人胆固醇酯水解酶对泡沫细胞的影响及相关机制的研究

目的 探讨人胆固醇酯水解酶(hCEH)表达对泡沫细胞的影响及相关机制.方法 利用含hCEH的慢病毒转染RAW264.7小鼠单核巨噬细胞,转染成功后巨噬细胞泡沫化.油红O染色和高效液相色谱分析hCEH对细胞内脂滴堆积情况及游离胆固醇含量变化的影响;Western blot检测ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)的表达情况.结果 转染72 h后,荧光细胞数量最多,接近50％,hCEH在细胞内大量表达;随着时间的延长,油红O染色阳性细胞数逐渐减少,细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量逐渐下降;Western blot显示在0～8 h,ABCA1和ABCG1表达逐渐增加,8h达高峰,以后逐渐减少.结论 hCEH表达可以促进巨噬细胞表面ABCA1、ABCG1的表达,并且ABCA1、ABCG1之间存在一定的协同性,从而有效增加了游离胆固醇外流、减少胆固醇酯在细胞内聚积,抑制泡沫细胞形成.     

白藜芦醇对胆固醇酯水解酶的调节作用

目的观察白藜芦醇对胆固醇酯水解酶（carboxylic ester hydrolase,CEH）的调节作用及对动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法 8周龄ApoE-/-小鼠分为空白对照组、CEH siRNA组、白藜芦醇＋CEH siRNA组及白藜芦醇组,高脂饲料同时给予白藜芦醇和（或）CEH siRNA干预,喂养10周后检测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量;取主动脉,常规HE染色,观察主动脉形态学变化;通过qRT-PCR和Western Blot观察血管细胞黏附分子1（vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）和补体因子H（complement factor H,CFH）表达情况。结果与对照组比较,白藜芦醇组LDL-C显著降低（P〈0.01）,CEH siRNA组LDL-C显著升高（P〈0.01）;与对照组比较,白藜芦醇组的内膜和中膜的厚度明显减轻（P〈0.01）,而CEH siRNA组内膜厚度明显增厚（P〈0.01）;qRT-PCR和Westernblot检测结果显示与对照组相比白藜芦醇组VCAM-1的表达被抑制,CFH的表达增强,而CEH siRNA组VCAM-1的表达明显被增强,CFH的表达明显被抑制。结论白藜芦醇可能通过对CEH表达的调节抑制LDL-C的含量,减少内膜厚度。     

罗格列酮对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量及SR-BⅠ表达的影响

目的通过观察罗格列酮对RAW264.7泡沫细胞内胆固醇含量和酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶1（ACAT-1）及B族Ⅰ型清
道夫受体（SR-BⅠ）表达的影响,探讨罗格列酮抗动脉粥样硬化的作用机制。方法以RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞为研究
对象,分为空白对照组、泡沫细胞组和罗格列酮组,用不同浓度的罗格列酮（5、10和20μmol/L）对泡沫细胞进行干预。采用油红
O染色观察泡沫细胞形成,胆固醇氧化酶法检测泡沫细胞内胆固醇含量的变化;Western blotting技术检测泡沫细胞表面
ACAT-1及SR-BⅠ的表达。结果与对照组相比,泡沫细胞组内总胆固醇及游离胆固醇含量升高（P<0.01）、ACAT-1表达增加
（P<0.05）、SR-BⅠ表达略有增加（P>0.05）;与泡沫细胞组相比,不同浓度罗格列酮干预组细胞内总胆固醇及游离胆固醇含量下
降（P<0.05）、ACAT-1表达下降（P<0.05）、SR-BⅠ表达升高（P<0.05）,呈现出一定的浓度依赖性。结论罗格列酮可通过下调
ACAT-1的表达和上调SR-BⅠ的表达来降低泡沫细胞内胆固醇含量,从而发挥抗动脉粥样硬化作用。
     

胆固醇流出对氧化性低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞凋亡的影响

目的探讨胆固醇流出对氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞凋亡的影响。方法采用高效液相分析法检测细胞内胆固醇含量;用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果用ox-LDL处理RAW264.7细胞48h后,细胞内胆固醇明显增加,同时细胞的凋亡率也随之明显增加;而用胆固醇流出刺激物高密度脂蛋白3和β-环糊精处理细胞后,细胞内胆固醇流出显著增加,细胞内总胆固醇明显减少,细胞凋亡率也下降明显。而用胆固醇流出阻断物BFA后,细胞内胆固醇流出明显下降,高密度脂蛋白对细胞的保护作用被明显的削弱。结论促细胞内胆固醇流出能够抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞的凋亡。     

