端粒酶逆转录酶在肝细胞肝癌中的表达及其与预后和免疫细胞浸润的关系

目的 分析端粒酶逆转录酶（TERT）在肝细胞肝癌中的表达及其与预后和免疫细胞浸润的关系。方法 通过癌症基因组图谱-肝细胞癌（TCGA-LIHC）和GSE124535数据集,分析TERT在肝细胞肝癌中的表达水平及其与肝细胞肝癌患者预后的关系。采用基因集富集分析（GSEA）识别与TERT相关的生物学途径。利用单样本基因集富集分析（ssGSEA）算法评估免疫细胞浸润,并分析TERT表达与免疫细胞浸润的关系。结果 在TCGA数据库和GSE124535数据集中,TERT在肝细胞肝癌肿瘤组织中的表达显著高于癌旁组织（均P<0.001）。在TCGA数据库中,TERT高表达肝细胞肝癌患者显示出较差的总生存时间（P=0.037）和无进展间隔时间（P=0.006）。在GSE124535数据集中,TERT高表达肝细胞肝癌患者的无病生存时间较差（P=0.190）。GSEA结果显示,端粒维持和细胞周期通路在TERT高表达组中显著富集。ssGSEA结果显示,TERT高表达组中CD8+T细胞、树突状细胞和自然杀伤细胞浸润水平较低,2型辅助T细胞浸润水平较高（均P<0.05）。结论 TERT高表达可能通过...     

miR-93-5p和miR-106b-5p在酒精相关性肝癌中的表达及其临床意义

目的： 探讨miR-93-5p和miR-106b-5p在酒精性肝硬化肝癌（酒精相关性肝癌）患者中的表达水平及其临床意义。方法： 选取酒精相关性肝癌患者穿刺组织蜡块10例,根据性别、年龄配对原则选取10例酒精性肝硬化患者穿刺组织蜡块,采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测组织中的miR-93-5p和miR-106b-5p表达水平。另收集河北医科大学第四医院2014年1月1日—2016年12月31日住院治疗的酒精相关性肝癌患者资料71例,治疗前抽取患者外周血,qPCR法检测血清中miR-93-5p和miR-106b-5p的表达水平,分析miR-93-5p和miR-106b-5p表达水平与患者临床病理指标和预后的关系。结果： 酒精相关性肝癌患者癌组织中miR-93-5p和miR-106b-5p的表达水平显著高于酒精性肝硬化患者（均P<0.01）。miR-93-5p或miR-106b-5p高表达组肿瘤最大径较低表达组显著增加（P<0.01）,且临床分期较晚（P<0.01）。全组患者中,年龄<60岁组患者生存率显著优于≥60岁组患者（P=0.03）;肿瘤最大径<5 cm组患者生存率显著优于≥5 cm组患者（P=0.01）;TNM分期Ⅰ+Ⅱ期患者生存率高于Ⅲ期患者（P=0.02）;miR-93-5p或miR-106b-5p高表达组患者生存率较低表达组患者显著降低（P≤0.01）;年龄和miR-106b-5p表达水平是患者预后的独立影响因素（P值分别为0.02和0.03）。结论： miR-93-5p和miR-106b-5p有作为酒精相关性肝癌肿瘤标志物的潜力,治疗前检测其表达水平可以预测患者临床病理指标和预后。     

MiR-18b-5p对大肠癌PTEN/PI3K/Akt2信号通路的调控

目的:探讨miR-18b-5p对大肠癌PTEN/PI3K/Akt2信号转导通路的调控。方法:qRT-PCR方法检测33例大肠癌患者癌组织中miR-18b-5p表达水平,将患者临床病理特征与癌组织miR-18b-5p表达水平进行独立样本t检验和多元线性回归分析。应用microrna.org预测miR-18b-5p靶基因,miR-18b-5p 类似物、抑制物转染肠癌细胞SW480及HCT116,qRT-PCR检测细胞PTEN、PI3K、Akt2 mRNA表达水平。结果:在大肠癌患者癌组织中,miR-18b-5p表达水平显著增高,为癌旁组织的3.6倍(P<0.01 ),其表达水平与肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期相关。Microrna.org预测PTEN可能是miR-18b-5p的靶基因,大肠癌细胞转染类似物后PTEN含量明显降低,其下游基因PI3K、Akt2表达增高。结论:miR-18b-5p下调抑癌基因PTEN表达,诱导PI3K/Akt2信号转导通路持续活化,促进了大肠癌的发生发展。     

