IL-10抑制AVP诱导大鼠心脏成纤维细胞CaN活性

目的：研究白细胞介素10（IL-10）对精氨酸血管加压素(AVP)诱导大鼠心脏成纤维细胞(CFs)钙调神经磷酸酶（CaN）活性的影响。方法:用培养的新生SD大鼠CFs，四氮唑盐(MTT)比色法检测CFs增殖，流式细胞仪检测细胞周期，分光光度法测定CaN活性。结果:（1）10-7 mol/L AVP组CFs的吸光度（A490）明显高于对照组（P<0.01）。IL-10呈浓度依赖性下调 AVP诱导的CFs的A490值（P<0.05或P<0.01）。IL-10本身对CFs的增殖无抑制作用。（2）10-7 mol/L AVP组CFs的S期百分率及增殖指数均明显高于对照组（均P<0.01）；10-6 g/L IL-10+10-7 mol/LAVP组S期百分率及增殖指数均明显低于AVP组（P<0.01）。（3）10-7 mol/L AVP组CaN活性明显高于对照组（P<0.01）；10-8、10-7、10-6和10-5g/L +10-7 mol/L AVP组的CaN活性均明显低于AVP组（P<0.01），但仍高于对照组（P<0.01或P<0.05）。IL-10呈浓度依赖性下调 AVP诱导CFs的CaN活性。结论:IL-10具有抑制AVP诱导CFs增殖和下调CFs的CaN活性的作用，这可能对预防和逆转心脏重构有一定的价值。     

奥帕曲拉对内皮素-1诱导的大鼠心肌细胞肥大的影响

 摘要： 目的 探讨奥帕曲拉（OMA）对内皮素-1（ET-1）诱导的大鼠心肌细胞肥大的作用及其机制。方法 经差速贴壁法获得乳鼠心肌细胞,随机分为对照组、ET-1组、OMA 组、ET-1＋OMA组、ET-1＋OMA＋L-NAME组和ET-1＋OMA＋HS-142-1（GC受体阻断剂）组。用分光光度法测定NOS活性, 放射免疫法测定细胞内cGMP水平;液体闪烁计数仪测定3H-亮氨酸（[3H]-leu）掺入率及蛋白激酶C (PKC)活性;用HJ2000图像分析系统测定细胞表面积。结果10-6mol/L ET-1能显著增加心肌细胞表面积、PKC活性及[3H]-leu 掺入率, 降低NOS活性及 cGMP含量 (均P < 0.01); 10-7 mol/L OMA能显著抑制ET-1的上述作用（均P < 0.01）,L-NAME、HS-142-1可部分阻断OMA的作用。结论OMA能抑制ET-1诱导的心肌细胞肥大效应,该作用部分通过NO/cGMP、PKC调控。     

促红细胞生成素通过P13-K／Akt信号通路抑制血管紧张素Ⅱ诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞增殖

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对血管紧张素11（AngⅡ）诱导的心脏成纤维细胞（CFs）增殖的影响,以及磷脂酰肌醇-3-激酶／蛋白激酶B（P13-K／Akt）信号途径和-氧化氮合酶（NOS）的作用。方法：应用胰酶和胶原酶双酶和差速贴壁法分离培养新生大鼠CFs细胞,应用EPO、AngⅡ、P13-K抑制剂LY294002、NOS抑制剂L—NAME不同因素干预。细胞计数和MTT法作出CFs的生长曲线,检测CFs的增殖。化学酶法检测CFs培养液中的-氧化氮（NO）浓度以及总NOS和其亚型的活性。Western blotting检测Akt、P—Akt、内皮型-氧化氮合酶（eNOS）和诱生型-氧化氮合酶（iNOS）蛋白的表达。结果：AngⅡ促CFs增殖的作用显著。EPO剂量依赖性的增加CFs培养液中的NO浓度,同时剂量依赖性的抑制AngⅡ诱导的CFs增殖。在给药后第4d,和单纯的AngⅡ相比,浓度为5&#215;10。U／L、1&#215;10^4U／L和2&#215;10^4U／LEPO对CFs增殖的抑制率分别达到了24．4％、41．5％和50．5％。EPO显著提高Akt的磷酸化水平,促进eNOS蛋白的表达。应用P13-K抑制剂LY294002和NOS抑制剂L—NAME均能使培养液中的NO浓度也随之下降,EPO抑制AngⅡ诱导CFs增殖的作用均被阻断。但LY294002同时阻断了cNOS蛋白表达,而L—NAME对cNOS没有影响。结论：EPO可剂量依赖性的抑制AngⅡ诱导的新生大鼠CFs的增殖。其作用机制是通过激活P13-K／Akt信号途径促使CFs中eNOS表达来促进NO的生成,从而抑制CFs的增殖。     

