TNF-α对精氨酸加压素诱导下大鼠心肌成纤维细胞诱导型一氧化氮合酶-一氧化氮系统活性的影响

目的：探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对精氨酸加压素(AVP)诱导下大鼠心肌成纤维细胞(CFs)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)-一氧化氮(NO)系统活性的影响。方法： 胰酶消化法分离培养Sprague-Dawley仔鼠CFs，应用硝酸还原酶法、分光光度法和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定不同浓度TNF-α与AVP联合作用下CFs的NO含量、NOS活性和iNOS mRNA表达。 结果： AVP诱导CFs iNOS mRNA表达上调，NOS活性提高，NO合成增加。一定浓度下TNF-α可与AVP联合作用，剂量依赖性地增加AVP对CFs iNOS-NO系统活性的提高作用。但当TNF-α浓度过高时，CFs的iNOS-NO系统活性不继续升高，反而有所下降。 结论： TNF-α可与AVP联合提高CFs的iNOS-NO系统活性，NO合成增加可拮抗TNF-α和AVP的促心脏重构作用。     

促红细胞生成素通过PI3-K/Akt信号通路抑制血管紧张素II诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞增殖

目的： 探讨促红细胞生成素（EPO）对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的心脏成纤维细胞（CFs）增殖的影响,以及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3-K/Akt）信号途径和一氧化氮合酶（NOS）的作用。方法: 应用胰酶和胶原酶双酶和差速贴壁法分离培养新生大鼠CFs细胞,应用EPO、Ang Ⅱ、PI3-K抑制剂LY294002、NOS抑制剂L-NAME不同因素干预。细胞计数和MTT法作出CFs的生长曲线,检测CFs的增殖。化学酶法检测CFs培养液中的一氧化氮（NO）浓度以及总NOS和其亚型的活性。Western blotting检测Akt、p-Akt、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和诱生型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白的表达。结果: Ang Ⅱ促CFs增殖的作用显著。EPO剂量依赖性的增加CFs培养液中的NO浓度,同时剂量依赖性的抑制Ang Ⅱ诱导的CFs增殖。在给药后第4 d,和单纯的Ang Ⅱ相比,浓度为5×103 U/L、1×104 U/L和2×104 U/L EPO对CFs增殖的抑制率分别达到了24.4％、41.5%和50.5%。EPO显著提高Akt的磷酸化水平,促进eNOS蛋白的表达。应用PI3-K抑制剂LY294002和NOS抑制剂L-NAME均能使培养液中的NO浓度也随之下降,EPO抑制Ang Ⅱ诱导CFs增殖的作用均被阻断。但LY294002同时阻断了eNOS蛋白表达,而L-NAME对eNOS没有影响。结论: EPO可剂量依赖性的抑制Ang Ⅱ诱导的新生大鼠CFs的增殖。其作用机制是通过激活PI3-K/Akt信号途径促使CFs中eNOS表达来促进NO的生成,从而抑制CFs的增殖。     

醛固酮对大鼠心脏成纤维细胞内皮素表达的影响

目的探讨醛固酮(Ald)对新生大鼠心脏成纤维细胞(CFs)内皮素(ET)表达的影响。方法采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取新生大鼠CFs,应用放射免疫法、免疫荧光检测法、RT-PCR方法分别测定不同条件下CFs培养液中ET水平和CFs中的ET-1含量以及ppET-1 mRNA的表达。结果醛固酮(10-9、10-8和10-7mol/L)可剂量依赖性地促进CFsppET-1mRNA的表达以及ET-1的合成和分泌,同时醛固酮(10-7mol/L)以时间依赖的方式促进CFsppET-1 mRNA的表达,在作用2h后表达开始增加,4h达高峰,以后逐渐降低。提前给予螺内酯(10-6mol/L)能抑制醛固酮(10-7mol/L)的上述作用。结论醛固酮能促使CFsppET-1 mRNA的表达以及ET-1的合成和分泌,且此作用可能是通过盐皮质激素受体介导。     

