犀草素可以明显提高Aβ25-35损伤神经元的细胞活力,由48.5%增至71.7%(P0.01),并且能抑制神经元的凋亡。与模型组相比较,降低凋亡蛋白Caspase-3的过表达(P0.01);降低细胞内ROS,由模型组100.4%降至64.2%(P0.01)。与模型组相比,调节抗炎因子IL-10,给药组IL-10上调至634.8 ng·L-1,下调促炎因子TNF-α至176.7 ng·L-1(P0.01)。结论:木犀草素对Aβ25-35损伤神经元具有保护作用,其机制可能是抑制ROS水平,调节炎症因子从而达到抗凋亡作用。     

缬草挥发油β-环糊精包合物的制备与评价

该研究以提高缬草挥发油的稳定性并掩盖其不良气味为目的,制备和评价了缬草挥发油β-环糊精包合物。通过考察包合物得率和缬草挥发油包合率,确定包合物的制备方法后,采用均匀设计法优化包合物的制备工艺与处方。差示扫描量热法(DSC)和X-射线粉末衍射法(X-RD)验证缬草挥发油β-环糊精包合物的形成,并考察其稳定性。饱和水溶液-超声细胞粉碎法显示较好的包合物得率与包合率。在优化条件下,所制包合物得率(84.78±3.23)%,挥发油的包合率(86.23±2.48)%,DSC和X-RD结果表明包合物的形成、β-环糊精包合物明显提高了缬草挥发油的稳定性。     

β-榄香烯与人血清白蛋白相互作用的机制研究

β-榄香烯作为一种抗肿瘤药物,是通过静脉注射后随血液循环达到靶器官发挥作用的,因此研究β-榄香烯与负责其血液运输的蛋白之间的关系就显得尤为重要。该实验采用荧光分光光度计研究了β-榄香烯与人血清白蛋白（HSA）之间的相互作用机制。HSA色氨酸残基的荧光淬灭直接反应其与β-榄香烯的结合情况,研究发现β-榄香烯对HSA的荧光淬灭是静态淬灭;根据计算不同温度下的结合常数及β-榄香烯与HSA结合物的焓,发现静电引力是β-榄香烯和HSA连接的主要 原因。     

油樟叶挥发油β-环糊精包合物的制备工艺研究及稳定性考察

研究油樟叶挥发油β-环糊精包合物的最佳制备工艺并考察其稳定性。采用饱和水溶法制备包合物,进行正交试验,以包合产率和包合率为筛选指标,优选包合工艺。使用红外分光光度法和薄层色谱法对包合效果进行评价,并考察包合物在强光、高温、高湿环境下的稳定性。最佳包合条件为1 mL油樟叶挥发油与8 g β-环糊精进行包合,包合时间3 h,包合物温度40℃,β-环糊精和水的体积比1:15。经红外分光光度法和薄层色谱法鉴定,形成了油樟叶挥发油β-环糊精包合物,并具有一定的抗光照性、热稳定性、湿稳定性。试验得出的最佳包合工艺操作简便,包合物稳定。     

中药对Aβ清除作用的研究进展

β淀粉样蛋白（β-amyloid peptide,Aβ）在脑组织中聚集和沉积,启动了阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）的病理过程。因此,促进Aβ清除,是防治阿尔茨海默病的重要靶点之一。研究证明一些中药复方及提取物能影响淀粉蛋白降解酶的活性,血脑屏障的转运及小胶质细胞的吞噬,促进Aβ清除,改善阿尔茨海默病动物模型的记忆和学习。该文综述了Aβ与阿尔茨海默病关系,Aβ清除机制以及中药对Aβ清除作用。     

PEG修饰β-谷甾醇制备新型绞股蓝总皂苷长循环脂质体的研究

目的：探讨用聚乙二醇(PEG)修饰β-谷甾醇(PEG-Sito)制备新型绞股蓝总皂苷长循环脂质体的可行性。方法：以丁二酸酐为连接臂连接β-谷甾醇与PEG 2000合成PEG-Sito;以鞘磷脂和PEG-Sito为膜材采用乙醇注入法制备绞股蓝总皂苷长循环脂质体;脂质体以鱼精蛋白沉淀法进行包封率的测定;¹H-NMR验证PEG-Sito的合成;粒径、电位、AFM电镜表征该新型绞股蓝总皂苷长循环脂质体。结果：¹H-NMR证实了PEG-Sito的合成成功,采用乙醇注入法用PEG-Sito为材料制备长循环脂质体的包封率为74.3%,粒径288.1 nm,电位－20.25 mV,电镜下呈规则圆形。结论：用PEG-Sito为材料制备绞股蓝总皂苷长循环脂质体方法可行,绞股蓝总皂苷包封率高,形态和粒径均较好。     