蛋白激酶C抑制剂Ro-31-8220逆转高糖诱导乳鼠心肌细胞肥大的作用及其相关机制

目的： 观察蛋白激酶C（PKC）抑制剂Ro-31-8220对高糖诱导的乳鼠心肌细胞肥大的影响,并初步探讨PKC及其下游信号转导途径在其中的作用机制。方法：建立乳鼠心肌细胞培养模型,随机分成对照组（5.5 mmol·L-1）、不同浓度高糖组（10 mmol·L-1、15 mmol·L-1、20 mmol·L-1、25.5 mmol·L-1）、高糖（25.5 mmol·L-1）+PKC抑制剂Ro-31-8220组（50 nmol·L-1）和高糖（25.5 mmol·L-1）+NF-κB抑制剂BAY11-7082（5 mmol·L-1）组,分别测定各组乳鼠心肌细胞直径和蛋白质含量,并应用Western blotting检测乳鼠心肌细胞PKC-α、PKC-β2、p-PKC-α、p-PKC-β2、NF-κB和c-Fos等蛋白的表达水平。结果：高糖可以明显诱导乳鼠心肌细胞肥大,提高乳鼠心肌细胞PKC-α、PKC-β2、p-PKC-α、p-PKC-β2、NF-κB和c-Fos的蛋白表达,与对照组相比差异显著（P<0.01）,并呈现一定的浓度依赖性;而Ro-31-8220能够逆转上述现象,其细胞直径和蛋白表达低于高糖组,并有显著差异（P<0.01）。结论：高糖能够浓度依赖性地诱导心肌细胞肥大,而PKC抑制剂Ro-31-8220则能抑制高糖所诱导的这种反应,其机制可能与PKC/NF-κB/c-Fos途径相关。     

血小板反应蛋白1在转化生长因子β1诱导的大鼠心肌成纤维细胞中的作用

目的：观察血小板反应蛋白1（TSP-1）在转化生长因子β₁(TGF-β₁)诱导大鼠心肌成纤维细胞中的作用。方法: 差速贴壁法分离新生Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌成纤维细胞(CFs)。MTT法测CFs生长,羟脯氨酸法测CFs胶原含量,RT-PCR 法测TSP-1mRNA表达。结果: TGF-β₁诱导CFs TSP-1的表达呈浓度-时间依赖性增加(P<0.01)。TGF-β₁（20 μg/L）作用下24 h可诱导CFs增殖和胶原合成(P<0.01)。TSP-1反义寡核苷酸作用后的CFs的MTT A值、胶原含量减少(P<0.01)。结论: TGF-β₁可诱导新生大鼠CFs TSP-1表达,TSP-1反义寡核苷酸对TGF-β1诱导大鼠CFs增殖与胶原合成具有明显的抑制作用,TSP-1在TGF-β₁诱导大鼠心肌纤维化中可能具有重要的作用。     