促红细胞生成素通过P13-K／Akt信号通路抑制血管紧张素Ⅱ诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞增殖

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对血管紧张素11（AngⅡ）诱导的心脏成纤维细胞（CFs）增殖的影响,以及磷脂酰肌醇-3-激酶／蛋白激酶B（P13-K／Akt）信号途径和-氧化氮合酶（NOS）的作用。方法：应用胰酶和胶原酶双酶和差速贴壁法分离培养新生大鼠CFs细胞,应用EPO、AngⅡ、P13-K抑制剂LY294002、NOS抑制剂L—NAME不同因素干预。细胞计数和MTT法作出CFs的生长曲线,检测CFs的增殖。化学酶法检测CFs培养液中的-氧化氮（NO）浓度以及总NOS和其亚型的活性。Western blotting检测Akt、P—Akt、内皮型-氧化氮合酶（eNOS）和诱生型-氧化氮合酶（iNOS）蛋白的表达。结果：AngⅡ促CFs增殖的作用显著。EPO剂量依赖性的增加CFs培养液中的NO浓度,同时剂量依赖性的抑制AngⅡ诱导的CFs增殖。在给药后第4d,和单纯的AngⅡ相比,浓度为5×10。U／L、1×10^4U／L和2×10^4U／LEPO对CFs增殖的抑制率分别达到了24．4％、41．5％和50．5％。EPO显著提高Akt的磷酸化水平,促进eNOS蛋白的表达。应用P13-K抑制剂LY294002和NOS抑制剂L—NAME均能使培养液中的NO浓度也随之下降,EPO抑制AngⅡ诱导CFs增殖的作用均被阻断。但LY294002同时阻断了cNOS蛋白表达,而L—NAME对cNOS没有影响。结论：EPO可剂量依赖性的抑制AngⅡ诱导的新生大鼠CFs的增殖。其作用机制是通过激活P13-K／Akt信号途径促使CFs中eNOS表达来促进NO的生成,从而抑制CFs的增殖。     

醛固酮对新生大鼠心肌成纤维细胞PTEN表达的影响

目的研究醛固酮(Ald)诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖中PTENmRNA、蛋白表达及螺内酯(Spi)对其表达的影响,从而探讨Ald对心肌成纤维细胞PTEN表达的影响。方法用体外培养新生SD大鼠的CFs,以Ald诱导其增殖和胶原合成,并加入Spi干预,用RT-PCR和Western Blot分别测定PTENmRNA和蛋白表达。结果与对照组相比,Ald组的CFs增殖和羟脯氨酸含量明显增加(P<0.05),并呈浓度依赖性降低PTENmRNA和蛋白表达(P<0.05);与Ald组相比,Ald+Spi组的CFs增殖和羟脯氨酸含量明显减少(P<0.05),同时其PTENmRNA、蛋白表达均明显升高(P<0.05)。结论醛固酮可通过盐皮质激素受体(MR)介导的基因组通路降低PTEN表达发挥其致心肌纤维化作用。     

创伤弧菌溶细胞素融合蛋白对小鼠单核巨噬细胞产NO及其合酶的影响

目的 研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)对小鼠单核-巨噬细胞(J774A.1)产生一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 应用MTT法检测rVvhA对J774A.1增殖的抑制作用;Griess法检测NO含量;RT-PCR和免疫荧光法检测iNOS mRNA和蛋白表达水平.结果 0.8 HU/ml及以上浓度rVvhA可显著抑制J774A.1的增殖;在IFN-γ的辅助作用下,0.4 HU/ml的rVvhA即可诱导J774A.1产生大量NO,显著增加细胞内活性以及iNOS mRNA和蛋白表达水平.结论 rVvhA可诱导巨噬细胞产生NO和iNOS表达,在创伤弧菌的致病机制中具有重要意义.     

