内皮素-1在大鼠肝脏冷保存不同时相的含量变化及其与肝损伤的关系*

目的研究内皮素-1在大鼠肝脏冷保存不同时相的含量变化及其与门静脉灌注压及肝损伤的关系.方法以离体鼠肝灌流为模型,用放免方法检测肝脏保存不同时间灌流液及肝脏中内皮素-1(ET-1)的变化,同时观察门静脉灌注压及肝脏功能变化,并做相关分析.结果随保存时间延长,ET-1水平呈进行性升高.ET-1与门静脉灌注压变化呈明显正相关(r=0.970,P＜0.01),与胆汁分泌量呈明显负相关(r=-0.864,P＜0.05),与灌注液AST、ALT、LDH也呈明显正相关(r=0.919,P＜0.01).结论ET-1参与并加重肝脏保存再灌注损伤,尤其对肝脏微循环的直接影响.因此ET-1很可能是形成该损伤的重要内源性致伤因子之一.     

内皮素-1在大鼠肝脏冷保存不同时相的含量变化及其与肝损伤的关系

目的：研究内皮素－ １ 在大鼠肝脏冷保存不同时相的含量变化及其与门静脉灌注压及肝损伤的关系。方法：以离体鼠肝灌流为模型,用放免方法检测肝脏保存不同时间灌流液及肝脏中内皮素－ １（ＥＴ－ １） 的变化,同时观察门静脉灌注压及肝脏功能变化,并做相关分析。结果：随保存时间延长,ＥＴ－ １ 水平呈进行性升高。ＥＴ－ １ 与门静脉灌注压变化呈明显正相关（ ｒ ＝ ０－９７０ ,Ｐ＜ ０－０１） ,与胆汁分泌量呈明显负相关（ ｒ ＝ － ０－８６４ ,Ｐ＜ ０－０５） ,与灌注液ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＬＤＨ 也呈明显正相关（ ｒ＝ ０－９１９ ,Ｐ＜ ０－０１） 。结论：ＥＴ－ １ 参与并加重肝脏保存再灌注损伤,尤其对肝脏微循环的直接影响。因此ＥＴ－ １ 很可能是形成该损伤的重要内源性致伤因子之一。     

酸性成纤维细胞生长因子复方保存液对大鼠肝脏低温保存的作用

目的: 探讨人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对离体大鼠肝脏低温保存的效果。方法: 24只Wistar大鼠随机分为高渗枸橼酸盐腺嘌呤(HCA)液对照组和aFGF复方保存液(HCA液中含aFGF_14-154 40 μg/L)实验组,分别用HCA液和aFGF复方保存液进行肝脏离体灌注,并低温保存肝脏。12和24 h后,测定肝脏保存前后的重量、肝组织丙二醛(MDA)含量及肝保存液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性的变化,并检查肝组织病理学改变。结果: 离体肝脏低温保存24 h后,aFGF复方保存液组肝脏重量差、ALT、AST和MDA水平均明显低于HCA对照组 (P<0.05);肝脏病理学检查结果显示,aFGF复方保存液组肝组织损伤明显减轻。结论: aFGF复方保存液对肝脏的低温保存效果较单纯HCA液更明显,其机制可能与aFGF参与抑制细胞肿胀和抗氧化损伤作用有关。     

自制PV液与大鼠肝脏低温保存:与UW液的对比

背景:目前许多学者对UW液成分进行改进,其目的主要在于进一步探索器官保存的原理,提高保存的技术和延长保存的时限;简化UW液的成分,以进一步满足临床运输、储存和使用的方便;寻找合适的替代品,降低UW液的成本以满足市场需要。目的:观察自制PV液对大鼠肝脏低温保存的效果,并与UW液进行对比。方法:将90只Wistar大鼠按随机数字表法分成3组,即UW液组、PV液组和生理盐水组,制作大鼠肝脏非循环离体灌注模型,分别使用相应灌洗保存液。每组再根据不同的保存时间分为保存0,6,12,18,24h5个亚组,每个亚组6只大鼠。测定保存不同时间后肝脏谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶活性变化,以及灌注流出液中氧自由基代谢产物丙二醛浓度与超氧化物歧化酶活性;观察胆汁分泌量及镜下肝脏形态学变化。结果与结论:PV液组与UW液组比较,灌注流出液中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶活性相近,差异无显著性意义(P0.05)。保存6h后,PV液组肿瘤坏死因子α质量浓度显著高于UW液组(P0.05);保存12h后,UW液组丙二醛浓度显著高于PV液组(P0.05);保存18h后,PV液组胆汁分泌量低于UW液组(P0.05);两组光镜、电镜下组织形态改变相似。提示PV液与UW液对Wistar大鼠肝脏功能均具有保护作用,两者短时间保存效果相似,在抗氧化及清除氧自由基方面,PV液略优于UW液。     