miR-144-5p通过靶向ACTG1和STAT1调控甲状腺乳头状癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的:探讨miR-144-5p在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)细胞中的表达趋势及对 PTC 细胞系增殖、侵袭及迁移能力的影响及相关分子机制研究。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)检测人PTC细胞系TPC-1、 BCPAP及人正常甲状腺滤泡细胞系Nthy-ori 3-1中miR-144-5p的表达情况。将miR-144-5p-mimics、miR-144-5p-inhibitor及inhibitor-NC和mimics-NC分别以LipofectaminTM2000转染至TPC-1细胞。分为4组:阴性对照组(mimics-NC 组)和过表达组(mimics-144-5p组)。阴性对照组(inhibitor-NC 组)和抑制组(inhibitor-144-5p组)。以CCK-8生长曲线、小室侵袭实验和划痕实验检测4组细胞增殖、侵袭和迁移能力。ENCORI数据库验证miR-144-5p在TCGA中的表达趋势。在线数据库预测miR-144-5p下游靶基因。通过STING得到靶基因蛋白互作网络图。通过Cytascap插件CytoHubba得Degree值为 Top10的基因。GEPIA数据库检测ACTG1和STAT1在TCGA数据库中的表达趋势。HPA 数据库验证ACTG1和STAT1蛋白表达水平。qRT-PCR和TaretScan在线数据库验证miR-144-5p与ACTG1和STAT1之间的调控关系。结果:PTC细胞系中miR-144-5p表达趋势明显低于Nthy-ori 3-1人正常甲状腺滤泡上皮细胞。上调miR-144-5p后TPC-1细胞的增殖活性、侵袭和迁移能力明显下降，而抑制miR-144-5p则起到相反的作用。在线数据库预测miR-144-5p下游靶基因为584个。通过STING得到靶基因蛋白互作网络图。通过Cytascap插件CytoHubba得Degree值为 Top10的基因。在线数据库ENCORI验证ACTG1和STAT1可能是miR-144-5p的下游靶基因。qRT-PCR验证miR-144-5p与ACTG1和STAT1之间存在负调控关系。结论:miR-144-5p在PTC细胞中低表达，过表达或敲低miR-144-5p可能是通过调控ACTG1和STAT1影响PTC细胞的增殖、侵袭及迁移。     

miR-621在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

摘 要：［目的］ 探讨肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中miR-621的表达及其临床意义,并对miR-621靶基因进行系统的生物信息学分析。［方法］ 基于GEO（Gene Expression Omnibus）和TCGA（The Cancer Genome Atlas）数据库,比较HCC组织和癌旁组织中miR-621表达量,并分析miR-621表达与HCC患者临床病理特征及预后的相关性。利用生物信息学方法对miR-621的靶基因进行预测及功能富集分析,并结合蛋白互作网络及预后分析结果筛选miR-621关键靶基因。［结果］ miR-621在HCC组织中较癌旁组织低表达（P<0.05）。HCC组织中miR-621表达量与患者TNM分期、肿瘤分化程度以及血清甲胎蛋白（AFP）等指标显著相关（P均<0.05）。生存分析显示HCC组织中miR-621低表达是影响患者预后的独立危险因素（P<0.05）。富集分析提示miR-621的靶基因主要富集于细胞黏附、氨基酸跨膜运输、钙离子结合等功能,以及MAPK、细胞周期等信号通路。AURKA、CDC25A、ESPL1、GINS2、KIF20B、MCM5、NUSAP1、OIP5等为miR-621关键靶基因,其在HCC组织中均呈现表达上调,且相对高表达者预后不良（P均<0.05）。［结论］ miR-621可作为一种抑癌基因参与HCC的发生、发展,并具有成为HCC诊断标志物、预后指标及治疗靶点的潜在价值。     

