雷帕霉素对培养的人Tenon′s囊成纤维细胞的作用

目的:观察雷帕霉素(rapamycin)对培养的人Tenon′s囊成纤维细胞的增殖及细胞周期的作用。方法:将培养的人Tenon′s囊成纤维细胞用含不同雷帕霉素浓度的培养液培养24 h后,用MTT法测定细胞的增殖情况,用流式细胞仪测定细胞周期的变化情况。结果:用含10、20、40、80和160 ng/ml雷帕霉素的培养液培养细胞时,细胞增殖抑制率分别为9.32%,22.55%,41.42%,42.25%,43.57%。细胞周期分析显示,雷帕霉素(40 ng/ml)作用后,G0/G1期细胞较对照组增多(41.76%vs 44.19%,P<0.05),S期细胞较对照组减少(45.42%vs 40.18%,P<0.05)。结论:雷帕霉素具有抑制人Tenon′s囊成纤维细胞增殖的效果,且随浓度增加抑制作用增强,并将细胞抑制在G1期的限制点内。     

雷帕霉素对培养的人Tenon’s囊成纤维细胞的作用

目的：观察雷帕霉素（rapamycin）对培养的人Tenon’s囊成纤维细胞的增殖及细胞周期的作用。方法：将培养的人Tenon’s囊成纤维细胞用含不同雷帕霉素浓度的培养液培养24h后，用MTT法测定细胞的增殖情况，用流式细胞仪测定细胞周期的变化情况。结果：用含10、20、40、80和160ng／ml雷帕霉素的培养液培养细胞时，细胞增殖抑制率分别为9．32％，22．55％，41．42％，42．25％，43．57％。细胞周期分析显示，雷帕霉素（40ng／ml）作用后，G0／G1期细胞较对照组增多（41．76％vs44、19％，P〈0.05），S期细胞较对照组减少（45．42％vs40．18％，P〈0．05）。结论：雷帕霉素具有抑制人Tenon’s囊成纤维细胞增殖的效果，且随浓度增加抑制作用增强，并将细胞抑制在G1期的限制点内。     

雷帕霉素对基质细胞衍生因子-1α诱导的内皮生长晕细胞增殖及黏附能力的影响

目的探讨雷帕霉素对基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α）诱导的内皮生长晕细胞（EOCs）增殖及黏附能力的影响。方法使用密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,培养并扩增EOCs,然后用免疫组化法、荧光染色法鉴定其内皮细胞特性。分为空白对照组、10ng/ml SDF-1α处理组、10ng/ml SDF-1α及10ng/ml雷帕霉素共同干预组、10ng/ml雷帕霉素处理组,各处理组与EOCs作用24h,CCK8检测细胞增殖能力,并在倒置显微镜下检测细胞的黏附能力。结果采用贴壁法培养的EOCs具有多种内皮细胞特性。10ng/ml的SDF-1α能显著提高EOCs的增殖及黏附能力（P＜0.05）,而10 ng/ml的雷帕霉素能阻断SDF-1α对EOCs增殖、黏附能力的促进作用（P＜0.05）。结论雷帕霉素可抑制SDF-1α诱导的EOCs增殖及黏附。     

雷帕霉素对膀胱癌5637细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨雷帕霉素对膀胱癌5637细胞增殖能力和细胞周期的影响。方法 5637细胞贴壁培养于含10%胎牛血清、100 U/m L青霉素、100μg/m L链霉素的RPMI 1640培养液中,37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养。处理组加入50、100、200和400 nmol/L的雷帕霉素,对照组不加药物,每天更换RPMI 1640培养液。MTT法检测处理组的生长抑制率,流式细胞术检测不同浓度的雷帕霉素对5637细胞增殖周期的影响。结果与对照组相比,雷帕霉素对5637细胞有明显抑制作用,呈浓度依赖性和时间依赖性。雷帕霉素可以将5637细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制细胞的增殖,且未见明显的凋亡情况。结论雷帕霉素使5637细胞阻滞在G0/G1期,抑制了膀胱癌5637细胞的增殖,说明雷帕霉素的作用靶点参与了5637的增殖过程,其有望成为膀胱癌治疗的新靶点。     

人Tenon’s囊成纤维细胞的离体培养及生长特性观察

目的离体培养人Tenon’s囊成纤维细胞,观察其生长特性。方法将人Tenon’s囊成纤维细胞进行离体培养及生长抑制实验,采用含10％胎牛血清的DMEM培养基,细胞计数法及MTT法描述细胞生长曲线。并通过免疫组织化学法对细胞进行鉴定。站果人Tenon’s囊成纤维细胞离体培养48h至7d处于对数生长期。细胞角蛋白染色阴性,波蛋白染色阳性。结论人Tenon’s囊成纤维细胞在体外易于生长,是细胞离体实验研究的良好材料。     

