ELISA法和RT-PCR法在麻疹病毒检测中的应用对比

目的:对比分析酶联免疫吸附试验(ELISA)法和实时荧光定量PCR(RT-PCR)法在麻疹病毒检测中的应用。方法:由本市各医院采集并送至本中心接受麻疹病毒检测的50例疑似麻疹患者为研究对象,所有患者标本均采用ELISA法和RT-PCR法进行麻疹病毒检测。对比两种检测方式在不同出疹时间段所取标本的阳性率、检测水平。结果:在50例疑似麻疹患者中,ELISA法检测麻疹病毒Ig M抗体阳性22例,Ig M抗体阴性28例,阳性率为44.00%;RT-PCR法检测,麻疹病毒Ig M抗体阳性26例,Ig M抗体阴性24例,阳性率为52.00%,两种检测方式阳性率比较,差异无统计学意义(P0.05)。患者出疹第1天收集的标本,采用ELISA法检测阳性率为60.00%,采用RT-PCR法检测阳性率为80.00%。随着患者采样时间不断改变,两种检测方式的阳性率均逐渐降低,两种方法检测的阳性率比较,差异均无统计学意义(P0.05)。50例麻疹疑似患者同一时间段采集血清和咽拭子标本,24例患有免疫史,不伴随有免疫史亦或者是不详的共26例。结论:RT-PCR法适用于出疹时间在2 d之内疑似麻疹患者的临床诊断中,而ELISA法则适合使用在出疹时间在2 d或以上疑似麻疹患者的临床检测中。     

河南省麻疹病毒基因分型及中和抗体水平研究

目的了解河南省流行的麻疹野病毒的基因特征,以及人群中麻疹中和抗体水平,探讨免疫水平对麻疹流行的影响。方法采集麻疹患者咽拭子标本分离病毒,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增麻疹野病毒分离株的核蛋白(N)基因羧基末端450个核苷酸片段,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析。用微量中和试验测定健康人群、麻疹患者血清中和麻疹疫苗株和野毒株的中和抗体水平。结果共分离麻疹病毒147株,挑选其中73株测序后均为H1基因型。检测麻疹患者血清351份,中和分离株和疫苗株,其中和抗体GMT值分别为1∶75.7和1∶75.7,差异无统计学意义(Z=0.560,P>0.05);通过免疫史分析发现,不管有无免疫史,麻疹患者血清中和两种抗原的抗体水平差异均无统计学意义。检测健康人群血清306份,中和两种毒株,其抗体GMT值分别为1∶81.9和1∶55.0,抗体滴度差异有统计学意义(Z=6.861,P<0.05)。结论河南省麻疹流行是以H1基因型为主。麻疹中和抗体达到一定水平,对于阻止麻疹病毒传播,降低发病率起到了积极的作用,但不排除当前疫苗对流行株抵御不足。     

间接免疫荧光法检测麻疹抗原在麻疹早期诊断中的临床应用

目的:探讨间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence Assay,IEA)检测麻疹病毒抗原对儿童麻疹病毒(measles virus,MV)感染的早期诊断价值.方法:观察86例临床诊断麻疹的患儿,在发病的不同阶段IFA检测痰液MV抗原和酶联免疫吸附试验(engymelinked imgmunosorbent assay,ELISA)检测血清中MV特异性LgM抗体,采集30份上呼吸道感染患者痰液进行IFA麻疹病毒抗原检测,比较分析检测结果.结果:86例中发病7 d内IFA测抗原ELISA测抗体两种方法的阳性率为分别为97.1%和16.2%;7 d后为33.3%和88.9%,P均＜0.01.IFA测抗原阳性率与检测时间的相关系数为-0.91,P=0.02;ELISA测抗体阳性率与检测时间的相关系数为0.97,P=0.04.30份对照组的标本MV抗原检测均为阴性,IFA测抗原的特异性与敏感性分别是100%和97.1%.结论:IFA测抗原在疾病早期检出阳性率高,阳性检出率与检测时间成负相关,IFA测抗原痰液麻疹病毒抗原是一种早期快速、特异敏感的实验室检测方法.     

