天花粉提取物对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg表达的影响

目的:探讨天花粉水提取物、醇提取物对HepG2.2.15细胞的增殖及培养细胞上清中HBsAg与HBeAg表达的影响。方法:用MTT方法检测HepG2.2.15细胞的存活率,以酶联免疫法(ELISA)检测HepG2.2.15细胞上清液HBsAg和HBeAg的表达量。结果:天花粉水提取物和醇提取物处理HepG2.2.15细胞后HBsAg和HBeAg的表达均呈时间依赖性和浓度依赖性抑制,但天花粉水提物的治疗指数明显优于醇提物。结论:天花粉水提物较醇提物有更好的抗HBV活性。     

紫丁香叶提取物对HepG2.2.15细胞中HBeAg及HBsAg表达的影响

目的 :观察紫丁香叶提取物对 Hep G2 .2 .1 5细胞分泌 HBe Ag和 HBs Ag的影响。方法 :采用酶联免疫吸附法 ( ELISA)检测培养上清中 HBe Ag和 HBs Ag表达的变化并以抑制率来表示。结果 :紫丁香叶提取物对 HBe Ag和 HBs Ag的分泌具有抑制作用 ,该作用呈现剂量依赖性和时间依赖性。结论 :紫丁香叶提取物对 HBe Ag和 HBs Ag分泌的抑制作用提示其在体外具有抗乙型肝炎病毒的作用     

siRNA表达载体与阳离子脂质体复合物转染HepG2.2.15细胞实验研究

目的:观察针对HBV X的siRNA表达载体pGenesil-HBV X与阳离子脂质体的复合物对HepG2.2.15细胞转染效果及其对HBVM表达的影响。方法:以pGenesil-siAFP表达载体和非转染细胞分别作非特异性序列对照组和空白对照组,用不同配比浓度pGenesil-HBV X与阳离子脂质体的复合物转染HepG2.2.15细胞,荧光显微镜下观察并计算转染阳性细胞百分率,筛选出最佳转染效率的剂量配比。于转染后24h、48h、72h采用时间分辨荧光免疫测定技术(TRFIA)检测上清液中HBsAg和HBeAg。结果:pGenesil-HBV X与阳离子脂质体复合物8μL∶2.5μg剂量配比组的平均转染率达到了(55.1±4.3)%,且不影响细胞活性;转染后48h和72h后该siRNA表达载体对HepG2.2.15细胞表达HBsAg和HBeAg抑制作用显著(P<0.05)。结论:8μL:2.5μg剂量配比组的pGenesil-HBV X与阳离子脂质体复合物是最佳的转染剂量配比,能有效抑制HepG2.2.15细胞表达HBsAg和HBeAg。     

HepG2.2.15细胞的差异性表达及对IFN-α的反应性研究

采用有限稀释法从HepG2.2.15细胞株中分离出10株单克隆细胞株.ELISA法检测其HBsAg与HBeAg表达量,根据HBsAg、HBeAg表达量的不同,筛选出最高、中等、最低3株克隆细胞株.MTT法进行干扰素(IFN)-α的细胞毒作用研究,表明IFN-α对不同克隆细胞株药物毒作用相似.ELISA法检测各克隆细胞株给IFN-α前后HBsAg、HBeAg表达量,IFN-α对HepG2.2.15细胞HBeAg的抑制作用较弱,对HBsAg、HBV DNA的抑制作用较强,且对表达量高的克隆细胞株抑制作用更强.不同HepG2.2.15细胞表达HBsAg与HBeAg存在差异性,且表达量高的细胞株对治疗浓度的IFN-α更加敏感.     

