高血压脑出血患者血肿周围脑组织细胞凋亡与Caspase-3表达规律的临床研究

目的初步探讨高血压脑出血患者血肿周围脑组织细胞凋亡的病理变化规律及其与Caspase-3的关系。方法术中获取19例不同时段脑出血患者血肿灶周围脑组织标本作为病例组,手术入路中远隔血肿部位脑组织标本5例作为对照组。根据脑出血后时间的不同将病例组分为:超早期组(<8h);早期组(8～24h);延期组(> 24h)。所有标本均行TUNEL染色以及Caspase-3免疫组化染色,利用图像分析仪观察阳性细胞数的变化规律,分析凋亡细胞与Caspase-3阳性细胞之间的关系。结果血肿周围脑组织存在TUNEL阳性细胞表达,出血后8～24h达高峰,随后下降,并且与Caspase-3的变化趋势相一致。结论细胞调亡是高血压脑出血患者血肿周围早期细胞死亡的主要形式。做为细胞凋亡的重要调控因子,Caspase-3的表达与脑出血后细胞凋亡的发生发展密切相关。     

同型半胱氨酸对大鼠脑出血后血肿周围细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的本实验通过观察同型半胱氨酸(Hcy)对脑出血模型大鼠血肿周围神经细胞凋亡和Caspase-3的表达的影响,探讨实验性脑出血后Hcy的损伤作用及其机制,并为预防及治疗脑出血提供实验理论基础。方法应用立体定向技术制备脑出血模型,Hcy组于术后30min予血肿同侧颅内直接注射Hcy,固定后连续切片作TUNEL染色和Caspase-3免疫组化染色,数据用SPSS13.0统计分析。结果假手术组偶可见TUNEL细胞表达,Caspase-3少量表达;脑出血组6h血肿周边组织出现TUNEL阳性细胞,72h达高峰,Caspase-3在脑出血后6h表达开始增高,24h达到高峰,应用Hcy干预后自12h起各时间点TUNEL细胞和Caspase-3表达均较ICH组增加(P<0.05),以各自高峰时间最为显著(P<0.05),但未能改变TUNEL细胞和Caspase-3表达的高峰时间。结论脑出血后血肿周围细胞凋亡与Caspase-3表达有关,Caspase-3介导了细胞凋亡的发生。Hcy能够促进脑出血后的细胞凋亡,可能与诱导Caspase-3表达有关,进一步证实Hcy为脑血管疾病的独立危险因素之一。     

依达拉奉干预对大鼠脑出血模型细胞凋亡相关通路的影响

目的研究脑出血后自由基对于细胞凋亡通路的影响。方法将动物随机分为4组,假手术组、模型组、依达拉奉组1（1mg／kg）、依达拉奉组2（3mg／kg）,通过立体定向技术,采用二次注血／退针方法向成年SD大鼠左尾壳核注入自体血80ul,制造大鼠脑出血动物模型。通过免疫组化半定量检测脑出血后肿瘤坏死因子-α（Tumournecrosis factor-alpha,TNF-a）的表达,并通过Westernblot检测脑组织中Caspase-3、8的表达水平。结果出血后模型组和药物干预组TN卜a表达水平有差异。半定量检测Caspase-3、Caspase-8蛋白水平,脑出血后二者均有激活,总体水平模型组和两种剂量药物干预组较假手术高,且模型组表达量高于药物干预组。结论脑出血后自由基可能对于TNF-α表达及分泌具有诱导作用,Caspase-3、Caspase-8蛋白表达水平升高,认为死亡受体通路可能参与脑出血后细胞凋亡,并与自由基水平有关。     