阿萨伊油中β-谷甾醇及总甾醇含量测定和抗氧化活性研究

建立阿萨伊油中甾醇类成分的含量测定方法,并对阿萨伊油的抗氧化活性进行评价。采用高效液相色谱法建立了阿萨伊油中β-谷甾醇、总甾醇(β-谷甾醇、豆甾醇之和,以β-谷甾醇计)的含量测定方法。采用Purosper STAR LP C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-异丙醇(30:70)为流动相,流速1 mL·min^-1,柱温为室温,蒸发光散射检测器漂移管温度70 ℃,雾化器流速2.0 L·min^-1。结果表明β-谷甾醇在0.766~6.38 μg线性关系良好,回归方程为Y=1.639X+0.702 7(r=0.999 2),平均加样回收率为95.7%(RSD 2.8%)。阿萨伊油中β-谷甾醇的质量分数为1.85 mg·g^-1,总甾醇的质量分数为1.93 mg·g^-1。同时采用总氧自由基清除能力(TOSC)法对阿萨伊油的抗氧化活性进行评价,结果表明样品具有显著的抗氧化能力,样品浓度和抗氧化能力具有较好的剂量-效应关系。     

HPLC测定紫草提取物中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量

目的: 建立HPLC测定紫草提取物中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量。 方法: 采用HPLC,Agilent HC-C₁₈色谱柱 (4.6 mm ×250 mm,5 μm);流动相乙腈-水-甲酸(70:30:0.05),检测波长275 nm,柱温40 ℃,流速1 mL·min^-1。 结果: β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁在50~200 μg具有良好的线性关系(r=0.999 8 ),平均加样回收率103.31%,RSD 1.44%(n=5)。 结论: 方法准确,重复性好,可作为紫草提取物的含量控制。     

黑海参多糖对β-淀粉样蛋白诱导的皮质神经元凋亡的保护作用

体外培养大鼠皮质神经元 ,用β-淀粉样蛋白 (β- AP)诱导皮质神经元凋亡。黑海参多糖使皮质神经元存活率增加 ,使神经元的 DNA电泳图谱不出现“梯子状”,使神经元的流式细胞仪分析图上不出现凋亡峰 ,表明黑海参多糖对 β- AP诱导的皮质神经元凋亡具有保护作用。     

电针血清对β淀粉样蛋白损伤原代培养大鼠海马神经元的保护作用

目的观察电针血清对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的原代大鼠海马神经元的保护作用。方法通过Aβ1-40脑内注射建立阿尔茨海默病大鼠模型,予以电针治疗后,留取各组血清。Aβ25-35处理原代培养海马神经元建立体外神经元损伤模型,实验分为正常组、模型组和电针血清组,通过MTT法检测神经元的增殖,采用TUNEL染色法检测神经元的凋亡,通过免疫细胞化学染色检测Caspase-3的表达。结果 MTT检测结果发现,经Aβ处理后,细胞活力显著下降。而与模型组比较,电针血清组细胞增殖能力明显增强(P＜0.01);TUNEL 染色结果显示,与模型组比较,电针血清组凋亡细胞数目明显减少(P＜0.01);经Aβ处理48 h后,Caspase-3表达水平明显升高,电针血清组Caspase-3阳性细胞数目较模型组显著减少(P＜0.01)。结论电针血清能促进海马神经元的增殖,降低其 Caspase-3的表达,对抗Aβ的神经毒性,减少神经元的凋亡。     

清开灵对AD小鼠学习记忆及脑组织 β-淀粉样蛋白水平的影响

目的:研究清开灵对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠脑组织β-淀粉样蛋白(Aβ)水平的影响。方法:选用雄性KM小鼠60只,随机分成6组:正常对照组、模型对照组、清开灵低、中、高剂量(20,40,80 g·kg-1)组和阳性对照药尼莫地平0.3 g·kg-1组,每组10只。ig给予等体积药物或生理盐水,每日给药1次,连续给药30 d。末次给药30 min后,东莨菪碱造模,用Morris水迷宫测试行为学指标,采用双抗体夹心法测定脑组织β-淀粉样蛋白水平。结果:Morris水迷宫测试表明,清开灵能明显缩短模型小鼠游泳时间及游泳路程;脑组织Aβ含量测定显示清开灵能显著降低脑组织Aβ水平。结论:清开灵能改善造模小鼠的学习记忆功能,其机制可能与降低脑组织Aβ水平有关。     