荔枝核黄酮类化合物对HepG2.2.15细胞系HBsAg与HBeAg表达及HBV-DNA含量的影响

目的:研究荔枝核提取物-黄酮类化合物(IL)对乙肝病毒的抑制作用.方法:应用光密度测定法和细胞培养及定量PCR技术研究荔枝核提取物IL对HepG2.2.15细胞系HBsAg与HBeAg表达及HBV-DNA含量的影响. 结果: 96孔板试验: 实验第3, 6日, IL对HBsAg和HBeAg表达均有明显的抑制作用(与对照组比较P<0.01). 24孔板试验: 实验第3, 6, 9日IL对HBsAg表达有明显的抑制作用(与对照组比较P<0.01);实验第6, 9日IL对HBeAg表达有明显的抑制作用(与对照组比较P<0.01);同时采用定量PCR方法检测,IL (400 mg/L )可使培养基中的HBV-DNA转阴. 结论: IL体外实验(培养细胞)有较强的抗乙肝病毒作用.     

新加达原饮治疗慢性乙型肝炎的临床研究*

目的〓观察新加达原饮治疗慢性乙型肝炎（CHB）的临床疗效。方法〓20例患者均给予新加达原饮治疗,疗程12周,比较治疗前、治疗后4、8、12周时患者肝功能,HBeAg及HBV-DNA变化情况,分析ALT、HBeAg及HBV-DNA的关系。结果〓与治疗前比较,患者ALT于治疗后8周时显著升高（P<0.01）,12周时明显下降（P<0.01）;HBeAg及HBV-DNA水平持续下降,治疗12周时下降最显著（P<0.01）。结论〓新加达原饮能快速降低慢性乙型肝炎患者HBeAg及HBV-DNA的水平,根据治疗后患者ALT,HBV-DNA及HBeAg变化曲线不同,推测新加达原饮抗乙型肝炎病毒的机制可能是通过激发机体免疫应答完成的。     

核酶对2.2.15细胞中HBeAg表达抑制作用的初步观察

目的：观察针对Ｈ了Ｃ区双位点核酶对２．２．１５细胞中ＨＢｅＡｇ表达的抑制作用。方法：利用亚克隆技术,从质粒ｐＧＥＭ－Ｒｚ１２３切下ＥｃｏＲ１－ＢａｍＨ１片段克隆于真核表达质料ｐＢＢＳ２１２中,将该质料转染２．２．１５细胞,用ＥＬＩＳＡ及免疫组化方法观察该核酶对ＨＢｅＡｇ合成的抑制作用。结果：细胞表达出针对ＨＢＶ Ｃ区核酶,该核酶对ＨＢｅＡｇ的抑制制达４８．６％。结论：该双位点核酶可能通过针对ＨＢＶ     

miR-122表达载体的构建及其对HepG2.2.15细胞增殖的抑制作用

目的构建miR-122表达载体并检测其表达对HepG2.2.15细胞恶性表型的逆转作用。方法以HepG2.2.15细胞基因组DNA为模板,PCR扩增miR-122前体cDNA序列,以质粒pSilencer3.1-H1 neo为母本,构建miR-122表达载体将其转染HepG2.2.15细胞。表达后,利用ELISA检测HepG2.2.15细胞HBV复制和表达的变化,利用CCK8检测细胞增殖的变化。结果构建的miR-122表达载体可在HepG2.2.15细胞中表达。转染后HepG2.2.15细胞中HBV复制、表达以及细胞增殖均被抑制。结论 miR-122表达载体可在HepG2.2.15细胞中有效表达,其表达可抑制HBV复制、表达以及细胞增殖。     

紫花地丁水浸出物对HepG2．2．15细胞分泌HBsAg的影响

目的探讨紫花地丁水浸出物对HepG2．2．15细胞分泌HBsAg的影响。方法将加药培养液和HepG2．2．15细胞共同培养3、6、9天后,采用MTT和EHSA法分别测定紫花地丁对细胞的毒性作用和对上清液中HBsAg含量的影响。结果紫花地丁是一种低毒药物,可有效地抑制HepG2．2．15细胞分泌的HBsAg。结论紫花地丁水浸出物在体外有一定的抗HBV作用。     