大鼠脑出血后血肿周围脑组织p75NTR的表达及其与细胞凋亡的关系

目的研究大鼠脑出血后不同时期血肿周围组织中p75NTR的表达规律及与其细胞凋亡的相关性。方法采用自体动脉血注入右侧尾状核制备大鼠脑出血动物模型,分别于脑出血后6h、24h、72h和10d处死大鼠获取血肿周围脑组织标本,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化法及实时荧光定量PCR检测p75NTR蛋白及mRNA的表达。结果脑出血后6hpp75NTR蛋白和nRNA表达水平即上升,24h继续升高,72h到达高峰,至10d仍维持在较高水平,与对照组相比均差异显著（P〈0．05）。脑出血后细胞凋亡率的动态变化趋势与p75NTR蛋白及mRNA表达变化一致,两者之间呈显著正相关（P〈0．05）。结论脑出血后p75NTR可能参与介导脑细胞凋亡。     

脑出血血肿周围脑组织细胞凋亡与细胞色素C表达的关系

目的 研究脑出血(ICH)患者血肿周围脑组织细胞凋亡与细胞色素C(Cyt-C)表达的关系.方法 选择不同时段行血肿清除术的ICH患者32例,选取手术过程中获得的血肿周围脑组织作为标本,采用TUNEL染色及免疫组织化学技术检测凋亡细胞和Cyt-C表达的变化.结果 ICH超早期组(＜8h)可见明显的TUNEL阳性细胞和Cyt-C阳性细胞;早期组(8～48h)二者均达到高峰;延期组(＞48h)TUNEL阳性细胞仍维持较高表达,而Cyt-C阳性细胞计数开始下降.凋亡细胞与Cyt-C表达呈正相关(r=0.87,P＜0.01).结论 ICH患者血肿周围脑组织中存在细胞凋亡,Cyt-C表达是细胞凋亡过程中的一个关键事件.     

大鼠脑出血后血肿周围脑组织含水量、细胞凋亡及行为变化的研究

目的通过观察大鼠脑出血模型血肿周围脑组织含水量、神经细胞凋亡及大鼠神经行为的动态变化,为临床有效治疗脑出血提供实验依据。方法制作胶原酶大鼠脑出血模型,检测大鼠脑出血后不同时间点血肿周围脑组织含水量、神经细胞调亡及神经功能缺损程度的动态变化。结果脑组织含水量在建模后2h尚未出现,9h开始出现,1～3d达到高峰,3d后逐渐消退,7d趋于正常;TUNEL阳性细胞在建模后2h只有少量,9h已明显增加,并持续增多,3d达到高峰,7d数量下降;建模后2h出现神经功能缺损症状,9～24h最明显,3d后开始减轻,7d明显减轻。结论出血后9h是临床治疗的重要时间窗。     

大鼠急性脊髓损伤后细胞凋亡以及相关蛋白表达的实验研究

目的 观察脊髓损伤（spinalcordinjury，SCI）后细胞凋亡和相关调控基因（FasL和Caspase．3）的表达情况。方法 通过建立静压型SCI模型（30g的重量，压迫T10节段10min），并用TUNEL染色（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling）和免疫组化染色方法，了解Sprague-Dawley大鼠SCI后（伤后6、12、24、48和72h以及伤后7、14、21d）细胞凋亡以及相关调控基因（FasL与Caspase-3）表达的情况。结果 大鼠SCI后损伤节段（T10节段）6h出现TUNEL阳性细胞数增加，12h达到高峰，持续3天～1周后显著减少；损伤相邻节段（T9、T11节段）伤后12h出现TUNEL阳性细胞，伤后3dTUNEL阳性细胞数达峰值；SCI后FasL与Cas-pase-3表达均有不同程度的增高。结论 大鼠脊髓损伤后多节段、长时间存在着大量的细胞凋亡；细胞凋亡可能与FasL-Caspase-3途径有关。     