Aβ损伤人脑微血管内皮细胞培养液对正常神经元凋亡的影响及通心络胶囊的干预作用

目的:通过β淀粉样蛋白(amyloidβ-protien,Aβ)损伤人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMEC)培养液对正常神经元凋亡的影响及通心络胶囊的干预作用研究,探讨通心络对HBMEC及脑神经元的保护作用及其可能作用机制。方法:实验分为空白组,正常组,模型组,Aβ损伤组,通心络组,石杉碱甲组,空白组为正常神经元组,正常组为正常HBMEC培养液培养神经元组,其余4组采用20μmol·L~(-1)Aβ诱导HBMEC损伤,其中通心络组提前干预(400 mg·L~(-1)通心络预处理6 h),石杉碱甲组提前干预(100 mg·L~(-1)石杉碱甲预处理6 h),取其损伤后的细胞培养液加到正常脑神经元中进行培养,实验结束检测神经元的凋亡情况及凋亡蛋白、基因表达。结果:Aβ损伤HBMEC后的培养液可加速脑神经元的凋亡,且较Aβ直接导致脑神经元凋亡严重,提前通过通心络干预的HBMEC培养液诱导脑神经元凋亡细胞减少,凋亡蛋白、基因表达均有降低(P0.05,P0.01),且优于西药石杉碱甲组(P0.05)。结论:老年性痴呆(AD)中HBMEC损伤可以进一步加速神经元的凋亡,而通心络保护HBMEC同时可起到保护脑神经元的作用,通心络胶囊对AD脑神经元及HBMEC具有双重保护作用。     

小檗碱对Aβ25-35致SH-SY5Y细胞株炎症反应中TNF-α及I型受体表达的干预作用

目的: 研究小檗碱对β淀粉样肽(Aβ)沉积导致SH-SY5Y细胞株炎症反应中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及Ⅰ型受体(TNFR1)表达的影响。 方法: 5 μmol·L^-1Aβ_25-35作用于SH-SY5Y细胞24 h,复制阿尔茨海默病(AD)细胞模型,造模前给予小檗碱预处理2 h。实验分为正常对照组、AD模型组、吲哚美辛组、小檗碱低、高剂量组。通过分光光度法检测培养液中LDH的活力,ELISA测定TNF-α的水平,RT-PCR检测TNFR1基因的表达,Western blot测定TNFR1蛋白的表达。 结果: 与对照组比较,AD细胞模型组培养液中LDH及TNF-α水平明显升高,TNFR1基因和蛋白的表达显著增加。小檗碱干预后细胞上清液中LDH活力及TNF-α水平下降。小檗碱干预可下调TNFR1基因和蛋白的表达,其中1×10^-5 mol·L^-1小檗碱对TNFR1的调节作用更加显著。 结论: 小檗碱对Aβ导致的SH-SY5Y细胞炎性损伤有保护作用,其机制可能与其抑制炎症因子TNF-α及其Ⅰ型受体的表达有关,其中对TNFR1的调节呈剂量依赖性。     

补肾方对β淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元细胞毒作用的影响

目的:建市Aβ所致的神经细胞毒模型,探讨补肾方的药效及作用机理。方法:原代培养大鼠海马神经元,用25μmol/L聚集状态的Aβ1-42建立神经细胞毒模型。采用LDH释放量来检测神经元存活率,通过透射电镜、流式细胞计判断神经元凋亡,应用免疫细胞化学法研究凋亡相关基因(Bcl-2、Bax、c-Jun)的蛋白表达。结果:神经元经Aβ1-42处理后,LDH释放增加;电镜显示细胞体积缩小、染色质固缩、或浓聚成块状位于核周边、滑面内质网扩张;流式细胞计可见亚二倍体峰;Bcl-2的蛋白表达减少,而Bax与C-Jun表达增加。补肾方使LDH释放减少,电镜下具有凋亡形态特征的细胞减少,流式细胞计显示凋亡率下降,Bcl-2蛋白表达增加,c-Jun表达减少,而Bax表达变化不明显。Tacrine组神经元存活率增加,但其它指标的变化不明显。结论:①补肾方对Aβ1-42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存活率,抑制凋亡。②其作用机制可能是通过提高bcl-2、降低c-Jun基因的蛋白表达而实现。③Tacrine对神经元存活率有提高作用,但抑制神经元凋亡的作用似不明显。补肾方对抑制Aβ所致神经元凋亡明显优于Tacrine。     