TGF-β1诱导人Tenon囊成纤维细胞增殖及其机制

目的:观察TGF-β1是否促进人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)增殖并且探讨其作用机制?方法:用TGF-β1(0?0.5?1.0?2.0?5.0?10.0 ng/ml)作用于体外培养的3~6代HTFs 24 h,CCK-8 法?EdU染色法检测其增殖;采用Western blot法检测HTFs中RhoE的表达及其下游细胞增殖相关蛋白cyclinD1和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,用慢病毒建立RhoE敲降细胞系?结果:TGF-β1可以剂量依赖性促进HTFs增殖,以5 ng/ml TGF-β1处理后有统计学差异,EdU掺入法检测发现,5 ng/ml TGF-β1组EdU标记率明显高于对照组?5 ng/ml TGF-β1组 HTFs中RhoE蛋白的表达平均灰度值明显低于对照组,细胞增殖相关蛋白cyclinD1?PCNA的表达平均灰度值高于对照组?细胞中RhoE沉默后,CCK-8法检测细胞活力较对照组上升,流式细胞术发现S期也升高,cyclinD1?PCNA灰度值也上升?结论:TGF-β1可以通过降低RhoE引起下游周期蛋白cyclinD1的表达升高,诱导人Tenon囊成纤维细胞增殖?     

缺氧条件下雷帕霉素抗人乳腺癌MCF-7细胞增殖作用的研究

目的:比较雷帕霉素、阿霉素单药或联合应用在常氧和缺氧条件下体外抗人乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力.方法:采用MIT法和流式细胞仪检测在常氧或缺氧状态下雷帕霉素、阿霉素单独或联合使用时,对MCF-7细胞增殖和细胞周期的影响.Western blot检测不同氧浓度下及不同药物处理下MCF-7细胞HIF-1α、pAkt的表达.结果:与阿霉素相反,在缺氧条件下,雷帕霉素对MCF-7细胞的增殖抑制能力高于常氧条件.在2种氧浓度下,临床常用浓度(10 ng/ml)的雷帕霉素和阿霉素联合使用无协同作用.雷帕霉素单独作用于MCF-7细胞主要表现为G1期阻滞,与阿霉素联用则表现为C2期细胞增多.缺氧使HIF-1α、pAkt表达增加.但10 ng/ml的雷帕霉素对HIF-1α、pAkt表达无明显影响.结论:临床常用浓度范围内的雷帕霉素在缺氧状态下抗MCF-7细胞增殖能力增强,其原因可能是雷帕霉素对细胞的增值抑制作用不受HIF-1α表达的影响,缺氧使肿瘤细胞pAkt表达增加可能使其对雷帕霉素敏感性增加.     

人表皮生长因子对牛角膜内皮细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察表皮生长因子(EGF)对牛角膜内皮细胞增殖和细胞周期的影响.方法 采用体外培养的牛角膜内皮细胞,在培养液中分别添加不同浓度的人表皮生长因子(hEGF),加药后第3、7天采用MTT法,在酶标仪492 nm波长处测定吸光度值观测细胞增殖,并记录细胞形态变化.将体外培养的牛角膜内皮细胞分为二组,常规DMEM培养液组和含50 ng/mL EGF的DMEM培养液组,培养3、7天后,应用流式细胞仪检测细胞周期各阶段G1、S、G2期分布.结果 与对照组相比,不同浓度EGF组对牛角膜内皮细胞增殖有促进作用且与浓度相关,其中10 ng/mL和100 ng/mL组作用强于1 ng/mL组.EGF加入后3 d,对照组S期细胞24.5%,G2-M期细胞0.08%,加药组S期细胞24.6%,G2-M期细胞0.06%.与对照组相比较,各期细胞分布大致相等,无显著差异.加入7 d后对照组S期细胞20.8%,G2-M期细胞0.41%,加药组S期细胞18.2%,G2-M期细胞1.55%,细胞分布发生明显变化.结论 EGF促进体外培养的牛角膜内皮细胞增殖,并使体外培养的牛角膜内皮细胞的细胞周期发生变化,S期细胞比例下降.     