安徽省蚌埠市麻疹野毒株核蛋白基因检测及序列分析

目的:通过检测麻疹野毒株的基因型,分析安徽省蚌埠市麻疹病毒流行株的基因特征,为麻疹监测和防治提供依据。方法:选取2010～2011年蚌埠市散发的15例临床确诊为麻疹的患者,收集患者急性传染期的尿液标本,提取病毒RNA,用RT-PCR方法扩增麻疹病毒核蛋白基因羧基末端的515 bp核苷酸片段,对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,构建基因亲缘关系树。结果:15份麻疹患者尿液标本中有14份分离到麻疹野毒株;将其中3株麻疹野毒株的核蛋白(N)羧基末端515 bp核苷酸与Genebank中麻疹病毒的8个参考株进行基因同源性关系比较,与Genebank中公布的H1、H2基因型参考株Hunan.CHN93-7、Beijing.CHN94-1所对应的核苷酸序列的遗传距离分别为0.020～0.026和0.064～0.075;而与H1a参考株China93-2的遗传距离最近,为0.009～0.015;3株麻疹野毒株N羧基末端515个核苷酸的同源性为97.8%～98.9%;与H1参考株Hunan.CHN93-7、H1a参考株China 93-2和H1b参考株China 94-7的核苷酸同源性分别为97.4%～98.0%、98.5%～99.1%和96.5%～97.1%。结论:蚌埠市麻疹野毒株的优势基因型为H1a基因亚型。     

实时荧光定量RT-PCR在麻疹病毒检测中的应用价值

目的探讨实时荧光定量RT-PCR在麻疹病毒检测中的应用价值。方法选取2015年10月至2017年3月淮阳县疾病预防控制中心收治的280例疑似麻疹患者,所有患者均接受酶联免疫吸附试验(ELISA)与实时荧光定量RTPCR检测,对比两种检测方法的阳性率。结果 280例疑似麻疹患者中,经实时荧光定量RT-PCR检测咽拭子中麻疹病毒核酸阳性的有166例,阳性率为59.29%;ELISA法检测出血清麻疹Ig M阳性的有139例,阳性率为49.64%。实时荧光定量RT-PCR检测阳性率较ELISA法高,差异有统计学意义(P<0.05)。出疹当天标本的实时荧光定量RT-PCR阳性率为56.52%,ELISA法检测阳性率为17.39%。随着时间的推移,ELISA法检测阳性率不断上升,而实时荧光定量RT-PCR检测在第4天开始逐渐下降。实时荧光定量RT-PCR对出疹2 d内标本检测阳性率较ELISA法高,差异有统计学意义(P<0.05);对于出疹后2 d及2 d以上的标本,两种检测方法阳性率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论实时荧光定量RT-PCR在麻疹病毒检测中具有较高应用价值,可早期诊断麻疹病毒,是一种安全、可靠的检测方式。     

扎赉诺尔区1~15岁儿童麻疹抗体监测报告

目的了解我地区的麻疹免疫状况,探索麻疹抗体水平的影响因素。方法采集监测对象的末梢血,检测并分析其麻疹病毒IgG抗体的阳性率。结果我地区1~15岁儿童麻疹病毒IgG抗体的阳性率为96%,〈1.5岁年龄组阳性率为91.35%,低于其他年龄组（χ2=60.00,P=0.000）,接种1剂次组阳性率低于≥2剂次组（χ2=284.487,P=0.000）;同一年龄组各地区间抗体阳性率的经检验差别具有统计学意义（P=0.000）。结论及时提高复种及时率对遏制麻疹小年龄发病有重要意义;基层防保单位在保证较高接种率的同时,应将工作重点放在提高接种质量上,同时加强冷链管理,加强专业人员培训,保证接种质量。     

宁夏2005年部分地区麻疹野病毒分离及基因型分析

目的了解2005年宁夏麻疹流行株基因型特征,为进一步的麻疹防治策略提供科学依据。方法采集宁夏2005年麻疹暴发病例的咽拭子或尿液标本19份,用EB病毒转化的狨猴淋巴母细胞(B95a)分离麻疹病毒。使用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增出分离的麻疹病毒株核蛋白(N)基因C末端676个核苷酸。再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,并以C末端456个核苷酸片断构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸同源性分析。结果从19份标本中分离到13株麻疹病毒,均为H1基因型H1a亚型。结论引起2005年宁夏部分地区麻疹暴发流行的野毒株为H1基因型,并以H1a为绝对优势亚型。不同暴发之间存在相同毒株引起的传播链,同一暴发中存在不同毒株的传播。     