自制移植肝低温保存液对氧自由基的影响

背景：在肝脏移植过程中,低温保存和缺血可导致肝脏产生氧自由基而损伤肝组织。 目的：研究自制器官保存液对低温保存大鼠肝脏氧自由基的影响,并与器官保存液的“金标准”UW液进行对比。 方法：16只9周龄SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组8只。建立SD大鼠肝脏灌注模型,分别用自制器官保存液组和UW液组灌洗肝脏,取出肝脏置于4 ℃保存液中,于保存24,48,72 h后分别检测肝脏超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶、总抗氧化能力和活性丙二醛水平。 结果与结论：自制器官保存液对大鼠肝脏低温保存各时点超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶、总抗氧化能力活性及丙二醛含量与UW液组比较差异均无显著性意义(P > 0.05),表明自制器官保存液能够减轻缺血再灌注后氧自由基对大鼠肝脏的损伤。自制器官保存液对低温保存大鼠肝脏在减轻氧自由基损伤方面有较好的效果,与UW液相当。     

siRNA沉默fas基因减轻大鼠肝移植供肝冷保存和缺血再灌注损伤

目的：探讨针对fas的siRNA对大鼠原位肝移植供肝冷保存和缺血再灌注损伤的拮抗作用及机制。方法:（1）化学合成针对大鼠fas基因的3对siRNA，转染大鼠正常肝细胞(BRL细胞)，筛选抑制效果最高的siRNA序列。（2）对SD大鼠用水压注射法转染fas siRNA，48 h 后取肝，供肝冷保存2、4、6 h 后行细胞凋亡指数及fas表达检测。（3）对照组、fas siRNA组各25对SD雄性大鼠，供肝冷保存 3 h 后行原位肝移植,再灌注后1、3、6、12和 24 h 每组各处死5只大鼠，查血谷丙转氨酶(ALT)；取供肝查fas mRNA表达、Fas蛋白水平和细胞凋亡计数。结果:315位点的siRNA抑制BRL细胞fas基因效率最高。供肝冷保存实验中，fas　siRNA组冷保存2、4、6 h 的肝脏fas表达与细胞凋亡指数低于对照组（P<0.01）。大鼠肝移植复流后，fas siRNA组各检测点的fas基因表达、蛋白水平均明显低于、凋亡细胞少于、血清ALT低于对照组。结论:针对fas的siRNA对大鼠肝移植中的供肝冷保存和缺血再灌注损伤有一定的拮抗作用。     

肝缺血再灌注损伤和氯丙嗪的保护作用—黄嘌呤脱氢酶活性的组化观察

本文用组织化学方法观察大鼠肝脏缺血不同时间后再灌注时对黄嘌呤脱氢酶(Xanthlne Dehydrogenase简称XDase)活性的影响,同时观察氯丙嗪的保护作用。结果表明,短时间(0.5小时)肝缺血后再灌注,XDase活性和HE染色都无异常改变。长时间(2小时)肝缺血,达到不可逆性损伤后再灌注3小时,可使XDase活性明显减低,再灌注24小时后,HE染色有大面积肝细胞凝固性坏死,氯丙嗪对这种改变有明显的保护作用。     

几种因素对大鼠再生肝摄取氨基酸能力的影响——离体肝灌流的实验研究

本实验选用大鼠肝部分切除后24小时的残余肝离体灌流,研究了四种因素对残余肝摄取氨基酸能力的影响。结果表明:1.肝部分切除后24小时,残余肝摄取氨基酸的量增加。肝脏摄取氨基酸能力的增强依赖于肝细胞蛋白质合成的增加。在一定范围内,肝脏摄取氨基酸的量随肝切除量的增加而增多。2.胰岛素能促进残余肝摄取氨基酸,高血糖素无此作用,但高血糖素与胰岛素联合施用则使残余肝摄取氨基酸的能力进一步增强。3.大鼠再生肝提取液中含有某种能促进残余肝摄取氨基酸的物质。     