整合素β1基因对RAW264.7细胞摄脂功能的影响

目的初步探讨整合素β1基因在RAW264.7细胞摄脂过程中的作用。方法针对整合素β1基因的不同靶点设计并化学合成3条具有阳性转染率的siRNA,用脂质体法转染RAW264.7细胞,并根据转染的方式将实验分为空白对照组、转染siRNA阴性对照组、脂质体对照组和转染筛选出的阳性转染率最高的siRNA组。用Cy3标记siRNA荧光显微镜下检测转染效率,Real-time PCR筛选沉默效率最高的siRNA,细胞黏附性实验检测细胞黏附性的改变,脂质油红O化学染色法检测细胞的脂质摄取量的变化,上述检测均重复测定3次。结果成功将siRNA转染入RAW264.7细胞,并成功筛选出沉默效率最高(65%)的siRNA为siRNA1,转染后实验组整合素β1mRNA表达明显低于其他组,细胞的黏附性从其他组的70%以上降低到53%,泡沫细胞转化率由其他组的90%以上显著降低到17%,摄脂能力显著降低,与其他组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论整合素β1基因明显影响RAW264.7细胞的摄脂功能,进而影响RAW264.7细胞向泡沫细胞的转化。     

过表达KLF4对RAW264.7巨噬细胞ABCA1表达和胆固醇蓄积的影响

目的观察KLF4过表达对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)胆固醇蓄积的影响及对ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)表达的影响。方法构建KLF4过表达的RAW264.7细胞株。将细胞分为三组:对照组、ox-LDL组、KLF4过表达+ox-LDL组,后两组加入终浓度为30 μg/mL的ox-LDL处理24 h。分别运用油红O染色观察细胞质脂滴变化,高效液相色谱法（HPLC）检测细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,Western blot法检测各组细胞ABCA1及KLF4蛋白表达。结果泡沫细胞模型组的细胞内存在大量的红色脂滴,KLF4及ABCA1蛋白表达及胆固醇含量较对照组升高;KLF4过表达细胞经ox-LDL处理后,细胞内脂滴较模型组明显减少,胆固醇含量下降,ABCA1蛋白表达进一步升高。结论KLF4可上调巨噬细胞ABCA1的表达,抑制ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积。     

白藜芦醇增强胆固醇酯水解酶的表达抑制动脉粥样硬化形成的机制

目的观察白藜芦醇是否能够通过增强胆固醇酯水解酶（cholesteryl ester hydrolase,CEH）的表达抑制动脉粥样硬化形成。方法构建表达CEH siRNA的载体并转染巨噬细胞,通过RT-PCR和Western Blot观察CEH的表达情况,检测白藜芦醇和CEH siRNA对CEH表达的影响;通过胆固醇含量分析和油红O染色观察白藜芦醇和CEH siRNA对细胞内胆固醇含量和脂滴形成的影响。结果 RT-PCR和Western blot检测结果显示CEH siRNA明显下调CEH的表达;Western blot检测结果显示与CEH siRNA、空白组、白藜芦醇＋CEH siRNA组相比白藜芦醇组CEH蛋白表达明显增强;油红O染色发现与CEH siRNA、空白组、白藜芦醇＋CEH siRNA组分别为81.2%±3.2%、74.3%±0.172 1%、69%±1.0%,而白藜芦醇组为17.45%±2.0%;胆固醇含量分析CEH siRNA、空白组、白藜芦醇＋CEH siRNA组胆固醇含量分别为0.62±0.41、0.59±0.10、0.51±0.12,而白藜芦醇组为0.23±0.06,白藜芦醇组胆固醇含量和脂滴形成明显降低。结论白藜芦醇可通过增强CEH的表达抑制动脉粥样硬化形成。     

家兔β-VLDL和VLDL对巨噬细胞内胆固醇水平的影响

本实验用 AS 模型家兔β-VLDL 和 VLDL 分别与小鼠腹腔巨噬细胞一起培养,测定细胞内 Ap(?)-B,TC、FC 和 CE 水平变化并观察细胞形态学改变。结果表明:β-VLDL 使巨噬细胞内脂质含量增加并使其转化为泡沫细胞,培养前后两者细胞内 Apo-B,TC,FC 和 CE 含量分别为30.6±3.4,148.6±6.1,49.8±2.8和98.8±10.7μg/mg,细胞蛋白质,差别均有高度显著性(P<0.01);VLDL 组培养前后的差别相应为12.3±2.5,24.0±2.4,11.24±1.6和12.9±2.7μg/mg·细胞蛋白质,差别亦均有高度显著性(P<0.01).两组问差异亦同样均有高度显著性(P<0.01).文中对两种脂蛋白与泡沫细胞的关系进行了讨论。     

