白细胞介素-2介导体内T细胞调节功能的研究进展

白细胞介素-2(IL-2)被认为是重要的T细胞生长因子,已经用于临床,并取得一定的疗效。体内IL-2信号缺失时,却又表现为明显的自身免疫性疾病。本文就IL-2在体内介导T细胞调节功能的研究进展简单做一综述。     

异种抗原治疗肿瘤对荷瘤小鼠调节性T细胞的影响

目的研究异种抗原免疫续贯瘤内注射的方法对荷瘤小鼠肿瘤局部调节性T细胞数量的影响,及其对肿瘤的治疗作用。方法利用异种抗原免疫续贯瘤内注射的方法处理试验小鼠,测量瘤块大小,计算抑瘤率,使用流式细胞术检测肿瘤主要组织相备性合体Ⅰ类(MHC-Ⅰ)类型表达及调节性T细胞的数量,使用ELISA方法检测瘤内白细胞介素2(IL-2)浓度。结果实验组小鼠的MHC-Ⅰantigen、CD3 CD8 T细胞以及CD3 CD4 CD25 T细胞的表达率分别为42.45%、22.58%和2.91%,IL-2的浓度为100.6pg/ml,与免疫对照组和空白对照组之间存在显著性差异(P<0.01)。结论异种抗原免疫续贯瘤内注射的治疗方法可以上调肿瘤MHC-Ⅰ类抗原,减少肿瘤局部调节性T细胞的数量,有良好的抗肿瘤作用。     

B细胞活化因子的双向性:促进调节性T细胞分泌白细胞介素-35

目的研究B细胞活化因子(B cell activation factor of the tumor necrosis factor family,BAFF)对调节性T细胞(Tregs)分泌抑制性细胞因子白细胞介素-35(interleukin-35,IL-35)的影响,验证系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)中BAFF对免疫反应的双向调节机制。方法磁珠分选狼疮模型鼠Tregs,经BAFF刺激后采用qRT-PCR及流式细胞术检测其分泌IL-35浓度。比较正常对照鼠、狼疮模型鼠及经尾静脉注射抗BAFF蛋白后狼疮模型鼠脾脏Tregs频率及分泌IL-35情况。结果BAFF能够有效促进Tregs分泌IL-35。相对于正常对照鼠,狼疮模型鼠(血清中BAFF升高)脾脏Tregs分泌较高浓度的IL-35,而中和其循环中BAFF后,Tregs分泌IL-35减少。结论在SLE发病机制中,BAFF不仅是重要的致病因素,还能够通过促进Tregs细胞分泌IL-35发挥负向免疫调节效应。     

调节性T细胞及白细胞介素17在子宫内膜癌患者中的表达及意义

目的研究调节性T细胞及白细胞介素17(IL-17)在子宫内膜癌患者中的表达及意义。方法选取2013年1月～2016年1月我院收治的20例子宫内膜癌患者作为子宫内膜癌组,另选取同期20名健康志愿者作为对照组,应用流式细胞术检测两组外周血中调节性T细胞水平。采用realtime-PCR及ELISA检测调节性T细胞转录因子Foxp3、抑制性细胞因子白细胞介素10(IL-10)及炎性细胞因子IL-17的水平。结果子宫内膜癌患者外周血中调节性T细胞的水平及Foxp3表达水平显著高于对照组,差异具有统计学意义(P0.01)。同时子宫内膜癌患者IL-10及IL-17的分泌水平也显著高于对照组,差异具有统计学意义(P0.01)。结论子宫内膜癌患者调节性T细胞/Th17细胞间的平衡被打破,调节性T细胞可能通过分泌IL-10参与调控子宫内膜癌的病理进程。     