蚕蛹水解氨基酸对人肝癌细胞HepG2.2.15的体外抑制作用的研究

目的探讨蚕蛹水解氨基酸对Hep G2.2.15(人肝癌细胞株)在体外的抑制作用。方法运用MTT比色法测定蚕蛹水解氨基酸对人QSG-7701(正常肝脏细胞株)的毒性后,计算蚕蛹水解氨基酸的安全浓度。将蚕蛹水解氨基酸溶液分别配制成0.001 mg/ml、0.01 mg/ml、0.1 mg/ml、1 mg/ml和10 mg/ml的浓度,与Hep G2.2.15细胞共同培养,实验同时设置空白对照和细胞对照组。每组设置4个复孔,每孔加入100μl的5×104个/ml的细胞悬液,于培养的24、48、72小时后,用MTT比色法测定OD值,评定蚕蛹水解氨基酸对Hep G2.2.15细胞株的抑制作用。结果蚕蛹水解氨基酸的最大无毒浓度(TC0)为12 mg/ml。梯度浓度的蚕蛹水解氨基酸与Hep G2.2.15细胞共同培养24、48和72 h后,与细胞对照组相比,OD值的差异有显著性(P<0.05),并有时间和浓度的线性关系。结论蚕蛹水解氨基酸对人肝癌细胞Hep G2.2.15具有显著的抑制作用,且毒性较低。     

干扰素对HepG2.2.15细胞表达HBVM及p53蛋白影响的实验研究

目的：观察α-2b干扰素对细胞培养上清中HBsAg和HBeAg、HBV—DNA水平和对p53蛋白的影响作用。方法：分别用酶联免疫吸附实验和荧光定量PCR法测定培养HepG2．2．15细胞悬浮液中HBV—DNA,HBsAg和HBeAg含量变化;免疫组化法观察p53蛋白在培养细胞中的含量和分布;计算α-2b干扰素对HBV及相关抗原的抑制率。结果：α-2b干扰素在1000IU／mL-5000IU／mL浓度范围内呈剂量相关性抑制。当浓度达3000IU／mL,作用至第5d时,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别达89,32％、87．23％和82．66％,并趋于稳定。免疫组化染色,治疗组p53蛋白颗粒增多,与细胞核相联,胞浆颗粒稀少。结论：α-2b干扰素可抑制HepG2．2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg、HBV—DNA,并能影响p53蛋白的表达和分布,提示α-2b干扰素在治疗慢性乙型肝炎和防治慢性HBV感染诱发原发性肝癌的价值。     

阳离子脂质体介导pEGFP-N1转染HepG2.2.15细胞效率初探

目的探讨阳离子脂质体介导绿色荧光蛋白质粒转染HepG2.2.15细胞的转染效率。方法以阳离子脂质体包裹绿色荧光蛋白质粒转染HepG2.2.15细胞,观察不同配比的脂质体与绿色荧光蛋白的转染率。结果对照组未见绿色荧光蛋白表达,各实验组HepG2.2.15细胞均可见绿色荧光蛋白表达,表达量随脂质体浓度增加而增加(P<0.05),最高转染率为23.22%。结论阳离子脂质体能有效地介导绿色荧光蛋白质粒转染HepG2.2.15细胞。     