高密度脂蛋白胆固醇低水平对心血管疾病的影响

目的评价低高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平对心血管疾病的影响。方法心血管疾病患者作为实验组,志愿者作为对照组,然后两组各继续分为两个亚组:正常HDL-C亚组和低HDL-C亚组。对如下数据进行分析:血压(BP)、体重指数(BMI)、腰围(WC)、血糖、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)、总HDL-C和亚群(小,中,和大)、对氧磷酶-1(PON1)活性、C反应蛋白(hs CRP)、尿酸、肿瘤坏死因子(TNF-α)、脂连蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)和细胞间黏附分子(ICAM1)。结果对照组的低HDL-C亚组与正常HDL-C亚组相比,BP和TG升高,PON1活性和脂连蛋白降低。然而,在实验组的亚组差异显然更加明显,低HDL-C亚组糖化血红蛋白,TG,OX-LDL,C反应蛋白,VEGF和小HDL-C增加,大HDL-C和脂连蛋白降低。此外,实验组正常HDL-C亚组OX-LDL,大HDL-C,和脂连蛋白呈现相关关系。结论提高HDL-C水平以及抑制OX-LDL水平可以预防心血管疾病。     

氧化型低密度脂蛋白对人主动脉平滑肌细胞生长的影响

【摘要】目的 探讨氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）作用不同时间对人主动脉平滑肌细胞（HA-VSMC）生长的影响,分析其诱导HA VSMC形成泡沫细胞的最适诱导浓度和时间,为开展动脉粥样硬化（AS）及相关疾病研究建立体外细胞模型提供依据。方法 使用不同浓度的ox LDL（15 μg/mL和20 μg/mL）分别处理HA VSMC不同时间（36、48、60、72、84、96 h）,通过测定细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量以及使用油红O染色观察细胞内脂质空泡来检测泡沫细胞形成的情况;用噻唑蓝比色实验（MTT法）检测细胞活力变化的情况。结果 细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量、胆固醇酯/总胆固醇的比值以及脂质空泡随着ox LDL浓度和处理时间的增加而增加。15 μg/mL ox LDL作用60 h细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值超过50%且脂质空泡形成,表明泡沫细胞形成;同时,与对照组相比,15 μg/mL ox LDL作用36、48 h对细胞增殖有促进作用,细胞活力显著增加（P＜005）;处理60、72和84 h细胞活力未发生显著性变化;处理96 h对细胞增殖有抑制作用,细胞活力显著下降（P＜005）。表明15 μg/mL ox LDL处理细胞建模不成功。20 μg/mL ox LDL作用48 h细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值超过50%且脂质空泡形成,表明泡沫细胞形成;同时,与15 μg/mL ox LDL处理的HA VSMC相比,20 μg/mL ox LDL处理细胞36 h细胞活力显著降低（P＜001）,处理48、60、72和84h细胞活力显著增加（P＜005）,处理96 h细胞活力无显著变化。20 μg/mL ox LDL处理细胞48、60、72和84 h建模成功。结论 浓度为20 μg/mL的 ox LDL处理HA VSMC细胞48 h细胞活力增加最为显著,其可作为建立AS体外细胞模型的最佳诱导时间和浓度。     

槲皮素对巨噬细胞胆固醇流入和流出的调节作用

目的研究槲皮素抑制RAW264.7巨噬细胞胆固醇累积、胆固醇流入及促进胆固醇流出作用及其机制。方法氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导产生的胆固醇累积用油红O染色法进行检测,同时用总胆固醇(TC)特定试剂盒检测了RAW264.7巨噬细胞中TC含量。流入和流出均采用荧光检测法,并用RT-PCR检测了流入流出相关基因的表达情况。结果槲皮素能够显著抑制RAW264.7巨噬细胞胆固醇累积及胆固醇流入,同时能够显著促进胆固醇流出,RT-PCR结果显示其能够提高过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、肝X受体α(LXRα)、ATP结合盒A1和G1(ABCA1,ABCG1)亚家族的m RNA表达水平,同时抑制清道夫受体(SR)-A1和SR-A2的表达水平。结论槲皮素可能是一种新型的胆固醇累积抑制剂,其作用可能是通过激活PPARγ-LXRα-ABCA1/ABCG1通路和抑制SR-A1和SR-A2的表达实现的。     

载脂蛋白A-I模拟肽对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响

目的:观察载脂蛋白A-I(apoA-I)模拟肽D-4F对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响,并探讨其机制.方法:巨噬细胞种植于24孔板,用1.85×107 Bq/孔 3H -胆固醇和含50 μg/mL氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共同孵育 24 h后,给予不同浓度的D-4F(0～100 μg/mL)干预24 ...     