铁死亡相关复发风险模型预测胶质母细胞瘤患者的临床结局与免疫浸润

目的构建铁死亡相关胶质母细胞瘤(GBM)复发预后风险模型并评价患者预后。方法通过CGGA和FerrDb数据库筛选复发GBM中铁死亡相关差异表达基因,经过Lasso分析构建nomogram模型,并利用TCGA数据验证预测效能。基因本体功能和信号通路富集分析影响患者预后的机制,通过ESTIMATE算法和TIMER数据库研究肿瘤免疫浸润与免疫检测点表达情况。结果WWTR1、PLIN2、BID是GBM复发的重要铁死亡相关基因,结合性别、年龄构建的nomogram校正曲线一致性良好,1、3、5年AUC分别为0.65、0.66、0.63(CGGA)和0.68、0.76、0.79(TCGA)。高风险亚型中上皮间充质转化、KRAS和炎性反应通路活性明显上调(P<0.05),免疫细胞浸润较少(P<0.05),且风险评分与免疫抑制检测点呈正相关(r=0.43~0.57,P<0.05)。结论基于3个铁死亡相关复发风险基因构建预后评分模型,发现浸润性免疫细胞和免疫检测点影响GBM患者预后。     

微小RNA-526b-3p通过JAK/STAT3信号通路对黑色素瘤细胞侵袭迁移的影响

目的 探讨微小RNA-526b-3p(miR-526b-3p)对黑素瘤细胞侵袭与迁移的影响及潜在机制。方法 实时定量PCR(qPCR)检测黑色素瘤组织和A2058细胞中miR-526b-3p和信号转导子与激活子3(STAT3)的表达水平，双荧光素酶报告基因实验验证miR-526b-3p和STAT3的靶向关系。成功构建miR-526b-3p模拟物(mimics)和过表达STAT3的质粒pcDNA3.1-STAT3后进行转染，将A2058细胞分为miR-NC组(对照)、miR-526b-3p mimics组(过表达miR-526b-3p)、miR-526b-3p mimics+pcDNA3.1-STAT3组(过表达miR-526b-3p和STAT3)。采用CCK-8法检测细胞增殖，划痕实验和Transwell小室实验检测各组细胞迁移和侵袭；运用qPCR和Western blot方法检测miR-526b-3p和JAK/STAT3信号通路相关基因STAT3和p-JAK1的表达水平。结果 黑色素瘤组织和细胞中miR-526b-3p表达下调，而STAT3表达上调(P<0.05)。相较于miR...     

胃癌中FKBP5的表达及其与免疫浸润和预后相关性研究

目的 探究FKBP5在为胃癌中的表达、预后意义及其与免疫浸润的关系。方法 利用TIMER数据库分析FKBP5在多种肿瘤中的表达;在癌症基因组图谱(TCGA)胃癌数据集中比较FKBP5在胃癌与癌旁正常组织及不同病理亚组中的表达差异;TCGA和KMplotter数据库分析FKBP5与患者预后的关系;基因富集分析(GSEA)分析FKBP5高表达组富集信号通路;应用TIMER数据库分析FKBP5与免疫浸润水平的关系,并分析不同免疫细胞浸润对胃癌患者预后的影响;Pearson相关分析FKBP5与经典免疫相关基因的表达相关性。结果 FKBP5在多种肿瘤组织中表达失调,在胃癌组织较癌旁正常组织表达下调;FKBP5表达水平随着T分期和病理分级的增高而升高;生存分析显示FKBP5 mRNA高表达的胃癌患者总生存率低于FKBP5低表达的胃癌患者(HR>1.50,P<0.05)。GSEA分析显示,FKBP5 mRNA高表达组胃癌样本在同种异体排斥、上皮间质转化、HEDGEHO信号、炎症反应、肌生成等信号通路富集(ES>1.50,P<0.05)。在胃癌组织中,FKBP5表达与CD4+T...     