醛固酮降低新生大鼠心肌成纤维细胞iNOS表达和NO含量

目的为探讨醛固酮诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖及其对诱导型一氧化氮合酶 一氧化氮(iNOS NO)系统活性的影响。方法用胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠CFs,采用MTT比色法、硝酸还原酶法、分光光度法和半定量RT PCR技术,观察不同浓度醛固酮对CFs的增殖、NO含量、iNOS活性和iNOSmRNA表达的影响。结果醛固酮(10 -11～10 -7mol/L)能剂量依赖性促进CFs的增殖,降低CFs的NO含量、iNOS活性及iNOSmRNA的表达(均P <0 .0 5 ) ,且螺内酯能逆转醛固酮的上述作用。醛固酮干预下CFs增殖数目与NO含量和iNOS活性呈显著负相关(r分别为- 0 . 94 2、- 0 . 978,均P <0 . 0 1)。结论醛固酮能剂量依赖性降低CFs的iNOS -NO系统活性,促进CFs增殖;螺内酯能逆转此作用。     

硫化氢对培养的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨硫化氢(H₂S)对内皮素-1(ET-1)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导途径的作用。方法:体外培养雄性SD大鼠主动脉VSMC, 将细胞分成对照组、血清组、内皮素组、NaHS组、血清+NaHS组和内皮素+NaHS组进行研究, 以不同浓度梯度NaHS处理VSMC, 观察对VSMC[³H]-TdR掺入和MAPK活性的影响。结果:加入5×10^-5-5×10^-4mol/LNaHS可明显浓度依赖性地抑制由内皮素诱导的VSMC增殖, 其[³H]-TdR掺入量减低, 抑制率分别为16.8%-37.4%(P＜0.01), 其MAPK活性明显减低, 抑制率为7.4%-33.6%(P＜0.05或P＜0.01)。结论:H₂S对内皮素诱导的VSMC增殖有抑制作用, 同时使MAPK活性下调。推测H₂S对VSMC增殖的抑制效应可能由MAPK信号途径所介导。     

促红细胞生成素通过PI3-K/Akt信号通路抑制血管紧张素II诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞增殖

目的： 探讨促红细胞生成素（EPO）对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的心脏成纤维细胞（CFs）增殖的影响,以及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3-K/Akt）信号途径和一氧化氮合酶（NOS）的作用。方法: 应用胰酶和胶原酶双酶和差速贴壁法分离培养新生大鼠CFs细胞,应用EPO、Ang Ⅱ、PI3-K抑制剂LY294002、NOS抑制剂L-NAME不同因素干预。细胞计数和MTT法作出CFs的生长曲线,检测CFs的增殖。化学酶法检测CFs培养液中的一氧化氮（NO）浓度以及总NOS和其亚型的活性。Western blotting检测Akt、p-Akt、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和诱生型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白的表达。结果: Ang Ⅱ促CFs增殖的作用显著。EPO剂量依赖性的增加CFs培养液中的NO浓度,同时剂量依赖性的抑制Ang Ⅱ诱导的CFs增殖。在给药后第4 d,和单纯的Ang Ⅱ相比,浓度为5×103 U/L、1×104 U/L和2×104 U/L EPO对CFs增殖的抑制率分别达到了24.4％、41.5%和50.5%。EPO显著提高Akt的磷酸化水平,促进eNOS蛋白的表达。应用PI3-K抑制剂LY294002和NOS抑制剂L-NAME均能使培养液中的NO浓度也随之下降,EPO抑制Ang Ⅱ诱导CFs增殖的作用均被阻断。但LY294002同时阻断了eNOS蛋白表达,而L-NAME对eNOS没有影响。结论: EPO可剂量依赖性的抑制Ang Ⅱ诱导的新生大鼠CFs的增殖。其作用机制是通过激活PI3-K/Akt信号途径促使CFs中eNOS表达来促进NO的生成,从而抑制CFs的增殖。     