西安市麻疹野病毒核蛋白基因序列分析

目的:研究西安市流行麻疹病毒的基因型别及特征. 方法:采集3 d内出疹麻疹患者咽拭子标本分离病毒,提取病毒RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒的核蛋白N基因碳末端的450 bp的核苷酸片段,对扩增产物进行序列测定和比较分析. 结果:采集咽拭子标本13份,分离出麻疹病毒8株,分离率62%;8株麻疹病毒均为H1基因型. 结论:H1基因型麻疹病毒是西安市麻疹病毒的优势流行株,与全国麻疹病毒流行株无明显差异.     

贵州省毕节市健康人群麻疹抗体水平监测结果分析

目的了解毕节市健康人群麻疹抗体水平,为消除麻疹工作提供科学依据。方法在随机选择的4个县(区)中,将健康人群分为8个年龄组,每个年龄组随机采集30名作为监测对象,采集静脉血清,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测麻疹IgG抗体,对不同人群抗体水平进行分析。结果 4个县(区)共监测1 034人,麻疹IgG抗体阳性率为90.04%,以1~2岁组最高,15~19岁组最低。不同性别麻疹IgG抗体阳性率差异无统计学意义,而不同县(区)、不同年龄组、不同免疫剂次人群麻疹IgG抗体阳性率差异均有统计学意义。结论毕节市麻疹抗体阳性率已达较高水平,但仍存在薄弱地区和薄弱人群。消除麻疹工作重点仍是继续巩固和提高常规免疫接种率,加强麻疹疫情监测及应急处置,以降低麻疹病毒传播风险。     

育龄妇女接种麻疹疫苗对婴儿麻疹抗体及麻疹疫苗接种的影响

目的：研究育龄妇女接种麻疹疫苗后所生婴儿的胎传麻疹抗体的动态变化,并了解其对婴儿接种麻疹疫苗的影响。方法：选择2012年1月1日至2012年12月31日300位育龄妇女纳入本研究,检测麻疹IgG抗体后进行随机对照试验（RCT）,设立高抗体无疫苗接种组（I组,52例）、高抗体疫苗接种组（II组,53例）、低抗体无疫苗接种组（III组,98例）和低抗体疫苗接种组（IV组,97例）。I组和III组不接种疫苗,II组和IV组接种麻腮风联合减毒活疫苗,各组均于待产时检测麻疹IgG抗体。检测育龄妇女所生婴儿出生时、8月龄大时、接种麻疹疫苗后半个月和接种麻疹疫苗后3个月血麻疹IgG抗体,于接种麻疹疫苗后半个月同时检测麻疹IgM抗体。分析育龄妇女待产时麻疹IgG抗体水平与婴儿出生时IgG抗体水平的相关性,分析婴儿麻疹IgG抗体的动态变化及IgM抗体的情况。结果：对育龄妇女待产时麻疹IgG抗体水平与新生儿脐带血麻疹IgG抗体水平进行pearson相关分析,显示相关系数为0.85,P=0.00,提示存在相关性。重复测量方法分析结果显示,I组和II组、III组和IV组之间婴儿麻疹IgG抗体变化差均异有统计学意义（均P=0.00）,而I组和III组、II组和IV组之间差异无统计学意义（分别为P=0.11和P=0.45）。接种后3个月各组间比较,F=1.36,P= 0.26,提示各组间此时间点上差异无统计学意义。婴儿IgG抗体趋势图显示,婴儿的胎传麻疹抗体水平随时间逐步减少,在接种麻疹疫苗3个月时又明显升高。I～IV组婴儿麻疹IgM抗体样本/临床值比值（S/CO值）经单因素方差分析,F=0.95,P=0.42,提示各组间差异无统计学意义。结论：育龄妇女接种麻疹疫苗可提高所生婴儿胎传麻疹抗体水平,使婴儿在接种麻疹疫苗前获得足够的保护性抗体,也不会影响婴儿接种麻疹疫苗的效果。