BCG干预对哮喘小鼠气道炎症及调节性T细胞生成的影响

目的观察减毒卡介活菌疫苗(BCG)干预后哮喘小鼠气道炎症及调节性T细胞生成的变化,以探讨其可能的作用机制。方法24只昆明小鼠随机分为哮喘组、BCG干预组、正常对照组。昆明小鼠以卵白蛋白(OVA)致敏激发建立哮喘模型,于OVA致敏前及后5d分别以BCG皮内注射干预;正常对照组小鼠以生理盐水代替OVA致敏激发。所有小鼠在最后一次激发后24h收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血。计数BALF中的细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)数。并用流式细胞仪分析外周血CD4 CD25 调节性T细胞(Treg)的百分比。开腹取脾,制备脾单细胞悬液并培养48h,收集上清液。Elisa法测定上清液中的IL-10含量。结果哮喘组小鼠BALF中的细胞总数及EOS计数较正常对照组显著增高(P<0.01),而BCG干预组其BALF中的细胞总数及EOS的计数较OVA致敏激发组降低(P<0.01);哮喘组外周血CD4 CD25 Treg百分比为(11.59±1.33)%,较正常对照组的(13.66±1.68)%显著下降(P<0.01);而BCG干预组CD4 CD25 Treg百分比为(14.4±2.75)%,较哮喘组明显上升(P<0.05)。BCG干预组脾细胞培养上清液中IL-10的水平(7.79±1.34pg/ml)较哮喘组(5.54±0.66pg/ml)显著升高(P<0.01)。结论BCG能明显抑制哮喘小鼠气道的炎症反应,其干预机制可能与促进Treg生成有关。     

沙利度胺联合甲氨蝶呤治疗类风湿性关节炎疗效及对患者调节性T细胞、白细胞介素-6水平影响临床研究

目的:探讨沙利度胺联合甲氨蝶呤治疗类风湿性关节炎(RA)的临床疗效及对调节性T细胞、白细胞介素-6(IL-6)水平影响。方法:选取120例RA患者按照随机数字表达法将其分为对照组与研究组,对照组口服甲氨蝶呤进行治疗,研究组在此基础上加用沙利度胺,均连续用药治疗3个月,记录两组患者治疗前、后关节肿胀指数、压痛指数、晨僵时间以及类风湿因子阳性情况、实验室C反应蛋白质、红细胞沉降率等指标表达,统计两种治疗方案临床疗效,记录两组患者治疗前后调节性T细胞、IL-6表达变化情况。结果:治疗后研究组患者临床症状与相关实验室指标均比对照组更低,改善程度优于对照组,临床治疗效果(91.67%)显著优于对照组(75%,均P<0.05)。治疗后两组患者调节性T细胞所占比例及IL-6水平均较治疗前明显增加或下降,且研究组患者调节性T细胞所占比例明显高于对照组,IL-6水平明显低于对照组(均P<0.05)。结论:与单用甲氨蝶呤抗风湿方案比较,联合沙利度胺治疗RA在改善患者临床症状、控制病情方面效果更佳,临床治疗效果更显著,其作用机制可能与增加调节性T细胞比例、降低IL-6表达调控免疫平衡有关。     

辅助性T细胞17和调节性T细胞在哮喘小鼠中的失衡表达及其意义

目的探讨辅助性T细胞17(Th17)和CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)的表达失衡在哮喘小鼠发病机制中的作用。方法将24只BALB/c小鼠随机分为哮喘组和正常对照组,每组12只。哮喘组采用卵白蛋白致敏和激发的方法制作小鼠哮喘模型,对照组用等量的生理盐水代替。采用体积描记法测定气道反应性;对BALF中炎性细胞进行计数;流式细胞术检测脾脏单个核细胞中Th17及Treg细胞占CD4+ T细胞比例;ELISA法检测BALF及肺匀浆中Th17及Treg相关细胞因子IL-17和IL-10水平。结果与对照组比较,哮喘组平均气道阻力显著升高(P0.01),Th17细胞比例显著升高[(5.68±1.99)%比(2.80±0.82)%,P0.01],而Treg细胞比例显著降低[(2.88±0.46)%比(6.10±2.44)%,P0.01],Th17/Treg比值显著升高(1.93±0.41比0.50±0.15,P0.01),BALF及肺匀浆中IL-17水平均显著升高[(22.37±3.00)pg/mL比(11.42±2.15)pg/mL,(52.93±5.39)pg/mL比(19.38±2.65)pg/mL,P均0.01],而IL-10水平均显著降低[(6.05±1.25)pg/mL比(14.23±2.94)pg/mL,(9.33±1.79)pg/mL比(21.40±2.44)pg/mL,P均0.01]。结论哮喘小鼠Th17细胞数量增多及IL-17水平增高,而Treg细胞数量减少及IL-10水平降低,Th17/Treg细胞比例失衡可能在哮喘的发病机制中具有重要作用。     