miR-15b-5p靶向HDGF抑制胃癌细胞增殖并促进凋亡

目的:研究miR-15b-5p和HDGF对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:采用qRT-PCR法检测胃癌细胞中miR-15b-5p的表达;通过软件预测miR-15b-5p的下游靶基因;将对数生长期AGS细胞随机分为miR-15b-5p组（转染miR-15b-5p模拟物）、miR-NC组(转染阴性对照)、Scramled 组(转染阴性对照)、shHDGF组(转染质粒pcDNA3.1-shHDGF)、Vector+miR-15b-5p组(miR-15b-5p模拟物和pcDNA3.1载体共转染)、HDGF+miR-15b-5p组(miR-15b-5p模拟物和HDGF共转染),均以脂质体法转染;MTT法和流式细胞术检测各组细胞的增殖和凋亡变化;Western blot法和双荧光素酶报告基因实验分析miR-15b-5p对HDGF的靶向调控作用。结果:与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901和AGS中miR-15b-5p低表达,且过表达miR-15b-5p可抑制AGS细胞的增殖并促进凋亡。HDGF是miR-15b-5p的潜在靶标,miR-15b-5p能够抑制HDGF表达。而回补HDGF可逆转miR-15b-5p抑制胃癌细胞增殖与促进凋亡的作用。结论:miR-15b-5p可抑制胃癌细胞的增殖并促进凋亡,其作用机制可能与靶向抑制HDGF有关,提示miR-15b-5p可能成为胃癌诊断与治疗的潜在靶点。     

miR-125b-5p和miR-196a-5p在胃癌根治术后患者血清中的表达水平及其与临床病理参数和预后的关系

目的 探讨miR-125b-5p和miR-196a-5p在胃癌根治术后患者血清中的表达水平及其与临床病理参数及预后的关系.方法 选取胃癌根治术后患者169例.采用ELISA法检测患者血清miR-125b-5p和miR-196a-5p表达水平,分析其与临床病理参数及预后的关系.结果 血清miR-125b-5p和miR-1...     

OIP5反义RNA 1靶向调控微小RNA-200b-3p对食管鳞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA OIP5反义RNA 1(OIP5-AS1)靶向调控微小RNA-200b-3p(miR-200b-3p)在食管鳞癌(ESCC)细胞增殖和凋亡中的作用。方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测ESCC组织和细胞的OIP5-AS1和miR-200b-3p水平。双荧光素酶报告基因实验鉴定OIP5-AS1与miR-200b-3p之间的相互作用。将靶向OIP5-AS1的小干扰RNA序列si-OIP5-AS1、miR-200b-3p抑制物(inhibitor)单独或共转染EC109细胞,qPCR验证转染效果后采用MTT法和Annexin-V/PI双染流式细胞术检测EC109细胞的增殖和凋亡情况。结果 与癌旁组织比较,ESCC组织的OIP5-AS1水平升高而miR-200b-3p水平降低(P<0.05),且两者水平呈负相关性(r=-0.415,P<0.001)。与HET-1A细胞相比,ESCC细胞的OIP5-AS1水平上调而miR-200b-3p水平下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验结果显示OIP5-AS1...     

miR-135b-5p靶向CMTM3调节胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力

目的:探究miR-135b-5p通过靶向CMTM3基因调节胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。方法:采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测胃癌组织和细胞系中CMTM3和miR-135b-5p的表达水平。利用慢性病毒转染技术将miR-135b-5p inhibitor转染至胃癌细胞,RT-qPCR检测转染效率;CCK-8比色法和Transwell实验检测转染后细胞的增殖、侵袭和迁移能力;Western blotting 检测转染后细胞中CMTM3蛋白表达水平。利用生物信息学网站预测miR-135b-5p潜在靶基因CMTM3,利用荧光素酶实验进行验证。结果:RT-qPCR检测结果表明,miR-135b-5p在胃癌组织和胃癌细胞株中呈现高表达,CMTM3在胃癌组织中呈现低表达（P<0.01）。RT-qPCR检测转染效率,结果显示,转染miR-135b-5p inhibitor敲低了miR-135b-5p的表达水平（P<0.001）;CCK-8和Transwell实验结果表明,敲低miR-135b-5p后抑制了胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力（P<0.01）,Western blotting实验结果表明,敲低miR-135b-5p促进了CMTM3蛋白的表达。生物信息学网站预测CMTM3为miR-135b-5p的潜在靶基因,荧光素酶实验证实了miR-135b-5p直接靶向胃癌细胞中CMTM3基因（P<0.01）。结论:miR-135b-5p作为重要的调节因子,反向调节抑癌靶基因CMTM3,从而促进胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