洛伐他汀对醛固酮诱导体外新生大鼠心肌成纤维细胞NO的调控

<正>心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖在心肌纤维化中起重要作用。已有报道CFs具有诱导型一氧化氮合酶——一氧化氮(i NOS-NO)系统,其合成的NO是一种重要的抗心肌纤维化因子[1]。他汀类药物对醛固酮诱导的CFs的i NOS-NO系统活性是否有调控作用?尚未见报道。本文实验观察了洛伐他汀干预条件下大鼠CFs的i NOS-NO系统     

参麦注射液对心肌缺血-再灌注大鼠一氧化氮合酶系统的影响

目的:探讨参麦注射液(SM)对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的防治作用及机制。方法:结扎冠状动脉前降支复制大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型,描记标准肢体II导联,测定心肌组织中丙二醛含量及结构型、诱导型一氧化氮合酶(cNOS,iNOS)活性,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测其cNOSmRNA、iNOSmRNA表达。结果:SM组心律失常发生率明显低于其他各组;cNOS活性及其mRNA表达显著增高(P<0.01),iNOS活性及其mRNA表达显著降低(P<0.01)。结论:SM能减轻缺血-再灌注引发的损伤,其作用机制可能与增加cNOS活性,促进cNOSmRNA表达,抑制iNOS活性,降低iNOSmRNA表达有关。     

葛根素对糖尿病大鼠白内障过程中晶状体诱导型一氧化氮合酶的影响

目的: 观察大鼠糖尿病性白内障(DC)晶状体诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达变化及葛根素对DC的治疗作用。方法: 经腹腔注射链脲佐菌素(STZ)复制大鼠DC模型。实验分为STZ组(STZ,45 mg/kg bw,ip)、葛根素组(STZ+葛根素,140 mg/kg bw ip)和对照组(等量生理盐水,ip),分别于实验第20、40、60 d摘取大鼠晶状体,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白印迹(Western blot)和生化方法检测晶状体iNOS mRNA和蛋白表达及一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性变化,观察晶状体损伤的宏观和微观病理变化。 结果:对照组大鼠晶状体透明,iNOS mRNA未见明显表达,蛋白呈微弱表达,NOS活性较低,NO含量较少。在DC形成过程中,晶状体出现混浊、晶状体上皮细胞(LEC)有明显病变,并随病程延长而加重;晶状体iNOS mRNA和蛋白表达明显上调,NOS活性增强、NO生成增加,并呈现时间依赖性。用药40-60 d时葛根素组前述晶状体病理变化轻于STZ组,iNOS mRNA和蛋白表达明显低于STZ组,NOS活性及NO 生成低于STZ组。结论: 在大鼠DC形成过程中晶状体iNOS 基因表达上调、NO含量增加;葛根素可减轻晶状体损伤,机制可能与抑制iNOS 基因表达、减少NO生成有关。     

从氧自由基、一氧化氮探讨四逆汤抗急性失血性休克的肝脏机制

目的:从氧自由基、一氧化氮探讨四逆汤抗急性失血性休克的肝脏机制。方法:复制急性失血性休克大鼠模型, 分为假手术对照组;单纯休克模型组;休克+生理盐水复苏组;休克+四逆注射液复苏组。四逆注射液(浓度1000g生药/L), 剂量0.1mL/200g大鼠。用生理盐水或四逆注射液治疗3h后处死动物并取组织。测定各组肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平, 一氧化氮(NO)水平。采用免疫组化染色法, 观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在肝细胞中的变化特点。RT-PCR观测肝细胞iNOS和内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的变化。结果:模型组在休克1h后SOD活性明显低于对照组(P＜0.01)、MDA水平明显高于对照组(P＜0.01)。四逆汤组复苏3h后肝组织SOD明显高于生理盐水组(P＜0.01)、MDA低于生理盐水组(P＜0.01)、NO水平明显高于生理盐水组(P＜0.01)。生理盐水组iNOS在肝细胞中染色阳性单位明显高于四逆汤组(P＜0.05)。生理盐水组促进iNOSmRNA的表达。四逆汤组eNOSmRNA的表达增强。结论:四逆汤通过清除氧自由基, 升高NO, 改善肝组织微循环, 减少诱导型iNOS表达的各种因素, 理论上减轻了NO与氧自由基生成的ONOO的细胞毒作用和血管的低反应性, 并对肝脏起到保护作用。     