金属硫蛋白抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:研究金属硫蛋白(MT)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖的影响及其作用机制。方法:以[³H]-TdR掺入法测定VSMCs增殖程度,免疫沉淀法测定VSMCs内丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性,[¹⁰⁹Cd]-血红蛋白饱和法测定MT含量,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,NADH氧化法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量。结果:Hcy(10^-6-10^-4mmol/L)呈浓度依赖性的刺激培养大鼠VSMCs[³H]-TdR掺入,0.1mmol/LHcy刺激[³H]-TdR掺入比对照组高4.2倍(P＜0.01)。Hcy亦呈浓度依赖性地激活VSMCsMAPK活性、增加细胞MDA的生成和LDH的漏出(P均<0.01)。单独MT孵育,对VSMCs的上述指标均无明显影响(P＞0.05)。但MT(10^-6-10^-4mol/L)呈浓度依赖性抑制100μmol/LHcy的促增殖效应(r=0.98,P＜0.01)。MT显著抑制Hcy对VSMCs的MAPK活性、MDA生成和LDH漏出的激活作用(均P＜0.01)。以0.5mmol/LZnCl₂预孵育6h后,VSMCsMT含量比非诱导细胞高5.7倍(P＜0.01),这种内源性MT高表达的细胞,显著抵抗Hcy刺激的-TdR掺入和MAPK激活;抑制Hcy的促细胞MDA生成与LDH漏出效应(均P＜0.01)。结论:MT能有效抑制Hcy促大鼠VMSCs增殖作用,其机制可能与MT拮抗Hcy对MAPK的激活和其抗氧化作用有关。     

反复热性惊厥过程中气体信号分子硫化氢对一氧化氮/一氧化氮合酶体系的影响

目的：探讨硫化氢（H₂S）对热性惊厥（FS）大鼠一氧化氮（NO）/一氧化氮合酶（NOS）体系表达的影响。方法:大鼠随机分为对照组、FS组、FS+NaHS组、FS+HA（hydroxylamine）组。采用热水浴诱导大鼠FS，隔日诱导1次，共10次。采用分光光度计法测定大鼠血浆中H₂S和NO含量；用原位杂交观察nNOS mRNA表达情况；用免疫组化方法观察NOS蛋白表达情况。结果:FS+NaHS组NO含量低于FS组，同时NOS表达也低于FS组；而FS+HA组NO含量高于FS组，同时NOS表达也强于FS组。结论:用H₂S外源性供体NaHS和胱硫醚-β-合成酶抑制剂HA的干预研究表明，反复热性惊厥过程中，H₂S的改变可影响NO/NOS体系的表达。     

阿司匹林对炎症条件下人血管内皮细胞一氧化氮的产生及诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的:探讨炎症时阿司匹林(AS)对内皮细胞一氧化氮(NO)的产生及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的抑制作用。方法:Griess法测上清液NO^-₂/NO^-₃水平、黄递酶法测NOS活性、常规生化法测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)浓度,染料排除法测细胞活力,RT-PCR技术分析iNOSmRNA水平。结果:白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、γ-干扰素(INF)联用脂多糖(LPS)诱导后上清液中NO^-₂/NO^-₃由(4.27±0.75)μmol/L增加到(9.35±1.25)μmol/L,对内皮细胞造成明显的损伤。但3mmol/LAS组NO生成及NOS活性明显降低,LDH释放率及MDA浓度下降,细胞存活率上升,与NO诱导组相比差异显著。并随AS剂量的增加对NO的抑制及对细胞的保护作用更加明显,但AS对生理水平的NO没有抑制作用。同时发现10mmol/L浓度以下AS对iNOSmRNA表达水平没有影响;但10-20mmol/L的AS则可在转录水平上抑制iNOSmRNA的表达。并观察到水杨酸钠及消炎痛不具有抑制NO产生的作用。结论:AS具有明显抑制IL-1β、TNF-α、γ-INF及LPS诱导NO生成的作用,从而保护血管内皮细胞避免炎症时高浓度NO的损伤。     

醛固酮对大鼠心脏成纤维细胞内皮素表达的影响

目的探讨醛固酮(Ald)对新生大鼠心脏成纤维细胞(CFs)内皮素(ET)表达的影响。方法采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取新生大鼠CFs,应用放射免疫法、免疫荧光检测法、RT-PCR方法分别测定不同条件下CFs培养液中ET水平和CFs中的ET-1含量以及ppET-1 mRNA的表达。结果醛固酮(10-9、10-8和10-7mol/L)可剂量依赖性地促进CFsppET-1mRNA的表达以及ET-1的合成和分泌,同时醛固酮(10-7mol/L)以时间依赖的方式促进CFsppET-1 mRNA的表达,在作用2h后表达开始增加,4h达高峰,以后逐渐降低。提前给予螺内酯(10-6mol/L)能抑制醛固酮(10-7mol/L)的上述作用。结论醛固酮能促使CFsppET-1 mRNA的表达以及ET-1的合成和分泌,且此作用可能是通过盐皮质激素受体介导。     