miRNA-30a-5p和异黏蛋白对乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响

目的探讨miRNA-30a-5p(miR-30a-5p)与异黏蛋白(MTDH)体外对人乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库数据, 分析数据库中112例乳腺癌患者癌及癌旁组织MTDH和103例乳腺癌患者癌及癌旁组织miR-30a-5p的表达情况;采用Pearson相关性分析法分析数据库中1 222例乳腺癌患者MTDH与miR-30a-5p的相关性;数据更新时间为2022年8月。将乳腺癌MDA-MB-231细胞分为阴性对照组(转染阴性对照序列)、miR-30a-5p过表达组(转染miR-30a-5p模拟物)、siMTDH组[转染针对MTDH基因的小干扰RNA(siMTDH)]、siMTDH+miR-30a-5p过表达组(同时转染siMTDH、miR-30a-5p模拟物);采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力, 采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力, Transwell法检测细胞侵袭能力, 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞miR-30a-5p、MTDH、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、波形蛋白(vimentin)...     

长链非编码RNA SNHG7靶向微小RNA-186-5p及对肝癌细胞迁移侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因7(SNHG7)靶向微小RNA-186-5p(miR-186-5p)对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在机制.方法 基于UALCAN网站分析TCGA数据库中肝癌组织的SNHG7水平,应用Kaplan-Meier Plotter数据库分析SNHG7水平与肝癌预后的关系;采用...     

MiR-221在肝癌中的表达及其作用机制研究

  目的   分析miR-221在肝癌患者癌组织和正常组织中以及血浆中的表达水平及其表达水平与临床病理特征、诊断和预后之间的相关性。并进一步分析探讨其在肝癌发生发展中的作用机制。   方法   利用基因表达数据库（Gene Expression Omnibus database,GEO）中的芯片数据集分析miR-221在肝患者癌组织及癌旁组织中的表达水平。利用实时荧光定量PCR法验证miR-221在74例临床肝癌患者肿瘤组织和对应癌旁组织中的表达水平,进一步检测miR-221在25例肝癌患者血浆和正常人血浆中的表达水平。进一步分析miR-221在肝癌诊断及预后方面的价值。进一步进行miR-221的靶基因进行功能富集分析,及其对肝癌细胞增殖、侵袭以及EMT进程的影响。   结果  GEO数据库分析结果显示miR-221在肝癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）,同样经实时荧光定量PCR验证结果证明miR-221在肝癌患者的肿瘤组织和血浆中显著高表达,且其表达水平与肝癌患者的TNM分期和肿瘤大小显著相关。MiR-221的表达水平降低与肝癌患者的总生存时间和无病生存时间延长显著相关。功能富集分析发现miR-221所参与的信号通路主要为p53信号通路、ErbB信号通路、RNA转运和mTOR信号通路等信号通路,且体外实验表明低表达miR-221显著抑制肝癌细胞的增殖和侵袭能力,同时肝癌HepG2和MHCC97H细胞的E-cadherin mRNA和蛋白表达水平显著上调（P<0.01）,而N-cadherin和vimentin mRNA和蛋白的表达水平明显降低。   结论  MiR-221在肝癌组织和血浆中显著高表达,且与肝癌患者的预后不良显著相关,主要在肝癌中通过EMT进程而发挥作用。       

