罗格列酮对高脂喂养大鼠肾小管上皮细胞SREBP-1、TGF-β1表达和细胞外基质沉积的影响

目的： 探讨高脂饮食对大鼠肾小管上皮细胞固醇调节元件结合蛋白-1（SREBP-1）、转化生长因子-β1（TGF-β1）表达和细胞外基质（ECM）沉积的影响以及罗格列酮的干预治疗。方法: 给予Wistar大鼠高脂饲料喂养并进行罗格列酮灌胃治疗3个月,进行血液生化检测。油红O检测肾脏脂质沉积情况,Masson染色检测肾脏细胞外基质沉积,SREBP-1、TGF-β1和FN蛋白表达检测采用免疫组织化学和Western blotting,原位杂交用于检测SREBP-1 mRNA的表达。结果: 罗格列酮有效避免了高脂饮食导致的大鼠血糖、血胰岛素和血甘油三酯的升高;高脂喂养组大鼠肾脏小管上皮细胞内出现了明显脂滴,小管外间质细胞外基质沉积增多,罗格列酮干预减少了脂滴和基质沉积;SREBP-1蛋白和RNA在高脂喂养组均呈高表达,明显强于正常对照组,经罗格列酮处理表达有显著下降,蛋白前体和成熟片段分别下降了27.39%和27.32%;致纤维化因子TGF-β1和细胞外基质成分之一的纤维黏连蛋白（FN）在高脂喂养大鼠肾脏的高表达均被罗格列酮干预治疗所避免,TGF-β1表达在罗格列酮干预组较高脂组降低了19.14%。结论: 罗格列酮可有效避免高脂饮食造成的大鼠肾小管上皮细胞SREBP-1、TGF-β1高表达、脂质沉积和细胞外基质堆积。     

库普弗细胞对原代培养贮脂细胞激活的调节作用

目的：观察库普弗细胞在贮脂细胞激活中的促进转化、促增殖及促进细胞外基质合成的效应；方法：采用库弗细胞和贮脂细胞分离培养，流式细胞仪测定ＤＮＡ含量，免疫组化和图像分析对贮脂细胞中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原和纤维粘连蛋白进行定量分析，液闪法检测贮脂细胞中＾３Ｈ－脯氨酸参入量；结果：（１）分离培养的贮脂细胞完全符合该细胞的各种特征；（２）贮脂细胞是肝纤维化中细胞外基质过度沉积的重要细胞来源之一；（３）库普弗细胞可     

多棘海盘车AST抗氧化作用研究

目的：以兔和大鼠心肌及肝组织匀浆为材料,研究一种多棘海盘车（Asterias amurensis)中提取得到的活性物质经结构改造和修饰得到的丁二酸二－（3β-羟基雄甾5－烯－17－酮）酯新化合物（代号AST）抗脂过氧化作用。方法：在体外产浆自发或Cys FeSO4激发脂质过氧化模型上,以丙二醛（MDA）产生作为过氧化程度指标。结果：AST在体外能抑制正常大鼠和兔心肌及肝匀浆过氧化脂质生成,并能对抗半氨酸和硫酸亚铁所致过氧化脂质生成增加。结论：AST对兔和大鼠的心肌及肝细胞匀浆均有不同程度的抗氧化作用。     

血小板活化因子对大鼠肾脏系膜细胞作用及机制探讨

目的观察血小板活化因子 (PAF)对大鼠肾小球系膜细胞 (GMC)作用 ,探讨其作用机制 ,并寻找由PAF诱导GMC损伤的保护方法。方法Wistar大鼠 ,160～200g,用改良的Hapar方法培养肾小球系膜细胞。分别置于硅化试管中 ,随机分为5组。①PAF组 ,调整RPML1640培养液中含PAF含量和45CaCl2,浓度为10 -7mmol/L和1.25mmol/L,分别测定GMC存活率、细胞内蛋白漏出量、细胞丙二醛 (MDA)、测定45Ca 的放射活性。②MnSO4 组 :调整细胞悬液中MnSO4 浓度为5×10 -4mmol/L ,测定内容同PAF组。③Verapamil(异博定 )组调整细胞悬液中Verapamil浓度为2×10 -4mmol/L,测定内容同PF组。④银杏皂甙组 :调整细胞血液中银杏皂甙提取物为浓度为100μg/ml外 ,测定内容同PF组。⑤对照组 :细胞悬液中不含PAF,测定内容同PF组。结果经PAF刺激后GMC死亡率显著升高 ,细胞外钙内流、细胞pr漏出、细胞脂质过氧化显著加强 (P<0.01)。应用Verapamil可显著减少细胞外钙内流 ,减少GMC死亡率 (P<0.01)。结论应用银杏叶醇提取物可显著减少GMC死亡率细胞脂质过氧化     

肝星形细胞的研究进展

肝星形细胞（HSCs）是肝脏中具有储存脂质特别是维生素A、合成细胞外基质、调节肝窦微循环等功能的非肝实质细胞,它们与多种肝脏疾病,特别是肝纤维化密切相关。我们简要总结了近几年有关肝星形细胞的分离、鉴定、增殖及增殖调控、在肝再生、肝病等中作用的研究进展。     