脱氧核酶及锁核酸核酶对2.2.15细胞中HBsAg和HBeAg表达的抑制作用

目的：观察针对HBV前C/C区的脱氧核酶（DNAzyme）及锁核酸核酶（LNAzyme）对2.2.15细胞中HBsAg、HBeAg表达的抑制作用。方法：设计合成针对HBV前C/C区2031位点的10-23DNAzyme、点硫代修饰的10-23DNAzyme及LNAzyme。本实验设对照组和10-23DNAzyme组、点硫代修饰的10-23DNAzyme组、LNAzyme实验组。对照组包括空白对照组、单纯脂质体对照组、单纯10-23DNAzyme对照组、无关10-23DNAzyme对照组。观察在0.16、0.64、1.28、1.60及1.92 μmol·L^-1浓度下及12、24、36、48、60、72、84及96 h时间段对2.2.15细胞的HBsAg、HBeAg表达的抑制效应。结果：10-23DNAzyme及LNAzyme作用于2.2.15细胞后,可明显抑制HBsAg、HBeAg的表达,且抑制率LNAzyme明显高于点硫代修饰的10-23DNAzyme,而后者又明显高于未进行任何修饰的10-23DNAzyme组。LNAzyme及点硫代修饰的10-23DNAzyme对HBsAg的最高抑制率分别是(91.6±8.4)％和(78.4±2.0)％,对HBeAg的最高抑制率分别是(90.1±5.2)％和(76.4±4.8)％;在给药后12 h就表现出抑制效应,48 h达高峰,LNAzymes、点硫代修饰的10-23DNAzyme有效抑制时间分别是为84及72 h。其对2.2.15细胞未见明显的细胞毒性作用。结论：10-23DNAzyme及LNAzyme对2.2.15细胞具有明显的高效阻断HBV的HBsAg、HBeAg表达的作用,且LNAzyme优于DNAzyme,是一类特异的高效的抗HBV治疗剂。     

蚕蛹水解氨基酸对人肝癌细胞 HepG2．2．15的体外抑制作用的研究

目的：探讨蚕蛹水解氨基酸对HepG2．2．15（人肝癌细胞株）在体外的抑制作用。方法运用MTT比色法测定蚕蛹水解氨基酸对人QSG-7701（正常肝脏细胞株）的毒性后,计算蚕蛹水解氨基酸的安全浓度。将蚕蛹水解氨基酸溶液分别配制成0．001 mg／ml、0．01 mg／ml、0．1 mg／ml、1 mg／ml和10 mg／ml的浓度,与HepG2．2．15细胞共同培养,实验同时设置空白对照和细胞对照组。每组设置4个复孔,每孔加入100μl的5×104个／ml的细胞悬液,于培养的24、48、72小时后,用MTT比色法测定OD值,评定蚕蛹水解氨基酸对HepG2．2．15细胞株的抑制作用。结果蚕蛹水解氨基酸的最大无毒浓度（TC0）为12 mg／ml。梯度浓度的蚕蛹水解氨基酸与HepG2．2．15细胞共同培养24、48和72 h后,与细胞对照组相比,OD值的差异有显著性（P＜0．05）,并有时间和浓度的线性关系。结论蚕蛹水解氨基酸对人肝癌细胞HepG2．2．15具有显著的抑制作用,且毒性较低。     

甘草甜素对HepG2.2.15细胞株HBeAg水平及TLR4表达的影响

目的 探讨甘草甜素(GL)时HepG2.2.15细胞上清HBeAg分泌,Toll样受体4(TLR 4)信号分子的表达及对细胞增殖的影响.方法 实时荧光定量PCR检测TLR4表达;直接免疫荧光流式细胞术(FCM)检测表达TLR4的阳性细胞率;ELASA检测HBV所分泌抗原;MTT检测细胞增殖活性,并与空白对照组比较.结果 给药后HBV e抗原(HBeAg)的分泌结果显示,总体均数间差异显著(P<0.05),但甘草甜素各组与对照组比较差异无统计学意义;GL各组TLR4 mRNA及流式细胞TLR4的表达总体均数间均有显著差异(P<0.01),分别与对照组相比差异有显著性(P<0.01),100μg/mL组尤其明显;MTT实验显示,200μg/mL缸以下三个剂量组均可促进细胞增殖,50μg/mL组与对照组间差异显著(P<0.05);400μg/mL、800μg/mL两组均显著抑制细胞增殖(P<0.01);而MTT结果与HBeAg水平呈显著负相关(P<0.01),与TLR4表达无相关关系(P>0.05.结论 研究表明,甘草甜素对HepG2.2.15的e抗原分泌可能具有双向作用;细胞的存活率与e抗原呈负相关;TLR4在HepG2.2.15细胞株低表达,GL可上调TLR 4表达,甘草甜素可影响先天免疫中的TLR4信号分子,有可能在体内通过免疫途径影响HBV复制和抗原分泌.     