靶向RECK基因的miR-374b-5p对裸鼠人胃癌移植瘤生长的影响

目的 :探讨微RNA-374b-5p(micro RNA-374b-5p,miR-374b-5p)及其靶基因反转录富含半胱氨酸蛋白(reversion-inducing-cysteine-rich protein with Kazal motifs,RECK)在胃癌发生和发展中的作用。方法 :采用人胃癌MGC-803细胞建立BABL/c裸鼠移植瘤模型,当移植瘤体积达到60 mm3左右时,将小鼠随机分为3组(每组5只),即空白对照组、阴性对照组[体内转染无意义微RNA序列(miR-374b-5p negative control inhibitor)]和miR-374b-5p抑制组(体内转染miR-374b-5p inhibitor),并观察各组移植瘤的生长情况。在接种MGC-803细胞后第35天时(最后一次治疗3 d后)处死各组小鼠,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察移植瘤标本的病理学特征;实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测移植瘤组织中miR-374b-5p的表达水平;荧光素酶活性检测验证miR-374b-5p是否靶向作用于RECK基因;分别采用RFQPCR和免疫组织化学法检测移植瘤中RECK mRNA和蛋白的表达情况。结果 :miR-374b-5p抑制组移植瘤体积在转染miR-374b-5p inhibitor 9 d后(即接种细胞的第23天后),开始明显小于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),而空白对照组和阴性对照组小鼠的移植瘤体积差异无统计学意义。病理学检测结果提示,miR-374b-5p抑制组移植瘤的恶性程度较空白对照组和阴性对照组明显下降。miR-374b-5p抑制组移植瘤中miR-374b-5p的表达水平均较空白对照组和阴性对照组明显下调(P<0.05)。荧光素酶报告载体系统证实,RECK是miR-374b-5p直接调控的靶基因;miR-374b-5p抑制组移植瘤中RECK m RNA及蛋白的表达水平均显著高于空白对照组和阴性对照组(P均<0.05)。结论 :miR-374b-5p可能通过RECK通路在胃癌的发生和发展中扮演着癌基因的角色。     

miR-10a-5p基因甲基化对卵巢癌铂类耐药的影响

目的 卵巢癌是死亡率最高的妇科肿瘤,较强的化疗耐药性是其预后差的主要原因之一,为了阐明卵巢癌对铂类药物的耐药机制,本研究探讨miRNA基因的甲基化水平对卵巢癌铂类耐药的影响.方法 将卵巢癌组织分为敏感组和耐药组,每组各3例;采用基因芯片技术,对比分析了两组微RNA(microRNA,miRNA)的表达差异;采用实时荧光定量PCR,分别在6例敏感和3例耐药组织、铂类药物敏感(CoC1)和耐药的卵巢癌细胞系(CoC1/DDP),检测了候选miRNA的表达差异;应用Massarray技术,检测敏感组织(15例)与耐药组织(6例)中miRNA基因启动子的甲基化差异;应用生物信息学分析,鉴定目标miRNA的潜在靶基因.结果 以铂类药物敏感的卵巢癌组织样本为对照,利用基因芯片筛选,鉴定了6条在耐药组织样本中出现表达上调的miRNA(miR-493-3p、miR-10a-5 p、miR-16-2-3p、miR-1248、miR-451a、miR-628-3p)和6条表达下调的miRNA(miR-509-3p、miR-1197、miR-376a-3p、miR-1273a、miR-550a-3p、miR-19b-3p).组织验证发现,miR-509-3p、miR-493-3p、miR-10a-5p、miR-16-2-3p和miR-451a,与芯片结果一致;培养细胞研究发现,4条miRNA的表达调控方式与组织芯片结果一致,miR-10a-5p、miR-16-2-3p、miR-1248和miR-628-3p在耐药细胞系中高表达.进一步研究发现,与敏感肿瘤组织相比,耐药组织中miR-10a-5p基因启动子的甲基化水平出现显著降低,P=0.04.结合生物信息学预测HOXA1和USF2为miR-10a-5p与耐药相关的靶基因.结论 与敏感组相比,耐药组miR-10a-5p基因启动子甲基化水平显著降低,miR-10a-5p表达升高,通过抑制 HOXA1和USF2,抑制细胞凋亡,导致铂类化疗药物耐受.     