左卡尼汀强化St.Thomas No.2液对低温离体心脏的保存效果

背景：在心脏瓣膜置换中应用添加左卡尼汀的心脏停搏液可明显减轻心肌线粒体的脂质过氧化反应,保护心肌细胞。 目的：观察加入左卡尼汀的St.Thomas No.2液对大鼠离体心脏低温保存的效果。 方法：利用Langendorff 灌注装置建立SD大鼠离体心脏灌注和工作模型,随机分成4组,其中2组采用 St.Thomas No.2 液作为心脏停搏液与保存液分别保存心脏4 h、6 h,另2组采用添加左卡尼汀的St.Thomas No.2液作为心脏停搏液与保存液分别保存心脏4 h、6 h。 结果与结论：与St.Thomas No.2 液保存4 h组比较,添加左卡尼汀的St.Thomas No.2液保存 4 h组心脏心率、冠状动脉流量、左心室收缩峰压和左心室内最大上升速率及心肌含水量、ATP含量差别无显著性意义(P > 0.05),但心肌酶漏出量明显减少(P < 0.05);添加左卡尼汀的St.Thomas No.2液保存 6 h组上述指标检测结果均优于St.Thomas No.2保存6 h组 (P < 0.05)。提示左卡尼汀强化的St.Thomas No.2液可显著提高大鼠离体心脏的低温保存效果。     

自制KYL器官保存液对恒河猴肝脏的保存作用

背景：目前肝脏移植是治疗终末期肝病的最佳方法,UW液是公认的肝脏保存液,但是其价格昂贵,并且细胞外液高K+状态,与人的生理不符,常会导致患者瞬时高钾血症,引起心跳停止,因此研发新的器官保存液已经刻不容缓。 目的：观察自制KYL液对恒河猴肝脏缺血再灌注后的保存效果。 方法：实验选受体猴和供体猴各8只,每组分别包括KYL液组和UW液组各4例供体肝脏灌注并冷保存4 h,行同种异体原位肝移植。分别于移植后30 min、6 h,记录胆汁分泌量,采血检测谷草转氨酶、谷丙转氨酶、一氧化氮、内皮素1、肿瘤坏死因子α浓度,切取肝组织行光学显微镜检测。 结果与结论：两组移植后均有胆汁分泌,随时间延长胆汁分泌量增加(P < 0.05)。移植后30 min、6 h,KYL液组血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶浓度均低于UW液组(P < 0.05),两组血清一氧化氮、内皮素1、肿瘤坏死因子α浓度差异无显著性意义(P > 0.05)。光学显微镜下肝组织形态学观察显示,UW液组较KYL液组肝细胞水肿明显。结果证实,KYL液在预防缺血再灌注损伤效果与UW液总体相当,部分效果略优于UW液。   中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程      

血清AFP、CA19-9、CEA单项及三者联合检验对原发性肝癌早期诊断与治疗的意义对比

目的 探讨血清AFP、CA19-9、CEA单项及三者联合检验对原发性肝癌早期诊断与治疗的意义。方法 抽取2015年6月~2016年6月我院就诊的原发性肝癌患者50例设置为实验组,另同期收集50例健康体检者设置为常规组,对比两组受检者的血清AFP、CA19-9、CEA水平。结果 实验组的AFP、CEA、CA19-9的检验值分别为（58.25±6.21）ng/ml、（16.24±2.10）μg/L、（48.56±5.65）U/L,常规组分别为（2.30±0.62）ng/ml、（2.58±0.65）μg/L、（12.98±1.81）U/L,实验组检验值均高于常规组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 对原发性肝癌患者给予血清AFP、CA19-9、CEA单项与三者联合检验方式的意义显著,便于为疾病诊疗提供相关的参考资料。     

射频消融对大鼠肝脏组织IL-10水平的影响

探讨射频消融（RFA）前后大鼠肝脏局部组织白细胞介素-10（IL-10）水平的变化及其临床意义。用30只健康SD大鼠随机分为RFA后1周组和2周组及对照组,每组10只,RFA组分别在RFA后1周及2周处死,对照组不作RFA即处死,取RFA灶周边0.5cm范围肝组织（对照组取正常肝组织）,采用密度梯度离心法分离肝组织单个核细胞,应用流式细胞术检测IL-10水平。结果表明：对照组大鼠肝组织IL-10水平为94.9±2.1μg/L;RFA组RFA后1周组为93.3±2.2μg/L,2周后为72.9±10.5μg/L。RFA后2周组与对照组比较IL-10水平降低,有显著性差异（P〈0.05）。RFA后1周组与对照组比较无显著性差异。RFA后大鼠RFA灶肝组织IL-10水平降低,推断可能削弱IL-10对树突状细胞分化成熟的抑制作用。     