大鼠脑出血后血肿周围凝血酶与脑细胞凋亡和脑水肿的关系

目的 研究大鼠脑出血后血肿周围脑组织中凝血酶的变化及其与脑细胞凋亡和脑水肿的关系.方法 105只成年雄性SD大鼠随机均分为脑出血组、生理盐水组和正常对照组.每组再随机均分为7个时相,分别为6 h、12 h、24 h、48 h、3 d、5 d、7 d;用立体定向脑内注射法制备脑出血模型;用ELISA法检测脑组织中凝血酶-抗凝血酶复合物的含量;用流式细胞仪检测脑细胞的凋亡率;用干-湿重法检测脑组织的含水量;用透射电镜观察脑组织的形态学变化.结果 制备动物模型后,脑出血组各时相血肿周围脑组织中凝血酶含量、脑细胞凋亡率、脑组织含水量均明显高于生理盐水组和正常对照组;血肿周围脑组织中凝血酶-抗凝血酶复合物的含量与脑细胞凋亡率和脑组织含水量之间均呈正相关;电镜下,在脑出血组各时相脑组织切片中均可见大量的脑细胞凋亡和毛细血管周围大片组织间隙水肿,以及神经纤维脱髓鞘改变.结论 脑出血后,血肿周围脑组织中凝血酶含量明显升高,可导致脑细胞凋亡和脑水肿,凝血酶的含量与脑细胞凋亡率和脑组织含水量呈正相关;尽早清除血肿有望改善凝血酶引起的继发性脑损伤.     

大鼠脑出血后血肿周围凝血酶与脑细胞凋亡和脑水肿的关系

目的 研究大鼠脑出血后血肿周围脑组织中凝血酶的变化及其与脑细胞凋亡和脑水肿的关系.方法 105只成年雄性SD大鼠随机均分为脑出血组、生理盐水组和正常对照组.每组再随机均分为7个时相,分别为6 h、12 h、24 h、48 h、3 d、5 d、7 d;用立体定向脑内注射法制备脑出血模型;用ELISA法检测脑组织中凝血酶-抗凝血酶复合物的含量;用流式细胞仪检测脑细胞的凋亡率;用干-湿重法检测脑组织的含水量;用透射电镜观察脑组织的形态学变化.结果 制备动物模型后,脑出血组各时相血肿周围脑组织中凝血酶含量、脑细胞凋亡率、脑组织含水量均明显高于生理盐水组和正常对照组;血肿周围脑组织中凝血酶-抗凝血酶复合物的含量与脑细胞凋亡率和脑组织含水量之间均呈正相关;电镜下,在脑出血组各时相脑组织切片中均可见大量的脑细胞凋亡和毛细血管周围大片组织间隙水肿,以及神经纤维脱髓鞘改变.结论 脑出血后,血肿周围脑组织中凝血酶含量明显升高,可导致脑细胞凋亡和脑水肿,凝血酶的含量与脑细胞凋亡率和脑组织含水量呈正相关;尽早清除血肿有望改善凝血酶引起的继发性脑损伤.     

大鼠脑出血后血肿周围凝血酶与脑细胞凋亡和脑水肿的关系

目的 研究大鼠脑出血后血肿周围脑组织中凝血酶的变化及其与脑细胞凋亡和脑水肿的关系.方法 105只成年雄性SD大鼠随机均分为脑出血组、生理盐水组和正常对照组.每组再随机均分为7个时相,分别为6 h、12 h、24 h、48 h、3 d、5 d、7 d;用立体定向脑内注射法制备脑出血模型;用ELISA法检测脑组织中凝血酶-抗凝血酶复合物的含量;用流式细胞仪检测脑细胞的凋亡率;用干-湿重法检测脑组织的含水量;用透射电镜观察脑组织的形态学变化.结果 制备动物模型后,脑出血组各时相血肿周围脑组织中凝血酶含量、脑细胞凋亡率、脑组织含水量均明显高于生理盐水组和正常对照组;血肿周围脑组织中凝血酶-抗凝血酶复合物的含量与脑细胞凋亡率和脑组织含水量之间均呈正相关;电镜下,在脑出血组各时相脑组织切片中均可见大量的脑细胞凋亡和毛细血管周围大片组织间隙水肿,以及神经纤维脱髓鞘改变.结论 脑出血后,血肿周围脑组织中凝血酶含量明显升高,可导致脑细胞凋亡和脑水肿,凝血酶的含量与脑细胞凋亡率和脑组织含水量呈正相关;尽早清除血肿有望改善凝血酶引起的继发性脑损伤.     