人参、银杏叶提取物对Aβ1-40诱导的大鼠原代神经元凋亡的保护作用

目的:观察β-淀粉样蛋白1-4(Aβ1-40)对原代神经元的损伤以及人参、银杏叶提取物(extracts of ginseng and ginkgobiloba,EGGB)的保护作用.方法:以Aβ1-40诱导大鼠原代神经元建立Aβ毒性损伤细胞模型,结合Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术、MTT比色法、透射电镜及Western blot法,确定Aβ1-40的造模浓度与时间,检测EGGB对原代神经元细胞增殖活性、凋亡率、超微结构和细胞caspase-3蛋白表达的影响.结果:1 μmol·L-1Aβ1-40作用24 h可诱导原代神经元凋亡率显著升高(P<0.01);EGGB(5,50 mg·L-1)可明显增强细胞增殖活性(P<0.05);EGGB(50 mg·L-1)可明显抑制神经元凋亡、改善细胞超微结构、抑制caspase-3的过度表达(P<0.05,P<0.01).结论:Aβ1-40可明显诱导体外培养的原代神经元凋亡,EGGB则有较好的神经保护作用,可有效抑制神经元凋亡,这种作用可能是与其改善神经元及亚细胞器结构、提高细胞增殖活性、抑制caspase-3的过度表达等有关.     

脱氧土大黄苷-β-环糊精超分子包合物的制备及包合物性能研究

通过均相法制备β-环糊精(β-cyclodextrin, β-CD)-脱氧土大黄苷(Desoxyrhaponticin, DES)包合物,采用紫外-可见光谱和荧光光谱法对包合物进行表征,测定包合物的包合率、主客体包结比、超分子体系的结合常数及热力学函数。结果表明,设计的方法合理,成功制备包合物,利用紫外-可见分光光度法测得包合物的包合率为38%;利用荧光光谱法测得主客体包结比为2:1, β-CD包合DES的热力学函数ΔH⁰<0, ΔS⁰<0,说明该包合物形成的作用力主要为氢键与范德华力,ΔG⁰<0且ΔG⁰与反应温度成正比,说明此反应随温度升高而自发性增强;利用偏振荧光法定量证明了β-CD与DES相互作用过程中,生成了非共价复合物,该研究有关结果可为环糊精超分子体系研究提供一定参考。     

人参皂苷Rb1对高糖培养海马神经元胰岛素信号转导途径的影响

目的：探讨人参皂苷Rb₁对高糖培养SD大鼠海马神经元糖原合成激酶（GSK）3β/胰岛素降解酶（IDE）信号转导通路及β淀粉样蛋白（Aβ蛋白）分泌的影响。方法：原代培养新生24 h SD大鼠海马神经元分别接种在不同条件的培养基中,分为正常组、高糖组、氯化锂组以及Rb₁组。上述培养基中培养72 h,Western blotting法检测其磷酸化GSK3β（pGSK3β）、总GSK3β（tGSK3β）和IDE蛋白的表达,RT-PCR法检测GSK3β,IDE mRNA的表达,ELISA法检测细胞上清液中Aβ蛋白的分泌。结果：与正常组相比,高糖组p/tGSK3β蛋白比值增加,IDE蛋白及mRNA减少,Aβ蛋白分泌增加（P<0.05）;与高糖组相比,氯化锂组和Rb₁组p/tGSK3β蛋白比值下降,IDE蛋白及mRNA表达增加,Aβ蛋白分泌减少（P<0.05）;与氯化锂组相比,Rb₁组p/tGSK3β蛋白,IDE蛋白及mRNA,Aβ蛋白分泌增加无明显差异;4组GSK3β mRNA的表达无明显差异。结论：人参皂苷Rb₁可能通过减少GSK3β的磷酸化,下调pGSK3β/GSK3β的比值,上调IDE的表达,从而减少海马神经元Aβ蛋白的分泌。     