TLR7激活对HepG2.2.15细胞株炎症因子TNF-α和IL-6表达的上调作用

目的比较乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因组稳定转染细胞株HepG2.2.15和肝癌细胞株HepG2中TLR7表达,分析HepG2.2.15细胞中TLR7激活后诱导炎症因子表达。方法通过实时荧光定量(Real-time)PCR分析HepG2和HepG2.2.15中TLR7受体、IL-6和TNF-αmRNA水平表达。TLR7配体Gardiquimod刺激20min后,Western blot分析激活的信号通路;刺激6h,Real-timePCR分析TLR7激活后IL-6和TNF-αmRNA水平表达变化;刺激48h,ELISA法分析IL-6和TNF-α蛋白质水平表达变化。结果HepG2.2.15细胞株中TLR7mRNA水平表达比HepG2中的表达高约30倍(P0.01)。在没有任何刺激的条件下,HepG2.2.15细胞株中IL-6和TNF-αmRNA水平表达比HepG2中的表达分别高约7.5和9.3倍;Gardiquimod刺激6h后,HepG2.2.15细胞株中IL-6和TNF-αmRNA表达水平明显升高,并具有剂量依赖关系(P0.01),而HepG2细胞在相同的刺激下IL-6和TNF-αmRNA表达水平升高并不明显(P0.05);刺激48h后,IL-6和TNF-α蛋白质表达水平变化与其mRNA水平变化一致(P0.01)。HepG2.2.15细胞株经Gardiquimod刺激后NF-κBp65亚单位进入细胞核中量显著增加。结论TLR7激活后能够上调HepG2.2.15细胞中IL-6和TNF-α的表达,提示TLR7可能在乙型病毒性肝炎的病理生理过程中发挥作用。     

EB1089对肝癌HepG2细胞的抑制作用

目的:探讨EB1089对体外培养的肝癌HepG2细胞增殖的影响.方法:以1,10,100nmol/LEB1089分别作用2,4,6和8d,采用平板克隆形成实验、细胞计数法及MTT法测定EB1089对HepG2细胞生长增殖的抑制作用,并绘制生长曲线.流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡.结果:平板克隆形成试验及MTT提示,EB1089对HepG2细胞的增殖有显著抑制作用,抑制率为16.9%～74.3%,EB1089的IC50为8.2nmol/L;细胞计数法的结果提示与平板克隆形成试验结果一致.流式细胞仪检测结果显示,10nmol/LEB1089处理HepG2细胞4d,G1期细胞占71.0%,对照组G1期细胞为63.2%,呈降低趋势;处理组与对照组S期及G2期分别占28.9%和36.8%,呈增加趋势,且处理组有凋亡峰出现,凋亡细胞占21.4%.结论:EB1089能够显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖,其机制可能与诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡有关.     

设计特异性结合HBV X基因启动子的人工锌指蛋白以抑制HepG2.2.15细胞中HBV的转录

目的：设计人工锌指蛋白（zinc finger protein,ZFP）特异性结合于乙型肝炎病毒X蛋白（hepatitis B virus X protein,HBX）基因启动子,观察ZFP在体外对乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）转录的抑制。方法：将pcDNA3.1-ZFP转染入HepG2.2.15细胞24 h后,用Western blot检测HBX蛋白的含量;用ELISA和real-time PCR检测上清液中乙型肝炎核心相关抗原（hepatitis B e antigen,HBeAg）和HBV DNA含量,用RT-PCR检测胞内HBV mRNA水平。结果：ZFP可抑制HepG2.2.15细胞中HBX的表达;相比空质粒组,ZFP组细胞培养上清液中HBV DNA 拷贝量和HBeAg 含量分别下降了51.7%（t=23.079,P=0.000,９５％CI=44.98%～58.52%）、33.8%（t=3.887,P=0.003,９５％CI=12.12%～55.48%）;细胞内HBV mRNA也明显减少（t=3.616,P=0.022）。结论：人工设计的可特异性结合于HBX的ZFP可于HepG2.2.15细胞中有效抑制HBV转录。