高浓度LPS损伤巨噬RAW264.7线粒体功能的研究

目的研究不同浓度LPS对巨噬细胞线粒体功能的影响。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,不同浓度LPS(0、1、2、4、8和16μg/m L)诱导24 h后,采用流式细胞术检测线粒体功能,并分析细胞凋亡和细胞内活性氧水平。结果低浓度的LPS促进细胞内活性氧产生,对线粒体功能无影响或具有略增强的效应;高LPS诱导下,活性氧水平较低浓度组下降,而线粒体功能受损伤、坏死和凋亡细胞比例增加。结论高浓度LPS对RAW264.7线粒体功能有损伤作用。     

小檗碱对小鼠RAW264．7巨噬细胞极化的影响

目的观察小檗碱对脂多糖（LPS）、白细胞介素－4（IL－4）诱导的小鼠RAW264．7细胞极化的影响。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264．7,模型组和给药组分别加入LPS （终浓度100 ng／mL）或IL－4（终浓度10 ng／mL）,给药组用终浓度20μmol／L的小檗碱分别进行干预,同时空白对照组给予等体积磷酸盐缓冲液（PBS）。采用荧光定量聚合酶链反应检测精氨酸酶－1（ Arg－1）、一氧化氮合酶（ iNOS）、细胞因子信号传导抑制蛋白2（ SOCS2）、细胞因子信号传导抑制蛋白3（SOCS3）的mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子－α（TNF－α）及IL－10的分泌量。结果小檗碱对LPS刺激的巨噬细胞TNF－α分泌量的增加以及iNOS、 SOCS3 mRNA表达水平的上升均有显著的下调作用（P＜0．05或P＜0．01）;对IL－4刺激的巨噬细胞IL－10分泌量的增加和Arg－1 mRNA表达水平的上升均有显著下调作用（P＜0．05）,而对SOCS2 mRNA的表达无显著影响（P＞0．05）。结论小檗碱能抑制巨噬细胞向M1型极化,亦能抑制巨噬细胞向M2型极化,提示其可能在维持M1／M2动态平衡中发挥调节作用。     

β-葡聚糖对巨噬细胞增殖胞内游离钙及cAMP浓度的影响

目的:探讨β-葡聚糖对RAW264.7细胞增生、胞内游离钙及cAMP浓度的影响。方法:中性红比色法检测细胞生长,酚试剂法检测细胞蛋白质合成,动态检测β-葡聚糖对胞内游离钙和cAMP浓度的影响。结果:微量β-葡聚糖可促进细胞生长及蛋白质合成;β-葡聚糖作用后3~5 min使胞内游离钙浓度升高,作用1 min后使cAMP浓度升高,并保持较高水平。结论:胞内游离钙及cAMP是β-葡聚糖对RAW264.7细胞作用过程中重要的信使分子。     

LPS对小鼠肺组织及RAW264.7细胞Akt蛋白表达及磷酸化的调控

目的 探讨脂多糖 (lipopolysaccharide, LPS)在体内外对Akt蛋白表达和磷酸化水平的影响.方法 用不同剂量LPS攻击RAW264.7细胞,检测不同时相点细胞Akt蛋白表达和磷酸化水平.小鼠腹腔注射LPS 6 h 后检测肺组织Akt蛋白表达和磷酸化水平.结果 不同剂量LPS攻击RAW264.7细胞,细胞Akt蛋白表达没有显著差异(P>0.05),磷酸化水平增加.而内毒素血症小鼠肺组织Akt蛋白表达没有显著变化(P>0.05),磷酸化水平减低.结论 LPS在体内外对Akt蛋白磷酸化作用不同,体外Akt蛋白磷酸化水平增高,但在内毒素血症小鼠体内出现Akt蛋白磷酸化水平异常减低.     

冠心康含药血清对RAW264.7巨噬细胞MerTK表达的影响

目的:通过观察冠心康含药血清对RAW264.7巨噬细胞Mer受体酪氨酸激酶(Mer tyrosine kinase,Mer TK)表达的影响,探讨冠心康抗动脉粥样硬化的可能作用机制。方法:SD大鼠给予冠心康灌胃,2次/d,连续给药5 d后制备冠心康含药血清。体外常规培养RAW264.7巨噬细胞,实验分为空白对照组(加10%浓度的正常血清)、模型组[加10%浓度的正常血清+20 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)]、冠心康组(加10%浓度的冠心康含药血清+20 mg/L ox-LDL)。干预12 h后采用RT-q PCR检测各组巨噬细胞的Mer TK mRNA表达;干预24 h后采用Western blot法检测各组巨噬细胞的Mer TK蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型组Mer TK mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P0.01);与模型组比较,冠心康组Mer TK mRNA和蛋白的表达水平均明显升高(P0.01)。结论:冠心康抗动脉粥样硬化的作用可能与上调巨噬细胞Mer TK的mRNA和蛋白表达有关。