Effects of Iptakalim on intracellular free calcium concentration of cultured rabbit pulmonary arterial smooth muscle cells

Objective:To explore the effects of Iptakalim on intracellular free calcium concentration and on the proliferation of cultured rabbit pulmonary arterial smooth muscle cells induced by endothelin-1(ET-1) in vitro. Methods:A cell culture model, [3H]-thymidine([3H]-TdR) incorporation test and confocal microscope were used to observe proliferation and intracellular free calcium concentration([Ca2+]i) of rabbit PASMC induced by ET-1 in vitro. Results:The value of [3H]-TdR incorporation in ET-1 group was increased 1.468 times higher than that in control group. Iptakalim at the concentration of 10-7mol/L,10-6 mol/L,10-5 mol/L lowered [3H]-TdR incorporation by (19.8±4.6)%, (41.2±9.5)%, (54.7±10.1)%, respectively, compared with the value of the cells treated with ET-1(P＜0.01); The intracellular fluorescence intensity of PASMC in ET-1 group was increased from 73.70±10.12 to 143.84±28.23, significantly higher than that in control group(P＜0.01); whereas with Iptakalim,the fluorescence intensity(FI) was only increased from 74.30±10.20 to 86.03±9.82, significantly lower than that in ET-1 group(P＜0.01). Conclusion:Iptakalim inhibited proliferation of PASMC and decreased intracellular free calcium concentration of cultured rabbit PASMC induced by ET-1.     

视黄醇X受体激动剂通过调控Smad2通路抑制TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞胶原合成

目的:探讨视黄醇X受体(RXR)激动剂9-顺式视黄酸(9-cis-RA)干预对缺氧条件下转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠心肌成纤维细胞(CFs)胶原合成的影响和分子机制。方法:心肌组织块干涸法培养大鼠CFs,持续通氮气法建立细胞缺氧环境,评价9-cis-RA和TGF-β1对CFs胶原合成的影响;ELISA法测CFs上清液Ⅰ、Ⅲ型胶原水平,Western blot法检测胞浆、胞核和细胞的Smad2及p-Smad2水平,细胞免疫化学法观察p-Smad2的亚细胞定位。结果:TGF-β1(0.01~10μg/L)在缺氧条件下呈浓度依赖性地诱导CFs合成Ⅰ型和Ⅲ胶原,当浓度达到5μg/L时,Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成水平显著增高(P0.01)。9-cis-RA(10-9~10-6mol/L)则呈浓度依赖性抑制TGF-β1在缺氧条件下诱导的CFs胶原合成,当浓度为10-7mol/L时,Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成水平显著降低(P0.01)。Smad2抑制剂(20 nmol/L)亦可显著抑制TGF-β1在缺氧条件下诱导的CFs Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成。免疫杂交和细胞免疫化学结果显示,与TGF-β1干预相比,TGF-β1和9-cis-RA联合干预组的CFs其胞浆内p-Smad2的水平显著增加,但胞核内p-Smad2的水平明显降低(P0.05)。结论:RXR激动剂9-cis-RA显著下调TGF-β1在缺氧条件下诱导的CFs Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成,其机制与其抑制TGF-β1诱导的p-Smad2细胞核转位有关。     