实验性脑出血大鼠脑内Caspase-3mRNA的表达作用研究

目的动态观察实验性脑出血大鼠脑内血肿周围神经细胞凋亡情况和Caspas-3蛋白及mRNA表达水平的变化,探讨脑H{血后血肿周围神经细胞损伤机制。方法健康雄性Wistar大鼠随机分为生理盐水对照组、假手术组和脑出血模型组,分为术后3h,6h,12h,24h,48h,3d,5d,7d共8个时相点,采用尾状核注射自体非抗凝动脉血复制大鼠脑出血模型,术后制作冰冻切片,对切片进行TUNEL染色,以及Caspase-5免疫组化和原位杂交染色,之后利用图像分析仪,观察阳性细胞数。结果脑出血后3h血肿周围尚无凋亡细胞出现,6h有凋亡发生,以后逐渐增多,3d达高峰后逐渐下降,生理盐水对照组仅有少量TUNEL阳性细胞。假手术组及生理盐水对照组3h无Caspase-3蛋白和mRNA表达,生理盐水对照组6h以后有少量表达,脑出血模型组在6hCaspase-3蛋白和mRNA开始表达,3d时Caspase-3的蛋白达到高峰,5d以后逐渐下降,24hCaspase-3mRNA表达达高峰,5d以后逐渐下降。脑出血后血肿周围脑组织Caspase-3蛋白的表达与TUNEL阳性细胞数呈正相关（r=0．515,P〈0．05）;Caspase-3蛋白表达与mRNA表达呈正相关（r=0．625,P〈0．05）。结论脑出血后血肿周围神经细胞损伤有凋亡机制参与,在出血后6h发生凋亡,第3天达高峰。Caspase-3的表达在Caspase-5蛋白水平变化趋势与脑m血后细胞凋亡的趋势一致,Caspase-3的mRNA水平的表达高峰时间先于Caspase-3蛋白的表达及凋亡的发生,提示Caspase-3的表达决定脑出血后细胞凋亡的发生,在脑出血后细胞凋亡中起促进作用。     

人脑出血后海马神经元损伤与Caspase-3的关系

目的　研究人脑出血后海马神经元损伤与凋亡促进因子Caspase- 3之间的关系。方法　选取10例因脑出血而死亡的尸检脑标本,应用HE染色,Caspase- 3免疫组织化学染色和Caspase- 3m RNA原位杂交,观察脑出血时海马CA1 区神经元损伤变化与Caspase- 3表达之间的关系。结果　海马CA1 区,出血5 h可检测Caspase- 3免疫组化染色的阳性细胞(10 .4个/高倍视野) ,2 2～4 8h时达高峰(2 1.7～2 4 .3个/高倍视野)。Caspase- 3m RNA原位杂交阳性表达始于5 h(6 .75个/高倍视野) ,2 4 h达高峰(14 .6 0～18.30个/高倍视野) ;二者均在72 h后呈明显下降趋势。出血2 4 h,可检测到TUNEL阳性细胞,持续至72 h。Caspase- 3m RNA与Caspase- 3呈正相关,相关系数为0 .717(P<0 .0 5 )。4～16 h受损神经元形态基本正常,2 4～4 8h细胞凋亡特征明显,72 h后,几乎所有神经元形态呈现严重病理变化。结论　人脑出血后海马神经元发生一系列形态学变化,其演变规律与凋亡促进因子Caspase- 3有密切相关性。     

赛莱乐治疗实验性脑出血的研究

目的　观察赛莱乐对脑出血的治疗作用及安全性。方法　采用定量胶原酶注入大鼠尾状核建立脑出血模型 ,观察赛莱乐对实验鼠注入胶原酶后血肿容积、神经功能缺失征评分及组织病理变化的影响。脑局部微血管用微血管灌注法观察。结果　赛莱乐治疗 5天可以减轻大鼠神经功能缺失体征 ,即 86 %的大鼠由 级转为 级 ,14 %转为 0级 (P<0 .0 5 ) ,改善脑内血肿周围微循环 ,不引起脑内血肿扩大。结论　赛莱乐对实验性脑出血有一定治疗作用 ,无加重出血副作用     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂对大鼠脑出血后神经元凋亡的影响