人参多糖介导Wnt/β-catenin信号转导诱导人鼻咽癌细胞CNE-2的凋亡

目的: 观察人参多糖(ginseng polysaccharide, GPS)对人鼻咽癌细胞CNE-2的增殖和凋亡的影响以及可能的机制探讨. 方法: CCK8法观察人参多糖对人鼻咽癌CNE-2细胞生长的影响.取对数生长期的CNE-2细胞,用不同质量浓度人参多糖(GPS)0,0.1,0.2,0.3,0.4 g·L^-1分别作用48 h后,流式细胞术检测其对CNE-2细胞凋亡的诱导作用;Hoechst-33258染色和电镜观察细胞的形态改变.Real-time PCR检测细胞β-catenin mRNA的表达.采用免疫荧光染色检测细胞中β-catenin,TCF4蛋白定位及表达量的变化.Western blot检测细胞中β-catenin,Bcl-2,Bax蛋白的变化. 结果: CCK8法测得人参多糖能明显抑制CNE-2细胞的增殖,其抑制作用呈剂量、时间依赖性,GPS处理细胞48 h的IC₅₀为0.39 g·L^-1;质量浓度分别为0.1,0.2,0.3,0.4 g·L^-1的GPS作用人鼻咽癌CNE-2细胞48 h后细胞凋亡率分别为(5.69±0.29)%,(10.3±0.63)%,(15.4±0.74)%,(35.7±1.86)%,与对照组(2.08±0.11)%比较均有显著性差异(P<0.05);Hoechst-33258染色结果显示细胞凋亡特征.电镜下可见0.4 g·L^-1GPS诱导48 h后可使CNE-2细胞出现凋亡小体.Real-time PCR显示β-catenin mRNA表达明显降低.激光共聚焦结果显示人参多糖作用48 h后β-catenin和TCF4在胞核中表达明显减少,β-catenin表达区域由胞核向胞膜转移.Western blot结果显示经浓度梯度增加的人参多糖作用CNE-2细胞48 h后,β-catenin和抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显减弱;而促凋亡蛋白Bax表达上调(P<0.05). 结论: 人参多糖可明显抑制CNE-2细胞增殖促进细胞凋亡.Wnt/β-catenin信号通路的受阻可能是GPS诱导人鼻咽癌细胞CNE-2凋亡的一个重要机制.     

独活香豆素对Aβ25-35损伤神经元的保护作用及机制研究

目的:研究独活香豆素对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)损伤神经元的保护作用及可能机制。方法:从新生乳鼠大脑皮层中分离纯化神经元,与Aβ25-35、不同浓度独活香豆素和丹酚酸B共同孵育24 h,用噻唑蓝(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)测定法检测细胞存活率与LDH释放量,用Hoechst 33258染色检测Aβ25-35诱导的神经元凋亡,用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3 mRNA的表达量。结果:独活香豆素(10、50、100、150μg/ml)能明显提高Aβ25-35(30μM)损伤神经元的存活率,降低LDH释放量,抑制神经元凋亡,以浓度为100μg/ml时作用最显著,作用强度与丹酚酸B相当;独活香豆素能提高神经元Bcl-2 mR-NA、降低Caspase-3 mRNA的表达量。结论:独活香豆素对Aβ25-35损伤神经元具有保护作用,其机制可能与抑制促凋亡基因Caspase-3、促进抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达有关。     

调心方对β淀粉样蛋白所致大鼠海马神经元凋亡的调控作用

目的 探讨调心方的药效及作用机制。方法 原代培养大鼠海马神经元,Aβ 1-42诱导神经细胞毒模型。采用FDA与PI双染检测神经元存活率,Hoechst 33258染色、TUNEL判断神经元凋亡,免疫细胞化学研究Caspase-3表达,Northern Blot、RT-PCR研究凋亡相关基因(bcl-2、bax、c-jun、c-fos)表达。结果 神经元经Aβ 1-42处理后,活细胞数减少,染色质浓缩、核碎裂,TUNEL染色阳性神经元增多,Caspase3表达增加,bcl-2 mRNA表达减少,而bax与c-jun表达增加、c-fos的表达变化不明显。调心方可显著改善上述变化。结论 调心方对Aβ 1-42神经细胞毒有保护作用,可提高细胞存活率,抑制凋亡。其机制可能通过提高bcl-2 mRAN水平,降低bax和c-jun mRAN水平,减少Caspase-3表达而实现。