AcSDKP对TGF-β 1诱导的大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成及表达的调节作用

目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的调节作用.方法 差速贴壁法获取大鼠心脏成纤维细胞;采用3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原蛋白的合成.采用免疫细胞化学染色和Western blotting法检测心脏成纤维细胞Ⅰ型与Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果 随着TGF-β1浓度的增加(1μg/L, 2.5μg/L,5μg/L,7.5μg/L),细胞脯氨酸含量(CPM值)逐渐增加(分别为147.6±10.2,229.2±16.4,427.0±40.6,454.8±26.1),分别是对照组(CPM值为91.6±9.8)的1.61倍、2.50倍、4.66倍、4.97倍,差异均有显著性(P<0.05).当加入不同浓度的AcSDKP(10-10mol/L,5×10-10mol/L, 10-9mol/L, 10-8mol/L)时,细胞脯氨酸含量逐渐下降(CPM值为378.8±6.4,292.8±14.4,130.6±17.6,230.6±19.4),分别是TGF-β1组(5μg/L)的88.7%,68.6%,30.6%,54.0%.差异均具有显著性(P<0.05).免疫细胞化学结果显示,TGF-β1组(5μg/L)细胞内Ⅰ型与Ⅲ型胶原蛋白平均吸度值分别是对照组的1.36倍和2.12倍,差异具有显著性(P<0.05); Western blotting法结果显示,TGF-β1组的Ⅰ型与Ⅲ型胶原蛋白表达条带吸光度值分别是对照组的1.09倍和1.29倍,差异具有显著性(P<0.05).当给予AcSDKP(10-9mol/L)进行干预时,免疫细胞化学结果显示,细胞内Ⅰ型与Ⅲ型胶原蛋白表达强度较TGF-β1组减弱,其平均吸光度值分别是TGF-β1组的61.3%和68.5%,差异具有显著性(P<0.05).Western blotting法结果显示,Ⅰ型与Ⅲ型胶原蛋白表达条带吸光度值分别是TGF-β1组的83%和54%,差异具有显著性(P<0.05).结论 AcSDKP对TGF-β1介导的心脏成纤维细胞胶原合成与Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达有明显抑制作用,这可能与其抗心脏纤维化的作用相关.     

Liver function during extracorporeal whole liver perfusion in a pig model of acute ischemic liver failure

The shortage of livers for transplant has renewed interest in the potential of temporary liver support such as extra corporeal whole liver perfusion. In an ischemic induced liver failure model we perfused an extra corporeal liver through only a portal vein and assessed the function of this ex vivo liver by using hepatic tests to estimate elimination as well as synthesis capacities. Acute liver failure was performed in five control pigs by a hepatic devascularization associated to an end to side portocaval shunt. In a treated group, 5 to 6 h after this hepatic devascularization, animals were connected to an extra corporeal liver perfused via the portal vein with blood withdrawn from the ischemic liver animal from its portal vein. Devascularization of the liver induced an increase in liver enzymes and ammonia, a drop in the ratio of branched chain amino acids to aromatic amino acids, and a decrease in blood urea and indocyanine green and galactose clearances. In treated animals, urea, amino acid ratio, and clearances increased after the ex vivo liver perfusion. In this group, mean bile production and mean liver oxygen consumption were 13.7 +/- 3.6 ml/h and 16.1 +/- 7.7 ml/min, respectively. In an acute ischemic liver failure pig model, an extra corporeal whole liver perfusion demonstrated detoxification properties as well as synthesis capacities.     