骨髓基质干细胞移植选择下调大鼠心肌梗死细胞外基质基因表达

目的心肌纤维化是心肌梗死后左室重构的主要组成部分，本实验主要观察骨髓基质干细胞移植对缺血性心肌左室重构细胞外基质的基因表达以及对心脏左室功能的影响。方法将骨髓基质干细胞经体外培养、5-氮杂胞苷（5-azacytidine）诱导、扩增及标记后，植入急性心肌梗死大鼠动物模型心肌中，于28d测定大鼠心脏功能后取出心脏并称量，对缺血性心肌的纤维化程度及注入的骨髓基质干细胞进行观察，应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及原位杂交技术，检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶1（MMP-1）和基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）等细胞外基质基因表达情况，并观察了转化生长因子（TGF）-β1基因表达情况。结果在心肌中骨髓基质干细胞存活；梗死大鼠心脏功能明显改善；心肌梗死面积明显减小（10％）；Ⅰ胶原、Ⅲ型胶原、TIM-1以及TGF-β1基因表达水平与未注入骨髓基质干细胞对照组相比显著降低，且心肌细胞纤维化被有效抑制。结论骨髓基质干细胞移植可以抑制心肌纤维化，降低细胞外基质基因表达，改善心脏功能，有望成为心肌梗死治疗的一条新途径。     

细胞外基质对培养神经元细胞存活和轴突生长的影响

目的：探讨不同的细胞外基质对体外培养胚胎大鼠脊髓运动神经元和背根神经节感觉神经元生长的影响。方法：取大鼠胚胎脊髓腹侧组织和背根神经节体外分离培养，选取不同生长底物包括多聚赖氮酸(PLL)、Ⅰ型胶原(CoⅠ)、层粘连蛋白(LN)、PLL联合LN进行包被培养板，观察运动神经元和感觉神经元的体外生长状况。结果：PLL和LN联合包被时，神经元存活率高，细胞分散良好。CoⅠ包被时细胞聚集成团．突起粗长。结论：不同的细胞外基质影响神经元的生长方式，PLL联合LN包被是体外研究单一神经元胞体和突起的较好方法。     

肝癌细胞外泌体鉴定及其对肝细胞的影响

目的 鉴定小鼠肝癌细胞Hepa1-6来源的外泌体（Hepa1-6 Exos），探讨Hepa1-6 Exos与小鼠正常肝细胞AML12共孵育时细胞摄取外泌体效率及对细胞增殖、凋亡和细胞功能的影响。方法 提取Hepa1-6 Exos；透射电子显微镜和纳米颗粒分析仪鉴定外泌体形态和粒径分布；Western blot实验检测外泌体特异性蛋白；免疫荧光技术分析AML12细胞摄取外泌体效率；CCK-8和transwell侵袭实验检测外泌体对AML12细胞增殖和凋亡能力的影响；定量聚合酶链式反应（qPCR）和Western blot实验分析外泌体对AML12细胞功能的影响。结果 Hepa1-6 Exos呈茶托样形态，粒径为50～200 nm，表达特异性蛋白CD9、CD63和TSG101。AML12细胞可高效摄取Hepa1-6 Exos。与正常AML12细胞对照组相比，Hepa1-6 Exos可促进AML12细胞增殖，24 h、48 h、72 h细胞增殖率分别为（10.15±0.91）%、（16.61±1.56）%、（28.57±1.53）%（均P <0.05）；与正常AML12细胞对照组相比，...     

改良原代大鼠肝细胞的体外分离培养和功能研究

目的建立经济有效且功能良好的原代肝细胞体外分离培养系统。方法采用0．02％胶原酶和Percoll分离液分离纯化大鼠肝细胞．光镜和电镜下观察HepatoZYME-SFM培养的肝细胞形态，自动生化仪定期检测培养肝细胞功能，RT—PCR半定量方法检测白蛋白mRNA，高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）分析安定代谢能力。结果分离纯化的大鼠肝细胞总数（2-3）×10^8 cells／整肝，活力和纯度大于95％，生长良好形态正常。培养3d后ALT、AST显著下降，加入NH4Cl后8d内BUN保持相对稳定高水平，白蛋白合成在第3-4天达到高峰，培养的2～5d内肝细胞可有效清除安定。结论通过使用低浓度胶原酶灌流、Pereoll分离液纯化以及HepatoZYME—SFM无血清培养基培养，肝细胞可有效保持良好形态结构和一定的生物合成代谢能力。     

活性氧清除剂对缺氧所致大鼠大脑皮层细胞产生脂质过氧化物的影响

对缺氧所致的大鼠大脑皮层细胞选用不同的活性氧清除剂观察其对脂质过氧化物的影响。苯甲酸钠可抑制脑细胞脂质过氧化，使脂质过氧化物生成减少；超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶对细胞脂质过氧化亦有不同程度的抑制作用，其中超氧化物歧化酶作用较强，谷胱甘肽过氧化物酶次之，过氧化氢酶作用较弱。结果提示缺氧可引起脑细胞活性氧生成增加。拮抗ＯＨ·或清除Ｏ和Ｈ＿（２）Ｏ＿（２），减弱ＯＨ·的效应均可降低细胞脂质过氧化物的生成。