化学发光法测定脑组织中一氧化氮合酶的活性

在NADPH等辅助因子的参与下，一氧化氛合酶（NOS）能催化L-精氨酸生成一氧化氮（NO）。NO与过氧化氢反应生成过氧亚硝酸，过氧亚硝酸能与鲁米诺产生化学发光反应，当NO浓度为100fmol／L～Inmol／L时，发光强度与NO量成正比．根据这一原理、利用化学发光分析建立了一种新的NOS活性测定方法。用该方法测量10只大鼠脑组织中的NOS活性，其NOS活性为28．3±6．9pmolNO／mg蛋白／min。     

Nitric oxide synthesis is increased in the endometrial tissue of women with endometriosis

BACKGROUND: Previous studies have shown that peritoneal macrophages from women with endometriosis produce excess nitric oxide (NO). This study was designed to quantify the amount of NO and determine the expression of endothelial (eNOS) and inducible NO synthases (iNOS) in women with and without endometriosis. METHODS: An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was performed on endometrial tissues obtained from controls (myoma, n = 30) and on eutopic/ectopic endometrial tissues from endometriosis patients (n = 34) to evaluate eNOS and iNOS protein concentrations in these endometrial tissues. A rapid-response chemiluminescence analyser was used to measure NO directly in fresh endometrial tissues. RESULTS: Mean (+/- SEM) levels of NO were significantly increased in the endometrial tissues of women with endometriosis (13.2 +/- 7.8 versus 19.8 +/- 12.6 nmol/g tissue; P = 0.016). Apparently higher levels of NO were found in ectopic compared with eutopic endometrium (P = 0.057). Endometrial tissues of women with endometriosis appeared to contain more iNOS than those of controls (3.6 +/- 2.2 versus 8.6 +/- 12.2 pg/ microg protein; P = 0.06), but no significant difference was found in eNOS levels. CONCLUSIONS: Greater amounts of NO and NOS are present in the endometrial tissues of women with endometriosis, implying a possible role for NO in the pathogenesis of endometriosis.     

抑制一氧化氮合酶活性促进大鼠脊髓损伤修复

NO是兼有细胞间第二信使和细胞毒性作用的气体性神经活性物质。过量NO是导致神经细胞死亡的主要因素之一、应用大鼠脊髓磁控过半夹损模型，在施加NOS抑制剂L－NAME和生理盐水作为对照条件下，手术后8周内动态观察行为学、电生理学和形态学变化．结果表明；损伤后1周，后肢行为能力逐渐增强，其中抑制剂组恢复速度较快、程度也较好，可记录到恢复的下行性脊髓诱发电位，在空洞形成和脊髓萎缩程度方面抑制剂组也均明显轻于对照组，抑制剂组未见NOS表达；但对照组伤后NOS阳性神经元渐增，至4周时达较高水平．后渐降并伴有损伤区不断扩大，神经元尼氏体移位、减少或消失。结果提示；神经损伤可诱导NOS表达，NOS抑制剂L－NAME对脊髓损伤的修复有促进作用，其机制可能与NO介导的神经毒性受阻有关。     

大鼠急性脑缺血再灌注NO含量和NOS活性变化的实验研究

目的探讨一氧化氮和一氧化氮合酶是否参与了急性脑缺血再灌注的发病机制。方法采用栓线法复制大鼠大脑中动脉阻塞模型，观察血清及脑组织NO含量和NOS活性的变化。结果脑缺血45min再灌注2h后血清及脑组织中NO含量及NOS活性增加，再灌注8h达高峰。结论NO及NOS在急性脑缺血再灌注的过程中起着重要的作用。     

病毒性肝炎中一氧化氮合酶调节的分子生物学机制

研究发现一氧化氮(NO)参与肝细胞的多项生理功能的调节,参与各种肝病的病理过程。一氧化氮具有潜在的抗病毒活性,一氧化氮合酶(NOs)作为产生一氧化氮的限速酶,不但参与一氧化氮的生成,还与一氧化氮的各种生理功能密切相关。了解与阐明肝细胞中一氧化氮合酶的分子生物学作用调节机制,有利于揭示病毒性肝炎的发病机理     