目的　探讨半胱氨酸蛋白酶 (Caspase)抑制剂zVADfmk对大鼠脑出血 (ICH)后Caspase 3激活及神经元凋亡的影响。方法　应用立体定向技术 ,将自体不凝血 5 0 μl注入大鼠尾状核区制备ICH模型 ,并侧脑室注入zVADfmk,分别在不同时间点断头取脑 ,连续切片作TUNEL染色和Caspase 3免疫组化染色。结果　ICH后血肿周围组织Caspase 3表达明显增强 ,TUNEL阳性细胞数明显增加 ,与假手术组相比差异显著 (P <0 0 1)。zVADfmk治疗组Caspase 3及TUNEL阳性细胞数较对照组明显减少 (P <0 0 5 )。结论　Caspase抑制剂能明显抑制Caspase 3的激活 ,减少神经元的凋亡 ,对出血性脑损伤有保护作用。     

实验性脑出血后大鼠行为学和血肿周围组织病理学的研究

目的观察大鼠脑出血后不同时间点神经行为学和血肿周围脑组织病理学的特点。方法将成年SD大鼠随机分为假手术组和脑出血组;脑出血组大鼠通过立体定向术向脑内注入VII型胶原酶制成脑尾状核出血模型,并按不同时间点（1、3、7、14、28d）分为5个亚组。采用神经功能评分和HE染色分别观察脑出血大鼠神经行为学和脑组织形态学的改变。结果与假手术组相比,脑出血组大鼠的神经行为学评分3d时最明显[3d与1、7d无明显差异（P〉0.05）;与14d和28d有显著差异（P〈0.05）]。脑出血后1d在尾壳核区域可见血肿形成,呈椭圆形或不规则形;3d时脑水肿明显;7d时血肿周围脑组织有胶质细胞增生;14d时血肿区逐渐形成不规则囊腔;28d时囊腔仍然存在,出血周边区见胶质细胞进一步增多。结论脑出血后神经行为学的改变、血肿及囊腔的形成与出血时间有关。     

脑溢安对脑出血大鼠脑内bFGF表达的影响

目的：探讨国家三类新药－脑溢安颗粒（NYA）对脑出血大鼠脑出碱性成纤维因子（bFGF）蛋白和mRNA表达的影响，从而为治疗脑出血，促进 神经功能的修复提供理论依据。方法：用Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型，并进行行为学计分，免疫组化、Northern blot4及吸光度扫描。结果：模型组的行为学计分在术后24h时开始降低，7d时逐渐减弱，脑溢安组在各个时间的表达均强于模型组，结论：脑溢安治疗脑出血有增强bFGF的表达，从而使行为学得到改善，这可能是脑溢安促进神经功能修复的主要机制之一。     

实验性大鼠脑出血后TNF-α、ICAM-1的表达和脑水肿的研究

目的:探讨TNF-α、ICAM-1在大鼠脑出血后脑水肿中的表达及意义。方法:利用立体定向技术建立中等 量大鼠自体尾动脉血脑出血模型(50μl),于脑出血后6h、24h、48h、72h处死大鼠,进行脑含水量测定,并于脑出血后3h、 6h、12h、24h、48h、72h、7d处死大鼠,进行TNF-α、IGAM-1的免疫组化染色,并对结果进行统计处理。结果:大鼠脑出血 后脑水肿于48h达到高峰;大鼠脑组织表达TNF-α也于48h达到高峰,高于假手术组,分别为58．4±6．19和2±1．12,P <0．01;ICAM-1表达72h达高峰,与假手术组比较存在显著性差异,分别为7．8±0．84和0．8±0．84,P<0．01。结论: TNF-α、ICAM-1在大鼠脑出血后血肿周围表达的高峰与脑水肿高峰存在时间上的相关性,提示高表达的TNF-α、ICAM- 1可能参与了脑水肿形成。