大鼠Tenon''''s囊成纤维细胞体外培养及生长特性的研究

目的 探讨建立体外大鼠Tenon’s囊成纤维细胞的培养方法，并对体外培养的Tenon’s囊成纤维细胞的生长特性进行观察。方法 选用健康年幼的SD大鼠40只，采用断颈法将其处死，摘除眼球，无菌条件下，分离剪下Tenon’s囊组织，采用植块法对Tenon’s囊成纤维细胞进行体外培养；通过细胞形态学观察和细胞免疫组化染色技术对其细胞性质进行鉴定；通过细胞记数和MTT法对其生长特性进行研究。结果 原代培养的大鼠Tenon’s囊组织块接种后，约48h即可见细胞由组织块中爬出，培养8～10d，细胞汇合程度大约可达70％左右；培养14～16d，细胞完全汇合；在细胞汇合程度达到70％-80％时，可以进行细胞传代，传代细胞接种后4—5h大部分细胞贴壁，10-12d左右传代细胞完全汇合。光镜下观察，可见Tenon’s囊成纤维细胞，在汇合程度低时细胞呈细长梭形外观，汇合程度高时细胞可呈多边形改变。免疫组化染色可见Tenon’s囊成纤维细胞角蛋白染色阴性，波蛋白染色阳性。细胞生长曲线显示，在2—8d细胞处于对数生长期。结论 体外成功地培养了大鼠Tenon’S囊成纤维细胞，这不仅为青光眼滤过泡瘢痕化防治的基础研究提供了一种新的细胞来源，同时为抗结膜瘢痕化药物的研究和开发提供了一种新的简便实用的细胞来源途径。     

碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期及凋亡的影响

目的:研究不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对瘢痕成纤维细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法:取术中切除的增生性瘢痕组织3例,以植块培养法进行成纤维细胞原代培养,取第2代用于实验.选用含1、5、10、50、100、500 ng/mL不同浓度bFGF的培养液作用于细胞72 h,以未加bFGF的培养液作为对照,并进行如下检测:①MTT法检测细胞增殖情况;②流式细胞仪检测细胞周期及凋亡.结果:①MTT显示,随bFGF浓度增高,OA值由0.1833±0.019递增至0.3432±0.041(P＜0.05),且具有剂量依赖性.②流式细胞仪检测结果示:bFGF主要影响G1期,G1期细胞百分数随bFGF浓度增加由81.3%±3.24%递减至75.9%±1.21%.凋亡细胞百分比由7.2%±O.56%递减为2.3%±0.49%(P＜0.05).结论:bFGF可通过增加有丝分裂促进瘢痕成纤维细胞增殖,并有保护细胞免于凋亡的作用.     

黄连及其主要成分小檗碱对人鼻咽癌细胞CNE-2Z生长的抑制作用

[摘要] 目的 观察黄连及其主要成分小檗碱对人鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖和细胞周期的作用。方法 MTT法、凋亡检测试剂盒检测不同浓度黄连以及小檗碱对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z生长抑制作用以及凋亡;流式细胞仪检测细胞周期的改变;裸鼠实验进行进一步的体内实验。结果 黄连及其小檗碱能够抑制CNE-2Z细胞增殖,且随药物浓度增加抑制效应增强,呈现浓度依赖性,不同浓度的黄连和小檗碱分别处理细胞24,48,72 h 时,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增加,其IC50黄连分别为(13.70±2.46) ug/ml、(10.02±3.41) ug/ml、(8.94±2.45) ug/ml,小檗碱分别为(3.59±1.24) ug/ml、(2.84±1.02) ug/ml、(1.47±0.45) ug/ml,各IC50间的差异有非常显著性(p<0.01)。不同浓度黄连和小檗碱作用细胞24 h 后,G0/G1期细胞明显下降,S期细胞明显升高(p<0.05,p<0.01)。两者对CNE-2Z 细胞周期具有阻滞作用,可以阻滞在S期。动物实验显示肿瘤体积减小,具有统计学意义。结论 黄连及其主要成分小檗碱对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z具有增殖抑制作用,该抑制作用具有剂量和时间依赖性;一定剂量的黄连和小檗碱可能通过阻滞CNE-2Z于S期而抑制其增殖;对鼻烟癌细胞接种的裸鼠肿瘤体积有抑制作用。 [关键词] 黄连 小檗碱 鼻咽肿瘤 细胞增殖     