Kinetics of uptake and biliary excretion of benzo(alpha)pyrene and mutagenic metabolites in isolated perfused rat liver

An isolated liver perfusion system was used as a simplifying tool to study the metabolism and excretion of benzo(alpha)pyrene (BP) as a prototype carcinogen/mutagen. Phenobarbital (PB) was used to induce liver microsomal enzymes in Sprague-Dawley male rats prior to isolated liver perfusion. Control livers were run simultaneously using generally tritiated (G-3H)BP/BP as substrate in the perfusion medium. Both biliary excretion and liver weight were increased in the induced compared to control liver, but biliary flow when corrected for liver weight is statistically the same for both control and PB-induced livers. The excretion rat of radioactivity in the bile is always higher for PB-induced than for control liver (maximum radioactive excretion at 1 hr). There is a more rapid radioactivity removal in the liver perfusion medium for PB-induced than for control livers. Data are explained by increased metabolism of BP in induced liver leading to the presence of more polar metabolites undergoing preferential biliary excretion than in the control liver. Results support in vivo experimental data. Extracts from liver and bile were tested for microbial mutagenicity by the Ames test (TA 100) after TLC separation. The control liver shows virtually no mutagenicity in bile, only in TLC fractions from the liver. The PB-induced liver shows significant mutagenicity in several TLC fractions in both bile and liver. The net effect of induction is to produce more mutagenic metabolites of BP, excreted in the bile, and presenting a significant exposure of carcinogens/mutagens, and consequent hazard to man.     

胆道系统CT扫描的三维重建研究

目的:通过CT扫描获取胆道系统容积数据,确立人体胆道系统三维重建的方法.方法:7例正常成人新鲜尸肝,以羧甲基纤维素(carboxymethylcellulose,CMC)/氧化铅(leadoxide,LO)混合物、牙托粉和明胶分别对应经胆道、门静脉和肝静脉灌注显影和固形,16排CT机扫描获取断层数据,在工作站用Mimics软件处理,建立胆系三维图像并进行评估.结果:7例标本6例灌注满意;6例满意者胆管连续、光滑、无伪影,空间感强烈、可任意度旋转;肝脏Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ各段胆管显示级数分别为5.8±0.75,10.1±1.05,10.2±0.98,7.8±0.75,11.8±0.75,11.7±0.82,13.2±0.75,11.7±1.63,相应各肝段胆管三维图像质量平均优秀率依次为98.14、97.78、97.82、98.68、97.05、96.22、95.02和95.31%;6例肝胆道图像平均优秀率(97.01±1.35%).结论:本法建立的人体胆道系统三三维模型胆道连续性好、图像空间感强烈,胆管显示级数多,图像质量高,是一种优秀的胆系=三维重建方法.     

Agrin, a novel basement membrane component in human and rat liver, accumulates in cirrhosis and hepatocellular carcinoma

Agrin is a multifunctional heparan sulfate proteoglycan originally discovered in the neuromuscular junctions and later observed in numerous other localizations. The presence of agrin in the liver, either healthy or diseased, has formerly not been reported. We detected agrin in minor amounts in the basement membranes of blood vessels and bile ducts in the healthy liver. The proliferation of bile ductules and the formation of new septal blood vessels in liver cirrhosis, as well as neoangiogenesis in the hepatocellular carcinoma (HCC) result in a dramatic increase in the quantity of agrin. Vascular and peribiliary basement membranes were strongly immunopositive for agrin in 29/29 human liver specimens with cirrhosis and HCC. However, sinusoidal walls of regenerative nodules in the cirrhotic liver consistently remained negative. Given the selectivity of agrin for tumor microvessels, agrin immunohistochemistry may prove helpful in recognizing malignant transformation in cirrhotic livers. Similar immunohistochemical observations were made on the liver of rats exposed to a combined cirrhosis/HCC induction treatment. In both human and rats, agrin probably originates from activated myofibroblasts, vascular smooth muscle cells and biliary epithelial cells. Increased agrin expression in human specimens, in the liver of 4/4 treated rats, as well as in isolated rat liver mesenchymal cells was verified by quantitative RT-PCR. Considering that agrin binds various growth factors, and it directly interacts with cell membrane receptors such as alphav-integrins, we hypothesize a stimulatory role for agrin in neoangiogenic processes such as tumor vascularization, and a supportive role in bile ductule proliferation.     