JNK信号通路介导高糖诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖

 目的 明确c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路在高糖诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖中的作用。方法 提取大鼠原代心肌成纤维细胞,观察不同糖浓度（12、18和25 mmol/L葡萄糖）和不同刺激时间（0、12、24和48 h）对JNK通路的影响。实验分为对照组（5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（25 mmol/L葡萄糖）、JNK抑制剂SP600125组（25 mmol/L葡萄糖+SP600125 10、20 μmol/L）和高渗组（5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇）培养48 h,应用MTT测定细胞增殖、Weastern blot测定JNK磷酸化水平和增殖细胞核抗原（PCNA）的蛋白表达、RT-PCR检测c-jun基因表达。结果 高糖呈时间和剂量依赖性增加JNK磷酸化水平。与对照组比较,高糖显著地促进了心肌成纤维细胞的增殖（0.44±0.02 vs 0.31±0.02, P<0.01）,并上调了c-jun的基因表达和PCNA蛋白水平。 SP600125能够浓度依赖性地抑制高糖诱导的细胞增殖和JNK通路的激活。结论 JNK信号通路部分地介导了高糖诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖。     

慢性低氧性肺动脉高压大鼠内源性一氧化氮代谢及其外源性吸入的研究

目的:研究一氧化氮(NO)在大鼠慢性低氧性肺动脉高压发生发展中的代谢变化,观察外源性吸入NO对肺血流动力学的疗效。方法:67只SD雄性成年大鼠,随机分为7组:常氧对照组(n=9),慢性间断性低氧(6h/d,7d/周)1周组(n=7),低氧2周组(n=11),低氧3周组(n=11),L-NAME(NO合成酶抑制剂,30mg/kg,灌饲)处理组(n=10),L-Arg(NO合成前质,10mg/kg,灌饲)处理组(n=9),NO吸入(0.0004%,20min)组(n=10)。插管测肺动脉平均压(MPAP),分离右心室(R)、室间膈+左心室(S+L),计算R/(S+L)(g/g)和R/Wt(Wt:体重,g/kg)。结果:①低氧1周组MPAP显著高于对照组,低氧2周时更高,R/(S+L)和R/Wt也显著高于对照组;②血浆NO₂^-/NO₃^-含量在低氧2周组显著高于对照组,而在低氧3周组显著低于低氧2周组和低氧1周组;低氧1周,血浆ET-1含量显著高于对照组,血浆ET-1含量与MPAP和R/(S+L)均呈显著正相关,r分别为0.43和0.46,P值均＜0.01;③L-NAME组大鼠血浆NO₂^-/NO₃^-含量降低33.2%,R/(S+L)显著增加15.2%,P＜0.05;④L-Arg组大鼠血浆NO₂^-/NO₃^-含量和PAPM无显著改变,但R/(S+L)降低8.7%,P＜0.05;⑤吸入NO,MPAP降低17.8%,P＜0.01。结论:内源性NO在慢性低氧早期(1-2周)继发性增加,但进一步低氧时则减少,血浆ET-1含量的增加在低氧性心肺血管重建中可能具有重要意义,吸入低浓度NO对以肺血管增生和右心室肥大为主要基础的肺动脉高压仍具有明显降低作用。     

阿司匹林对高糖和高胰岛素诱导的血管平滑肌细胞内iNOS含量的影响

目的:探讨阿司匹林对高糖和高胰岛素诱导的大鼠血管平滑肌细胞(vasculersmoothmusclecells,VSMCs)内诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)含量变化的影响,以及高糖、高胰岛素状态下细胞内iNOS含量变化与上清液中NO含量变化的相关性。方法:组织贴块法原代培养大鼠胸主动脉VSMCs,用阿司匹林干预高糖和高胰岛素诱导后的VSMCs。实验设正常对照组(CON组)、高糖组(HG组)、高胰岛素组(HI组)、高糖和高胰岛素组(HGI组)、阿司匹林2.50mmol/L+HG组(AHG组)、阿司匹林2.50 mmol/L+HI组(AHI组)、阿司匹林2.50 mmol/L+HGI组(AHGI组),每组样本数为6。应用大鼠iNOS ELISA试剂盒检测细胞内iNOS的变化情况(OD值),NO试剂盒检测培养基上清液中NO含量,并分析高糖、高胰岛素状态下两者的相关性。结果:高糖、高胰岛素均能使VSMCs内iNOS含量减低(P<0.05),高糖和高胰岛素联合能使VSMCs内iNOS含量明显减低(P<0.01);阿司匹林能使高糖、高胰岛素刺激后VSMCs内iNOS含量升高(P<0.05),并能显著提高高糖和高胰岛素联合刺激后VSMCs内iNOS含量(P<0.01)。高糖、高胰岛素、高糖和高胰岛素联合均能使培养基上清液中NO含量减低(P<0.05);阿司匹林能提升上述三者刺激后上清液中NO含量(P<0.05)。HGI组中iNOS的降低与上清液中NO的降低、AHGI组iNOS的升高与上清液中NO的升高并不表现出相关性(r=0.778,r=0.632,均P>0.05)。结论:阿司匹林能提高高糖和高胰岛素联合刺激后VSMCs内iNOS的含量,并能提高培养液中NO的含量,但细胞内iNOS含量可能不是决定培养液中NO含量的唯一因素。     