雷帕霉素在兔眼滤过性手术中的抗瘢痕作用

目的探讨雷帕霉素在兔眼滤过性手术中抑制瘢痕的作用。方法取健康成年的青紫兰兔96只,雌雄不限,左眼行小梁切 除术后随机分为4组,3组对照组,1组实验组,每组24只。术后实验组左眼分别滴1%、3%、5%的雷帕霉素,对照组左眼滴药用 蓖麻油,4次/d。监测眼压并观察结膜、角膜、前房、晶状体情况。常规HE染色,免疫组化方法标记PCNA（抗增殖细胞核抗原） 观察滤过道成纤维细胞增殖情况。将RTFs进行体外培养,检测不同浓度（0、0.06、0.25、1、4mg/L）的雷帕霉素处理成纤维细胞后 caspase-3,caspase-8,caspase-9的表达变化。结果术后各实验组较对照组眼压低,各时间点实验组PCNA阳性细胞数低于对照 组,均具有显著性差异（P<0.05）。采用不同浓度的雷帕霉素处理后,caspase-3,caspase-9的mRNA表达量和蛋白的相对表达量 随着雷帕霉素浓度的增加而增加（P<0.001）,表现出浓度依赖性。但是caspase-8的mRNA表达量和蛋白相对表达量与对照组 相比却未表现出显著的差别（P>0.05）。结论雷帕霉素具有抑制兔青光眼滤过术后滤过道中成纤维细胞过分增生,减少瘢痕形 成的作用,还可以通过增加caspase-3和caspase-9的表达诱导RTFs细胞凋亡的发生。     

雷帕霉素抑制人脐静脉内皮细胞增殖与迁移

目的探讨雷帕霉素(Rapamycin)对脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移的抑制作用。方法应用噻唑蓝(MTT)实验、流式细胞仪、迁移实验研究不同浓度雷帕霉素对血管内皮细胞生长因子(VEGF)诱导的HUVECs增殖、迁移的影响。结果雷帕霉素浓度大于10ng/ml、作用48h以上可以明显抑制VEGF诱导的HUVECs的增殖(P<0.05),呈时间、剂量依赖性;流式细胞仪检测细胞被阻滞在G0/G1期,并诱发了细胞凋亡;利用Transwell装置证实雷帕霉素浓度大于10ng/ml时抑制了HUVECs的迁移。结论雷帕霉素可通过抑制血管内皮细胞的增殖与迁移抑制血管生成。     

全反式维甲酸对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的：观察全反式维甲酸(ATRA)对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞（HTCFs）增殖及凋亡的影响。方法：体外培养HTCFs,采用流式细胞仪检测细胞周期改变、细胞凋亡率、抗凋亡基因bcl-2的水平,琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA,研究不同浓度的ATRA对体外培养的HTCFs增殖及凋亡的影响,同时与丝裂霉素C（MMC）作比较。结果：用ATRA和MMC处理后,HTCFs细胞周期的分布发生了明显的变化,表现为G⁰/G¹期细胞数增多,S期细胞数减少;1×10_-9mol/L的ATRA即可诱导细胞的凋亡,随着浓度的增加,凋亡率显著增高;ATRA组bcl-2的水平比空白对照组大约低了一倍;DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示：ATRA组为呈一定间隔的DNA梯形条带,MMC组呈现弥漫的片状图谱,无明显的条带。结论：ATRA可有效抑制体外培养的HTCFs的增殖,但与MMC的作用方式不同。MMC主要造成细胞坏死,而ATRA则主要诱导细胞凋亡,无明显细胞毒作用。     

重组海葵溶细胞素及平颏海蛇磷脂酶A2对血管外膜成纤维细胞增殖的影响

OBJECTIVE: To observe the effects of recombinant Sagartia rosea cytolysin (rSrc) and Lapemis hardwickii phospholipase A2(rPLA2) on adventitial fibroblasts proliferation. METHODS: NIH-3T3 cells were cultured and treated with rSrc and rPLA2 at different concentrations for observation of cell proliferation using non-radioactive MTS/PES assay in comparison with the control group. RESULTS: The ratio of cell proliferation was 0.840+/-0.061 in the control group, and was 0.263+/-0.044, 0.418+/-0.054, 0.605+/-0.063, 0.772+/-0.054 and 0.906+/-0.072 in rSrc groups corresponding to rSrc concentrations of 100, 10, 1 microg/ml and 100, 10 ng/ml respectively. rSrc was found to significantly inhibit fibroblast proliferation in a dose-dependent manner when the concentration used was above 1 microg/ml (P<0.05), as compared with the control group (P<0.05). The ratio of cell proliferation was 0.498+/-0.076, 0.937+/-0.112 and 0.978+/-0.145 in rPLA2 groups corresponding to rPLA2 concentrations of 100, 10, 1 microg/ml respectively, indicating that rPLA2 also significantly inhibited fibroblast proliferation at the concentration of 100 microg/ml (P<0.05). CONCLUSION: rSrc and rPLA2 can both significantly inhibit adventitial fibroblast proliferation.     