野黄苓甙在体外肝脏灌流复苏大鼠无心跳边缘供肝中的作用

目的: 探讨野黄苓甙在大鼠体外肝脏灌流复苏无心跳边缘供肝过程中对供肝功能和超微结构的影响。方法: 采用清洁级雄性Wistar大鼠24只,无心跳供肝按热缺血时间和处理方法的不同随机分为3组。A组(n=8)无心跳供肝的热缺血时间在安全时限内(15~20min),B组(n=8)和C组(n=8)无心跳供肝的热缺血时间均为45 min;3组均采用体外肝脏灌流系统(ECLP)常温灌流6 h,其中C组在灌流液中定时加入定量的野黄芩甙溶液。观察灌流后1 h、3 h和6 h供肝胆汁分泌量的变化以及灌流液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和内皮素-1(ET-1)水平的变化;在灌流前和灌流后1 h、3 h和6 h分别取3组供肝标本,通过透射电镜观察肝细胞超微结构的变化。结果: B、C 2组供肝在灌流后1 h和3 h胆汁分泌量与A组相比差异显著(P<0.05),但随着灌流时间的延长,在灌流后6 h 3组差异不显著(P>0.05),灌流后3 h B和C组差异显著(P<0.05)。灌流液中ALT 和ET-1的水平在3个时点B组、C组与A组相比差异有统计学意义(P<0.05),B组和C组在灌流后3 h和6 h差异显著(P<0.05),但在灌流后1 h差异不显著(P>0.05)。超微病理变化显示灌注前与A组相比,B、C 2组供肝的肝细胞线粒体部分膜断裂,嵴疏松溶解,核皱缩变形,染色质粗糙,核仁浓缩甚至裂解。灌流3 h后B、C 2组供肝的超微结构均有明显的恢复,灌流6 h后C组肝细胞结构恢复得更加明显。结论: 体外肝脏灌流野黄苓甙能够改善无心跳边缘供肝的功能和超微结构。     

Synthesis of Serum Albumin in Isolated Rat Liver Perfused by a Synthetic Medium with Fluorocarbon FG–80 Emulsion as Oxygen Carrier

A fluorocarbon emulsion FC-80 has been used as a substitute for erythrocytes in a synthetic nutrition medium in in vitro perfusions of isolated rat livers. The rate of albumin synthesis was estimated. After the first hour albumin was synthesised at a constant rate of 0.52 + 0.17 mg/h per 100 g of the body weight of the liver donor. ¹⁴C-lysine was incorporated into the circulating proteins linearly after the first hour. Other parameters tested were: levels of circulating proteins, urea nitrogen, glucose, glutamic-pyruvic transaminase, excretion of bile, weight changes of the liver, and level of glycogen in liver tissue after perfusion. Histological examinations were also performed. The function of the liver was comparable with the findings of other investigators who used whole blood as the perfusate. As far as we are aware this is the first time that a rat liver has been maintained in good functional condition for over 6 hours during in vitro perfusions with a synthetic medium that included an erythrocyte substitute. The method seems to offer great advantages for the study of metabolic processes.     

微囊小肝细胞样前体细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭

目的探索大鼠海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊小肝细胞样前体细胞(SHPC)移植治疗急性肝衰竭(AHF)大鼠模型的可行性和有效性。方法选择体质量150~180 g健康雄性Wistar大鼠10只。采用Retrosine(30 mg/kg)腹腔内注射联合2/3肝切除诱导雄性Wistar大鼠SHPC增殖模型,改进Seglen胶原酶灌注联合Percoll密度梯度离心分离SHPC,倒置显微镜、电子显微镜下观察,并进行免疫组织化学染色;静电液滴法APA微囊包埋。选择体质量180~220 g健康雌性Wistar大鼠20只,随机分为A组(微囊化SHPC腹腔内移植)、B组(空囊对照组);采用D-氨基半乳糖腹腔注射制备大鼠AHF模型;观察模型一般状况及生存时间,术后不同时间点检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBiL)及血氨水平,检测肝脏病理改变。结果Retrosine腹腔内注射联合2/3肝切除成功建立SHPC增殖模型,分离获得细胞符合大鼠SHPC;APA微囊呈光滑规则球形,直径为(300±40)μm,强度、韧性良好,囊内细胞形态完整,存活率为(90.0±1.3)%。微囊SHPC移植后,A组较B组中位生存时间延长(119.00 h vs 70.33 h),差异有统计学意义(P<0.05);随时间延长,A组大鼠血清ALT、AST、TBiL及血氨水平明显下降,均低于移植前水平,各时间点A组明显低于B组,差异有统计学意义(P<0.05);肝组织病理显示A组肝细胞损伤较B组明显改善;存活48 h大鼠腹腔内微囊保持完整光滑球形,囊内SHPC形态完整,1周微囊有散在破损皱缩,囊内细胞有增多聚集趋势,细胞存活率85%以上。结论APA微囊化大鼠SHPC腹腔内移植能改善大鼠AHF模型生存时间、生物化学指标(ALT、TBiL等)及病理损伤。