MicroRNA-490-5p靶向CDK1通过ERK信号通路参与胃癌细胞周期调控

目的:探讨miR-490-5p对胃癌细胞增殖与周期的调控作用和分子机制,以期为临床治疗胃癌提供新的有效靶点.方法:收集30例胃癌患者的胃癌组织及相应的癌旁组织标本;采用Real-time PCR法检测miR-490-5p和CDK1的表达水平;分析细胞周期相关蛋白 CDK1 与 miR-490-5p 的靶向关系.MTT法和流式细胞仪检测转染后胃癌细胞生长以及细胞周期情况.结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-490-5p的表达显著下调(P<0.001);转染 miR-490-5p mimics 的细胞中miR-490-5p的表达显著上调,而miR-490-5p inhibitors中miR-490-5p显著下降(均P<0.001);CDK1 是 miR-490-5p 的靶基因;下调miR-490-5p、上调CDK1能促进胃癌细胞的增殖能力及G1/S期的转化(均P<0.001).结论:通过上调miR-490-5p 可以抑制胃癌细胞的恶性增殖,减少CDK1表达,抑制 ERK信号途径,降低了G1/S期的转化速率,从而为胃癌诊断及治疗提供新靶标.     

miRNA-26b-3p通过靶向STAT3调控食管鳞状细胞癌细胞的增殖和迁移

目的：观察miR-26b-3p在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中的表达水平及其对ESCC细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并探讨其分子调控机制。方法: 选取河北医科大学第四医院2018年4月1日至2018年12月25日手术切除的ESCC组织及相应癌旁组织各60例,利用qPCR法检测ESCC组织、癌旁组织和ESCC细胞中miR-26b-3p的表达。选取miR-26b-3p表达水平较低的ESCC细胞TE1和KYSE150,转染miR-26b-3p mimic,并设立阴性对照。利用细胞增殖实验、划痕愈合实验和Transwell实验检测过表达miR-26b-3p对TE1和KYSE150细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。荧光素酶报告基因实验检测miR-26b-3p与STAT3的 3''UTR 靶点部位的结合情况。随后同时转染 miR-26b-3p mimic 和 pcDNA3.0-STAT3,利用细胞增殖实验、划痕愈合实验和Transwell实验检测STAT3是否可逆转过表达miR-26b-3p对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。qPCR 和 WB法检测甲基化酶抑制剂5-Aza-DC对ESCC细胞甲基化的影响和miR-26b-3p与STAT3表达的影响。结果: miR-26b-3p在ESCC组织中的表达低于癌旁组织（P<0.01）,其在 ESCC 细胞TE1、KYSE150和LYSE170中表达水平显著低于人正常食管上皮细胞HEEC（均P<0.01）。与miR-26b-3p NC组相比,miR-26b-3p mimic转染可明显上调TE1和KYSE150细胞中miR-26b-3p的表达（均P<0.01）,但可明显抑制两种细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）。荧光素酶报告基因实验结果表明,在TE1和KYSE150细胞中,miR-26b-3p明显抑制了野生型STAT3载体的荧光素酶活性（P<0.05或P<0.01）,而突变型的荧光素酶活性不受影响。同时转染miR-26b-3pmimic和pcDNA3.0-STAT3可部分逆转miR-26b-3p mimic对TE1 和 KYSE150 细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用（P<0.05或P<0.01）。5-Aza-DC 处理后 ,TE1 和 KYSE150 细胞中 miR-26b-3p 表达上调（均 P<0.01）、STAT3 mRNA 和蛋白水平降低（P<0.05）,miR-26b-3p呈现去甲基化状态。结论: miR-26b-3p的启动子高甲基化导致其在ESCC组织和细胞中的表达下调,其作为抑癌因子可通过靶向STAT3而抑制ESCC细胞的增殖、侵袭和迁移能力。