白细胞介素-17对小鼠胚胎丢失的作用

目的:探讨正常妊娠与自然流产小鼠体内Th17/Treg细胞的表达差异以及白细胞介素-17(IL-17)对正常妊娠小鼠胚胎丢失的影响。方法:孕4 d时分别给予正常妊娠小鼠(CBA/J♀×BALB/c♂)生理盐水和IL-17A构建正常妊娠组和给药组,给予自然流产小鼠(CBA/J♀×DBA/2♂)生理盐水构建自然流产组。孕14 d时计算胚胎吸收率,采用ELISA法测定外周血IL-17水平,Real-time PCR及Western blot法检测胎盘组织IL-17、RORγt及Foxp3的表达水平。结果:自然流产组及给药组胚胎吸收率、胎盘组织中IL-17、RORγt的mRNA及蛋白水平显著高于正常妊娠组,而Foxp3水平则低于正常妊娠组;自然流产组外周血IL-17含量显著高于正常妊娠组。结论:自然流产小鼠体内Th17/Treg平衡明显向Th17细胞偏移,IL-17是介导流产发生的独立危险因素之一。     

BRCA2对乳腺癌癌症干细胞的影响及其机制研究

目的 探讨乳腺癌易感基因2(breast cancer suscepbility gene 2, BRCA2)对上皮型乳腺癌癌症干细胞的影响及从Notch信号角度分析其机制。方法 利用本实验室前期建立的反转录病毒干扰载体pMSCVneo/eGFP-U6构建BRCA2的载体, 合成慢病毒颗粒, 转染上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞。筛选出单克隆细胞后, 利用Western blot法检测MCF7细胞中干扰BRCA2的效果。球形成试验分析干扰BRCA2后对MCF7上皮型乳腺癌干细胞的影响。克隆形成试验分析BRCA2下调后对MCF7上皮型乳腺癌干细胞增殖能力的影响。Western blot法检测乳腺癌癌症干细胞自我更新因子Notch1和Notch4在干扰BRCA2的上皮型乳腺癌中的影响。结果 干扰BRCA2的反转录病毒载体和对照载体测序正确, 可以合成反转录病毒。Western blot法发现干扰BRCA2的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞中BRCA2的表达较对照细胞显著下调。球形成试验结果显示干扰BRCA2的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞球形成数量较对照细胞显著增加。克隆形成试验结果显示干扰BRCA2的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞克隆形成能力较对照细胞显著增加。Western blot法检测结果显示干扰BRCA2的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞中Notch1的表达较对照细胞显著上调, 未在对照和干扰BRCA2的MCF7细胞中检测到Notch4的表达。结论 BRCA2沉默的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞可通过上调Notch1表达使其形成癌症干细胞的能力增加。     

小鼠乳腺癌动物模型中调节性T细胞的动态检测及其实验意义

【摘要】 目的 分析小鼠乳腺癌实验动物模型中调节性T细胞(Tregs)的变化,并探讨其在肿瘤发生中的意义。 方法 建立小鼠乳腺癌动物模型。在肿瘤接种后1周、3周和6周3个不同时间点,流式细胞术（FACS）检测CD4+CD25+ 和CD4+ FOXP3+调节性T细胞在脾脏、引流淋巴结和肿瘤组织中所占的CD4+T细胞细胞的比例, CD4+T细胞中CD25+ FOXP3+双阳的表达情况,肿瘤组织中CD4+T细胞占肿瘤浸润T淋巴细胞（CD3+T）的比例。结果 与正常对照组比较,在小鼠乳腺癌动物模型中,脾脏和淋巴结中CD4+ T细胞占淋巴细胞的比例在荷瘤1周、3周和6周逐渐下降（P0. 05）。 结论 调节性T细胞在恶性肿瘤模型中表达增加,在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。     