Hyperoxia reduces basal release of nitric oxide and contracts porcine coronary arteries

Aim: The purpose of the present study was to investigate whether changes in nitric oxide (NO) concentration is involved in hyperoxia‐induced vasoconstriction in porcine conduit coronary arteries. Methods: The effect of hyperoxia on NO release and vasoconstriction was evaluated by tension recording, microsensor measurements, and immunoblotting in porcine conduit coronary arteries contracted with U46619 or 5‐hydroxytryptamine. Results: In endothelium‐intact segments exchanging 20% O₂, 5% CO₂, 75% N₂ (normoxia) for 95% O₂, 5% CO₂ (hyperoxia) increased contraction. In segments without endothelium hyperoxia‐evoked contraction was abolished, but restored by an encircling donor segment with endothelium. An inhibitor of NOS, asymmetric dimethylarginine (ADMA, 300 μm ), reduced hyperoxic contraction and basal NO concentration by, respectively, 38 ± 12% and 46 ± 3% (P < 0.05, n = 9). A NO donor, S‐nitroso‐N‐acetylpenicillamine (SNAP), increased NO concentration and evoked relaxation to the same levels in normoxic and hyperoxic conditions. β‐actin and endothelial NO synthase (eNOS) protein expression was similar in normoxic and hyperoxic arterial segments. Phosphorylation of eNOS was unaltered in normoxia vs. hyperoxia, but phosphorylation of eNOS‐Ser¹¹⁷⁷ was increased and phosphorylation of eNOS‐Thr⁴⁹⁵ decreased by U46619. Blockers of ATP‐sensitive, voltage‐dependent and calcium‐activated K⁺ channels did not change hyperoxic contraction. However, high extracellular K⁺ concentration or a second and third exposure to hyperoxia decreased contraction. Conclusion: The present study provides direct evidence that hyperoxia reduces basal release of NO leading to depletable endothelium‐dependent vasoconstriction in porcine coronary arteries independent of changes in eNOS phosphorylation.     

No effect of metabolic acidosis on nitric oxide production in hypoxic and hyperoxic lung regions in pigs

Aim: In the severely ill intensive care patients metabolic acidosis and hypoxia often co‐exist. We studied the effects of metabolic acidosis on nitric oxide synthase (NOS) dependent and NOS independent nitric oxide (NO) production in hypoxic and hyperoxic lung (HL) regions in a pig model. Methods: Eighteen healthy anaesthetized pigs were separately ventilated with hypoxic gas to the left lower lobe (LLL) and hyperoxic gas to the rest of the lung. Six pigs received HCl infusion (HCl group), six pigs received the non‐specific NOS inhibitor N^ω‐nitro‐l ‐arginine methyl ester (l ‐NAME) and HCl infusions (l ‐NAME + HCl group) and six pigs received buffered Ringer’s solution (control group). NO concentration in exhaled air (ENO), NOS activity in lung tissue, and regional pulmonary blood flow were measured. Results: Metabolic acidosis, induced by infusion of HCl, decreased the relative perfusion to the hypoxic LLL from 7 (3) [mean (SD)] to 3 (1) % in the HCl group (P < 0.01), and from 4 (1) to 1 (1) % in the l ‐NAME + HCl group (P < 0.05), without any measurable significant changes in ENO from hypoxic or HL regions There were no significant differences between the HCl and control groups for Ca²⁺‐dependent (cNOS) or Ca²⁺‐independent NOS (iNOS) activity in hypoxic or HL regions. Conclusions: Metabolic acidosis augmented the hypoxic pulmonary vasoconstriction, without any changes in pulmonary NOS dependent or NOS independent NO production. When acidosis was induced during ongoing NOS blockade, the perfusion of hypoxic lung regions was almost abolished, indicating acidosis‐induced pulmonary vasoconstriction was not NO dependent.