雷帕霉素抑制兔眼后发性白内障的实验研究

目的：探讨雷帕霉素（Rapamycin,RAPA）抑制兔眼后发性白内障发生的有效性及可行性。方法：雄性新西兰大白兔12只，24眼随机分为空白对照组，RAPA 7.5、15和30?ng/ml组,4组均行超声乳化透明晶状体吸除术；实验组灌注液中分别加入不同浓度的RAPA。术后不同时间裂隙灯观察兔眼角膜、房水及晶状体后囊膜混浊情况；3个月后处死动物，分别对4组兔眼行组织病理学及电镜检查。结果：术后12周，RAPA15?ng/ml组和30?ng/ml组后囊混浊发生率较对照组明显减少（P＜0.05）；各组术后裂隙灯下角膜混浊度无明显差异。结论：浓度为15～30?ng/ml的RAPA灌注液可有效抑制兔眼后发性白内障的发生且对角膜无明显的毒性作用。     

rhIL-10对肿瘤坏死因子-α诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的 观察重组人白细胞介素-10(rhIL—10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的成纤维细胞增殖的影响。方法 体外培养NIH／3T3细胞，应用rhIL-10与TNF-α共同作用并设立对照进行比较，采用MTS／PES法确定NIH／3T3细胞的增殖状态。应用流式细胞仪测定细胞周期。结果 TNF-α对NIH／3T3细胞增殖具有明显的刺激作用。rhIL-10单独应用对NIH／3T3细胞生长没有影响。在TNF-α刺激下，一定剂量的rhIL-10可抑制NIH／3T3细胞的增殖。rhIL-10可使TNF-α作用下的NIH／3T3细胞大部分处于G0／G1期。结论 rhIL-10能明显抑制由TNF-α刺激的成纤维细胞增殖。     

开口箭皂甙抑制小鼠S-180肉瘤细胞增殖及实体瘤生长的实验研究

目的 研究开口箭皂甙(STCB)体内外抗S-180肉瘤活性的强度及其作用机制.方法 MTT法检测S-180细胞的增殖程度;制备昆明种小鼠S-180移植实体瘤模型,观察STCB的抑瘤作用;光镜和电镜下观察药物作用后S-180细胞形态及超微结构变化;以不同浓度STCB处理S-180细胞,经碘化丙啶染色后应用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况.结果 STCB体外明显抑制S-180细胞增殖,IC50为34.64μg/ml.经灌胃给药,STCB对荷S-180实体瘤小鼠表现出良好的抑瘤作用,低剂量(0.5 g/kg体质量)时,抑瘤率已超过30%,高剂量(2 g/kg体质量)时,抑制率达到54.86%.电镜观察和FCM检测证明肿瘤细胞凋亡率随STCB浓度增加而增加.STCB的浓度为10和30μg/ml时,S期细胞百分率上升,G2/M期细胞百分率下降;当STCB的浓度达到60μg/ml,G0/G1期细胞百分率下降,G2/M期细胞百分率上升:提示低浓度STCB阻止S-180细胞从S期进入G2期;高浓度时,STCB还干扰S-180细胞的有丝分裂.结论 STCB在体内外对S-180肉瘤细胞均有抑制作用,其作用机制与诱导肿瘤细胞的凋亡和干扰细胞周期有关.     

雷公藤甲素抑制TGF—β1的促皮肤成纤维细胞增殖效应的实验研究

目的 观察雷公藤甲素抑制转化生长因子-β^1（TGF-β^1）促皮肤成纤维细胞增殖的作用并阐明其作用机制。方法用MTT法分别检测不同浓度外源性TGF—β^1及雷公藤甲素作用下皮肤成纤维细胞增殖的情况以及10^-7mol／L雷公藤甲素对25ng／mlTGF—β^1引起的皮肤成纤维细胞增殖的影响;蛋白免疫印迹法检测10^7mol／L的雷公藤甲素和25ng／ml的TGF—β^1、作用下皮肤成纤维细胞ERK1／2的磷酸化情况。结果TGF—β^1促进皮肤成纤维细胞的增殖呈浓度依赖性,而雷公藤甲素抑制皮肤成纤维细胞增殖也呈浓度依赖性;10^-8mol／L的雷公藤甲素即可抑制皮肤成纤维细胞增殖（P〈0．01）,10^-7mol／L的雷公藤甲素基本达到最大的效应（P〈0.01）。10^-7mol／L雷公藤甲素可以显著抑制25ng／ml的TGF-β^1对皮肤成纤维细胞的促增殖作用及对ERK1／2促磷酸化作用。结论雷公藤甲素能够抑制TGF—β^1对皮肤成纤维细胞的促增殖作用。