NUAK2在乳腺癌诊疗中的价值及其对乳腺癌细胞MCF-7生物学功能的影响

摘要:目的 利用生物信息学数据库探究 NUAK2基因在乳腺癌诊疗中的临床价值并分析其对乳腺癌细胞 MCF-7 生物学功能的影响。方法 通过 TCGA 和 GTEx数据库分析 NUAK2基因在乳腺癌中的表达水平及其与乳腺癌患者 临床病理特征的相关性;以人乳腺癌细胞 MCF-7为细胞模型,合成 NUAK2的特异性siRNA(si-NUAK2)并转染 MCF7细胞,通过qRT-PCR和 Westernblot检测 NUAK2的表达情况;干扰人乳腺癌 MCF-7细胞 NUAK2的表达,利用平板 克隆实验和 CCK-8实验检测细胞增殖水平,Transwell实验和划痕实验检测细胞迁移能力;通过String数据库得到 NUAK2相互结合蛋白并进行功能富集分析。结果 TCGA 数据库和 GETx数据库分析结果及患者组织标本检测结果显 示 NUAK2在乳腺癌中高表达且与患者临床病理分型密切相关;平板克隆实验和 CCK-8实验结果显示si-NUAK2组细 胞增殖能力显著低于对照组;Transwell实验和划痕实验结果显示si-NUAK2组细胞的迁移能力明显低于对照组;String 数据库分析结果显示 NUAK2与蛋白水解、生理节律以及 Wnt等信号通路密切相关。结论 NUAK2可能与乳腺癌的 发生发展密切相关,有望成为乳腺癌治疗的新靶点。     

护理干预对乳腺癌患者生活质量的影响

目的 研究女性乳腺癌患者的临床表现,并且对不同护理方式下乳腺癌患者手术后的生存质量进行分析.方法 回顾分析2009年1月至2011年1月期间在我院进行治疗的60例老年乳腺癌患者资料,将其随机分为观察组和对照组,观察组患者进行针对性护理干预,对照组患者采取常规护理.1个月后对两组患者的心理指标进行分析.结果 在进行了长期的观察与严密的比对之后,观察组患者在进行针对性干预后,心理障碍发生率低于对照组,患者回归正常生活的比例较高.结果 针对性的护理方式能够有效缓解患者在治疗中容易产生的焦虑等情绪,促进患者身体的恢复,提高其生存质量,因而应该在临床中进行推广.     

c-erbB-2多克隆抗体的制备及特性分析

目的　制备针对表皮生长因子受体 (c erbB 2 )细胞表面受体的抗体 ,不仅可阻止生长信号的传递 ,从而抑制肿瘤生长 ,还可通过抗体介导的细胞毒作用杀伤肿瘤细胞 ,具有重要的临床治疗应用价值。方法　通过重组表达获得了纯化的c erbB 2基因产物———融合蛋白GST c erbB 2 ,用此抗原制备兔抗血清 ,经rProteinGAgarose和GlutathioneSepharose 4B亲和层析柱纯化获得IgG型抗c erbB 2蛋白的多克隆抗体。对此抗体进行了细胞表面特异识别、体外肿瘤细胞生长抑制等方面的功能研究。结果　抗体可特异性识别重组表达蛋白、细胞表面c erbB 2抗原 ,并与之结合 ;抗体对c erbB 2阳性的人乳腺癌细胞SK BR 3有特异性的杀伤作用 ,且呈剂量相关 ,而对c erbB 2阴性的人乳腺癌细胞MCF 7则无明显作用。结论　c erbB 2抗体通过其对c erbB 2阳性细胞的特异识别和生长抑制 ,有广阔的临床应用前景。     