抗衰老Klotho蛋白对高糖作用下血管内皮细胞的保护作用

目的:研究抗衰老Klotho蛋白对高糖作用下血管内皮细胞的保护作用及其作用机制。方法:体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),设置PBS对照组、5.5 mmol/L葡萄糖组、33.3 mmol/L葡萄糖组、0.1μmol/L Klotho+33.3 mmol/L葡萄糖组、1μmol/L Klotho+33.3 mmol/L葡萄糖组和10μmol/L Klotho+33.3 mmol/L葡萄糖组。使用MTT法检测各组细胞活力;同时检测各组细胞培养上清中丙二醛(MDA)的含量以及乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)的活性;流式细胞术检测各组细胞中活性氧(ROS)含量变化;ELISA检测各组细胞培养液中一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的浓度变化;Western blot法检测各组细胞中核因子κB(NF-κB)蛋白的表达。结果:与PBS对照组相比,33.3 mmol/L葡萄糖能够显著降低HUVECs的细胞活力,增加细胞中ROS的含量,增加细胞培养上清中LDH活性和MDA含量,降低SOD和GSH的活性,同时降低NO分泌,诱导ET-1、ICAM-1分泌及细胞中NF-κB蛋白的表达(P0.05)。不同浓度Klotho蛋白和33.3 mmol/L高糖同时作用HUVECs时,细胞活力逐渐上升,ROS和MDA含量以及LDH活性逐渐下降,SOD和GSH活性则逐渐上升,同时NO分泌增加,ET-1、ICAM-1分泌及NF-κB蛋白表达显著下降(P0.05)。结论:抗衰老Klotho蛋白能够提升高糖作用下HUVECs的细胞活力,减少高糖诱导的ROS生成及氧化损伤,恢复HUVECs的正常分泌功能,并通过减少NF-κB蛋白表达发挥抗损伤作用。     

阿司匹林对高糖和高胰岛素诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨阿司匹林对高糖和高胰岛素诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及相关机制。方法：组织贴块法培养原代大鼠胸主动脉平滑肌细胞, 用高糖和高胰岛素诱导细胞增殖。实验设对照组、高糖和高胰岛素组(HGI)、HGI +阿司匹林（0.5,1.25,2.50 mmol/L）组。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定VSMCs增殖;一氧化氮(NO)试剂盒检测培养基上清液NO含量;流式细胞仪检测细胞周期。结果：阿司匹林呈剂量依赖性地抑制高糖和高胰岛素诱导的动脉VSMCs增殖,最大抑制作用出现在2.50 mmol/L阿司匹林培养5 d时(P<0.01);阿司匹林（2.50 mmol／L）干预可使高糖和高胰岛素导致下降的NO含量上升 (P<0.01);与高糖和高胰岛素组比较,阿司匹林(2.50 mmol/L)可使细胞静止期/DNA合成前期(G0/G1期)的VSMCs所占比例显著升高(P<0.05),而DNA合成期(S 期)细胞所占比例显著降低(P<0.05)。结论：阿司匹林能呈剂量依赖性地抑制高糖和高胰岛素诱导的动脉VSMCs的增殖,抑制细胞在G0/G1期,促进动脉平滑肌细胞NO的产生。