乳腺癌干细胞相关miRNA的高通量筛选及miR-25介导自噬对乳腺癌干细胞的调控作用

目的探讨乳腺癌干细胞相关微RNA(miRNA)的高通量筛选及miR-25介导自噬对乳腺癌干细胞的调控作用。方法以MDA-MB-231乳腺癌干细胞为研究对象,通过干细胞成球实验、高通量芯片检测、生物信息学分析、乙醛脱氢酶(ALDH)流式检测、实时自噬活性监测及自噬相关蛋白表达的检测明确miRNA如何通过介导自噬影响乳腺干细胞自我更新能力。结果 miRNA微阵列芯片共筛选出131个差异miRNA,其中56个上调miRNA,57个下调miRNA。与非乳腺癌干细胞相比,一部分miRNA在乳腺癌干细胞上低表达,其中miR-25的表达在乳腺癌干细胞内显著下调约41%。差异的miRNA按照5个数据库(miRWalk、miRanda、miRDB、RNA22和Targetscan)来预测其靶基因,共获得4 565个靶基因。与紫杉醇单药组相比,紫杉醇联用3-甲基腺嘌呤或氯喹均导致成球直径缩小近1/2[(254±16)μm、(226±38)μm比(494±44)μm](均P <0. 05)。与空白对照组相比,紫杉醇组的微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ表达水平升高且p62表达水平降低;与Nc+紫杉醇组相比,Mimics+紫杉醇组的UNC-51样激酶1蛋白表达明显降低。结论 miR-25可能是介导自噬活性与乳腺癌干细胞之间的重要信号分子,其表达异常可能与其启动子区域DNA甲基化调控有关。     

乳腺癌根治术后患者生存及婚姻质量相关因素分析与干预

目的评估乳腺癌术后患者生存与婚姻质量。方法应用EORTCQLQ—C30量表和Olson婚姻质量问卷对52例手术后1个月以上、年龄在62岁以下的乳腺癌患者及52例对照组进行调查，并筛选出影响乳腺癌患者生存质量的重要因素。结果乳腺癌患者的生存质量低于对照组，躯体功能、角色功能、社会功能、情绪功能、功能领域经济状况及总分等比较，差异存在显著性意义。而乳腺癌患者婚姻质量在婚姻满意度、夫妻交流、性生活3个方面得分明显低于常模。结论乳腺癌术后患者的生存与婚姻质量内涵低于一般人群，有必要对其进行有针对性的心理社会干预，尽可能促进身心康复。     

胎脾LAK细胞与重组白细胞介素—2在病人体内的联合应用

自体LAK细胞用于临床治疗肿瘤病人已收到一定疗效。但是在实施此疗法过程中存在一个难题,即LAK细胞数量问题。为了寻找能够代替自身PBL新的LAK前体细胞来     

中药辨证论治对乳腺癌患者术后生活质量的影响

[目的]探讨中药辨证论治对乳腺癌患者术后生活质量的影响。[方法]将141例患者随机分为4组：A组（ER-PR-,仅观察随访）15例,B组（ER-PR-,中药治疗）25例,C组（ER＋或PR＋,内分泌治疗）42例,D组（ER＋或PR＋,中药联合内分泌治疗）59例,在入组时、1月后及2月后随访记录、统计分析各项症状和生活状态。[结果]经中医辨证论治后,治疗组（B、D组）较对照组（A、C组）在生理状况、情感状况及功能状况维度均有显著改善（P＜0.05）,而在社会/家庭状况及附加关注维度则无统计学差异（P〈0.05）。[结论]中药辨证论治能明显改善乳腺癌患者术后生活质量。     

乳腺癌影响因素的结构方程模型研究

目的:基于结构方程模型分析研究乳腺癌患者影响因素的直接和间接作用。方法:采取1∶1病例对照研究方式分别对190例女性患者和非乳腺癌女性进行问卷调查,用结构方程模型方法对结果进行分析。结果:乳腺癌的发生主要由健康保健、运动情况、负性事件、健康状况、基本生理状态和生活饮食习惯这六个因子决定,且因子间有相互作用。结论:结构方程模型在对乳腺癌影响因素的研究分析中具有一定的实际指导意义。